下载文档原格式
医院多重耐药菌的耐药机制及防控措施作者：杜凤霞贾靖王艳鸿刘莉来源：《中国卫生产业》2017年第14期[摘要] 大量广谱抗生素的应用及抗生素的滥用打破了抗菌药物-细菌耐药的动态平衡，造成细菌耐药性增强。
多重耐药菌在医院的传播形势日益严重，也给医院感染控制带来严峻的挑战。
为保障医疗安全，让医务人员了解多重耐药菌的耐药机制，及早采取有效的防控措施，预防和控制多重耐药菌的传播和医院感染的发生。
该文针对多重耐药菌的耐药机制和防控措施进行了综述。
[关键词] 医院；多重耐药菌；耐药机制；防控措施[中图分类号] R515 [文献标识码] A [文章编号] 1672-5654（2017）05（b）-0195-02多重耐药菌的产生与流行已构成社会性危害，防控MDRO感染重于治疗。
研究多重耐药菌的耐药机制，有利于临床制定合理的治疗方案及多重耐药菌感染与传播预防策略[1]。
多重耐药菌的概念（MDRO）[2]：指对通常敏感的常用的3类或3类以上抗菌药物同时呈现耐药的细菌，临床常见多重耐药菌有耐甲氧西林金黄色葡萄球菌（MRSA）、耐万古霉素肠球菌（VRE）、产超广谱β-内酰胺酶（ESBLs）的细菌、耐碳青霉烯类肠杆菌科细菌（CRE）如耐碳青霉烯鲍曼不动杆菌（CR-AB）、产KPC的细菌、产NDM-1的细菌、多重耐药/泛耐药铜绿假单胞菌（MDR-PA）和艰难梭菌（CD）等。
1 常见多重耐药菌耐药机制1.1 艰难梭菌耐药机制艰难梭菌（CD）主要引起抗生素相关腹泻和假膜性肠炎，其感染发病率和病死率极高，尤其是多重耐药艰难梭菌，给临床的治疗带来极大的挑战。
目前，随着广谱抗菌药物的大量使用导致患者肠道菌群失调，极易引起艰难梭菌感染。
避免盲目使用广谱抗菌素，从而降低CD 感染的发生和传播。
2001年我国报道了1例多重耐药艰难梭菌感染的病例，绝大多数艰难梭菌菌株对甲硝唑、万古霉素、非达霉素仍呈敏感，但近来报道敏感性逐渐下降甚至呈现耐药，耐药机制可能为铁代谢、细菌DNA修复能力增强等多种因素有关。
耐万古霉素肠球菌患者的临床分布特点及耐药性分析作者：袁妍朱卫民来源：《中国药房》2022年第10期中圖分类号 R446.5 文献标志码 A 文章编号 1001-0408（2022）10-1253-05DOI 10.6039/j.issn.1001-0408.2022.10.16摘要目的研究耐万古霉素肠球菌（VRE）患者的临床分布特点及耐药情况，为临床预防及感染控制提供参考。
方法纳入2017年5月1日-2020年5月1日我院住院部各科室送检标本培养出肠球菌的患者，共290例，根据其药敏结果分为VRE组（24例）和万古霉素敏感肠球菌（VSE）组（266例）。
收集患者的基本信息（性别、年龄、送检科室等）、基础疾病（高血压、糖尿病、慢性阻塞性肺疾病等）、临床事件（导尿、气管插管、深静脉置管等）、抗菌药物使用情况（检出前后抗菌药物使用情况及使用时间）、临床表现（炎症指标异常、临床症状等）、临床结局（住院时间、好转等）、药敏谱等，比较分析两组的临床分布特点及耐药情况。
结果两组患者检出肠球菌的菌种种类、混合感染菌株类型、临床表现均有明显差异（P关键词肠球菌;万古霉素;临床分布;耐药情况Analysis of clinical distribution and drug resistance of vancomycin-resistant EnterococciYUAN Yan，ZHU Weimin（Dept. of Infectious Diseases， the First Affiliated Hospital of Chongqing Medical University， Chongqing 400016， China）ABSTRACT OBJECTIVE To study the characteristics of clinical distribution and drug resistance in patients with vancomycin-resistant Enterococci （VRE）， and to provide reference for clinical prevention and control of infection. METHODS From May 1， 2017 to May 1， 2020， a total of 290 patients with Enterococci cultured from the samples submitted by inpatient department of our hospital were included. They were divided into VRE group （24 cases） and vancomycin-sensitive Enterococci （VSE） group （266 cases） according to the results of sensitivity tests. The basic information of patients （gender， age， submitting department， etc.）， basic diseases （hypertension， diabetes， chronic obstructive pulmonary disease， etc.）， clinical events （catheterization， endotracheal intubation， deep venous catheterization， etc.）， use of antibiotics （utilization and utilization time of antibiotics before and after detection）， clinical manifestations （abnormal inflammatory indicators， clinical symptoms， etc.）， clinical outcomes （length of stay， improvement， etc.）， drug sensitivity spectrum were all collected. Clinical distribution and drug resistance were compared and analyzed between 2 groups. RESULTS There were significant differences in the type of Enterococci， mixed infection strains and clinical manifestations between 2 groups （PKEYWORDS Enterococci; vancomycin; clinical distribution; drug resistance肠球菌（Enterococcus）广泛存在于土壤、水源等自然界中，是肠道正常菌群的组成部分之一，是除葡萄球菌（Staphylococcus）外最常见的导致院内感染的革兰氏阳性球菌[1]。
耐万古霉素肠球菌感染防治专家共识耐万古霉素肠球菌感染防治专家委员会肠球菌广泛分布在自然界，常栖居人、动物的肠道和女性泌尿生殖系统，是人类的正常菌群之一。
近年来，由于抗菌药物的广泛应用，使原本就对β一内酰胺类、氨基糖苷类抗菌药物具有内在抗药性的肠球菌耐药性进一步扩大，逐渐形成了多重耐药菌。
在我国，耐万古霉素肠球菌(vancomycin resistant enterococci，VRE)感染的发生率呈逐年上升趋势，VRE已成为医院感染的重要病原菌之一[1，2]，它的产生对临床微生物学和流行病学提出了新的挑战。
为了进一步规范并优化VRE感染患者的预防和治疗，《中华实验和临床感染病杂志(电子版)》编辑部与《医学参考报·感染病学频道》编辑部组织国内部分专家，结合多年经验对相关资料进行整理分析，形成了《耐万古霉素肠球菌感染防治专家共识》(以下简称《共识》)。
本《共识》依据的循证医学证据等级见表1。
一、相关概念1.肠球菌(enteroeoccus)：肠球菌为革兰阳性球菌，多数菌种为短链状排列，一般无芽胞、尢荚膜，最适生长温度37℃，最适pH值4.7～7.6。
在需氧革兰阳性球菌中，肠球菌是仅次于葡萄球菌的重要院内感染致病菌，可引起泌尿道感染、腹腔感染、盆腔炎和心内膜炎，严重时可导致脓毒症，病死率达21.0％～27.5％[3]。
在分离的肠球菌菌种分布中，粪肠球菌占绝大多数，其次为屎肠球菌。
2.天然耐药(natural resistance)：天然耐药又称固有性耐药，指细菌对某种抗菌药物具有天然的耐药性，通常由染色体基因决定，并会子代相传。
肠球菌与其他临床上重要的革兰阳性菌相比，具有更强的天然耐药性，存在对头孢菌素类、部分氟喹诺酮类、氨基糖苷类等多种抗菌药物天然耐药。
3.获得性耐药(acquired drug resistance)：获得性耐药指细菌在接触抗菌药物后，改变代谢途径，使其自身具有抵抗抗菌药物而不被杀灭的能力，可由质粒将耐药基因转移到染色体，继而代代相传。
肠球菌万古霉素耐药基因簇遗传特性陈春辉;徐晓刚【摘要】Vancomycin resistant enterococci has become an important nosocomial pathogen since it is discovered in late 1980s. The products, encoded by vancomycin resistant gene cluster in enterococci, catalyze the synthesis of peptidoglycan precursors with low affinity with glycopeptide antibiotics including vancomycin and teicoplanin and lead to resistance. These vancomycin resistant gene clusters are classified into nine types according to their gene se-quences and organization, or D-Ala:D-Lac (VanA, VanB, VanD and VanM) and D-Ala:D-Ser (VanC, VanE, VanG, VanL and VanN) ligase gene clusters based on the differences of their encoded ligases. Moreover, these gene clusters are characterized by their different resistance levels and infection models. In this review, we summarize the classifi-cation, gene organization and infection model of vancomycin resistant gene cluster inEnterococcus spp.%万古霉素耐药肠球菌自20世纪80年代后期被发现以来,已逐渐发展成为重要的医院感染病原菌.此类耐药肠球菌携带的万古霉素耐药基因簇编码产物可催化合成与万古霉素、替考拉宁等糖肽类抗生素亲和力极低的细胞壁前体导致耐药.目前已在肠球菌中发现的万古霉素耐药基因簇根据基因序列及构成不同分为 9 个型别;依据它们编码的连接酶合成产物不同又可分为D-Ala:D-Lac连接酶基因簇(VanA、VanB、VanD及VanM型)和D-Ala:D-Ser连接酶基因簇(VanC、VanE、VanG、VanL和VanN型).这些耐药基因簇介导的耐药水平及其传播模式各有特点.文章综述了肠球菌中万古霉素耐药基因簇的类型、基因构成及传播特性.【期刊名称】《遗传》【年(卷),期】2015(037)005【总页数】6页(P452-457)【关键词】肠球菌属;万古霉素;耐药;基因簇【作者】陈春辉;徐晓刚【作者单位】复旦大学附属华山医院抗生素研究所,卫生部抗生素临床药理重点实验室,上海 200040;复旦大学附属华山医院抗生素研究所,卫生部抗生素临床药理重点实验室,上海 200040【正文语种】中文肠球菌属(Enterococcus spp)是人类肠道以及泌尿生殖道正常菌群，也可作为条件致病菌引起尿路、腹腔、伤口感染，以及血流感染和心内膜炎等严重感染[1]。
耐万古霉素肠球菌耐药表型检测和基因型分析张侠家;沈继录;贾伟华【摘要】Objective To research the resistant characteristics, genotype and prevalence of vancomycin-resistant Enterococci( VRE) . Methods K-B disc diffusion method was used to determine the susceptibility, minimum inhibi-tory concentration ( MIC) for vancomycin of VRE was detected by E-test method;VRE was then subjected to PCR for resistance related genes;6 strains sequencing results of PCR product were contrastively analyzed the amino acid sequence by BLAST. Results 6 VREFm strains were found from 193 strains enterococci;6 VREFm strains were completely resistant to high unit gentamicin, ampicillin, ciprofloxacin, teicoplanin,but were sensitive to linezolid and macrodantin,MIC for vancomycin was more than 256mg/L;Genotypes were vanA;Amino acids in vanA gene have changed with Asn83→Asp( AAC→GAC) . Conclusion VRE in our hospital is mostly multi-drug resistant , which bringS difficulty in clinical treatment for its infection. So the hospital should strengthen the prevention and monitoring, to prevent the spread of VRE strains in the hospital and popular.%目的研究某院耐万古霉素肠球菌( VRE)的耐药特性、基因型及流行情况。
万古霉素耐药肠球菌分子特征及遗传背景研究的开
题报告
开题报告：
题目：万古霉素耐药肠球菌分子特征及遗传背景研究
研究背景：
万古霉素是一种广谱抗生素，被广泛应用于临床治疗中。
然而，近年来在肠球菌中出现了对万古霉素的耐药现象，这对临床治疗带来了诸多困难。
目前，已经有一些文献报道了肠球菌耐药机制的研究，但是对万古霉素耐药肠球菌的分子特征及遗传背景的探究仍然不充分。
研究目的：
本研究旨在探究万古霉素耐药肠球菌的分子特征及遗传背景，为临床治疗提供理论依据和数据支持。
研究方法：
本研究将从以下两个方面进行研究：
1.分子特征方面：对万古霉素耐药肠球菌的基因组进行测序，并使用比对软件进行序列比对，分析其与敏感肠球菌的差异，探究耐药基因和耐药机制。
2.遗传背景方面：对多个耐药菌株及其敏感对照菌株进行基因组比对及物种分类，通过建立进化树、分析群体结构等方法，探究其遗传背景的异同与演化。
研究意义：
本研究将为深入探究万古霉素耐药肠球菌的分子特征及遗传背景提供新的数据和思路，为临床治疗提供科学依据，对防控细菌耐药性具有积极意义。
ＤＯＩ：１０．１３６０２／ｊ．ｃｎｋｉ．ｊｃｌｓ．２０１９．０７．０６·临床实验研究·耐万古霉素肠球菌基因分型及耐药性分析程晨１，谭枝微１，刘颖梅２，纵帅３，姜飞３，谢硕硕１，顾兵１，３（１．徐州医科大学医学技术学院，江苏徐州２２１００４；２．北京中日友好医院临床微生物与感染实验室，北京１０００２９；３．徐州医科大学附属医院检验科，江苏徐州２２１００２）摘要：目的 明确万古霉素耐药肠球菌（ｖａｎｃｏｍｙｃｉｎｒｅｓｉｓｔａｎｔｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｉ，ＶＲＥ）耐药基因型别及耐药性，指导临床用药。
方法 收集北京中日友好医院２０１６年１０月至２０１７年１０月临床分离的１７株ＶＲＥ，Ｖｉｔｅｋ２Ｃｏｍｐａｃｔ全自动细菌鉴定及药敏分析系统检测其对临床常用１４种抗菌药物的敏感性，Ｅ ｔｅｓｔ法确证其对万古霉素和替考拉宁的药物敏感性；ＰＣＲ法检测１７株ＶＲＥ的耐药基因ｖａｎＡ、ｖａｎＢ、ｖａｎＣ１、ｖａｎＣ２／３，并经测序验证。
结果 １７株ＶＲＥ均为耐万古霉素屎肠球菌，均对环丙沙星、左氧氟沙星、莫西沙星、青霉素１００％耐药，对利奈唑胺、替加环素、奎奴普丁／达福普汀等敏感；其耐药基因型均为ｖａｎＡ型，其中有４株ｖａｎＢ表型－ｖａｎＡ基因型。
结论 所收集的ＶＲＥ均对万古霉素高水平耐药，耐药型均为ｖａｎＡ型，应加强临床分离株的耐药监控，合理使用抗菌药物。
关键词：万古霉素耐药肠球菌；Ｅ ｔｅｓｔ法；聚合酶链反应；耐药基因型中图分类号：Ｒ４４６．５ 文献标志码：ＡＧｅｎｏｔｙｐｅａｎｄａｎａｌｙｓｉｓｏｆｄｒｕｇｒｅｓｉｓｔａｎｃｅｆｏｒｖａｎｃｏｍｙｃｉｎｒｅｓｉｓｔａｎｔｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｉＣＨＥＮＧＣｈｅｎ１，ＴＡＮＺｈｉｗｅｉ１，ＬＩＵＹｉｎｇｍｅｉ２，ＺＯＮＧＳｈｕａｉ３，ＪＩＡＮＧＦｅｉ３，ＸＩＥＳｈｕｏｓｈｕｏ１，ＧＵＢｉｎｇ１，３（１．ＳｃｈｏｏｌｏｆＭｅｄｉｃａｌＴｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，ＸｕｚｈｏｕＭｅｄｉｃａｌＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｘｕｚｈｏｕ２２１００４，Ｊｉａｎｇｓｕ；２．ＣｌｉｎｉｃａｌＭｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙａｎｄＩｎｆｅｃｔｉｏｎＬａｂｏｒａｔｏｒｙ，Ｃｈｉｎａ ＪａｐａｎＦｒｉｅｎｄｓｈｉｐＨｏｓｐｉｔａｌ，Ｂｅｉｊｉｎｇ１０００２９；３．ＣｌｉｎｉｃａｌＬａｂｏｒａｔｏｒｙ，ｔｈｅＡｆｆｉｌｉａｔｅｄＨｏｓｐｉｔａｌｏｆＸｕｚｈｏｕＭｅｄｉｃａｌＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｘｕｚｈｏｕ２２１００２，Ｊｉａｎｇｓｕ，Ｃｈｉ ｎａ）Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ Ｔｏｉｄｅｎｔｉｆｙｔｈｅｇｅｎｏｔｙｐｅａｎｄｄｒｕｇｒｅｓｉｓｔａｎｃｅｏｆｖａｎｃｏｍｙｃｉｎｒｅｓｉｓｔａｎｔｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｉ（ＶＲＥ）ｆｏｒｇｕｉｄｉｎｇｔｈｅｃｌｉｎｉｃａｌｍｅｄｉｃａｔｉｏｎ．Ｍｅｔｈｏｄｓ ＳｅｖｅｎｔｅｅｎＶＲＥｓｔｒａｉｎｓｉｓｏｌａｔｅｄｆｒｏｍＣｈｉｎａ ＪａｐａｎＦｒｉｅｎｄｓｈｉｐＨｏｓｐｉｔａｌｆｒｏｍＯｃｔｏｂｅｒ２０１６ｔｏＯｃｔｏｂｅｒ２０１７ｗｅｒｅｃｏｌｌｅｃｔｅｄａｎｄｉｄｅｎｔｉｆｉｅｄ，ａｎｄｔｈｅｓｕｓｃｅｐｔｉｂｉｌｉｔｉｅｓｔｏｆｏｕｒｔｅｅｎｃｏｍｍｏｎｌｙｕｓｅｄａｎｔｉｍｉｃｒｏｂｉａｌｄｒｕｇｓｗｅｒｅｄｅｔｅｃｔｅｄｂｙＶｉｔｅｋ２ＣｏｍｐａｃｔＡｕｔｏ ｍａｔｉｃＢａｃｔｅｒｉａｌＩｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎａｎｄＤｒｕｇＳｅｎｓｉｔｉｖｉｔｙＡｎａｌｙｓｉｓＳｙｓｔｅｍ．ＴｈｅｓｅｎｓｉｔｉｖｉｔｉｅｓｔｏｖａｎｃｏｍｙｃｉｎａｎｄｔｅｉｃｏｐｌａｎｉｎｗｅｒｅｃｏｎｆｉｒｍｅｄｂｙＥ ｔｅｓｔ．ＴｈｅｒｅｓｉｓｔａｎｔｇｅｎｅｖａｎＡ，ｖａｎＢ，ｖａｎＣ１ａｎｄｖａｎＣ２／３ｉｎｔｈｅｓｅｖｅｎｔｅｅｎＶＲＥｓｔｒａｉｎｓｗｅｒｅｄｅｔｅｃｔｅｄｂｙＰＣＲａｎｄｔｈｅｒｅｓｕｌｔｓｗｅｒｅｃｏｎｆｉｒｍｅｄｂｙｓｅｑｕｅｎｃｉｎｇ．Ｒｅｓｕｌｔｓ ＡｌｌｔｈｅｓｅｖｅｎｔｅｅｎＶＲＥｓｔｒａｉｎｓｗｅｒｅｃｏｎｆｏｒｍｅｄｔｏｂｅｖａｎｃｏｍｙｃｉｎ ｒｅｓｉｓｔａｎｔｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓａｎｄｃｏｍｐｌｅｔｅｒｅｓｉｓｔａｎｔｔｏｃｉｐｒｏｆｌｏｘａｃｉｎ，ｌｅｖｏｆｌｏｘａｃｉｎ，ｍｏｘｉｆｌｏｘａｃｉｎ，ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｎ，ｂｕｔｓｅｎｓｉｔｉｖｅｔｏｌｉｎａｚｏｌａｍｉｎｅ，ｔｅｇｉｃｙｃｌｉｎｅａｎｄｑｕｅｎｕｐｔｉｎｅ／ｄａｆｏｓ ｔｉｎｅ，ｅｔｃ．ＴｈｅｒｅｓｉｓｔａｎｔｇｅｎｏｔｙｐｅｏｆｔｈｅｓｅｖｅｎｔｅｅｎｓｔｒａｉｎｓｗａｓａｌｌｖａｎＡ，ｏｆｗｈｉｃｈｆｏｕｒｗｅｒｅｖａｎＢｐｈｅｎｏｔｙｐｅ ｖａｎＡｇｅｎｏｔｙｐｅ．Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ ＴｈｅＶＲＥｓｔｒａｉｎｓｃｏｌｌｅｃｔｅｄｉｎｔｈｉｓｓｔｕｄｙｗｅｒｅａｌｌｈｉｇｈｌｙｒｅｓｉｓｔａｎｔｔｏｖａｎｃｏｍｙｃｉｎ，ａｎｄｔｈｅｄｒｕｇｒｅｓｉｓｔａｎｔｇｅｎｏｔｙｐｅｗａｓｖａｎＡ，ｓｏｔｈｅｍｏｎｉｔｏｒｉｎｇｆｏｒｄｒｕｇｒｅｓｉｓｔａｎｃｅｏｆｃｌｉｎｉｃａｌｉｓｏｌａｔｅｓａｎｄｒａｔｉｏｎａｌｕｓｅｏｆａｎｔｉｂｉｏｔｉｃｓｓｈｏｕｌｄｂｅｓｔｒｅｎｇｔｈｅｎｅｄ．Ｋｅｙｗｏｒｄｓ：ｖａｎｃｏｍｙｃｉｎｒｅｓｉｓｔａｎｔｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｉ；Ｅ ｔｅｓｔｍｅｔｈｏｄ；ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅｃｈａｉｎｒｅａｃｔｉｏｎ；ｄｒｕｇｒｅｓｉｓｔａｎｔｇｅｎｏｔｙｐｅ １９８８年英国首次报道万古霉素耐药肠球菌（ｖａｎｃｏｍｙｃｉｎｒｅｓｉｓｔａｎｔｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｉ，ＶＲＥ），随后１９９３年北美，１９９４年新加坡［１］均报道当地ＶＲＥ的出现，ＶＲＥ已经在全球范围内成为院内感染的重要病原菌之一。
ＶＲＥ还存在将万古霉素耐药性传递到金黄色葡葡球菌的危险，导致万古霉素耐药金黄色葡萄球菌（ｖａｎｃｏｍｙｃｉｎ ｒｅｓｉｓｔａｎｔＳｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓａｕｒｅｕｓ，ＶＲＳＡ）的出现［２］。
近年来，中国ＶＲＥ的流行率相比欧美较低，但在中国各地都有报道［３ ４］，需对ＶＲＥ进行密切监测并控制其播散。
此篇研究对分离出的ＶＲＥ菌株进行耐药表型和基因型研究，从而了解其流行情况，为临床治疗提供依据。
１ 材料与方法１．１ 菌株来源 １７株ＶＲＥ菌种均来自２０１６年１０月至２０１７年１０月北京中日友好医院临床微生物与感染实验室鉴定后的冷冻保存菌株，标本来源包括尿液１０株，全血２株，胆汁１株，腹水１株，血导管基金项目：国家自然科学基金（８１８７１７３４）；江苏省卫生计生委科研项目（Ｈ２０１６３１）。
作者简介：程晨，１９９６年生，男，硕士研究生，临床检验诊断学专业；谭枝微，１９８５年生，女，硕士研究生，主管技师，临床检验诊断学专业。
程晨撰写论文，参与实验；谭枝微参与实验，为共同第一作者。
通信作者：顾兵，博士，副研究员，Ｅ ｍａｉｌ：ｇｂ２００３１１２９＠１６３．ｃｏｍ。
头２株和伤口组织１株，其中存在同一患者但不同部位的分离株。
所有临床分离株经基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱（ＭＡＬＤＩ ＴＯＦＭＳ）仪、Ｖｉｔｅｋ２Ｃｏｍｐａｃｔ全自动细菌分析仪与Ｅ ｔｅｓｔ法鉴定复核。
１．２ 仪器与试剂 ＭＡＬＤＩ ＴＯＦＭＳ仪（德国布鲁克公司）；Ｖｉｔｅｋ２Ｃｏｍｐａｃｔ全自动细菌分析仪，万古霉素、替考拉宁Ｅ ｔｅｓｔ试条（法国生物梅里埃公司）；细菌基因组ＤＮＡ提取试剂盒（天根生物公司）；１０００ｂｐＤＮＡｍａｒｋｅｒ、ＰｒｅｍｉｘＴａｑ（日本ＴａＫａＲａ公司）；ＰＣＲ扩增仪、凝胶成像仪（美国Ｂｉｏ Ｒａｄ公司）。
１．３ 药物敏感性试验 用Ｖｉｔｅｋ２Ｃｏｍｐａｃｔ全自动微生物鉴定和药敏系统（ＧＰ６７药敏卡）测定细菌对１３种常用抗菌药物的耐药谱；用Ｅ ｔｅｓｔ条检测１７株ＶＲＥ对万古霉素和替考拉宁的耐药性，结果判定根据美国临床和实验室标准化协会（ＣＬＳＩ）２０１７推荐的标准，药敏试验质控菌株为粪肠球菌ＡＴＣＣ２９２１２（购自原卫生部临床检验中心）。
１．４ 引物设计与合成 耐药基因ｖａｎＡ、ｖａｎＢ、ｖａｎＣ１、ｖａｎＣ２／３片段的引物序列参考文献［５］，用软件ＡｒｒａｙＤｅｓｉｇｎｅｒ设计，由上海生工生物工程公司合成。
引物序列见表１。
表１ 万古霉素耐药基因ＰＣＲ检测所用引物基因引物序列（５′→３′）产物长度（ｂｐ）ｖａｎＡＦ：ＧＴＡＧＧＣＴＧＣＧＡＴＡＴＴＣＡＡＡＧＣ２３１Ｒ：ＣＧＡＴＴＣＡＡＴＴＧＣＧＴＡＧＴＣＣＡＡｖａｎＢＦ：ＧＴＡＧＧＣＴＧＣＧＡＴＡＴＴＣＡＡＡＧＣ３３０Ｒ：ＧＣＣＧＡＣＡＡＴＣＡＡＡＴＣＡＴＣＣＴＣｖａｎＣ１Ｆ：ＴＧＧＴＡＴＴＧＧＴＡＴＣＡＡＧＧＡＡＡＣＣ４４７Ｒ：ＡＧＡＴＴＧＧＡＧＣＧＣＴＧＴＴＴＴＧＴＣｖａｎＣ２／３Ｆ：ＣＡＧＣＡＧＣＣＡＴＴＧＧＣＧＴＡＣＡＡ５９７Ｒ：ＣＡＡＧＣＡＧＴＴＴＴＴＧＴＡＧＴＡＧＴＴＣ１．５ ＤＮＡ模板提取 将－８０℃冷冻干燥保存的肠球菌菌株用肉汤复苏并接种至血琼脂平板，３５℃培养２４ｈ后，再接种至ＬＢ液体培养基过夜增菌。
１２～１４ｈ后用细菌基因组ＤＮＡ提取试剂盒提取ＤＮＡ，参照试剂说明书操作，测定提取的ＤＮＡ的浓度和纯度，并于－２０℃保存备用。
１．６ 耐药相关基因检测 用ＰＣＲ检测万古霉素耐药基因型。
ＰＣＲ反应体系共５０μＬ，包括ＰｒｅｍｉｘＴａｑ（ＥｘＴａｑ１．２５Ｕ，ｄＮＴＰ２．５ｍｍｏｌ／Ｌ，ＥｘＴａｑＢｕｆｆｅｒ４ｍｍｏｌ／Ｌ）２５μＬ，ＤＮＡ模板２μＬ，２０μｍｏｌ／Ｌ上、下游引物各１μＬ，无菌去离子水２１μＬ。
反应条件为：９５℃预变性３ｍｉｎ；９５℃变性３０ｓ，５６℃退火３０ｓ，７２℃延伸４５ｓ，３５个循环；７２℃延伸５ｍｉｎ。
ＰＣＲ产物用１５ｇ／Ｌ琼脂糖凝胶电泳检测，在１００Ｖ电压下电泳５０ｍｉｎ后将琼脂糖凝胶置于透射紫外仪下观察并拍照，取阳性菌株条带测序鉴定。
测序工作均由上海生工生物工程公司完成。
２ 结果２．１ 菌种鉴定结果 通过ＭＡＬＤＩ ＴＯＦＭＳ和Ｖｉｔｅｋ２Ｃｏｍｐａｃｔ全自动细菌分析仪鉴定，１７株ＶＲＥ均为屎肠球菌。
２．２ 药敏结果２．２．１ Ｖｉｔｅｋ２Ｃｏｍｐａｃｔ全自动细菌分析仪药敏结果 所有ＶＲＥ均对环丙沙星、左氧氟沙星、莫西沙星、青霉素耐药；但均对利奈唑胺、奎奴普丁／达福普汀、替加环素敏感，见表２。
表２ Ｖｉｔｅｋ２Ｃｏｍｐａｃｔ药敏检测结果抗菌药物耐药株数耐药率（％）环丙沙星１７１００左氧氟沙星１７１００利奈唑胺００莫西沙星１７１００氨苄西林１６９４．１青霉素１７１００奎奴普丁００四环素６３５．３万古霉素１７１００红霉素１１６４．７替加环素００高水平庆大霉素协同３１７．６高水平链霉素协同４２３．５２．２．２ Ｅ ｔｅｓｔ结果 １７株屎肠球菌均对万古霉素耐药，最低抑菌浓度（ＭＩＣ）均≥２５６μｇ／ｍＬ；其中，有４株对替考拉宁敏感（ＭＩＣ为２、４、２、８μｇ／ｍＬ），３株对替考拉宁中介（ＭＩＣ＝１６μｇ／ｍＬ）。
