银杏黄酮类化合物的提取1

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银杏黄酮类化合物的性质

银杏黄酮类化合物的苷元一般难溶于或不溶于水,可按于甲醇、乙醇、丙酮、乙酸乙酯、氯仿、乙醚等有机溶剂及稀碱溶液中。银杏黄酮苷元与糖结合成苷后,水溶性相应增大,一般可溶于热水、甲醇、乙醇、丙酮、乙酸乙能中,难溶于乙醚、石油醚、苯、氯仿等有机溶剂。银杏黄酮类化合物因分子中具有酚羟基而显弱酸性,可溶于碱性水溶液、吡啶、甲酰胺及二甲基甲酰胺等。

根据活性成分的特性,本实验中主要采用了简单易行、比较常用的有机溶剂提取法来进行有效成分的提取。由于回流提取法是利用易挥发的有机溶剂进行加热提取,并采用冷却装置使溶剂连续回流,使植物有效成分能充分提出,且此法简单易行,溶剂用量少,提取较完全,故本实验中采用了回流提取法。

通过查找相关文献知银杏绿叶中总黄酮含量约为1.19%,银杏黄叶的总黄酮含量约为0.83%,所以采用绿叶作为原料提取黄酮类化合物,可以提高总黄酮的产量。在60℃时碱性去离子水的提取率为46.2%,纯乙醇的提取率为73.41%,乙醇水溶液的提取率介于两者之间,考虑成本,使用乙醇水溶液作为浸取剂更为合适。且在70%的乙醇水溶液,浸取温度为80℃,料液比为1:15,提取时间为4h的提取条件下黄酮类化合物的提取率为87.54%。

试剂与仪器

试剂:芸香叶苷标准品(纯度≥95%),银杏叶,乙醇,亚硝酸钠,硝酸铝,氢氧化钠。

仪器:紫外—可见分光光度计、粉碎机,烘箱,分析天平,恒温水浴锅,搅拌器,搅拌叶,升降架,冷凝管,温度计(量程100℃),真空泵,三口烧瓶(100ml)容量瓶(10ml、50ml)。

具体步骤

1、银杏黄酮的提取将银杏叶干燥,粉碎,筛分,精确称量20目的银杏叶样品10g。

(1)将其和35mL70%乙醇水溶液加入到100mL带搅拌、冷凝管和温度计的三口烧瓶中进行回流提取,在50℃搅拌提取2h。

(2)将粗提液过滤、抽滤,再用70%乙醇定容至50mL。

(3)定容液中黄酮类化合物的含量用紫外—可见分光光度计测定。

2、银杏黄酮的测定

(1)标准溶液的配制精确称取芸香叶苷5mg,置于50mL容量瓶中,加入适量60%乙醇,在水浴上加热溶解,自然冷却,用60%乙醇稀释至刻度,摇匀。(2)标准曲线的制作取10mL容量瓶6只,分别准确吸取标准溶液1.0mI、2.0mI、3.0mI、4.0mI、5.0mL置于10mL容量瓶中,另一容量瓶中不加标准溶液(配制空白溶液,作参比)。然后各加30%乙醇补充至5mI,加入5%亚硝酸钠溶液0.3mI,摇匀,放置6min,再加10%硝酸铝溶液0.3mL,摇匀,再放6min,加4%NaOH溶液4mL,用水稀释到10mI,放置20min。在紫外—可见分光光度计上,先取两个2cm比色皿加空白溶液,调零。取出一个比色皿,分别加入不同浓度的溶液,在波长510nm处测定吸光度,以酮含量为横坐标,吸光度为纵坐标,绘制标准曲线。

(3)未知液中酮含量的测定吸取2mL未知液代替标准溶液,其他步骤均同上,测定吸光度。由未知液的吸光度在标准曲线上查出2mL未知液中黄酮的含量。乙醇提取

银杏叶采集后洗净,于60℃烘干至恒重,粉碎、过筛。称取粉碎银杏叶100g,加入400ml75%酒精,浸泡过夜,再于55℃左右水浴,并不断搅拌,5~6h后趁热过滤,收集滤液。将滤渣重复上述操作,合并两次滤液;将滤液盛于分液漏斗中,用石油醚萃取1~2次,每次石油醚用量约为滤液体积的1/25,直到水层不含叶绿素时为止;将分液漏斗中分出的水相,用旋转蒸发器旋转蒸发,同时回收乙醇;当蒸至少量液体时,转入培养皿中,于60~70℃干燥箱中烘干,得到棕红色粘稠物,这就是主要成份为黄酮类化合物的银杏叶提取物。

1.溶剂热法

是指在特制密封容器中,以有机溶剂为反应介质,通过对体系加热进行合成的一种方法,该法中溶剂因在密闭条件下而表现出高压、高传质速率等优势性。利用这一原理,将该方法用作银杏叶黄酮的提取,取得了较理想的效果。

称取1.0g磨细的银杏叶粉末,装入50ml止聚四氟乙烯内衬的不锈钢反应釜中,加入70%的乙醇40ml,将反应釜密封好,置于干燥箱,在90℃下按设定的时间(3小时)加热,待自然冷至室温后取釜,将提取液抽滤,取滤液10mL加入3mL体积比为1:4的盐酸,在90℃的水浴中水解30min后迅速冷至室温,用甲醇定容于25ml容量瓶得分析液。