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天然药物化学实验报告实验报告：天然药物化学实验摘要：本实验采用天然药物提取法，以姜黄素为目标化合物，通过溶剂提取、分离纯化和结构鉴定等步骤，成功地从姜黄中提取出姜黄素。
利用紫外-可见光谱法对姜黄素进行了定性和定量分析，并对其结构进行了确认。
实验结果表明，本实验方法可用于姜黄素的提取和纯化。
引言：天然药物在中药领域有长久的历史，并且越来越被广泛应用于药物研究和治疗中。
本实验旨在利用化学方法从天然药物中提取目标化合物，以姜黄素为例进行研究。
姜黄素是姜黄根茎中的有效成分，具有抗氧化、抗炎和抗癌等多种生物活性。
实验材料与仪器：1.实验材料：鲜姜黄，无水乙醇，乙酸，氯仿，丙酮等。
2.实验仪器：电子天平，恒温槽，高速离心机，紫外可见分光光度计等。
实验步骤：1.预处理姜黄样品：将鲜姜黄切碎并研磨成细粉，加入无水乙醇溶液中，将其置于40℃的恒温槽中提取一段时间。
2.溶剂提取：将提取液过滤，所得过滤液用氯仿萃取，重复该步骤两次，所得的有机相合并，并经旋转蒸发机蒸发浓缩。
3.分离纯化：将提取液溶解在正己烷中，通过硅胶柱层析法进行分离纯化。
首先用正己烷进行洗脱，之后用氯仿-甲醇（20:1）溶液进行洗脱。
4.结构鉴定：通过紫外-可见光谱法进行姜黄素的定性和定量分析，利用相对滴定法测定含量，并与标准品对照鉴定。
实验结果：1.提取纯化：通过溶剂提取和硅胶柱层析法，成功地从姜黄中提取出纯化的姜黄素。
提取纯化过程中，利用纸色谱法监测样品的纯化情况。
2.结构鉴定：利用紫外-可见光谱法对姜黄素进行了定性和定量分析。
通过比对标准品和实验样品的吸收峰位置和峰高，确认了所提取的化合物为姜黄素。
讨论与结论：本实验通过天然药物提取法和硅胶柱层析法成功地从姜黄中提取纯化了姜黄素，并进行了结构鉴定。
实验结果显示，本实验方法可用于姜黄素的提取和纯化，并通过紫外-可见光谱法对姜黄素进行了定性和定量分析。
本实验为天然药物的提取和纯化研究提供了一种有效的方法，对于深入研究姜黄素的药理作用和临床应用具有重要意义。
天然药物的提取及分析在生命科学中，天然药物被广泛使用来获得治疗和预防疾病的效果。
天然药物是指来自天然材料的或自然存在的药物，包括有机或无机的物质，如植物提取物、海藻、矿物、微生物和动物物质等。
这些天然药物在医药研究和临床实验中显示出极大的潜力，因此对天然药物的提取和分析至关重要。
天然药物提取的方法1. 水提取法水是一种常用的提取剂，该方法具有高效、成本低廉的优点。
该方法适用于许多农作物和天然药物的提取，如茶叶、蘑菇等。
2. 酒精提取法酒精提取法是一种常见的提取方法，该方法适用于许多植物的提取，如花、树皮和树叶。
酒精具有较好的溶剂性，能够提取一些不易溶于水的天然物质，且可以提取更多的化合物，因此该方法更适用于植物的提取。
3. 超临界萃取法超临界萃取法是一种先进的提取技术，该方法适用于油脂、脂肪酸和挥发性组分等物质的提取。
在此方法中，天然药物被置于高压模式下的高温超临界流体中，如二氧化碳，真空将药物流体蒸发后，得到纯净的萃取物。
天然药物分析的方法天然药物提取后，需要进一步分析以了解其成分。
以下是一些常见的分析方法：1. 高效液相色谱（HPLC）HPLC是一种分离和测定化合物的方法，它使用流动相（通常是气体或液体）将混合样品分开。
HPLC对于精确定量测定、准确度和灵敏度都具有很高的精度。
2. 质谱（MS）质谱是测量分子的质量和分析分子结构的技术。
质谱可用于定性分析和定量分析。
定性分析可以确定在药物中存在哪些化合物，而定量分析则可以测量每种化合物的相对浓度。
3. 核磁共振（NMR）核磁共振是一种分析核磁性原子的技术，并用于识别和分析化合物的结构。
配合其他分析方法进行分析，其准确度更高。
总结提取和分析天然药物的技术能够提供有关其组成和成分的关键信息。
随着天然药物在临床实验和药物开发中的应用不断增加，对其提取和分析的需求也不断提高。
通过更好的了解和分析天然药物，可以更好的发现和利用其药物学特性，为人们的健康和医疗提供更多的选择。
天然药物化学成分的研究分析作者：王颖来源：《现代盐化工》2020年第05期摘要：中华文明传承五千年，远古时期伏羲、神农尝百草，始有医药之传说。
伴随当今医疗事业的发展，为了达到更高的医疗水准，需要从天然药物中提取更多的药物化学成分。
天然药物化学成分不局限于植物，还可以从动物、微生物甚至矿物中提取。
着重对天然药物化学成分进行分析，对药物背景、生长规律、加工贮藏的影响以及药物内不同化学成分的构造关系进行详细分析。
关键词：天然药物；化学成分；构造关系自古以来，天然药物都是医疗药物的重要来源。
现如今，许多化学药物都是由天然药物中的化学成分提炼而来，例如毛花甘C就是从毛花洋地黄中提取出来的。
对天然药物中的化学成分进行分析，提取药物中的有效成分，获取其药物组成结构特征，使其对人体发挥有效作用是当前天然药物研究的重点。
1 天然药物发展背景纵观人类历史，人类的进化是与各种病症抗争的历程。
根据历史记载，人类对天然药物的应用已经经历数以万计的实验。
过去，人体的疼痛被称为“疾病”，也因此诞生了“医者”。
医者通过各种途径寻找解决或者减缓“疾病”的方法，而所找到的“材料”大多数都是天然药物。
经过一代代的传承和改进，现在这种药物在国内外有不同的定义：国外称之为“天然型药品”，而国内称作“中药”（亦称中本药）[1]。
不管命名如何，在本质上都是取自天然资源，直接或间接地提炼其中具有医疗成效的多元化物质，包括一些地区的常见生物，例如生活在热带、亚热带和温带地区的幼蝉猴，幼蝉猴是蝉（亦称知了）的幼虫，除了自身的使用价值，其在蜕变成蝉之后遗留的外壳亦具有益精、強阳、解渴、促肺、抗菌、抗高血压、治疗脱发、抑制癌症等药用价值[2]。
在当今世界范围内，依旧有许多部落和民族使用传统药物，令人吃惊的是，即使是在世界经济走下坡路的时候，新型天然药物成本每年依旧以不小于17%的增长率递增。
2 对天然药物生长规律的研究天然药物化学成分对现代医学的发展有十分重要的作用，因此，需要对药物的生长规律进行细致研究。
天然药物中无机元素的测定方法。
摘要无机元素是生命体系的基础，广泛存在于天然药物中。
因此，无机元素的测定对天然药物质量的评价具有重要意义。
本文综述了无机元素测定的方法，包括传统的分光光度法、原子吸收光谱法、电感耦合等离子体质谱法等，以及近年来发展起来的电感耦合等离子体光谱法、量子点荧光法等新技术。
此外，还对这些方法在天然药物中的应用进行了分析，包括了对中药材、植物药、海洋生物等不同类型天然药物的无机元素分析。
最后，本文探讨了无机元素测定在天然药物研究中存在的问题，并提出了相应的解决方案。
关键词：无机元素；天然药物；分光光度法；原子吸收光谱法；电感耦合等离子体质谱法；电感耦合等离子体光谱法；量子点荧光法AbstractInorganic elements are the foundation of the life system and exist widely in natural medicines. Therefore, the determination of inorganic elements is of great significance for the quality evaluation of natural medicines. This paper reviews the methods for determining inorganic elements, including traditional methods such as atomic absorption spectrometry, inductively coupled plasma mass spectrometry, and new technologies such as inductively coupled plasma optical emission spectrometry and quantum dots fluorescence. In addition, this paper analyzes the applications of these methods in the analysis of inorganic elements in different types of natural medicines, such as Chinese herbal medicines, plant medicines, and marine organisms. Finally, this paper discusses the problems of determining inorganic elements in natural medicines research and proposes correspondingsolutions.Keywords: inorganic elements; natural medicines; spectrophotometry; atomic absorption spectrometry; inductively coupled plasma mass spectrometry; inductively coupled plasma optical emission spectrometry; quantum dots fluorescence引言天然药物是指以天然物质为原料制备的药品，具有源头清洁、性质稳定、治疗效果显著等特点。
名词解释天然药物化学天然药物化学是研究天然药物的化学成分和化学性质的学科。
天然药物是指从植物、动物、微生物等自然界中提取的药物，其来源于自然界的生物多样性，具有悠久的历史和广泛的应用。
天然药物化学的研究内容主要包括以下几个方面：1. 天然药物的提取和分离：天然药物化学研究的第一步是从天然来源中提取药物，并通过化学方法进行分离纯化。
这需要运用不同的提取技术，如溶剂提取、萃取、蒸馏等，以及色谱、电泳等分离技术。
2. 天然药物的化学成分分析：天然药物化学研究的重点是确定药物的化学成分。
通过使用不同的分析技术，如质谱、核磁共振、红外光谱等，可以确定药物中存在的化学物质的种类和结构。
3. 天然药物的化学性质研究：天然药物化学研究还包括对药物的化学性质进行研究。
这包括药物的物理性质（如溶解度、熔点等）和化学性质（如稳定性、反应性等）的研究，以及对药物的药理学作用机制的研究。
4. 天然药物的合成和修饰：天然药物化学研究还涉及对天然药物的合成和修饰。
通过对药物分子结构的理解，可以合成类似结构的分子，以获得更好的药物活性和选择性。
此外，还可以通过对药物分子结构的修饰，改变其药性和药代动力学特性，以提高药物的疗效和减少副作用。
天然药物化学的研究对于药物的发现、开发和应用具有重要的意义。
通过研究天然药物的化学成分和化学性质，可以更好地理解药物的活性和药效，为药物的设计和合成提供参考。
此外，天然药物化学研究还可以为天然药物的质量控制和标准化提供科学依据，保证药物的安全和有效性。
总之，天然药物化学是研究天然药物的化学成分和化学性质的学科，通过对天然药物的提取、分离、分析和研究，可以揭示药物的活性和作用机制，为药物的发现和开发提供科学依据。
天然药物中活性成分的提取和分离导言天然药物中常含有多种活性成分，如何从大量的混合物中提取出目标成分，是制药企业和科研人员一直感兴趣的问题。
天然药物中的活性成分提取和分离工作关系到药物的质量和有效性，是制药研究的重要步骤。
本文将针对天然药物中活性成分的提取和分离进行介绍。
第一部分：活性成分的提取天然药物中活性成分的提取可分为常规提取法和特殊提取法两类。
（一）常规提取法1. 水提法水提法是最常用的提取法之一，通常是将药材研磨成粉末，经过煮沸或浸泡等过程，将目标成分溶解在水中，再通过蒸馏等方法将水分离出。
水提法适用于水溶性较好的成分。
2. 醇提法醇提法可以通过使用不同种类的醇来提取目标成分，如乙醇、丙醇、甲醇等。
与水提法相比，醇提法可以提取更多的脂溶性成分。
但需要注意的是，醇提法容易引起挥发性成分的损失，需严密控制温度和时间等因素。
3. 挥发油提取法挥发油提取法主要用于提取药材中含有香气成分的物质，如薄荷脑、丁香油、葛根油等。
该法在药材的加热过程中，香气成分挥发后，通过冷却、凝固等步骤将目标成分分离出。
（二）特殊提取法1. 超声波提取法超声波提取法是一种新兴的提取技术，其原理是通过高频超声波的振动作用将药材的细胞壁破开，使目标成分更容易被提取出来。
该方法具有提取速度快、提取效率高等优点。
2. 微波辅助提取法微波辅助提取法是一种利用微波辐射加快药材中目标成分的释放和分离的方法。
该方法具有时间短、效率高、节能等优点。
第二部分：活性成分的分离（一）色谱法色谱法是目前用于天然药物中活性成分分离的主要方法，包括GC、HPLC、TLC等多种分离技术。
1. GC法气相色谱（GC）是一种分离挥发性成分的有效方法，它将样品注入气相色谱柱并进行加热，然后根据化学成分特性从柱中分离目标成分并检测。
2. HPLC法高效液相色谱法（HPLC）是目前广泛应用的天然药物中活性成分分离方法之一。
它将样品通过提取、预处理等工序得到样品溶液，然后以样品组成不同的溶剂为移动相，利用填料为固定相的柱进行分离。
《天然药物分析》3章光谱光谱分析是一种常用的方法，用于研究药物的结构和性质。
在天然药物分析中，光谱分析可以被用来鉴定和定量天然药物中的化学成分。
光谱分析的原理是物质吸收或发射特定波长的光线。
根据被测物质对光线的吸收或发射特性，可以得到关于物质的结构和性质的信息。
主要的光谱分析方法包括紫外可见吸收光谱（UV-Vis）、红外光谱（IR）、拉曼光谱、核磁共振（NMR）等。
在天然药物分析中，紫外可见光谱是最常用的光谱分析方法之一、该方法测量物质对紫外和可见光的吸收，通过观察吸收峰的位置和强度，可以判断物质的结构和浓度。
紫外可见光谱对天然药物中的芳香环和共轭体系非常敏感，因此可以用来鉴定并定量这些化合物。
红外光谱分析也广泛应用于天然药物的研究。
红外光谱能够提供关于物质中官能团的信息，如羟基、羰基、氨基、硫醇等。
通过分析红外光谱，可以确定物质的结构和功能基团，并与已知物质进行比对，从而鉴定未知化合物。
拉曼光谱是一种非常灵敏的光谱分析方法，在天然药物研究中也有广泛的应用。
拉曼光谱通过测量样品中光散射的强度和频率，来提供关于样品分子振动和转动信息。
由于拉曼光谱与分子结构相关，因此可以用来鉴定和分析天然药物中的化合物。
核磁共振是一种非常强大的光谱分析方法，可以提供关于核自旋的信息。
核磁共振光谱通过测量样品中原子核的共振频率，可以得到关于样品中原子核的化学环境，以及分子之间的相互作用等信息。
在天然药物研究中，核磁共振光谱常用于鉴定和定量分析复杂结构的化合物，如天然产物。
总之，光谱分析是天然药物研究中不可或缺的方法之一、紫外可见吸收光谱、红外光谱、拉曼光谱和核磁共振等光谱分析方法可以提供关于天然药物中化学成分的信息。
根据光谱的特征，可以鉴定未知化合物，定量分析天然药物中的成分，并进一步研究天然药物的药理作用和药物代谢等方面。
药物化学在天然药物分析中的应用药物化学是一门研究药物合成、性质以及药物与生物体相互作用的学科。
它在天然药物分析中发挥着重要的作用，通过利用药物化学的原理和技术手段，可以为天然药物的研究、开发和应用提供有力支持。
本文将介绍药物化学在天然药物分析中的应用。
一、药物化学分析方法的应用1. 药物合成的监控药物化学分析方法可以用于监控天然药物的提取和纯化过程中，分析各个步骤中的药物含量和纯度，确保药物的质量。
同时，药物化学分析还可以检测合成药物中的杂质，保证合成药物的纯净度和安全性。
2. 药物结构的表征药物化学分析方法可以通过质谱、红外光谱和核磁共振等手段，对天然药物中的化学结构进行表征。
这些结构信息对于研究药物的药效和作用机制具有重要意义，为天然药物的开发和改良提供了基础。
二、分子模拟在天然药物分析中的应用分子模拟是药物化学领域常用的一种计算方法，它可以通过计算机模拟天然药物与药物靶标之间的相互作用，预测药物的活性和选择性。
分子模拟通常可以提供药物分子的3D结构、药物靶标的结合模式以及药物与靶标之间的作用力等信息。
1. 药物的设计优化在天然药物的研究和开发过程中，分子模拟可以帮助研究人员设计和优化药物结构，改善药物的活性和选择性。
通过模拟药物与靶标的结合模式，可以预测药物分子在靶标上的结合位点、作用力等信息，为药物的结构改造提供指导。
2. 药物分子的筛选分子模拟还可以用于药物分子的筛选工作。
通过建立药物分子库和靶标数据库，利用分子对接模拟等方法，可以高效地对药物分子进行筛选，找到具有潜在药效的化合物。
三、质谱技术在天然药物分析中的应用质谱技术是药物化学分析中常用的一种手段，其可以对复杂的化合物进行快速和准确的鉴定和定量分析。
1. 结构鉴定质谱技术可以通过电离和质子化等过程，将天然药物中的化合物转化为带电离子，并用质谱仪进行分析。
通过分析药物分子的质谱图，可以推测化合物的分子量、化学组成以及结构信息。
2. 定量分析质谱技术可以通过标准品法或内标法进行定量分析，测定天然药物中化合物的含量。
二、水蒸汽蒸馏法：挥发油、小分子化合物三、升华法：樟脑、香豆素四、压榨法：龙舌兰中海柯皂苷元五、酶解法：苷元六、化学法：内酯七、超声波萃取八、超临界流体萃取（SFE)九、膜分离技术大类成分样品制备一、生物碱–强碱• 非极性有机溶剂萃取• 极性有机溶剂萃取• 水提或酸水提–弱碱有机溶剂直接提取–水溶性生物碱或季铵碱：雷氏盐、磷钨酸–挥发性生物碱：水蒸气蒸馏、升华法二、黄酮–醇提–铅盐沉淀法三、皂苷：醇提–精制方法• 醇－醚沉淀法• 铅盐沉淀法• 胆甾醇沉淀法• 氧化镁吸附法四、强心苷：醇提五、挥发油–水蒸汽蒸馏–浸取法：石油醚–吸收法：豚脂、牛脂–冷压法第三节供试品溶液的精制溶剂分离法：多糖提取、去蛋白液液萃取：石油醚除脂溶性色素沉淀法：醋酸铅除酸性物质和鞣质盐析法：丹皮酚－－氯化钠色谱法：柱色谱、薄层色谱、气相色谱、高效液相色谱等常见杂质的处理1、鞣质：明胶沉淀、生物碱沉淀、醋酸铅、氨水沉淀2、叶绿素：苯、氯仿、铅盐3、油脂、蜡和树脂：石油醚、苯4、蛋白质：乙醇、甲醇、铅盐5、无机盐：醇提、透析6、糖和淀粉：有机溶剂提取水分检查法烘干法（不含或少含挥发性成分）甲苯法（含挥发性成分）减压干燥法（含挥发性成分贵重药）GC法（气相色谱法）古蔡法检查砷的原理为金属锌与酸作用产生新生态的氢，与药物中微量砷盐反应生成具挥发性的砷化氢，遇溴化汞试纸，产生黄色至棕色的砷斑，与一定量标准砷溶液所生成的砷班比较，判定药物中砷盐的含量。
醋酸铅棉花、溴化汞试纸、标准砷溶液、盐酸、碘化钾试液、酸性氯化亚锡试液、锌粒常用的理化鉴定方法显微鉴别定性反应（颜色或沉淀反应）色谱法波谱法（2）颜色或沉淀反应各类成分因结构或功能团的不同，常与某些特定试剂发生反应，产生不同的颜色或沉淀。
–生物碱与碘化铋钾生成橙色沉淀；–蒽醌类与碱液反应生成橙、红、蓝色；–黄酮类与盐酸镁粉的反应–内酯类的异羟肟酸铁反应–皂甙类的Liebermann一Burchard反应–酚类的三氯化铁反应–鞣质的明胶沉淀反应–氨基酸的茚三酮反应–糖类的苯酚－硫酸反应等。
–对照药材法阳性对照：将要鉴别的药材按制剂工艺处理，再按鉴别方法提取的溶液阴性对照：把制剂中要鉴别的药材除去，用剩下的各味药按制剂工艺处理，再按鉴别方法提取的溶液分析实例—万氏牛黄清心丸牛黄—清热解毒药，主含胆酸类成分。
黄连—清热燥湿药，主要为小檗碱。
黄芩—清热燥湿药，主要为黄酮类。
栀子—清热泻火药，主含栀子甙。
朱砂—安神药，主含硫化汞（HgS）。
郁金—活血去瘀药，主含挥发油。
化学鉴别1. 朱砂的鉴别取本品3g，加水适量，研匀，反复洗去悬浮物，可得少量朱红色沉淀，取出，加入盐酸1ml及铜片少量，加热煮沸，铜片由黄色变为银白色。
HgS + 2HCl + Cu→CuCl2+ Hg + H2S在酸性条件下，朱砂与铜片发生置换反应析出金属汞，在铜片表面形成银白色汞齐色谱鉴别2. 人工牛黄的鉴别取本品，剪碎，加硅藻土0.6g，研匀，加氯仿10ml、冰醋酸0.5ml，加热回流30min,放冷，滤过，滤液蒸干，残渣加乙醇2ml使溶解，滤过，滤液作为供试品溶液。
胆酸和猪去氧胆酸加乙醇制成1ml含1mg的混合溶液，作为对照品溶液。
TLC法CMC-Na，硅胶G展开剂醋酸乙酯-正己烷-醋酸-甲醇（32:6:1:1）显色剂10%磷钼酸乙醇液，1100C,10min黄芩的鉴别供试品溶液的制备：取本品3g，剪碎，加硅藻土0.5g，研匀，加甲醇20ml，加热回流1hr,放冷，滤过，滤液作为供试品溶液。
对照品溶液的制备：黄芩苷对照品加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液。
TLC法CMC-Na，硅胶G （4%醋酸钠）使斑点更为集中展开剂醋酸乙酯-丁酮-甲酸-水（5:3:1:1）显色剂2%三氯化铁乙醇液-OH与Fe+3络合5. 黄连的鉴别供试品溶液的制备：取含量测定项下剩余的盐酸-甲醇提取液4ml，水浴蒸干，残渣加甲醇溶解，使成1ml作为供试品溶液。
对照药材溶液的制备：黄连对照药材50mg，加甲醇10ml，回流加热15min ,滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为对照药材溶液。
对照品溶液的制备：再取盐酸小檗碱对照品，加甲醇制成每1ml含0.5mg的溶液，作为对照品溶液TLC法硅胶G CMC-Na展开剂苯-醋酸乙酯-甲醇-异丙醇-浓氨试液（12:6:3:3:1）显色方式UV（365nm硅胶：微酸性极性固定相，适用于酸性、中性物质分离（可以制备成酸度不同或碱性硅胶扩大使用范围）氧化铝：碱性极性固定相，适用于碱性、中性物质分离（可以制备成中性或酸性氧化铝扩大使用范围）• 聚酰胺：含有酰胺基极性固定相，适用于酚类、醇类化合物的分离• 纤维素：含有羟基的极性固定相，适用于分离亲水性物质.薄层扫描仪中国药典采用双波长薄层扫描仪实例2用气相色谱法同时测定石菖蒲挥发油中α-细辛醚和β-细辛醚的含量色谱条件• HP-35 (二苯基-65%-二甲基硅氧烷共聚物)毛细管气相色谱柱;• 程序升温:起始温度为30 ℃,升至220℃, 保持5m进样口温度:250 ℃; 检测器温度:320 ℃;• 进样量:2. 0μl ;无分流进样;• 溶剂:甲醇; 载气:氦气; 柱头压:5. 5 04Pa ;内标物:α-萘酚。
•样品溶液的制备用水蒸汽蒸馏法提取石菖蒲中的挥发油,称取适量,以α-萘酚,以甲醇溶解,进样。
对照品溶液的制备称取α-细辛醚、β-细辛醚对照品适量,加0.2mg·ml– 1 α-萘酚的甲醇溶液制成含α-细辛醚的对照品溶液(1) 和含β-细辛醚的对照品溶液(。
灵敏度分析方法的灵敏度是指单位浓度(或量)与响应值的比值。
检测限：以信噪比来确定检测限的最低水平。
回收率．加样回收率即于已知被测成分含量的成药中再精密加入一定量的被测成分纯品2．以成药空白所做的加样回收率在成药空白（9即除去欲测成分的药材后制成的成药)）中加入一定量的被测纯品，依法测定。
示例治伤软膏中苦参碱的含量测定色谱条件的选择2.1固定相的选择曾采用苯基柱、C8、ODS、硅胶柱、DIOL和氰基柱，苦参碱、槐定碱和槐果碱均不能达到良好的分离；考虑到用反相色谱柱时，软膏基质影响色谱柱寿命最终参考苦参国家标准中苦参碱、氧化苦参碱的含量测定方法，选用氨基键合硅胶为固定相，本试验采用L)色谱柱。
2.2 流动相的选择采用氨基柱，试验了如下几种流动相系统，见表1。
最终采用苦参国家标准中苦参碱、氧化苦参碱含量测定用流动相：乙腈-无水乙醇-3%磷酸，结合本药实际情况，将比例调整为表1 流动相系统的选择乙腈-无水乙醇-3%磷酸(84:9:7) 苦参碱出峰时间合适，无干扰，苦参碱出峰太慢乙腈-无水乙醇-0.1%磷酸(调节PH至2.5)，(80:10:10)乙腈-无水乙醇-3%磷酸(80:10:10) 苦参碱出峰太早，有干扰结果流动相组成2.3检测波长的选择采用苦参国家标准中苦参碱、氧化苦参碱的含量测定用波长220 nm前处理方法的选择先后采用甲醇水浴提取法，乙醇水浴提取法，氯仿放置过夜提取法，氯仿振摇提取法，氯仿回流法，氯仿超声提取法。
甲醇、乙醇水浴提取方法简单，但提取出的成分复杂，干扰苦参碱的测定。
以氯仿作为提取溶剂提取率高且杂质干扰少，我们比较了以下几种提取方法：氯仿放置过夜提取法、氯仿振摇提取法、氯仿回流法、氯仿超声提取法。
氯仿放置过夜提取和氯仿振摇提取法提取率均不高且操作不便，费时。
通过比较，超声提取和回流提取测得的含量接近，因超声提取操作步骤简单，所以选择此方法处理供试品。
3.1 超声时间的考察表2 超声时间的考察0.056 0.060 0.060 0.065 0.065苦参碱含量(%)超声时间(min) 3.2冰浴时间的考察为了防止软膏中脂溶性基质影响色谱柱寿命，采取冰浴的方式使脂溶性基质尽可能析出，再离心除去。
表3冰浴时间的考察测得含量（％）冰浴时间（min） 20 40 50 60 70试验结果表明：冰浴1小时以内不会造成样品含量降低考虑时间长有利于基质析出，最终确定为60 min。
复溶溶剂的选择曾选用甲醇作测定法色谱条件及系统适用性以氨基键合硅胶为填充剂；以乙腈-无水乙醇-3%磷酸溶液(84:9:7)为流动相；检测波长220 nm。
理论板数按苦参碱峰计算应不低于1500。
对照品溶液的制备精密称取苦参碱对照品适量，加流动相溶解，制成每1ml含苦参碱80 g的溶液，即得。
供试品溶液的制备取本品内容物约2.5 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，尽可能平铺于底部，加氨水1 ml，充分浸润膏体后，精密加入氯仿50ml，密塞，称定重量，60 ℃超声处理（功率250W，频率40kHz）1小时，放冷，再称定重量，用氯仿补足减失的重量，摇匀，转移至分液漏斗中，分取氯仿层，滤过，精密量取续滤液25 ml置100 ml烧杯中，80℃水浴蒸干，残渣精密加入流动相10 ml，密闭，超声3分钟，并时时振摇，所得溶液转移至10ml具塞玻璃离心管中，密塞，置冰浴中静置1小时，离心20分钟（4000转/分），取上清液作为供试品溶液。
测定法分别精密吸取对照品溶液和供试品溶液各20l，注入液相色谱仪，测定，即得。
本品每支含苦参碱（C15H24N2O）不得少于10 mg。
为复溶溶剂，图谱显示对苦参碱峰有干扰，采用流动相复溶没有干扰，所以选择流动相为溶剂。
5 方法学验证5.1专属性试验①空白溶剂的制备流动相作为空白溶剂：乙腈-无水乙醇-3%磷酸（84:9:7）；②苦参碱对照品溶液的制备取苦参碱对照品约10 mg，精密称定，置50 ml容量瓶中，流动相溶解并稀释至刻度，摇匀，精密量取20 ml置50 ml容量瓶中，流动相稀释至刻度，摇匀，作为对照品溶液，精密量取20 l，注入液相色谱仪，测定，即得；③苦参碱、氧化苦参碱、槐定碱、槐果碱、氧化槐果碱混合对照溶液的制备分别取上述对照品适量，流动相溶解，摇匀，即得；④不含苦参的阴性对照供试品溶液的制备取不含苦参的阴性对照软膏内容物约2.5 g，依“测定法”中供试品溶液的制备方法操作，即得；⑤软膏供试品溶液的制备定量限苦参碱对照溶液稀释浓度为每1 ml含245 ng的溶液时，色谱图中苦参碱的信噪比约为10（见附图6），所以苦参碱的最低定量限为245 ng/ml线性试验精密称取苦参碱对照品12.25mg，置50 ml量瓶中，加流动相溶解并稀释制成每1 ml含245 μg的溶液，作为贮备液；分别精密量取贮备液2、5、10、12.5和20 ml于25 ml量瓶中，用流动相稀释至刻度，摇匀，得稀释液(1)、(2)、(3)、(4)和(5)。
分别精密量取各稀释液20 μl，注入液相色谱仪，记录色谱图，测定结果见表。
Y=9943.8X-8472.9回归方程187387 481722 961907 1206829 1941545 2428906 平均峰面积（A）C（μg/ml） 19.6 49 98 122.5 196 2455.4 精密度试验重复性取2批供试品，照“测定法”项下方法操作，一天内共分析6次，计算含量200071101批治伤软膏重复性试验考察RSD% 1.80平均值（mg支）含量（mg/ 18.支）分析次数1 2中间精密度进样精密度试验6回收率试验取苦参碱对照品约21 mg，精密称定，置50 ml量瓶中，用纯水溶解并稀释到刻度，制成422.9 μg/ml的对照品储备液。
