细胞实验二 细胞计数

一、实验目的1. 熟悉细胞计数的基本原理和方法。

2. 掌握使用血细胞计数板进行细胞计数操作。

3. 通过实验，了解细胞密度与培养条件的关系。

二、实验原理细胞计数是细胞生物学、微生物学等学科中常用的一种技术，用于测定样品中细胞的数量。

本实验采用血细胞计数板进行细胞计数，原理如下：血细胞计数板是一种特制的载玻片，其上刻有网格，将计数室分为若干个大方格，每个大方格再分为16个中方格，每个中方格又分为25个小方格。

计数时，只需计数四个角大方格内的细胞数，即可推算出整个计数室内的细胞数。

三、实验材料1. 血细胞计数板2. 显微镜3. 细胞悬液4. 吸管5. 稀释液6. 试管7. 移液管四、实验步骤1. 准备工作（1）将血细胞计数板及盖片用擦试干净，并将盖片盖在计数板上。

（2）将细胞悬液吸出少许，注射在盖片边缘，使细胞均匀分布在计数板上。

2. 稀释（1）根据细胞密度，选择合适的稀释倍数。

（2）用吸管吸取稀释液，加入适量细胞悬液，混匀。

（3）用移液管吸取稀释后的细胞悬液，加入计数板中，使细胞充满计数室。

3. 计数（1）将计数板置于显微镜下，选择合适的倍数。

（2）观察四个角大方格内的细胞，计数每个大方格内的细胞数。

（3）记录每个大方格内的细胞数，计算平均值。

4. 计算细胞密度（1）根据细胞密度、稀释倍数和计数室容积，计算细胞密度。

（2）细胞密度 = 平均细胞数× 稀释倍数× 计数室容积五、实验结果与分析1. 实验结果本次实验采用血细胞计数板对细胞悬液进行计数，得到以下结果：计数室面积：1mm²计数室容积：0.1mm³平均细胞数：50细胞密度：5 × 10⁶个/mL2. 结果分析根据实验结果，本次细胞悬液的细胞密度为5 × 10⁶个/mL。

细胞密度较高，表明细胞生长良好。

在后续培养过程中，应注意控制培养条件，以保证细胞密度在适宜范围内。

六、实验讨论1. 细胞计数板计数时，应注意计数四个角大方格内的细胞，避免误差。

细胞个数实验报告篇一：细胞计数实验报告细胞计数实验报告一、目的培养的细胞在一般条件下要求有一定的密度才能生长良好，所以要进行细胞计数二、原理细胞计数的原理和方法与血细胞计数相同。

显微镜直接计数法是将一定稀释的菌体或孢子悬液注入血球计数板的计数室中，于显微镜下直接计数的一种简便、快速、直观的方法。

因为计数板是一块特别的载玻片。

其上由四条槽构成三个平台；中间较宽的平台又被一短横槽隔成两半，每一边的平台上各刻有一个方格网，每个方格网共分为九个大方格，一个大方格分成16个中方格，每个中方格又分成25个小方格，无论哪种每个大方格中的小方格都是400个。

每一个大方格边长为0．1mm，所以计数室的容积为0．1mm3。

计数时，通常只用4个四周大方格内的细胞数即可。

然后求出每个大方格的平均值，即得出一个大方格中的平均细胞数，再换算成lml菌液中的总细胞数。

若设大方格中平均细胞数为N，菌液稀释倍数为M，则计算方法为：lml菌液中的总菌数=平均每个中格中菌的个数=10000xMxN=10000MN(个)三、实验材料普通显微镜、血球计数板、试管、吸管，微量移液管、细胞悬浮液四、实验步骤1、将血球计数板及盖片用擦试干净，并将盖片盖在计数板上。

2、将细胞悬液吸出少许，注射在盖片边缘，使悬液充满盖片和计数板之间。

3、镜下观察，计算计数板四大格细胞总数，压线细胞只计左侧和上方的。

然后按下式计算：细胞数/ml＝4大格细胞总数/ 4×10000注意：镜下偶见由两个以上细胞组成的细胞团，应按单个细胞计算，若细胞团占10%以上，说明分散不好，需重新制备细胞悬液五、实验结果六、讨论与反思注意多计数几次，求平均值细胞要比较均匀的分布，四个大方格上的细胞数不应相差太多，否则重新混匀细胞悬浮液，再次计数篇二：细胞生物学实验报告染色体标本的制备及观察泮力菁 XX00140091XX级生物基地同组者：商倩倩【实验目的】1、掌握染色体标本制作的方法；2、认识不同生物染色体的特征，学会制作染色体组形图；【实验原理】1、制作染色体标本的意义：A、生物学方面：根据染色体特征鉴别生物及种类（例如猫38；小鼠40；大鼠42；兔44；人46；马64；鸡和狗78）；B、临床医学方面：主要用于遗传性疾病的诊断及研究（例如21三体综合症，卵巢退化症；睾丸退化症等）。

第1篇一、前言细胞实验作为生物学研究的重要手段，在揭示生命现象、探索疾病机制、开发新型药物等方面发挥着至关重要的作用。

本次实验报告针对我所参与的细胞实验进行反思总结，旨在提高实验技能、优化实验设计、提升实验结果的可信度。

二、实验目的本次实验旨在：1. 掌握细胞培养的基本操作技能，包括细胞传代、细胞接种、细胞计数等。

2. 熟悉细胞实验所需的器材和试剂，了解其作用和用途。

3. 分析实验结果，探讨实验现象背后的生物学机制。

三、实验过程1. 细胞传代：在实验过程中，我们严格按照细胞传代操作规程进行，确保细胞在适宜的培养条件下生长。

通过观察细胞生长状态、调整传代比例，保证了细胞的活力和数量。

2. 细胞接种：在细胞接种过程中，我们遵循无菌操作原则，确保细胞在无菌条件下生长。

同时，根据实验需求调整接种密度，为后续实验提供充足细胞资源。

3. 细胞计数：在细胞计数实验中，我们熟练运用血球计数板进行细胞计数，并对计数结果进行统计分析。

通过对比不同处理组的细胞数量，分析实验现象背后的生物学机制。

4. 实验数据分析：在实验数据分析过程中，我们运用统计学方法对实验数据进行分析，探讨实验现象背后的生物学机制。

同时，对实验结果进行合理的解释和推断。

四、实验反思1. 实验操作方面：（1）在细胞传代过程中，我们应严格按照操作规程进行，避免细胞污染和传代失败。

（2）在细胞接种过程中，应注意无菌操作，防止细胞污染。

（3）在细胞计数过程中，应保证计数准确，避免人为误差。

2. 实验设计方面：（1）在实验设计过程中，应充分考虑实验目的和实验条件，确保实验结果具有可重复性和可靠性。

（2）在实验过程中，应密切关注实验现象，及时调整实验参数，优化实验设计。

（3）在实验结果分析过程中，应运用多种统计学方法，提高实验结果的可信度。

3. 实验结果分析方面：（1）在实验结果分析过程中，应充分挖掘实验数据，探讨实验现象背后的生物学机制。

（2）在实验结果解释过程中，应结合相关文献，对实验结果进行合理的解释和推断。

实验二微生物细胞计数与显微测量一、实验目的与要求1、了解血球计数板结构，掌握血球计数板计数微生物数量的技术。

2、了解目镜测微尺和物镜测微尺，掌握显微镜下测定微生物细胞大小的技术。

二、微生物细胞计数1、血球计数板的结构：4条竖槽和1条横槽；计数室（即正中间的大方格）大小为1mm×1mm×0.1mm；计数室共有400个小格，划分有两种可能：16中格×25小格或25中格×16小格。

菌体较大的酵母菌或霉菌孢子可采用血球计数板，因血球计数板较厚，不能使用油镜，故细菌不易看清。

2、血球计数板的使用（1）低倍镜下观察空白的血球计数板，找到计数室，注意应用调光旋钮、聚光镜和光圈调节视野亮度，建议将调光旋钮调到较亮的位置、聚光镜上升、光圈调到较小的位置。

（2）滴加稀释至适宜浓度的样品，盖上特制的盖玻片，静置5-10min. 也可以先盖上盖玻片，再沿槽滴加样品。

以酵母菌为例，以小格内含4-5个酵母菌为宜。

（3）在低倍镜下寻找大方格，将正中间的大方格（即计数室）移至视野正中央，再根据需要换上高倍镜计数。

3、血球计数板的计数方法（1）计数室含25个中格时，取4个角的中格及中间1个中格计数；计数室含16个中格时，取4个角的中格计数。

当样品中的细胞数较少时，应计算所有中格中的细胞。

每个样品须重复计数2-3次。

（实验室现有的血球计数板均为25中格的格式。

）（2）计数时需调节细准焦螺旋，以看到计数室内不同深度的微生物细胞（3）压线的细胞的计数方法：计压左线和上线的细胞或压右线和下线的细胞。

4、计算方法：样品细胞数（个/mL）=每小格的细胞数×400×10000×稀释倍数三、草履虫大小（长*宽）的显微测量1. 目尺和物尺的形态、安装及用途。

注意物尺每一小格代表的实际长度。

2. 标定：两尺平行--记录两尺重合线之间的刻度数--计算标定结果（即某一放大倍数下，目尺一小格代表的实际长度）。

细胞计数实验实验目的：掌握细胞计数的方法。

了解区分细胞存活状态的方法。

实验用品：0.4%台盼蓝溶液、无水乙醇或95%乙醇溶液、脱脂棉普通显微镜、试管、吸管、毛细吸管、细胞计数板、绸布。

实验原理：在细胞培养工作中，常需要了解细胞生活状态和鉴别细胞死活，确定细胞接种浓度和数量以及了解细胞存活率和增殖度，如用酶消化制备的细胞悬液中细胞活力的鉴别，冻存细胞复苏后的活力检测等。

细胞悬液制备后，常用活体染料台盼蓝对细胞进行染色，进行细胞计数。

台盼蓝不能透过活细胞正常完整的细胞膜，故活细胞不着色。

而死亡细胞的细胞膜通透性增高，可使染料进入细胞内而使细胞着色（蓝色）。

细胞计数一般用血细胞计数板，按白细胞计数方法进行计数，便于确定细胞的生活状况。

当待测细胞悬液中细胞均匀分布时，通过测定一定体积悬液中的细胞的数目，即可换算出每毫升细胞悬液中细胞的细胞数目。

实验内容与方法：（一）制备动物细胞悬液将动物细胞用生物盐水制备成适当浓度的细胞悬液备用。

（二）细胞计数1. 计数板处理用无水乙醇或95%乙醇溶液擦拭计数板后，用绸布擦净，另擦净盖玻片一张，把盖片覆在计数板上面。

2. 染色用滴管吸取0.4%台盼蓝染液，按1∶1比例加入细胞悬液中。

将细胞悬液吸出少许，滴加在盖片边缘，使悬液充满盖片和计数板之间，静置3min，将计数板放在低倍镜下（10×10倍）观察计数。

注意盖片下不要有气泡，也不能让悬液流入旁边槽中，否则要重做。

3. 计数方法按图计算计数板的四角大方格（每个大方格又分16个小方格）内的细胞数。

计数时，只计数完整的细胞，若聚成一团的细胞则按一个细胞进行计数。

若细胞团10%以上，说明分散不好，需重新制备细胞悬液。

在一个大方格中，压线细胞只计左侧和上方的。

二次重复计数误差不应超过±5%（图7-1）。

镜下观察，凡折光性强而不着色者为活细胞，染上蓝色者为死细胞。

4. 计数的换算计完数后，需换算出每ml悬液中的细胞数。

红细胞计数一、实验目的：学习、掌握应用稀释法计数红细胞的方法二、实验原理：1．血液中血细胞数很多，直接计数有一定难度，需要将血液稀释到一定倍数，然后用血细胞计数板计数。

2．在显微镜下计数一定容积的稀释血液中的红细胞，之后需要将其换算成每升血液中所含的红细胞数。

三、实验用品：器具：显微镜、血细胞计数板、小试管、采血管、1mL和5mL移液管、玻璃棒、刺血针、干棉球试剂：哺乳动物红细胞稀释液、蒸馏水、75%酒精四、实验方法与步骤：1．采血2．稀释：用移液管取10微升血液，加至2mL红细胞稀释液中3．充池：将盖玻片的一边与计数池的纵线末端接触，然后缓慢放下，使盖玻片平放在计数室两侧的隆起上，醮少许红细胞稀释液靠近盖玻片乾元，靠毛细管作用将稀释液冲入计数池，于高倍镜下观察红细胞分布情况4．静置计数板2~3min 待经红细胞下沉后，大方格四角以及中央取5个4×4中方格红细胞数，用高倍镜或低倍镜计数5．计数，计算注意事项：1.保证计数板和盖玻片清洁；以防影响计数结果的准确性。

2.一次完成充池，如充池过少、过多、有气泡或出现任何碎片，应拭净计数板及盖玻片后重新操作。

3.充池后平放计数板，不能移动盖玻片。

4.计数板中细胞如果严重分布不均，应重新充池计数。

5.凡压线的细胞应按照数上不数下、数左不数右的原则，避免漏数或重复计数。

五、实验结果观察与记录以及分析：1．结果计算：（53+113+76+60+64）/5=73.2每16格平均73.2个红细胞,红细胞数：73.2×25×200×10×1000000=3.66×10的12次方个／升2．显微镜下图片①空白计数板：低倍镜：高倍镜：②400格：③16格（5个）：16格计数图片：六、思考题：1.稀释液装入计数板后，为什么静置一段时间才开始计数？为使红细胞沉降完全2.显微镜载物台为什么应置于水平位，而不能倾斜？计数时是取某一视野内的细胞数来估算整体数的，如果倾斜了，会使一边多一边少，如果取了多的那边数个数，整体的就比实际值多了，取少的那边计算，整体就比实际值少了，误差太大。

细胞复苏与计数实验报告实验二细胞复苏及细胞鉴别与计数实验目的1.掌握无菌操作技术。

2.掌握细胞复苏技术。

3.掌握用血球计数板进行细胞计数的方法。

4.学习死活细胞鉴别的方法。

5.了解细胞污染的判定方法。

6.了解细胞形态的多样性。

实验原理1.细胞复苏：以一定的复温速率将冻存的培养物恢复到常温的过程，复苏时要快速融化，必须将冻存在-196℃液氮中的细胞在1分钟内快速融化至37℃，使细胞迅速通过最易受损的温度区间-5-0℃，使冻存时细胞外的冰晶迅速融化，避免冰晶缓慢融化时进入细胞形成再结晶，对细胞造成损害。

2.细胞计数：采用血细胞计数板法，血细胞计数板由一块长约7.5cm，宽3.5cm的厚玻璃制成，平台中部上下各有一个计数室，每个计数室分9大格，每格边长1mm，面积1mm2，盖上盖玻片后体积为0.1mm3。

四角的大格划分为16个中方格，一般用作白细胞、血小板组织培养的细胞计数。

中央的大方格则由双线划分为25个中方格，每个中方格面积为0.04mm2，盖上盖玻片后体积为0.004mm3，每个中方格又分成16个小方格，用于红细胞、微生物细胞的计数。

细胞计数原则：细胞压线则计上不计下，计左不计右，镜下计数，有时偶尔有两个以上细胞组成的细胞团，应按单个细胞计算。

对每个试样重复计数3次，取其算数平均值。

实验仪器、试剂及操作步骤1.实验仪器超净工作台、倒置相差显微镜、CO2培养箱、酒精灯、酒精棉球、酒精喷壶、试管架、滴管筒（头）、吸管筒（头）、废液缸、移液器、枪头等2.实验试剂DMEM培养基、血清、抗生素等3.实验步骤细胞复苏：3.1.实验室和超净工作台消毒，紫外照射20Min左右。

3.2.穿好实验服，进无菌室前穿鞋套、洗手。

3.3.关闭紫外灯，开日光灯和开风机，超净工作台台面应整洁，用75%酒精擦双手消毒，擦拭台面。

3.4.自液氮中取出冷冻管，检查盖子是否旋紧，立即投入40℃水浴锅中解冻，轻摇冷冻管使其在1分钟内全部融化。

细胞计数及细胞活性的检测实训结果分析及总结实验目的：1、了解细胞计数和活性检测的方法，并加以比较。

2、掌握不同培养基中培养细胞活力的变化情况，分析不同处理条件下细胞生长情况的差异；3、学会正确使用显微镜对标本进行观察，包括各种细胞器的形态结构和颜色；4、熟悉细胞形态结构及功能分析的基本原理，为后续相关课程打好基础。

一、实训内容（一）细胞计数1、学习目的：了解细胞计数和活性检测的方法，并加以比较。

2、设备与材料：显微镜、细胞计数板、试管、试管架、细菌生长记录表、酒精灯、载玻片、盖玻片、吸水纸、稀释液、蒸馏水、血清、新鲜细胞，小白鼠，各种常见细胞标本，显微摄影系统，显微照像系统，玻璃仪器。

3、操作步骤：①、标本制作：在载玻片上滴几滴生理盐水将细胞核与整个细胞去除干净。

②、配置血清：取10ml 的无菌生理盐水倒入烧杯中，放入一块载玻片，用牙签蘸少量的生理盐水，把另一只手固定住，然后往玻片边缘涂抹几下，使盐水均匀的铺满整个载玻片，随即轻轻摇动，最后再用棉花棒蘸取已经准备好的1ml新鲜血清，均匀地刷到刚才在玻片边缘留有盐水的部位，这样重复两次，便得到一块平整光滑的血清层。

2、掌握不同培养基中培养细胞活力的变化情况，分析不同处理条件下细胞生长情况的差异；3、学会正确使用显微镜对标本进行观察，包括各种细胞器的形态结构和颜色；4、熟悉细胞形态结构及功能分析的基本原理，为后续相关课程打好基础。

二、注意事项1、采集细胞时要做到迅速而又细致，否则，细胞破碎过多或过大，就不利于实验观察。

2、为了避免损伤细胞膜和影响细胞呼吸，所选择的溶液必须是低渗的，且浓度适宜，使细胞保持膨胀状态，如稀释度过高，很可能造成细胞失水萎缩死亡，尤其应避免使用生理盐水或糖水，因此时的细胞还没有完***水，难以分辨出哪些是成熟细胞，那些是幼稚细胞，从而给实验带来误差。

3、配置血清时，为防止营养物质流失，可将盐酸和缓冲剂混合均匀后直接使用，以免损失。

细胞计数方法实验原理：当待测细胞悬液中细胞均匀分布时，通过测定一定体积悬液中的细胞的数目，即可换算出每毫升细胞悬液中细胞的细胞数目。

具体操作：1. 将计数板及盖片擦拭干净，并将盖片盖在计数板。

2. 将细胞悬液吸出少许，滴加在盖片边缘，使悬液充满盖片和计数板之间，静置3min，注意盖片下不要有气泡，也不能让悬液流入旁边槽中。

3. 计算板四大格细胞总数，压线细胞只计左侧和上方的。

然后按公式计算：细胞数/mL=四大格细胞总数/4×104说明：公式中除以4，因为计数了4个大格的细胞数。

公式中乘以104因为计数板中每一个大格的体积为：1.0mm（长）×1.0mm（宽）×0.1mm（高）=0.1mm3而 1ml=1000mm3（注意：镜下偶见有两个以上细胞组成的细胞团，应按单个细胞计算，若细胞团10%以上，说明分散不好，需重新制备细胞悬液）细胞计数方法：①盖好盖玻片：取一套血球计数板，将特制的盖玻片盖在血球计数槽上。

②制备计数用的细胞悬液：用吸管吸5滴细胞悬液到离心管中，加入5滴锥虫蓝染液（0.4％）或苯胺黑，活细胞不会被染色，加入染液后就可以在显微镜下区别活细胞和死细胞。

③将细胞悬液滴入计数板：将待测细胞悬液吹均匀，然后吸取少量悬液沿盖片边缘缓缓滴入，要保证盖片下充满悬液，注意盖片下不要有气泡，也不能让悬液流入旁边槽中。

④统计4个大格的细胞数：将血球计数板放于显微镜的低倍镜下观察，并移动计数板，当看到镜中出现计数方格后，数出四角的4个大铬（每个大格含有16个中格）中没有被染液染上色的细胞数目。

⑤计算原细胞悬液的细胞数:按照下面公式计算细胞密度：（细胞悬液的细胞数）/mL＝（4个大格子细胞数/4)×2×104说明：公式中除以4因为计数了4个大格的细胞数。

公式中乘以2因为细胞悬液于染液是1：1稀释。

公式中乘以104因为计数板中每一个大格的体积为：1.0mm（长）×1.0mm（宽）×0.1mm（高）＝0.1mm3而 1mL＝1000mm3细胞计数要点：①进行细胞计数时，要求悬液中细胞数目不低于1×107 L-1，如果细胞数目很少要进行离心再悬浮于少量培养液中。

細胞計數目的：利用血球計數器，測量培養中的活細胞數目。

原理：Trypan Blue是一種常被使用於細胞染色的染劑。

Trypan Blue無法穿透活細胞的細胞膜，但是當細胞受傷或死亡，細胞膜破損時，Trypan Blue則可以通透細胞膜進入細胞內，使細胞染成藍黑色。

利用此一特點，配合血球計數器的使用，則可以在顯微鏡底下，分辨出細胞樣本中的活細胞與死細胞，以方便細胞計數。

材料：1.欲計數的細胞懸浮液2.染劑Trypan Blue (0.4%)3.pipetman & tips4.血球計數器(hemocytometer)5.單鍵計數器(counter)6.蓋玻片(coverglass, 22mm×22mm)7.拭鏡紙(soft lint-free gauze)8.封口膜(parafilm)方法：一、前置工作1.剪一小片石蠟（parafilm），約1.5cm×5cm。

2.用水清洗蓋玻片以及血球計數器的counting chamber表面，並分別以拭鏡紙擦拭；再噴70%的酒精於蓋玻片和counting chamber表面之上，等兩者完全乾燥後，將蓋玻片置於血球計數器之上，使覆蓋住兩個counting chambers。

*注意！不可以用衛生紙擦拭chamber表面，否則會刮壞chamber。

3.以pipetman吸取兩滴各5μL細胞懸浮液，與兩滴各5μL 0.4 % trypan blue，並分別滴於parafilm上面(見Fig.1)。

4.以pipetman(旋至10μL)將步驟3的一滴細胞懸浮液與一滴trypan blue均勻混合，再自血球計數器的一端注入chamber內。

同樣地，將剩餘兩滴也均勻混合，自血球計數器的另一端注入。

(見Fig.2)*注意！ a. 不可使細胞停留在染劑中太久，否則細胞容易死亡或受傷。

b. Trypan blue為致癌物質且易揮發，取用完畢，須立即關緊瓶蓋；若皮膚不小心接觸到染劑，應立即以清水沖洗。