吡啶类药物分析

还原性：异烟肼吡啶环γ位上被酰肼取代，酰肼基具有较强的还原 性，可被不同的氧化剂氧化，也可与某些含羰基的试剂发生缩合 反应。
弱碱性：本类药物含有吡啶环，吡啶环上的氮原子为碱性氮原子， 吡啶环的pKb值为8.8（水中）。所以本类药物具有弱碱性。
一、吡啶环的开环反应
1.戊烯二醛反应（Konig反应）：
紫外-可见分光光度法
原理：吡啶类药物含有吡啶环，具有特征的紫外吸收特征。测
其最大吸收波长处的吸光度，再利用此波长处的百分吸光系数计 算其含量。
方法：尼可刹米注射液的含量测定：用移液管精密量取本品2ml，
置于200ml量瓶中，用0.5%硫酸溶液分次洗涤移液管内壁，洗液并 入量瓶中，加0.5%硫酸溶液稀释至刻度，摇匀；精密量取适量， 加0.5%硫酸溶液定量稀释成每1ml中约含有尼可刹米20ug的溶液。 照紫外-可见分光光度法，在263nm的波长处测定吸光度，按尼可 刹米的吸收系数为292计算即得。
（如氯化汞、硫酸铜、碘化铋钾）及苦味酸等试剂形成沉淀。如尼 可刹米可与硫酸铜及硫氰酸铵作用生成草绿色配位化合物沉淀。
（2）方法：取尼可刹米2滴，加水1ml，摇匀，加硫酸铜试液2
滴与硫氰酸氨试液3滴，即生成草绿色的沉淀。
四、分解产物的反应
1、与氢氧化钠试液共热
原理：尼可刹米与氢氧化钠试液加热，酰胺键水解，即可有二乙
二、酰肼基的反应
1、还原反应（银镜反应）：
原理：异烟肼具有酰肼基，酰肼基的还原性较强，当与 氨制硝酸银试液作用时，即被氧化成异烟酸胺，并生成金 属银黑色浑浊和气泡（氨气），在玻璃试管壁上产生银镜。 《中国药典》将其用于异烟肼的鉴别。
1、还原反应（银镜反应）
方法：取异烟肼约10mg，置试管中，加水2ml溶解
高效液相色谱法
高效液相色谱法具有高压、高速、高效、 高灵敏度等优点，适用于分析含有较多有 关物质的杂环类药物。《中国药典》利用 该方法对异烟肼、异烟肼片、和托吡卡胺 滴眼液进行鉴别。
规定：在含量测定项下记录的色谱图中， 供试品溶液主峰的保留时间与对照品溶液 主峰的保留时间一致。
异烟肼的杂质检测项目和方法
高效液相色谱法
1.原理：《中国药典》采用高效液相色谱法对异烟肼，异烟肼
片和注射用异烟肼的含量进行测定。
2方法：
色谱柱 ：十八烷基硅烷键合硅胶色谱柱
流动相 ：0.02mol/L磷酸氢二钠溶液-甲醇（85:15）
紫外检测波长 :262 nm，理论塔板数不低于4000. 测定方法：取本品，精密称定，加水溶解并定量稀释制成每1ml中 含约0.1ml的溶液，精密量取10ul注入色谱仪，记录色谱图，另取 异烟肼对照品，同法测定。按外标法以峰面积计算，即得。
1、溴酸钾法
方法：取注射用异烟肼装量差异项下的内容物，混合均匀，精
密称取0.2g，置100ml量瓶中，用水定容，摇匀；精密量取25ml， 加水50ml，盐酸20ml与甲基橙指示液1滴，用溴酸钾滴定液 （0.01667mol/L）缓缓滴定。（温度保持在18~20℃）至粉红色 消失。每1ml溴酸钾试液=3.429mg异烟肼。
指当溴化氰与芳香第一胺作用于吡啶环，使环上氮原子由3 价转变成5价时，吡啶环水解，形成戊烯二醛后再与芳香第一胺 缩合成有色的戊烯二醛衍生物的反应。注意——戊烯二醛衍生物 的颜色随所用芳香第一胺不同而有所不同，如与苯胺缩合形成黄
至黄棕色；与联苯胺则形成淡红至红色。
戊烯二醛反应（Konig反应）：
2、异烟肼中有关物质的检查
方法： 供试品：异烟肼（1mg/0.5mg）
对照品：异烟肼（1mg/0.005mg） 按照含量测定项下的色谱条件，取对照溶液10ul注入液相色谱 仪，调节灵敏度，使主成分色谱峰的峰高约为满量程的20%； 再精密量取供试品溶液和对照品溶液各10ul，分别注入液相色 谱仪，记录色谱图至主峰保留时间的3.5倍。供试品溶液的色 谱图中如有杂质峰，单个杂质峰面积不得大于对照品主峰面积 的0.35倍（0.35%）各杂质峰面积的和不得大于对照品溶液主峰 面积（1.0%）。
非水溶液滴定法
原理：吡啶类药物分子中的吡啶环具有碱性，在冰醋酸溶
液（非水溶剂）中与高氯酸定量反应生成高氯酸盐，以结晶 紫（pH 0.5（绿）～2.0(蓝））为指示剂指示终点 。
方法：取尼可刹米约0.15g ，精密称定，加冰醋酸10ml与
结晶紫指示液1滴，用高氯酸滴定液(0.1mol/L)滴定至溶液 显蓝绿色，并将滴定的结果用空白试验校正。每1ml 高氯酸 滴定液(0.1mol/L)相当于17.82mg 的尼可刹米。
概述：异烟肼是一种不稳定的药物，其中的游离肼是由
制备时原料引入，或在贮存过程中降解而产生。而肼又是 一种诱变剂和致癌物质，因此国内外药典多数规定了异烟 肼原料药及其制剂中游离肼的限量检查。常用的方法有薄 层色谱法，比浊法和差示分光光度法。
1、异烟肼中游离肼的检查
（1）原理：《中国药典》对异烟肼及异烟肼片中游离肼
的检查方法采用薄层色谱法，利用薄层色谱法分离肼后，以 对二甲氨基苯甲醛与肼反应生成腙显色，进行比较。
方法： 溶解液：丙酮-水（1；1）
供试品：异烟肼（1ml/100mg） 对照品：硫酸肼（1ml/0.08mg=游离肼20ug） 系统适用性试液溶液：（供试品+对照品） 各吸取5ul,分别点于同一硅胶G薄层板上，以异丙醇-丙醇（3； 2）为展开剂展开，晾干。喷以乙醇制对二甲氨基苯甲醛试液 （显色剂），15min后检视，系统适用性试液溶液所显游离肼 与异烟肼的斑点应完全分离。游离肼的Rf值约为0.75，异烟 肼的Rf值约为0.56,在供试品主斑点前方与硫酸肼斑点相应的 位置上，不得显黄色斑点。
检测灵敏度，使主成分色谱峰的峰高约为满量程的20%；再精密量
取供试品溶液和对照品溶液各10ul，分别注入液相色谱仪，记录色
谱图至主成分峰保留时间的2倍。供试品溶液的色谱图中如有杂质
峰，各杂质的峰面积的和不得大于对照溶液主峰面积的（0.5%）。
含量测定
异烟肼含量测定方法的依据是：异烟肼中酰肼基具有还原 性。可采用氧化还原滴定法测定其含量，溴酸钾法、碘量 法、溴量法最为常用。中国药典（1963年版）曾采用溴量 法测定异烟肼的含量。我国药典自1977年版改为在强酸性 溶液中用溴酸钾滴定液直接滴定法，用甲基橙指示剂（小 于3.1红色，3.1~4.4橙色，大于4.4黄色）指示终点；同 时采用本法测定异烟肼片和注射剂的含量。
吡啶类药物的分析
——胡少聪 2019，4，17
目录
吡啶类药物的分子结构中均含有氮吡啶环。典型代表 药物有异烟肼、尼可刹米、硝苯地平、尼莫地平和尼群 地平。
性状：异烟肼，本品为无色结晶，或白色至类白色的结晶性粉末； 无臭，味微甜后苦，遇光渐变质。尼可刹米为无色至淡黄色的澄 清油状液体，放置冷处，即成结晶，有轻微臭，味苦，有引湿性。
后，加氨制硝酸银试液1ml，即发生气泡（氮气）与黑色 浑浊，并在试管壁上生成银镜。反应式如下：
二、酰肼基的反应
2、缩合反应：
原理：异烟肼具有末端酰肼基，酰肼基可以与芳
醛缩合形成腙，析出结晶型，可测定其熔点。最常用的 芳醛为香草醛，其次是对二甲氨基苯甲醛、水杨醛等与 1，2－萘醌－4－磺酸在碱性介质中可缩合显红色，凡 具有－NH2或活性－CH2－基者均有此反应。
溶解性：异烟肼在水中易溶，在乙醇中微溶，在乙醚中极微溶 解。尼可刹米能与水、乙醇、三氯甲烷或乙醚任意混合。
紫外吸收特性：本类药物的分子结构中均含有芳杂环，在紫外光 区有特征吸收，可用于鉴别。
吡啶环的特性：本类药物分子结构中均含有β或γ位被烷基或羧基衍 生物取代的吡啶环，可发生开环反应（特性反应），可用于鉴别。
尼可刹米中有关物质检查
方法：
供试品：尼可刹米 (4mg/ml) 对照品：尼可刹米 (0.04mg/ml) 填充剂：十八烷基硅烷键合硅胶 流动相：甲醇-水（30：70），检测波长为263nm。
理论塔板数按尼可刹米峰计算不低于2000，尼可刹米峰与其相邻杂
质峰的分离度应符合要求。取对照溶液10ul注入液相色谱仪，调节
原理：
紫外与红外对吡啶类的鉴别
《中国药典》利用紫外-可见分光光度法对托吡咔 胺进行鉴别，方法为：取本品，加0.1mol/l硫酸 溶液制成每1ml中约含有25ug的溶液，照紫外-可 见分光光度法测定，在波长220~350nm范围内，仅 在254nm的波长处有最大吸收。
红外吸收光谱特征性强，能专属性的反义分子结 构的官能团信息，常用于原料药的鉴别。《中国 药典》对异烟肼，尼可刹米，托吡卡胺的吡啶类 药物均用红外分光光度法进行鉴别，利用供试品 的红外吸收图谱与对照品的图谱一致进行鉴别。
胺臭味逸出，使红色石蕊试纸变蓝；《中国药典》采用此方法鉴别 尼可刹米。
方法：取尼可刹米10滴，加氢氧化钠试液3ml，加热，即发生二乙
胺的臭气，使红色石蕊试纸变蓝；
2、与无水碳酸氢钠或氢氧化钙共热
原理：异烟肼，尼可刹米等与无水碳酸钠或氢氧化钙共
热，可发生脱羧降解，并有吡啶臭味析取尼可刹米1滴，加水50ml，摇匀，分取2ml，加溴 化氰试液2ml与2.5%苯胺溶液3ml，摇匀，溶液渐显黄色。
一、吡啶环的开环反应
二硝基氯苯反应（Vongerichthe反应）
原理：在无水条件下，将吡啶及其某些衍射物与2,4-二硝基 氯苯混合，共热或使其热至熔融，冷却后，加醇制氢氧化钾溶液 将残渣溶解，溶液呈紫红色的反应。
注意：尼可刹米、异烟肼和异烟腙等，需经适当处理，即将酰肼 氧化成羧基或将酰胺水解为羧基后才有此反应。中国药典已用于 异烟腙的鉴别。
二硝基氯苯反应（Vongerichthe反应）
方法：取异烟肼5mg，加乙醇溶解后，加2，4-二硝基氯苯 0.1g，置水浴锅上加热5分钟，放冷，加氢氧化钠-乙醇溶 液（1 10）1ml,溶液即显紫红色。
2、缩合反应：