细胞培养—无菌操作.ppt
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细胞实验考核要点一、准备工作1、清点超净台中仪器物品(垃圾桶、饭盒中三种管、橡胶塞、蓝枪头、移液枪、电子枪、50ml离心管、镊子、剪刀、marker笔、打火机、卫生纸、6孔板、平衡50ml内含1ml离心管),合理布置台面。
2、超净台灭菌:酒精喷洒超净台面,紫外照射20min左右。
3、预热:将PBS、10%FBS、胰酶装进PE手套中,37℃预热备用。
二、实际操作1、点燃酒精灯2、从水浴锅中取出预热的三种液体,喷酒精后放入超净台,用卫生纸擦拭瓶壁酒精。
撕开三个封口膜。
瓶口在外焰烧灼烧,拧松三个瓶盖,以备用。
3、手喷酒精后,旋松并取出T25瓶。
在显微镜下观察细胞长势,若细胞密度达到了80%-90%,则可以进行传代。
注意若显微镜没有人用过,需要在载物台附近喷洒酒精后擦拭。
4、将T25拿到超净台里面。
手进入台面内需酒精喷洒消毒(后不赘述)。
打开吸泵。
5、来回灼烧吸泵铁头。
旋开T25瓶,注意灼烧瓶盖,瓶盖扣放。
铁头插上两个蓝枪头,瓶身倾斜吸去瓶中原培养基。
灼烧瓶盖和瓶口后盖盖,不要盖太紧。
6、取1ml移液枪,将T25竖起来,向未生长细胞的侧壁打入5ml PBS冲洗。
盖盖后左右上下稍移动。
将PBS吸出。
关吸泵!7、向瓶中加入500ul胰酶。
稍混合均匀。
放入培养箱中消化2min。
计时。
8、2min内需完成的操作(1)取出一个50ml离心管。
(2)烧套管:镊子在火上过一下,套管盒稍稍开一小口,用镊子取出一个套管,火上来回灼烧,然后放置在离心管架上。
(3)烧弯头吸管:从烧瓶中用镊子取出一个塞子。
弯头吸管盒稍开一小口,确定是不是塞棉花的一头。
镊子稍稍过火灼烧,开一小口,镊子夹出塞棉花一头,放下镊子,拿出吸管。
盒子放回原处。
将塞子塞入弯头吸管中。
手持塞子来回在火上灼烧,完毕后放入套管中。
9、取出培养箱中消化的细胞,显微镜及肉眼观察消化是否合适。
若在显微镜下看到细胞质壁分离呈球形,大部分细胞已经脱离瓶壁游走在视野中,肉眼观察有白色的成片细胞脱落,说明消化完成。
细胞培养—无菌操作细胞培养是一种常见的生物技术操作,可以用来研究细胞的生理功能、细胞的增殖和分化以及生物化学反应等。
在进行细胞培养时,无菌操作至关重要,因为细胞非常容易受到外部微生物的污染,从而影响实验结果的准确性。
下面将介绍细胞培养的无菌操作步骤。
1.准备工作在进行细胞培养之前,需要准备好以下工具和试剂:-培养皿:使用符合实验要求的培养皿,常见的有培养瓶、细胞培养板等。
-培养基:根据实验需要选择适当的培养基,例如DMEM、RPMI-1640等。
-无菌操作台:无菌操作台提供一个无菌的工作环境,可以防止微生物的污染。
-显微镜:显微镜可以用来观察细胞的形态和增殖情况。
-移液器和吸头:用于移液操作,需要保持无菌。
-无菌培养液:例如乙醇、连苯三氯和消毒液等。
-消毒器材:例如灭菌器、高压蒸汽灭菌器和紫外线灭菌器等。
2.准备培养皿和培养基将培养皿放入无菌操作台的工作区域内,通过高压蒸汽灭菌器或紫外线灭菌器对培养皿进行灭菌处理,确保其表面无菌。
然后用无菌移液器加入适量的培养基到培养皿中,根据实验需要选择适当的培养基。
3.细胞接种将需要进行细胞培养的细胞按照预定的密度接种到培养皿中。
在进行细胞接种前,需要将细胞培养液中的细胞进行离心,去掉上清液,然后用适量的培养基将细胞悬浮液稀释到适当的细胞密度。
在接种细胞时需要注意,避免将培养皿的口部接触到任何表面,以免引入微生物污染。
4.细胞培养将接种好的细胞培养皿放入细胞培养箱或培养箱中进行培养,保持适当的温度和湿度。
通常将细胞培养箱设置在37摄氏度,5%二氧化碳的环境中,以模拟人体体内的条件。
在细胞培养过程中需要定期检查细胞的状态,观察细胞的形态和增殖情况。
5.细胞培养的无菌操作在培养细胞的整个过程中,需要保持无菌操作。
在进行任何操作之前,需要在无菌操作台上烧毁以杀死细菌和真菌。
接种细胞、更换培养基、观察细胞等一系列操作都需要在无菌操作台上进行,以减少细胞受到外部污染的机会。