鼠类抗药性的监测方法与治理技术

农田鼠害防治技术一、防治鼠害的意义世上老鼠知多少？据说全世界有鼠口100亿只，分布数量之多以亚洲为冠，印度约有35亿只，是人口的6倍；日本有3亿只，约为人口的3倍；我国人口有12亿，鼠口将近40亿。

鼠类传播疾病，窃取粮食和食品，破坏森林、草原、农田、以及啃咬物品建筑、通讯设施、家具衣物等，给人类的生命财产带来了巨大的损失。

由于害鼠对农牧业生产和人民的生活危害很大，因此，防治鼠害对促进农牧业生产，发展国民经济，保障人民的身体健康具有深远的意义。

1、鼠类对农林牧的危害（l）对农业生产的危害害鼠常年危害农业生产，从在土壤中盗食种子开始，啮食作物根、茎、叶和果实，直到作物收获后继续危害贮存的粮食及加工的食品，以及蔬菜、果树、果品、经济作物，无所不害。

其发生面积之大，损失之重，超过历来被认为我国对农业危害最重的蝗、螟、粘虫、小麦条锈病灾害的总和。

进入90年代以来，农村鼠害再次回升。

1993年和1994年我国农田鼠害发生面积分别为2333万公顷和2533万公顷，分别比1990年增加40％和50％。

据不完全统计，“八五”期间，全国每年因鼠害造成的粮食作物田间损失达30多亿公斤，棉花达20多万担，甘蔗达10万吨以上。

西南、西北、东北、华南等鼠害严重地区的水稻、玉米、小麦、豆类等作物一般减产5％－10％，重者达30％以上，部分农田甚至毁种或绝收。

1993湖南邵阳县一个村失收水稻17. 9公顷（268亩），全村人均损失稻谷50．5公斤；广西贵港市一农户损失稻谷高达1250公斤。

1994年江西早稻遭受鼠害面积100万公顷（1500万亩）、晚稻受害重的稻田减产3-5成。

此外一些地区花生、低酚棉、果树、甘蔗等作物也不同程度遭受鼠害。

害鼠对农户储粮的影响也很大。

据调查，一个农户一年损失储粮少者10-20公斤，多者50公斤以上。

我国2/3以上的农户，不同程度存在着鼠害问题。

有关主管部门估计，每年因鼠害造成全国农户储粮损失达20－30亿公斤。

附件8全国病媒生物监测实施方案抗药性ChinaOperationalGuidelinesforVectorsSurveillance—InsecticideResistance 通过抗药性监测工作的开展,能够使我们了解病媒生物对常用杀虫剂的抗药性水平,掌握抗药性的发展变化趋势,合理选择、使用有效杀虫剂；通过抗药性治理措施的落实,可以保护杀虫剂的有效性,提高病媒生物的防控效果;1.监测病媒生物种类蚊虫当地优势蚊种或重要媒介蚊种至少一种,一旦选定,就持续监测、家蝇和德国小蠊;2.监测生境每个监测县区,选择辖区内不同方位的城市居民区、公园、医院、城乡结合部、农村等生境采集蚊虫、家蝇和德国小蠊,移入实验室饲养,进行抗药性测定;不同年度间抗药性监测试虫采集点应相对固定;3.监测频率和时间每类病媒生物至少每两年开展一次抗药性监测;各类试虫应在其活动高峰期采集;4.待测杀虫剂选择当地防控蚊虫、家蝇和德国小蠊的常用杀虫剂不少于3种;监测必须使用中国疾病预防控制中心传染病预防控制所统一标定的杀虫剂原药;5.监测方法1蚊虫抗药性测定用WHO推荐使用的幼虫浸渍法和成蚊接触筒法参考GB/T26347-2010分别测定幼虫;成蚊用诊断剂量和成蚊的抗药性;幼虫测定3龄末至4龄初幼虫对常用杀虫剂的LC50测定其24ｈ死亡率;1）蚊虫的采集和饲养在当地有代表性的区域如东、西、南、北、中不同方位,或者某一个特定区域,根据蚊虫的吸血活动、栖息和孳生环境采集蚊虫;按表8-1中列出的项目,记录采集时间、地点、经纬度、采集数量和虫态等信息;试虫采集后,根据蚊虫的孳生习性、成蚊或4龄幼虫形态学特征,鉴定种类,进行常规饲养;2成蚊抗药性测定把恢复筒与隔板连接,用吸蚊管取20～30只羽化后3～5天的健康雌蚊中华按蚊用采自野外的健康雌蚊放入恢复筒中,平行放置15min,剔除不健康蚊虫;在隔板另一面装上已衬贴药纸可自制、购买,或由中国疾病预防控制中心传染病预防控制所提供的接触筒,使恢复筒在下面,竖直放置,轻轻拍打使蚊虫聚集于恢复筒底部,然后瞬间把隔板抽开,颠倒接触筒与恢复筒位置,将恢复筒内蚊虫轻吹入接触筒,迅速关上隔板;将筒平放,即开始计算接触时间;不同的杀虫剂接触时间参考表8-4;试虫死亡的判断标准：试虫完全不动,或仅躯体、足、翅或触角等震颤而无存活的可能性,视为死亡;若对照死亡率超过20％,试验视为无效,重新测定;测试结果记入表8-3;结果用死亡率表述：死亡率=死亡虫数/试虫总数×100%对照组死亡率小于5%无需校正,对照组死亡率在5%～20%之间,用Abbott公式进行校正;校正死亡率=处理组死亡率-对照组死亡率/1-对照组死亡率100%抗性水平判断标准：在诊断剂量下蚊虫的死亡率在98%～100%表明其为敏感种群；死亡率在80%～98%不含表明其为可能抗性种群；死亡率<80%表明其为抗性种群;3幼虫浸渍法测定用丙酮配制杀虫剂的5～7个系列浓度；将烧杯中加入200mL脱氯水,用微量移液器取出100μL,首先在对照组烧杯加入100μL丙酮,再依次于试验组中加入100μL药液,用玻璃棒或磁力搅拌器,按照对照、低浓度、高浓度的次序搅拌均匀,每个浓度至少重复3次;用幼虫吸管,吸取3龄末至4龄初幼虫,用小漏勺将水滤掉,按照对照组、低浓度组到高浓度组依次分别加入20只幼虫;放入设定好的温度〔25±1℃〕和湿度〔70±10%〕的培养箱或房间中,24ｈ后查看蚊虫的死亡情况;测定信息和结果记录见表8-2,获得毒力回归线、致死中浓度、斜率值、卡方值等数据,计算抗性倍数RR;RR=待测种群LC50值/敏感种群LC50值可参考如下标准判断抗药性水平：RR＜3为敏感,3≤RR＜10为低抗,10≤RR＜40为中抗,RR≥40为高抗;2家蝇抗药性测定家蝇的抗药性测定采用WHO推荐的点滴法参考GB/T26347-2010;1采集和饲养用网捕或笼诱等方法,在代表性区域采集成蝇,也可以在养殖场挖取采集幼虫蛆;从采集到的蝇类中挑选家蝇,在室内按照常规方法饲养;2杀虫剂配制：用丙酮将杀虫药剂母液稀释到一系列的浓度通过预试验确定药剂的浓度范围,最低浓度时死亡率小于1O%,最高浓度时大于80%;3测定和恢复环境：温度:25±1℃,光周期:14L:10D,相对湿度:60-70%;4测定方法等麻醉至昏迷;用点滴器将0.3μL左右杀虫药剂溶液点滴在雌将试虫用乙醚或C02性家蝇前胸背板上;每个处理组点滴30只羽化后3～5天的雌性家蝇,以相应溶剂点滴为空白对照,试验重复3次;将受药后的试虫转入清洁容器内,供给水和食物,正常饲养,24h后统计死亡情况,填入表8-2;凡腹部上翻、六足抽搐、用锐器触之不能翻身爬值;行者判为死亡;根据每一浓度对应的死亡率求出回归方程,根据回归方程求出LD50 5抗药性水平判定标准：敏感品系和测定样本95%置信区间不重叠,且抗性倍数≥5为抗性种群;3德国小蠊抗药性测定采用药膜法,参见GB/T26352-2010;1采集和饲养用诱捕器内部放置诱饵、捕蟑器或粘蟑板等在所选生境采集试虫,数量不少于50只,常规饲养;2抗药性测定用丙酮或其他的有机溶剂将杀虫剂原液逐级稀释到所需浓度,取2.5mL药液加入500mL锥形瓶中,不断转动锥形瓶,使药液均匀分布于瓶内壁,置于通风厨中过夜,使有机溶剂全部挥发;每瓶放入试虫10只,用纱网或纱布封口;试验重复10次,以相应溶剂处理作为对照组;24h后记录每次以及对照组的死亡数;试虫不能正常爬行或者完全不动视为死亡,可用器具碰触试虫查看其反应;测试结果记录见表8-3;3结果计算死亡率=死亡虫数/试虫总数100%对照死亡率小于5%无需校正；对照死亡率在5%～20%之间,用Abbott公式校正;对照死亡率大于20%为无效测定,需重新进行测定;校正死亡率=处理组死亡率-对照组死亡率/1-对照组死亡率100% 4抗药性水平判定标准：校正死亡率小于80%为抗性种群;表8-1____________病媒名称采集信息记录表__________省自治区、直辖市________市________县区表8-2病媒生物抗药性测定记录表毒力回归线__________省自治区、直辖市________市________县区监测单位：_________________监测人：_________审核人：________表8-3病媒生物抗药性测定记录表诊断剂量__________省自治区、直辖市________市________县区审核人：__________表8-4WHO推荐的几种杀虫剂对成蚊的区分剂量杀虫剂类型杀虫剂区分剂量〔接触时间h〕致倦库蚊埃及伊蚊按蚊致倦库蚊有机氯DDT4%44%0.54%1-狄氏剂4%10.4%10.4%1-有机磷杀螟硫磷1%2-1%2-DDVP---0.77%1马拉硫磷5%10.8%15%15%1氨基甲酸酯残杀威0.1%20.1%10.1%10.33%1拟除虫菊酯高效氟氯氰菊酯0.025%10.03%1-0.025%1氯菊酯0.25%30.25%10.25%10.79%1溴氰菊酯0.025%1-0.025%10.02%1注：我国致倦库蚊区分剂量汪中明等,2008。

第三章农业有害生物抗药性及其综合治理（一）目的与要求通过学习害虫抗药性、植物病原物抗性和杂草抗药性的发展及现状，要求学生掌握相关的基本概念，及农药轮换、交替等使用，并有效应用综合防治措施以减少抗性的产生及延缓农药的使用寿命，同时了解抗性产生的原理及发展趋势。

（二）教学内容第一节害虫抗药性1主要内容：害虫抗药性概念、害虫抗药性的形成与机理、害虫抗药性的遗传及抗药性治理。

2基本概念和知识点：昆虫抗药性、交互抗性、多抗性、耐药性、负交互抗性等基本概念，重点是害虫抗性形成的理论、影响因子及昆虫抗药性在生理生化方面的机理，以及害虫抗性治理的措施。

3问题与应用（能力要求）：要求学生掌握害虫抗药性的基本概念、害虫抗性形成的生理生化机理及影响因子，并能根据农业生产状况制定有效的抗性治理措施。

一、害虫抗药性概况（一）几个基本概念1昆虫抗药性：昆虫具有忍受杀死正常种群大多数个体的药量的能力在其种群中发展起来的现象。

在理解抗药性定义时，应当注意以下几点：（1）抗药性是针对昆虫群体而言，并不是指某一个体；（2）抗药性是相对于正常敏感种群而言，通常通过比较同种昆虫的不同种群在相同发育阶段、相同生理状态和相同环境条件下对药剂耐受力与正常敏感种群的差异来确定。

（3）抗药性有地区性，即抗性的形成与该地区的用药历史、药剂的选择压力等有关；（4）抗药性是由基因控制的，是可遗传的，杀虫剂起了选择压力的作用。

2耐药性：1）自然抗性：有些昆虫对某些药剂有一种天然的抗药性，即敏感度低，它是可以遗传的，这是由于生物的不同，或同是一个种而在不同的发展阶段、不同的生理状态，或具有特殊的行为而对药剂产生了不同的耐力，这称为自然抗性。

例如用防治蚜虫效果很差，而用来防治蚊蝇则效果很好。

2）健壮抗性：由于害虫的营养条件好，环境条件适宜，昆虫的生命活动、生理代谢增强，对药剂的耐受力增强，产生的抗药性称为健壮抗性，它是不稳定的，不能遗传的。

3交互抗性：昆虫的一个品系由于相同抗性机理或相似作用机理或类似化学结构，对于选择药剂以外的其他从未使用过的一种药剂或一类药剂也产生抗药性的现象。

病菌抗药性最新进展及检测技术摘要：本文从对几种植物病害抗药性的监测、病原菌交互抗性的研究、抗药性的遗传研究论述了病菌抗药性的最新进展；从传统的检测技术和现代分子监测技术两方面说明了病菌抗药性的监测技术。

关键词：抗药性；进展研究；监测技术农用杀菌剂从19世纪80年代开始应用，至今为止，共出现了三大类杀菌剂:第一代以二硫代氨基甲酸盐类为代表的杀菌剂是多作用位点的、广谱性的有机合成杀菌剂。

长期大量使用，会破坏环境的微生物平衡，且很有可能造成植物病害的猖撅发生。

第二代杀菌剂以内吸治疗为特点的，诸如苯并咪哇、氧硫杂艺类以及近年来出现的三哇类、咪哇类等麦角街醇合成抑制剂，这类药剂的作用点单一，容易出现抗药性。

随着人们环境保护意识的增强，以无毒性保护特点的第三代杀菌剂不断被研制利用;在杀菌剂的广泛应用中，不论那类杀菌剂，都会出现抗药性的问题。

随着科技的发展，病原菌抗药性的研究的一个热点问题。

植物病原菌抗药性或杀菌剂抗药性，是指病原菌长期在单一药剂选择作用下，通过遗传、变异，对此获得的适应性。

联合国粮农组织(FAO)对杀菌剂抗药性推荐的定义是“遗传学为基础的灵敏度降低”。

特别是随着高效、内吸、选择性强的杀菌剂被开发和广泛应用，杀菌剂抗性越来越严重和普遍，成为制约化学防治措施发展的关键因素之一。

我国对杀菌剂抗药性的研究,从80年代初开始。

近二十年中,着重对一些抗性问题严重的病害进行了研究。

尽管我国的病菌抗药性工作研究得不很多,而且大多研究工作都着眼于对病害抗性的监测与生物学特性等一些基础工作的研究上,但其无论在理论上还是在生产实践上,都有重要的意义。

1.病菌抗药性最新进展1.1对几种植物病害抗药性的监测1.1.1水稻稻瘟病水稻稻瘟病是中国水稻产区最重要的病害之一。

以往一直采用稻瘟净、异稻瘟净和克瘟散为主的有机磷类杀菌剂进行化学防治。

沈嘉祥首先于1981~1987年对云南稻瘟病菌的抗药性进行检测,发现少数地区开始对稻瘟净和异稻瘟净产生了抗性。

昆虫抗药性检测技术————————————————————————————————作者：————————————————————————————————日期：昆虫抗药性检测技术-农学论文昆虫抗药性检测技术赵丽萍（西藏职业技术学院，西藏拉萨850000）收稿日期：２０15—10—22摘要：随着各类农药的不断使用，昆虫抗药性水平越来越高，造成的经济损失也越来越严重。

因此，要提前监测出昆虫的抗药性，就必须有一套简便、快捷、准确、合理的检测方法。

本文对常用的生物检测法、区分剂量法、生化检测法及神经电生理检测法进行了阐述，并对这些方法的优缺点进行了分析。

关键词：昆虫抗药性；检测方法；抗性检测昆虫抗药性是一种普遍的、潜在的、强大的微进化现象，该现象却在很大程度上受到人类活动的影响，同时人类活动控制着抗药性的发展速度和严重程度。

各类昆虫在杀虫剂的高选择压力下都会产生抗性。

据相关报道，自1960年至今，已有超过600种昆虫对农药产生抗药性，且造成的损失越来越严重[1]。

昆虫主要通过改变行为、代谢解毒能力增强、表皮穿透力降低、靶标敏感性降低等方式增强抗药性。

要了解昆虫抗药性水平就必须先建立一套简单、快捷、准确的抗药性检测方法，才能准确的掌握昆虫抗药性水平，明确昆虫产生抗性的农药种类，最终制定出合理的防治方案。

目前用到的常规检测方法有生物检测法、区分剂量法、生物化学法及神经电生理检测法。

1 生物测定法生物检测法又称抗性倍数法[2]，是通过比较室内种群和田间抗性种群的LD50或剂量- 反应曲线（LD - Pline）的斜率来描述的，该方法是最经典、最基础的方法，包括浸渍法、点滴法、表面接触法或药膜残留法和饲喂法4种。

施德等[3]用浸渍法对浙江地区褐飞虱抗性水平进行了检测。

曹明章等[4]用点滴法测定了2001—2002年浙江等四省水稻二化螟4龄幼虫对阿维菌素、杀虫单、氟虫清和三唑磷的抗性水平。

兰亦全等[5]用点滴法测定了福建省福州市、南平、莆田、厦门等地甜菜夜蛾4龄幼虫的抗性水平，并比较了3种新型药剂对6个田间种群的毒力。