klh载体蛋白分子量

一、Frdbio –SH介导多肽与载体偶联1. cKLH载体蛋白与sulfo-SMCC的偶联（以偶联20mg多肽为例，根据实验实际偶联量，所有试剂体积作同比缩放）1.1 称取20mg cKLH（Frdbio，Cat No.: BCJ0002），溶于2ml超纯水，配成【10 mg/ml cKLH溶液】。

1.2 称取10 mg Sulfo-SMCC(Frdbio)于2ml超纯水配成【5mg/ml Sulfo-SMCC溶液】。

1.3 将以上两种溶液等体积混匀，室温(25℃)反应60 min或者37℃反应30 min，磁力搅拌器慢速均匀搅动反应，避免产生气泡。

1.4 反应完后将以上反应溶液装入10kD透析袋，在PBS（pH7.2）溶液中透析除去过多Sulfo-SMCC，每隔3h换液，至少换3～4次，确保透析完全，即为【活化的cKLH载体】（有条件的也可以用sephdex-G25分子筛色谱分离或超滤管。

活化的cKLH要尽快使用，不可久放。

）2. 多肽的偶联偶联前需检测多肽中-SH活性。

2.1 Ellman试剂法检测多肽-SH状态:方法：在96孔酶标板中，10μl多肽+100μl Ellman试剂，用分光光度计在96孔酶标板中412nm进行测量，OD ＞0.15时，多肽SH正常，如果OD＜0.15，说明多肽被氧化或者自我交联，不可使用。

偶联完成之后，透析前用上述同样方法检测DO＜0.03时，说明多肽已经80%以上全部偶联，可继续添加多肽；如果OD＞0.03，说明多肽过量未全部偶联。

如果没有Nano分光光度计，直接观察颜色，颜色变黄，说明游离—SH过量。

2.2 称取20mg多肽溶解于5ml交联缓冲液(0.1M PB，0.15M NaCl)中，配成【4mg/ml的多肽溶液】（对于难溶肽，可用≤30%的DMSO溶解），一般我们只偶联5～10mg多肽，等比例缩小体积即可。

2.3 将第1.4步透析好的cKLH与第5步配好的【4mg/ml多肽溶液】混合，室温(25℃)4h。

载体蛋白的信息BSA的序列1 mkwvtfisll llfssaysrg vfrrdthkse iahrfkdlge ehfkglvlia fsqylqqcpf 61 dehvklvnel tefaktcvad eshagceksl htlfgdelck vaslretygd madccekqep121 ernecflshk ddspdlpklk pdpntlcdef kadekkfwgk ylyeiarrhp yfyapellyy181 ankyngvfqe ccqaedkgac llpkietmre kvltssarqr lrcasiqkfg eralkawsva241 rlsqkfpkae fvevtklvtd ltkvhkecch gdllecaddr adlakyicdn qdtissklke301 ccdkplleks hciaevekda ipenlpplta dfaedkdvck nyqeakdafl gsflyeysrr361 hpeyavsvll rlakeyeatl eeccakddph acystvfdkl khlvdepqnl ikqncdqfek421 lgeygfqnal ivrytrkvpq vstptlvevs rslgkvgtrc ctkpesermp ctedylslil481 nrlcvlhekt pvsekvtkcc teslvnrrpc fsaltpdety vpkafdeklf tfhadictlp541 dtekqikkqt alvellkhkp kateeqlktv menfvafvdk ccaaddkeac favegpklvv601 stqtalaY=21 H=17 W=2 K=60 E=59 D=40HRP的序列1 mqltptfydn scpnvsnivr dtivnelrsd priaasilrl hfhdcfvngc dasilldntt61 sfrtekdafg nansargfpv idrmkaaves acprtvscad lltiaaqqsv tlaggpswrv121 plgrrdslqa fldlananlp apfftlpqlk dsfrnvglnr ssdlvalsgg htfgknqcrf181 imdrlynfsn tglpdptlnt tylqtlrglc plngnlsalv dfdlrtptif dnkyyvnlee241 qkgliqsdqe lfsspnatdt iplvrsfans tqtffnafve amdrmgnitp ltgtqgqirl301 ncrvvnsnsY=5（Tyr，酪氨酸） H=3 W=1 K=6 E=7 D=21KLH：其所处溶液的氯化钠浓度要大于0.6m；以KLH的分子量为500000，每一摩尔的KLH有2000多个LYS的侧链氨基，700多个半胱氨酸的-SH（不知道是否都是游离的），还有1900个Tyr；KLH在50%的DMSO溶液中能溶，在60%时变浑浊，在67%彻底沉淀；BSA：有59个Lys的侧链氨基，但只有30-35个可用来交联；有40个ASP和59个GLU；一个游离的-SH，17个二硫键；19个Tyr的苯环，17个His基团，重氮盐可与这两个基团反应；在35%的DMSO中可溶，40%变浑浊，45%沉淀；在小于50%的二氧六环溶液中可溶；OV A：20个Lys残基，14个ASP和33个GLU，即20个侧链氨基和47个侧链羧基；4个-SH；10个Tyr，7个His;在70%的DMSO中可溶，75%变浑浊，80%沉淀；HRP：5个Tyr，3个His, 参与重氮法的偶联；21个ASP，7个GLU；即28个侧链羧基；6个LYS，即有6个侧链氨基；。

抗β淀粉样蛋白单抗杂交瘤的建立及免疫学特性的分析（作者:___________单位: ___________邮编: ___________）作者：赵满仓魏文青张艳焦娟刘晶付瑶【摘要】目的制备抗β142淀粉样蛋白（Aβ142）单克隆抗体，并对其免疫学特性进行了分析，为进一步探讨阿尔茨海默病（AD）的发病机制打下基础。

方法用合成的Aβ142偶联血蓝蛋白（KLH）制成抗原，免疫BALB/c小鼠制备抗Aβ142单克隆抗体，并对抗体的免疫学特性进行分析。

结果从24个阳性孔中筛选出6株特异性好效价高的细胞株，命名B1～6，其中B2、B3、B4、B6属于IgG2a亚型，而B1、B5属于IgG2b亚型。

测得相对亲和力B6＜B1、B4＜B2＜B3、B5。

结论成功制备出特异性好、效价高的抗Aβ142蛋白单抗杂交瘤细胞株，为下一步的深入研究打下基础。

【关键词】β142淀粉样蛋白；阿尔茨海默病；单克隆抗体；免疫学特性大量的流行病学、神经病理学及动物模型研究等均证明了β淀粉样（βamyloid，Aβ）蛋白在阿尔茨海默病（AD）的发病及发展中起着关键性作用〔1～3〕。

因此，许多治疗AD的方法靶向减少Aβ产生和清除Aβ沉积。

Schnek等〔4〕用人工合成的Aβ142多肽免疫PDAPP小鼠，10月龄以上的动物模型出现老年斑的现象基本被控制。

Janus等〔5〕在转基因小鼠分别进行了Aβ的免疫接种实验，不但使动物的Aβ过载得以减轻和老年斑的出现明显减少，而且观察到疫苗对动物模型的认知功能障碍具有预防作用。

为此，国内外许多学者都致力于研制针对Aβ不同片段的多克隆及单克隆抗体，用于AD的免疫治疗研究。

此外，Aβ抗体还可用于AD的诊断和预防的研究。

本研究以合成的Aβ142免疫BALB/c小鼠，利用传统的杂交瘤技术，建立了稳定分泌单抗的6个杂交瘤细胞株，并对所得6株单抗的特异性和亲合力进行了分析。

1 材料与方法1.1 主要试剂Aβ142多肽由北京博奥森生物技术有限公司采用FMOC有机化学固相合成法合成，HPLC纯化，纯度90%以上；用BDB法偶联载体蛋白KLH（血蓝蛋白）。

klh蛋白分子量
KLH蛋白分子量
KLH是一种结构上简单的呈螺旋状的磷脂蛋白，又称凝集氨基酸蛋白。

它是一种常用的免疫原，被广泛用于制造免疫血清、免疫疫苗、生物反应芯片、免疫治疗和血清学检测等。

KLH分子量的大小取决于其底物特性，其普遍范围在13.3-14.3 kDa之间。

从分子量的角度考虑，KLH具有一定的物理和化学稳定性，KLH分子量(量子化学算法)约为13-14 kDa，其结构上简单而又不失牢固稳定。

与其他Protein 类似，KLH在做免疫抗体时一般也需要BSA或是乳清蛋白，或是添加一定的阳离子表面活性剂，以增强其分子间的结合力，增强其在生物体内的免疫反应能力。

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klh标准
KLH标准（Keyhole Limpet Hemocyanin Standard）是一种用于诱导机体免疫应答的蛋白
标准。

KLH标准是由一种被称为Keyhole limpet（扁背蠔）的海洋软体动物产生的一种蓝
蛋白，具有高度的免疫原性，可以作为辅助抗原来增强疫苗的免疫原性。

KLH标准已经被广泛应用于生物医药领域，特别是在疫苗和免疫疗法的研究和开发中。

KLH标准的特性
1. 高度免疫原性：KLH标准具有高度的免疫原性，可以有效地诱导机体产生免疫应答，包括细胞免疫和体液免疫。

2. 多肽结合性：KLH标准可以结合多种多肽和蛋白质，使之成为一种优秀的载体蛋白，可以增强抗原的免疫原性。

3. 低毒性：KLH标准作为一种天然蛋白质，具有低毒性和微生物污染的风险，可以安全地应用于人体。

KLH标准的应用
1. 疫苗研究：KLH标准可以作为一种辅助抗原来增强疫苗的免疫原性，可以广泛应用于疫苗研究和开发中。

2. 免疫疗法：KLH标准可以与抗原结合形成免疫复合物，用于免疫疗法的研究和开发中，如癌症免疫疗法等。

3. 免疫诊断：KLH标准可以用于免疫诊断试剂的制备，如ELISA、Western blot等。

总结
KLH标准作为一种优秀的蛋白标准，具有高度的免疫原性、多肽结合性和低毒性，已经被广泛应用于生物医药领域。

随着生物医药技术的不断发展，KLH标准将在疫苗、免疫疗法和免疫诊断领域发挥更大的作用，为人类健康做出更大的贡献。

KLH标准的研究和开发将持续推动生物医药行业的发展，为全球的健康事业做出贡献。

KLH标准的未来将更加美好，值得期待。

klh载体蛋白分子量
KLH（Keyhole Limpet Hemocyanin）是一种常用的载体蛋白，用于免疫学研究和生物制剂开发。

KLH的分子量可以根据其多种形式和来源而有所不同，但通常在350,000至400,000道尔顿（Da）之间。

KLH是由多个亚单位组成的大分子复合物，每个亚单位的分子量约为40,000道尔顿。

这些亚单位通过非共价键结合在一起，形成KLH 的全分子。

需要注意的是，具体的分子量可能因其来源、纯度和后续处理而有所差异。

因此，在实验设计和数据分析中，应该使用具体的来源和批次的KLH，并参考供应商提供的准确数值。

EDCCat. No. : C600433C600433 package: 25 g/100 g描述EDC1-乙基-3-[3-二甲基氨基丙基]碳化二亚胺盐酸化物分子量: 191.7CAS # [25952-53-8]储存收到货后储存在干燥的-20°C 条件下，运输则在该温度下运输。

简介1-乙基-3-[3-二甲基氨基丙基]碳化二亚胺盐酸化物（EDC ）是一种零长度交联剂，用于羧基与氨基的偶联。

EDC 首先与羧基反应形成可与胺反应的O-酰基异脲中间体，其与氨基快速反应以形成酰胺键并释放异脲副产物（图1）。

中间体在水溶液中是不稳定的，因此两步共轭方法依靠N-羟基琥珀酰亚胺使其稳定。

不与胺反应将导致中间体的水解、羧基的再生和N-取代的脲的释放。

副反应形成N-酰基脲，通常仅限于位于蛋白质疏水区域的羧基。

Figure.1:. EDC reaction with carboxyl and amine-containing molecules 图1：EDC 与羧基和胺类分子的反应 使用EDC 将半连接蛋白偶联到载体蛋白的步骤所需材料1.载体蛋白：2 mg 牛血清白蛋白（BSA ），卵清蛋白（OVA ）或匙孔血蓝蛋白（KLH ） 2.共轭缓冲液：0.1M MES （2- [N-吗啉代]乙磺酸），pH 4.5~5 3.EDC ：10 mg 4.半抗原：1~2 mg 5.旋转脱盐柱或其他具有5~6K 分子量截留的凝胶过滤柱 步骤1.将EDC 放置至室温； 2.加入2 mg 冻干BSA 、OVA 或KLH 至200 μl 共轭缓冲液； 3.在500 μl 的共轭缓冲液中溶解高达2 mg 的肽或半抗原，并将其加入到200 μl 载体蛋白溶液中； 4. 对于BSA 或OVA 缀合，将10 ml EDC 溶于1 ml 超纯水中，立即将100 μl 该溶液加入载体-肽溶液中。

对于KLH 缀合，将10 mg EDC 溶于1 ml 超纯水中后，立即将50 μl 该溶液加入载体-肽溶液中。