高效液相色谱仪操作规程-U3000(已打印)

U-3000操作手册1．操作条件：电压：220V, 温度：10-40℃，湿度：10%-85%。

2．注意事项：密封圈清洗溶液为1：9甲醇/水，每次使用前更换，样品必须经过μm的滤膜过滤，流动相也必须经过μm过滤（色谱纯除外）并脱气。

3．若流动相含有无机盐或酸，每天仪器使用完后，要用5%：95%的甲醇/水清洗系统至少30min 后再用100%甲醇冲30min关机。

开机则用5%：95%的甲醇/水冲10min，换流动相。

先开仪器电源，再开电脑，待电脑右下角的服务器监测器由黄色变为灰色，双击面上的图标，进入工作站，如图为工作站根目录，点击快捷栏内的“default panel tabset”出现以下界面，点开“”My Computer”前加号：选择“Chromeleon Server”,“OK”，出现下面的控制界面，分别在“Pump”下设置比例和流速如果流路内有气泡，拧松泵混合器上的“Purge”阀，点上图内的“Purge off”前的按钮，快速排气泡，待气泡排完后，上图内的“Purge off”前的按钮停止，拧紧“Purge”阀，在“Col．Comp”下设置柱温，在“VWD”下开氘灯，设置波长。

系统开始平衡，点快捷栏内的兰色圆点“”采集基线，待基线稳定后，点“”停止采集基线，准备测样。

新建文件夹（第一次使用必须）点快捷栏内“”，回到根目录，右键点击根目录，，点“New Directory”，输入文件夹名称，“OK”。

建立程序文件点“File”下“New”，“OK”，“下一步”，设置温度，“下一步”，设置流速和各通道比例，“下一步”，设置取样和推样速度，“下一步”，设置采集时间，选择采集信号，“下一步”，“下一步”，“下一步”，设置波长，“下一步”，“完成”，如需要，可更改一些参数后，点右键，选“Check”，“确定”，点快捷栏内的“”，选择保存路径，输入名称后“Save”，关闭窗口。

新建方法文件点“File”下“New”，点“File”下“Save As”选择保存路径，输入名称后“Save”，关闭窗口。

ThermoU-3000HPLC操作规程⼀、开机：1、打开电源，打开仪器接线板电源开关；2、打开电脑显⽰器电源，打开电脑主机电源（POWER），启动电脑；3、依次打开泵、⾃动进样器、柱温箱、检测器的电源；4、选择开始＞程序＞Chromeleon＞Sever Monitor或双击屏幕右下⾓快捷图标,出现对话界⾯后点击Ｓtart启动,等Dongle序号出来以后（表⽰Sever Monitor程序运⾏正常）可以点击Close来关闭界⾯。

5、打开“开始”/“程序”/“Chromel”/“Chromeleon”或双击在桌⾯上的Chromeleon图标（⼯作站主程序）打开HPLC软件系统主界⾯。

⼆、系统设置1、点击快捷⽅式见“默认⾯板”进⼊⾯板的设置。

2、进⼊泵的⾯板：2.1点击“连接”；在流动相A、B、C、D选择将要做的（⽐如要⽤A相，就把它设置成100%）2.2将仪器的“Purge”阀拧开，点击软件上的“purge”进⾏排⽓泡（若没进⾏更换流动相，可以不⽤排⽓泡），⼤约4分钟后；再次点击“purge”停⽌排⽓泡，（purge设置3.00ml/min）将仪器的“Purge”阀拧紧即可；2.3将流速设置1.00ml/min（根据实际需要⾃⼰设置相应的流速），将压⼒的下限值设在8个左右，上限值设置280左右；打开泵的流速。

3、进⼊⾃动进样器的⾯板3.1点击连接，在“温箱控制”设置实际所需要的稳定值3.2若注射器内有⽓泡，点击“灌注针”进⾏⽓泡的排除；若针需要清洗，点击“清洗针”3.3若要进⾏满环进样（20uL），点击“更多选项”，在“进样模式”选择“FullLoop”否则选择“Partial”;4、进⼊紫外检测器的⾯板4.1点击“连接”4.2点击“紫外灯”将氘灯打开（若需要可见光，请点“可见灯”）4.3在“波长”栏设置实际所需要的波长5、采集波长在灯打开3分钟后，点击快捷⽅式键蓝⾊的圆点，在弹出的窗⼝选择紫外“UV”，点击确定，即开始采集基线。

时间：2021.02.11 创作：欧阳计赛默飞世尔(原戴安) 液相色谱操作规程-U3000一、操作前准备：1.1流动相的配制：1.1.1根据所供试品的性质、相关的文献资料、工作经验等按比例配制流动相。

1.1.2根据流动相的性质确定采用有机膜（0.45um）还是水相膜(0.45um)对流动相进行过滤。

1.1.3将过滤后的流动相进行超声脱气10~15分钟。

1.2对照品供试品处理：1.2.1称取或量取适量的对照品或供试品，用适当的溶剂（最好采用流动相或流动相的主成分）进行充分溶解（也可借助超声波进行超声溶解），使其浓度为0.1~1mg/mL （根据检测结果再适当调节溶液的浓度）。

1.2.2根据对照品或供试品的性质确定采用有机针头滤膜（0.45um）还是水相针头滤膜(0.45um)进行过滤。

1.3色谱柱的选择：根据样品的性质选择适当的色谱柱。

二、开机：2.1打开UPS（不间断电源）电源，打开仪器接线板电源开关；2.2打开电脑显示器电源，打开电脑主机电源（POWER），启动电脑；2.3依次打开泵、自动进样器、柱温箱、检测器的电源；2.4双击屏幕右下角“服务管理器”快捷图标,出现对话界面后点击“启动仪器控制器”启动,等显示“本地仪器控制器运行空闲”,可以关闭界面。

2.5双击在桌面上的Chromeleon 7图标（工作站主程序）。

2.6在左下方点击仪器，则在右边会自动显示该仪器控制面板。

2.7旋开泵上的排液阀(两圈以上)；设置A通道为100%，点击“冲洗”，然后再出现的对话框中点击“忽略并执行”；（默认冲洗5分钟）；然后分别“冲洗”流路中其他通道气泡；排完气泡后关闭排液阀；2.8设置流动相的比例及流速后，点击“马达”。

此时泵自动会以设置的流速进行运行。

2.9在控制面板“柱温箱”控制框中，设置准备分析样品所使用的柱温箱温度。

3.0清洗进样器：依次执行灌注注射器，清洗缓冲环，外部清洗针。

三、样品分析：3.1建立仪器方法：3.2建立处理方法及报告模板（此步骤可以省略，直接调用以前的）：3.3建立序列：3.4打开氘灯（待系统压力稳定后约15min后再开灯）：在控制面板“Detector”控制框中，选中“紫外灯”选框，及“可见灯”选框（如果波长在可见范围）。

一、开机：1、打开电源，打开仪器接线板电源开关；2、打开电脑显示器电源，打开电脑主机电源（POWER），启动电脑；3、依次打开泵、自动进样器、柱温箱、检测器的电源；4、选择开始＞程序＞Chromeleon＞Sever Monitor或双击屏幕右下角快捷图标,出现对话界面后点击Ｓtart启动,等Dongle序号出来以后（表示Sever Monitor程序运行正常）可以点击Close来关闭界面。

5、打开“开始”/“程序”/“Chromel”/“Chromeleon”或双击在桌面上的Chromeleon图标（工作站主程序）打开HPLC软件系统主界面。

二、系统设置1、点击快捷方式见“默认面板”进入面板的设置。

2、进入泵的面板：2.1点击“连接”；在流动相A、B、C、D选择将要做的（比如要用A相，就把它设置成100%）2.2将仪器的“Purge”阀拧开，点击软件上的“purge”进行排气泡（若没进行更换流动相，可以不用排气泡），大约4分钟后；再次点击“purge”停止排气泡，（purge设置3.00ml/min）将仪器的“Purge”阀拧紧即可；2.3将流速设置1.00ml/min（根据实际需要自己设置相应的流速），将压力的下限值设在8个左右，上限值设置280左右；打开泵的流速。

3、进入自动进样器的面板3.1点击连接，在“温箱控制”设置实际所需要的稳定值3.2若注射器内有气泡，点击“灌注针”进行气泡的排除；若针需要清洗，点击“清洗针”3.3若要进行满环进样（20uL），点击“更多选项”，在“进样模式”选择“FullLoop”否则选择“Partial”;4、进入紫外检测器的面板4.1点击“连接”4.2点击“紫外灯”将氘灯打开（若需要可见光，请点“可见灯”）4.3在“波长”栏设置实际所需要的波长5、采集波长在灯打开3分钟后，点击快捷方式键蓝色的圆点，在弹出的窗口选择紫外“UV”，点击确定，即开始采集基线。

当基线走平稳后就可以进行进样分析。

戴安U3000-HPLC操作流程一、仪器及配置液相色谱由系统控制器、输液泵、脱气组件、低压梯度组件、自动进样器、柱温箱、DAD 检测器、Chromeleon色谱数据工作站和电脑等组成，另还包括打印机等辅助设备。

二、准备工作：1、使用前应根据待检样品的检验方法准备所需流动相（亦可在平衡系统时配制，流动相必须用0.45um的滤膜滤过）；样品和标准品溶液（亦用0.45um的滤膜滤过）；更换合适的色谱柱（柱进出口应与流动相流向一致）。

2、放置流动相溶液，进行清洗，置换流路；试样瓶放置到自动进样架上；废液瓶、废液管的确认；柱塞清洗液的补充。

3、通电前应检查仪器设备间的电源线、数据线和输液管是否连接正常。

三、主机操作：约30秒钟后，各部件预热完毕，进入待机状态，1、开机：电源，打开仪器各部件开关电脑主机、显示器。

2、从桌面选择Chromeleon，登陆Chromeleon数据色谱工作站。

三、仪器平衡：1、泵：应以完成准备工作后，以 0.2ml/min 的步进速度(每个平衡点保持 0.5 分钟以上时间)进行流速的增加，在达到 0.6ml/min 以上的流速时进行等度流动相比例或梯度流动相初始平衡比例调整，待压力稳定后平衡 30 分钟以上时间方可进样样品的分析。

当比例调整幅度大于 40%的变化时，应进行过渡(选择两步或两步以上调整后达到需要的比例)。

2、检测器：常规情况，设定方法要求的波长并调整检测器显示范围为-5～100mV，查看基线 20 分钟以上，基线基本平直即可开始样品分析。

3、柱温箱：在方法要求使用柱温箱时，应在仪器电源打开后，及时将柱温箱温度设置到预定值并启动。

4、进样器：手动进样在系统平衡过程中应扳至 Inject 位置，以保证系统充分平衡。

四、样品方法的编辑与运行：1、新方法编辑及运行：2、已有方法的运行：五、数据分析方法：1、数据的选择：在资源管理中(点击 Browser 图标进入，如下图；或在仪器控制面板中选择 Files----Browser 进入)找到数据保存（所要查看数据的Sequence）的位置，双击打开第一个对照品数据，即进入数据查看窗口，点击参比峰（一般为比主成分峰小但大于其它杂质峰做为参比峰，或主成分峰）查看并记录"Area"值，做为最小峰面积的设定参考。

题目戴安U3000分析型液相色谱仪使用标准操作规程制定审核批准制定日期审核日期批准日期颁发部门质量部颁发数量份生效日期分发单位质检科、工程设备科1、目的：建立戴安U3000分析型液相色谱仪标准操作规程。

2、适用范围：本规程适用于戴安U3000分析型液相色谱仪的操作。

3、责任人：使用者。

4、内容：4.1准备工作4.1.1流动相的超声过滤，样品的前期处理。

4.1.2在线清洗液的更换（10%的甲醇水溶液，一周2次）。

4.2开机4.2.1插上仪器，电脑的各电源线。

4.2.2依次打开稳压器，电脑，泵，自动进样器，紫外检测器的电源。

4.3各部件的准备操作4.3.1在电脑上启动“服务监视器”，然后双击桌面的变色龙图标“chromeleon”打开软件。

4.3.2点击快捷方式见“默认面板”进入面板的设置。

4.4进入泵的面板：4.4.1点击“连接”；在流动相A、B、C、D选择将要做的（比如要用A相，就把它设置成100%）4.4.2将仪器的“Purge”阀拧开，点击软件上的“purge”进行排气泡（若没进行更换流动相，可以不用排气泡），大约4分钟后；再次点击“purge”停止排气泡，（purge设置3.00ml/min）将仪器的“Purge”阀拧紧即可；4.4.3将流速设置1.00ml/min（根据实际需要自己设置相应的流速），将压力的下限值设在8个左右，上限值设置280左右；打开泵的流速。

4.5进入自动进样器的面板4.5.1点击连接，在“温箱控制”设置实际所需要的稳定值4.5.2若注射器内有气泡，点击“灌注针”进行气泡的排除；若针需要清洗，点击“清洗针”4.5.3若要进行满环进样（20uL），点击“更多选项”，在“进样模式”选择“FullLoop”否则选择戴安U3000分析型液相色谱仪使用标准操作规程编码：QL-SB-SOP-357-00 “Partial”;4.6进入紫外检测器的面板4.6.1点击“连接”4.6.2点击“紫外灯”将氘灯打开（若需要可见光，请点“可见灯”）4.6.3在“波长”栏设置实际所需要的波长4.7采集波长在灯打开3分钟后，点击快捷方式键蓝色的圆点，在弹出的窗口选择紫外“UV”，点击确定，即开始采集基线。

戴安U3000分析型液相色谱仪使用标准操作规程编码：QL-SB-SOP-357-00 题目戴安U3000分析型液相色谱仪使用标准操作规程制定审核批准制定日期审核日期批准日期颁发部门质量部颁发数量份生效日期分发单位质检科、工程设备科1、目的：建立戴安U3000分析型液相色谱仪标准操作规程。

2、适用范围：本规程适用于戴安U3000分析型液相色谱仪的操作。

3、责任人：使用者。

4、内容：4.1准备工作4.1.1流动相的超声过滤，样品的前期处理。

4.1.2在线清洗液的更换（10%的甲醇水溶液，一周2次）。

4.2开机4.2.1插上仪器，电脑的各电源线。

4.2.2依次打开稳压器，电脑，泵，自动进样器，紫外检测器的电源。

4.3各部件的准备操作4.3.1在电脑上启动“服务监视器”，然后双击桌面的变色龙图标“chromeleon”打开软件。

4.3.2点击快捷方式见“默认面板”进入面板的设置。

4.4进入泵的面板：4.4.1点击“连接”；在流动相A、B、C、D选择将要做的（比如要用A相，就把它设置成100%）4.4.2将仪器的“Purge”阀拧开，点击软件上的“purge”进行排气泡（若没进行更换流动相，可以不用排气泡），大约4分钟后；再次点击“purge”停止排气泡，（purge设置3.00ml/min）将仪器的“Purge”阀拧紧即可；4.4.3将流速设置1.00ml/min（根据实际需要自己设置相应的流速），将压力的下限值设在8个左右，上限值设置280左右；打开泵的流速。

4.5进入自动进样器的面板4.5.1点击连接，在“温箱控制”设置实际所需要的稳定值4.5.2若注射器内有气泡，点击“灌注针”进行气泡的排除；若针需要清洗，点击“清洗针”4.5.3若要进行满环进样（20uL），点击“更多选项”，在“进样模式”选择“FullLoop”否则选择戴安U3000分析型液相色谱仪使用标准操作规程编码：QL-SB-SOP-357-00 “Partial”;4.6进入紫外检测器的面板4.6.1点击“连接”4.6.2点击“紫外灯”将氘灯打开（若需要可见光，请点“可见灯”）4.6.3在“波长”栏设置实际所需要的波长4.7采集波长在灯打开3分钟后，点击快捷方式键蓝色的圆点，在弹出的窗口选择紫外“UV”，点击确定，即开始采集基线。

UItiMate 3000高效液相色谱仪标准操作规程起草人日期年月日审核人日期年月日日期年月日日期年月日质量部审核日期年月日批准人日期年月日颁发部门质量部执行日期年月日分发部门检测中心〔3〕替换的文件名及编号修订的原因、目的：1.目的建立UItiMate 3000型高效液相色谱仪操作规程，使高效液相色谱仪的操作标准化、规范化。

2.适用范围适用于本公司UItiMate 3000型高效液相色谱仪的操作。

3.责任仪器使用人员负责本文件的执行，检测中心主任负责监督和指导。

4.依据UItiMate 3000型高效液相色谱仪使用说明书。

5.内容5.1.型号及仪器组成5.1.1.型号：UItiMate 3000型5.1.2.仪器组成：UItiMate 3000四元泵+UV检测器+自动进样器+柱温箱5.2.操作程序5.2.1.使用前的准备工作5.2.1.1.接入稳压电源将稳压电源的输入端插头插在墙上的插孔上。

5.2.1.2.打开电源开关按下稳压电源前面板的“ON”键，大约一分钟后，稳压电源将正常供电。

5.2.1.3.更换泵头清洗瓶中溶液：必须采用非循环模式进行冲洗，将一只1000mL容量的清洗瓶置于U3000系统上方的托盘中，清洗液为10%左右的甲醇或异丙醇的水溶液，所使用的试剂必须为色谱纯，用超纯水或二次蒸馏水来配置。

5.2.2.打开仪器电源开关打开仪器各部份后面板电源线下方的电源开关，仪器将开机自动进行自检。

各部分自检成功后，方可正常进行以下各步操作。

（备注：各电源开关没有先后顺序；）；5.2.2.1.打开电脑:打开电脑，等待约1～2分钟，变色龙服务监视器将会自动启动。

然后双击桌面的变色图标，打开软件。

5.2.3.四元泵：5.2.3.1.确定好各通道的流动相后，先向上掀开泵头前面板，然后拧松快速清洗阀（反时针两圈左右）。

然后在软件中按此“冲洗”键，泵将以3.0 mL/min的速度自动快速清洗泵内残留的气泡，5分钟将自动停止（备注：需要依次对各通道单独进行排气，不能同时进行）5.2.3.2.排气结束后，将清洗阀拧紧，调节好各通道的流动相比例及流速，启动“马达”按钮即可；5.2.4.自动进样器的清洗：自动进样器的清洗分三个部分，一般在每天或每次使用自动进样器前需先进行如下三个步骤排除自动进样器的气泡。

目的：建立戴安U3000高效液相色谱仪标准操作规程，确保仪器使用的规范化、标准化。

范围：适用于戴安U3000高效液相色谱仪的操作。

责任：QC主管、仪器操作员对本规程的实施负责。

内容：内容：1、流动相的配制1.1首先配制常用流动相以及泵后密封圈清洗液小瓶（5%-10%甲醇溶液)如下图（图1）。

配制过程中有机相必须用有机系0.45 µm的滤膜过滤，水相或缓冲盐用水系0.45µm的滤膜过滤。

然后超声20分钟，超声时应避免超声温度过高以使有机相挥发。

一般流动相可以保存3天，含缓冲盐的流动相必须临用新配，注意水相、5%甲醇或10%甲醇溶液（清洗液）必须每天更换！1.2 D通道抽滤并超声的10%甲醇；注意各通道必须保证流动相充足，当流动相体积150ml2、开机、仪器方法设置。

2.1稳压电源打开JJW-3KV A稳压器“ON”位置，等2-3分钟稳定后，按下ON-LINE 1KV A 蓄电池电源前面板的“ON”，等2-3分钟。

2.2 打开泵(Pump)、自动进样器(Sampler)及所需检测器后面板电源线下方的电源开关，仪器将开机自动进行自检。

各部分自检成功后，方可进行以下各部操作。

2.3 打开电脑，等5-7分钟，电脑稳定。

2.4打开软件，连接仪器。

打开变色龙软件控制面板双击电脑桌面的“变色龙Chromeleon 7”图标。

出现如下对话框点击“确定”后出现进样器界面（图2）：（图2）输入自己的用户名及密码，进入软件界面如下图（图3）（图3）在图3左侧出现两台仪器，一台为—U3000，一台为—U3000-01，根据需要选择操作的仪器。

在主页项中连接“泵”，“Sampler(自动进样器)”，及所需检测器，UV是紫外检测器，FLD是荧光检测器，A2D是蒸发光和示差折光检测器（图4）。

然后点击“泵(Pump)”选项，再点击下方的“更多选项”（图5-6），（图5）将“通过进样器”后“Yes”改为“NO”。

U-3000操作手册1．操作条件：电压：220V, 温度：10-40℃，湿度：10%-85%。

2．注意事项：密封圈清洗溶液为1：9甲醇/水，每次使用前更换，样品必须经过0.45μm 的滤膜过滤，流动相也必须经过0.45μm过滤（色谱纯除外）并脱气。

3．若流动相含有无机盐或酸，每天仪器使用完后，要用5%：95%的甲醇/水清洗系统至少30min后再用100%甲醇冲30min关机。

开机则用5%：95%的甲醇/水冲10min，换流动相。

先开仪器电源，再开电脑，待电脑右下角的服务器监测器由黄色变为灰色，双击面上的图标，进入工作站，如图为工作站根目录，点击快捷栏内的“default panel tabset”出现以下界面，点开“”My Computer”前加号：选择“Chromeleon Server”,“OK”，出现下面的控制界面，分别在“Pump”下设置比例和流速如果流路内有气泡，拧松泵混合器上的“Purge”阀，点上图内的“Purge off”前的按钮，快速排气泡，待气泡排完后，上图内的“Purge off”前的按钮停止，拧紧“Purge”阀，在“Col．Comp”下设置柱温，在“VWD”下开氘灯，设置波长。

系统开始平衡，点快捷栏内的兰色圆点“”采集基线，待基线稳定后，点“”停止采集基线，准备测样。

新建文件夹（第一次使用必须）点快捷栏内“”，回到根目录，右键点击根目录，，点“New Directory”，输入文件夹名称，“OK”。

建立程序文件点“File”下“New”，“OK”，“下一步”，设置温度，“下一步”，设置流速和各通道比例，“下一步”，设置取样和推样速度，“下一步”，设置采集时间，选择采集信号，“下一步”，“下一步”，“下一步”，设置波长，“下一步”，“完成”，如需要，可更改一些参数后，点右键，选“Check”，“确定”，点快捷栏内的“”，选择保存路径，输入名称后“Save”，关闭窗口。

新建方法文件点“File”下“New”，点“File”下“Save As”选择保存路径，输入名称后“Save”，关闭窗口。

省产品质量监督检验检验研究院仪器设备操作规程（cg———2016）设备编号（）仪器名称U3000 液相色谱仪操作规程编制审核批准2016 年月日U3000高效液相色谱仪操作规程一基本原理U3000高效液相色谱系统由：①输液泵②自动进样器、③色谱柱温箱、④检测器、⑤数据处理系统组成。

使用高效液相色谱时，液体待检测物由流动相带入色谱柱，通过压力在色谱柱中移动，由于试样中各组分在色谱柱固定相与流动相间分配或吸附特性的差异，不同的物质组分顺序离开色谱柱，经检测器检测得到不同的色谱峰信号，依据组分的保留时间和响应值（峰面积或峰高）进行定性和定量分析。

二操作前准备1.1流动相的配制：1.1.1根据所供试品的性质、相关的文献资料、工作经验等按比例配制流动相。

1.1.2根据流动相的性质确定采用有机膜（0.45um）还是水相膜(0.45um)对流动相进行过滤。

1.1.3将过滤后的流动相进行超声脱气10~15分钟。

1.2对照品供试品处理：1.2.1称取或量取适量的对照品或供试品，用适当的溶剂（最好采用流动相或流动相的主成分）进行充分溶解（也可借助超声波进行超声溶解），使其浓度为0.1~1mg/mL（根据检测结果再适当调节溶液的浓度）。

1.2.2根据对照品或供试品的性质确定采用有机针头滤膜（0.45um）还是水相针头滤膜(0.45um)进行过滤。

1.3色谱柱的选择：根据样品的性质选择适当的色谱柱。

三操作顺序1.开机2.1打开UPS（不间断电源）电源，打开仪器接线板电源开关；2.2打开电脑显示器电源，打开电脑主机电源（POWER），启动电脑；2.3依次打开泵、自动进样器、柱温箱、检测器的电源；2.4双击屏幕右下角“服务管理器”快捷图标,出现对话界面后点击“启动仪器控制器”启动,等显示“本地仪器控制器运行空闲”,可以关闭界面。

2.5双击在桌面上的Chromeleon 7图标（工作站主程序）。

2.6在左下方点击仪器，则在右边会自动显示该仪器控制面板。

戴安中国有限公司液相色谱操作规程-U3000一、操作前准备：1.1流动相的配制：1.1.1根据所供试品的性质、相关的文献资料、工作经验等按比例配制流动相。

1.1.2根据流动相的性质确定采用有机膜（0.45um）还是水相膜(0.45um)对流动相进行过滤。

1.1.3将过滤后的流动相进行超声脱气10~15分钟。

1.2对照品供试品处理：1.2.1称取或量取适量的对照品或供试品，用适当的溶剂（最好采用流动相或流动相的主成分）进行充分溶解（也可借助超声波进行超声溶解），使其浓度为0.1~1mg/mL（根据检测结果再适当调节溶液的浓度）。

1.2.2根据对照品或供试品的性质确定采用有机针头滤膜（0.45um）还是水相针头滤膜(0.45um)进行过滤。

1.3色谱柱的选择：根据样品的性质选择适当的色谱柱。

二、开机：2.1打开UPS（不间断电源）电源，打开仪器接线板电源开关；2.2打开电脑显示器电源，打开电脑主机电源（POWER），启动电脑；2.3依次打开泵、自动进样器、柱温箱、检测器的电源；2.4选择开始＞程序＞Chromeleon＞Sever Monitor或双击屏幕右下角快捷图标,出现对话界面后点击Ｓtart启动,等Dongle序号出来以后（表示Sever Monitor程序运行正常）可以点击Close来关闭界面。

2.5打开“开始”/“程序”/“Chromel”/“Chromeleon”或双击在桌面上的Chromeleon图标（工作站主程序）打开HPLC软件系统主界面。

2.6 在左窗口中单击根目录，此时会在右边的窗口中出现一个“hplc.pan”文件，双击此文件打开HPLC控制面板程序。

2.7在控制面板“Pump”控制框中选中“connect”选框，Purge流路中气泡，设置总流速为适当的数值（建议要由0.2ml/min逐渐增加到适当的流速）后并按回车键（“Enter”）以示确定。

此时泵自动会以设置的流速进行运行。

U3000戴安液相色谱仪操作规程1.5接通电源，检查插座上各插孔的指示灯是否显示正常。

1.6准备好超声过的流动相和流路冲洗溶剂。

2开机2.1撤下设备停用卡，换上设备运行卡。

2.2换上A、B、C、D管路的溶剂：A、B、D管路为溶剂管路，可以放置流动相，C管路为洗进样针管路。

一般A路放甲醇，B路为纯化水，C路放5%甲醇水，D路放流动相。

C管路在运行样品时用5%甲醇水清洗进样针，做完样品用纯甲醇灌满，C管路中软管为冲洗泵头管路，并随仪器开机工作。

2.3运行检查：从上至下打开仪器各部件开关，待机器自检，核实无异常。

2.4开启仪器工作站：打开电脑，双击电脑桌面上仪器图标，显示工作站主界面；2.5脱气操作：在工作站主界面上，点击泵：XPG-3X00(RS,SD)，将旁通阀开关逆时针旋转一圈（自动进样器上），冲洗顺序为B→C→D→A，每个管路冲洗5分钟，每个管路脱气前，需先设参数为100%，再依次点击冲洗→忽略警告执行，每个管路冲洗时间均在自动进样器显示屏上显示（注意：D管路冲洗完成后，需将D管路设置为0，点击开始冲洗，方可冲洗A管路）。

冲洗排气完成后关闭旁通阀。

2.6清洗进样器在WPS-3000 SL项下启动栏中依次点灌注注射器、清洗缓冲环、外部清洗针。

注意：外部清洗针运行完毕后，点击进样阀栏中到进样位置。

2.7升流速：在XPG-3X00(RS,SD)界面，在流速/压力栏中填写所需的流速（注意：流速设定要0.2个单位逐步到所设定的流速，待柱压稳定后，再增加流量）。

2.8设柱温箱温度在TCC-3x00项下温度控制栏中设所需温度，点击回车。

2.9点紫外灯在VWD-3x00（RS）项下信号栏中输入所需波长，在命令栏中点击紫外灯（切记点一下）注意：待温度稳定5～10分钟后再开灯以上各项必须点击各项下的模块连接栏中连接才能执行命令。

待紫外灯点亮后可在xPG-3x00（RS，SD）项下流速/压力栏中输入所需流速开始平衡，平衡时间约30分钟。

U-3000操作手册1 操作条件：电压： 220V,温度：10-40 C,湿度：10%-85%。

2•注意事项：密封圈清洗溶液为1： 9甲醇/水，每次使用前更换，样品必须经过 0.45卩m的滤膜过滤，流动相也必须经过0.45m 过滤（色谱纯除外）并脱气。

3•若流动相含有无机盐或酸，每天仪器使用完后，要用 5% : 95%的甲醇/水清洗系统至少30min 后再用100%甲醇冲30min 关机。

开机则用 5% : 95%的甲醇/水冲10min ，换流动相。

先开仪器电源，再开电脑，待电脑右下角的服务器监测器由黄色变为灰色，双击面上的如图为工作站根目录，点击快捷栏内的"default panel tabset —- ”出现以下界面,图标，进入工作站,点开"” My Computer "前加号:选择"Chromeleon Server” , "OK”,出现下面的控制界面,分别在"Pump”下设置比例和流速如果流路内有气泡，拧松泵混合器上的" Purge”阀，点上图内的"Purge off”前的按钮，快速排气泡，待气泡排完后，上图内的“Purge off”前的按钮停止，拧紧“ Purge”阀，在"Col. Comp”下设置柱温，在“ VWD ”下开氘灯，设置波长。

系统开始平衡，点快捷栏内的兰色圆点“.”采集基线，待基线稳定后，点 新建文件夹（第一次使用必须）点快捷栏内“：上”，回到根目录，右键点击根目录,“ New Directory ”，输入文件夹名称，“0K 建立程序文件 点“ File ”下“ New ”，警 Chr^n^leazi - [SAB_LQcal\pro$TU — firqvseI ：：File Edi t Vi ew W orksp 宜亡eQuAlificationB^teh Tool□ 耳EW …・Ctrl+H建立N^w Direet&ry...曰Open..-C+rl+OClose驾！ Cbrcudl - [S J UB.I&CQ I - Browsfl£j A.rr ■ I 比皿盘L二|曲迪I JH-STO 二|g和I pr-ctsr-u'i LEPOKTg Ji^.LJ| 筮饭BJU 闻I Ltr 亟 程期咋乳”停止采集基线，准备测样。

目的：正确掌握和运用UltiMate 3000高效液相色谱仪标准操作规程标准操作规程。

范围：适用于UltiMate 3000高效液相色谱仪标准操作规程。

职责：QC操作人员操作步骤：1、接通所有电源。

2、设置泵流速（一般为1.00ml/min）3、设置цV波长（一般为254nm）。

4、色谱条件需要设置柱温时要设置柱温（一般情况下不需要），然后oven。

5、启动泵，打开在线色谱工作站。

6、方法6.1 采样控制：采样时间的设置；选采样结束自动积分；自选动方式—前缀+计时；设置文件前缀；最后采样。

6.2 积分：选面积；选归一法，设置最小峰面积，最后采用。

6.3 谱图显示：设置时间显示范围最大值与采样结束时间一致，最小值为0；设置电压显示范围；最大值由峰高决定，最小值一般为1/10最大值为宜；最后采用。

7、数据采集：开液相约半小时后，цv校正零点，单击零点校正。

8、进样：自动进样，把样品放进指定的区域，在运行栏里写上对应编码。

9、选积分，把归一法换成外标法（或其他方法），最后采用。

9.1 选组分表，选谱图，双击样品，双击所需谱图，选全选，设置峰名，最后采用，选OK，选校正，选组分含量，输入标准含量，选ok ,加入标样，打开谱图，校正完毕。

10、测试完毕，选着甲醇通道进行清洗。

11、关闭系统：先关闭电脑，然后关掉灯，泵和柱温，最后关电源。

12、保养及注意事项12.1 要经常使用空调，控制高效液相色谱的温度和湿度。

12.2 启动泵压力一定不要过大，正常一般在4MPA左右。

12.3 使用前后，要清洗系统，要清洗进样针。

12.4 流动相和样品溶液一定要经超声.过滤处理后使用。

ThermoU-3000液相色谱操作规程Thermo U-3000 液相色谱操作规程一、仪器操作1.准备工作1)检查管道氮气、流动相流路与压力是否正常。

如不合适请调整气路、气源与流动相流路。

2)检查实验室环境，包括温度、湿度等是否正常。

温度保持在21-25 oC，；湿度保持在70%以下。

如不合适请联系相关维修人员3)确认各流动相瓶内溶液体积大于瓶体积50%；有机流动相使用HPLC级与HPLC级以上的乙腈与甲醇；离子对添加剂使用HPLC级与HPLC级以上的甲酸、甲酸铵、乙酸铵等；高纯水存放时间不超过一周。

4)流动相中仅能加入5 mM浓度以下的挥发性缓冲盐，如甲酸铵、乙酸铵等。

5)所有新配置的流动相均充分混匀后在超声10分钟，排除气泡。

2.开机过程：1)打开电脑进入windows的桌面。

2)打开液相各个模块的电源（没有顺序）。

3)打开氮气管道开关阀，确证压力指示在0.3 Mpa。

4)打开变色龙服务器软件，点击连接数据传输。

5)打开变色龙色谱工作站。

6)在Create Program窗口中编辑液相方法并保存。

7)打开液相色谱流路，平衡液相系统。

8)点击进样按钮开始进样。

3.待机过程：1)待机前，将色谱流动相流路切换至90%乙腈水溶液，以0.3 mL/min流速冲洗色谱柱20分钟。

2)在5分钟内将色谱流速从1 mL/min 缓慢降至0 mL/min。

3)关闭柱温箱加热功能，关闭CAD检测器氮气气路。

4.长假关机过程：1)关闭液相色谱各模块的加热功能2)关闭流动相流速。

3)关闭所有软件和电脑。

4)关闭液相所有模块的电源。

5)关闭氮气减压阀。

6)关机结束。

二、仪器维护1.做完实验：使用纯水、纯乙腈冲洗色谱管路；2.关闭紫外检测器，关闭柱温箱的加热功能。

3.废气与废液排放空间通畅；三、液相可能存在的问题与排查方法1.可能存在的问题1)灵敏度突然间降低2)空白溶液背景很高2.排查方法1)检查流动相是否新鲜配置2)检查各个温度，气体流速，流动相流路3)检查进样系统是否正常工作4)检查紫外检测器是否工作正常5)检查色谱柱是否堵塞，是否漏液。

Ultimate 3000型高效液相色谱仪操作规程一、开机前的准备工作1.检查设备电源、流路、信号连接是否完好。

2.流动相：配制相应的流动相，经0.45µm微孔滤膜抽真空过滤后，超声脱气15分钟，必须使用色谱纯的溶剂，水或缓冲盐溶液要用超纯水；盛放样品溶液和流动相所用的玻璃容器必须用超纯水清洗。

3.样品溶液：按方法取样或配制标准样品溶液，0.45µm滤膜过滤。

二、仪器的组成及开机平衡系统1.仪器组成：本仪器由Ultimate 3000分离单元、DAD-3000（RS）检测器、Chromeleon 7色谱工作站和打印机组成。

Ultimate 3000分离单元包括四元梯度洗脱的溶剂输送系统，四通道在线真空脱气机，可容纳120个样品瓶的自动进样系统，柱温箱，内置的柱塞密封垫清洗系统，溶剂托盘，液晶显示器，键盘用户界面及软盘驱动器。

2.开机：依次接通Ultimate 3000分离单元、检测器、计算机和打印机的电源。

接通Ultimate 3000分离单元后，仪器开始自检约20s，打开电脑，双击电脑右下角的变色龙软件的服务管理器，单击“启动Chromeleon仪器控制器”，激活服务管理器，双击电脑桌面的“Chromeleon 7”图标，进入变色龙软件。

3.脱气（Degasssger）：向上掀开泵头前面板，拧松快速清洗阀（逆时针两圈左右），然后按“冲洗”键，泵将以3.0ml/min的速度自动快速清洗泵类残留的气泡，5min将自动停止。

若想手动停止，只要再按“冲洗”键，将停止清洗。

4.清洗有缓冲盐的那个通道前后，一定要用超纯水清洗管路和泵头，以防止缓冲盐溶液直接与纯有机相混合而产生结晶堵塞比例阀。

5.清洗完毕，先停泵，再拧紧快速清洗阀。

切记不要在泵未停止清洗前拧紧快速清洗阀。

三、编辑仪器方法1.在Chromeleon Console“创建”菜单中点击“仪器方法”。

2.采集时间和采集通道设置：在弹出的“仪器方法向导”窗口中输入分析运行时间；在“诊断通道”项下点击“取消选择所有通道”，点击下一步。

U3000戴安液相色谱仪操作规程一、实验目的1.熟悉U3000戴安液相色谱仪的基本操作方法；2.学习正确使用液相色谱仪的技巧和注意事项；3.实现对待测物质的定性和定量分析。

二、实验器材和试剂1.U3000戴安液相色谱仪；2.色谱柱；3.手套，安全护目镜；4.甲醇、乙醇等有机溶剂；5.待测物质溶液。

三、操作步骤1.安全操作a.穿戴好实验室服装，佩戴手套和安全护目镜；b.检查液相色谱仪的电源线是否接地，仪器是否工作正常；c.检查色谱柱是否安装正确，连接管路是否紧固。

2.准备工作a.打开液相色谱仪的电源开关，待仪器启动完成后，打开色谱软件；b.打开软件后，进行仪器的空白检测，用纯溶剂进行洗涤柱和平衡柱的操作；c.调整柱温为合适的温度，一般为室温。

3.样品处理a.将待测物质溶解在合适的溶剂中，制备样品溶液；b.将样品溶液通过5μm的滤膜过滤，以去除杂质。

4.色谱条件设置a.在色谱软件中设置所需的流动相体系、流速、波长等参数；b.在样品进样器上设置进样体积、进样方式等参数；c.设置检测器的检测波长和灵敏度。

5.进样操作a.将处理好的样品溶液注入进样器中，并设定好进样体积；b.执行进样操作，确保样品被成功进入流动相中。

6.开始分析a.点击软件上的开始分析按钮，启动色谱仪的工作；b.液相色谱仪将自动进行样品的分离和检测；c.注意观察色谱图，确认是否出现所需的峰。

7.数据处理a.分析所得的色谱图，测量峰的面积、时间、高度等参数；b.将峰的参数与标准曲线进行比对，获得待测物质的定量结果；c.记录分析结果和实验过程中的注意事项。

四、操作注意事项1.操作前需熟悉液相色谱仪的相关知识，并按照规定的操作步骤进行使用；2.所选用的色谱柱要与待测物质的性质相适应；3.操作过程中应避免尽量摔打液相色谱仪和碰触色谱柱；4.操作中应小心不要发生溶剂泄漏或喷洒，避免涉及皮肤和眼睛；5.在进样前，应先调节进样器的进样速度，以避免进样不均匀。

U3000高效液相色谱仪操作规程及封面第一章绪论1.1编写目的本操作规程的目的是为了规范和指导U3000高效液相色谱仪的使用，保证实验室成员能够正确有效地操作仪器，获得准确可靠的实验结果。

1.2适用范围本操作规程适用于U3000高效液相色谱仪的使用者。

1.3安全注意事项1.3.1操作前检查仪器电源是否正常，地线是否入地良好。

1.3.2仪器操作需戴好实验手套，以免对操作人员造成伤害。

1.3.3仪器操作时需注意化学品的毒性和腐蚀性。

1.3.4在进行一些实验操作前，需事先测定溶剂的pH值。

1.3.5离开仪器时，关闭电源并断开电源线。

第二章仪器准备工作2.1开机操作2.1.1检查电源、电源线是否连接正常。

2.1.2打开仪器电源开关，待仪器启动完成后进入下一步操作。

2.2仪器检查2.2.1检查进样器是否安装正确。

2.2.2检查流量计、压力计是否正常。

2.2.3检查溶剂瓶是否已加满溶剂。

2.3校准仪器2.3.1进行空气校正和流量校正。

2.3.2校准UV检测器和荧光检测器。

第三章样品准备与进样3.1样品准备3.1.1按照实验需要将样品制备好。

3.1.2不同样品需使用不同的溶剂进行稀释。

3.2进样准备3.2.1将样品注射到进样器中。

3.2.2调整进样量和进样方式。

第四章仪器操作4.1开始分析4.1.1设置分析条件：流速、柱温、波长等。

4.1.2选择合适的柱和检测器。

4.2进行分析4.2.1打开仪器操控软件，点击开始分析。

4.2.2实时监测色谱图，记录实验数据。

4.3实验结束4.3.1点击停止按钮结束分析。

4.3.2关闭仪器，清洗仪器各部件。

第五章紧急故障处理5.1仪器故障分类5.1.1仪器无法启动。

5.1.2仪器无法进行分析。

5.1.3色谱图异常。

5.2故障排除方法5.2.1仪器无法启动：检查电源和电源线连接是否正常。

5.2.2仪器无法进行分析：检查润滑油和溶剂是否已用尽。

5.2.3色谱图异常：检查柱是否老化或损坏。