Waters高效液相色谱仪标准操作规程

Waters高效液相色谱系统操作规程1. 目的规范Waters高效液相色谱系统的使用和维护。

2. 范围本规程适用于Waters高效液相色谱系统的使用和维护。

3. 职责质检室仪器分析员负责Waters高效液相色谱系统的日常使用和维护。

4. 系统组成本系统由Waters 600E多溶剂输送系统（有梯度控制器的高压输液泵）、Waters在线脱气机、Rheodyne 7725i 手动进样阀、Waters 2487双通道紫外检测器、Millennium32色谱工作站/电脑等组成，另外还包括打印机、断电保护器和通风柜等辅助设备。

5. 程序5.1. 准备5.1.1. 使用前应根据待检样品的检验方法准备所需的流动相（应足够；流动相必须用0.45μm滤膜过滤）、样品和标准溶液（也可在平衡系统时配制），更换合适的色谱柱（柱进出口位置应与流动相流向一致）和定量环。

5.1.2. 通电前应检查仪器设备之间的电源线、数据线和输液管道是否连接正常。

5.2. 开机和泵操作5.2.1. 开机5.2.1.1. 接通断电保护器的电源，依次打开断电保护器、脱气机、600E泵、2487检测器，待检测器自检结束显示测量状态时，打开打印机、电脑显示器、主机。

5.2.1.2. 打开Millennium32软件，按「Login...」，输入用户名和密码，按「OK」注册进入系统主界面。

在Project档内选择所需的项目，右击『Run Samples』图标，选择色谱系统“600_2487”后打开QuickSet窗口。

5.2.2. 更换溶剂5.2.2.1. 打开600E泵后，转动进口集合管阀手柄（以下简称手柄）至RUN位置；5.2.2.2. 将一塑料烧杯放在参照阀出口管下以收集分流的溶剂，向右打开参照阀（断开柱和进样器）；5.2.2.3. 按［Direct］键使其显示直接控制屏幕，设流速为1ml/min（梯度配比阀在0ml/min时不工作）；5.2.2.4. 选择欲使用的某一溶剂通道，设其比例为100%，其它为0%；5.2.2.5. 将输液管从原有溶剂瓶中取出，放入一干净的空瓶中；5.2.2.6. 逆时钟转动手柄至DRAW位置，用启动注射器从进口集合管阀的接口抽出约2ml溶剂；5.2.2.7. 再将输液管放入新溶剂瓶内，继续抽吸直到新溶剂出来并无气泡为止；5.2.2.8. 转动手柄至RUN位置，将启动注射器取下并排掉筒内的溶剂。

Waters2695高效液相色谱操作规程[开机程序]1. 状态检查：1）检查仪器外观是否完好2）检查各种线缆连接是否稳固，外表有无损伤痕迹3）确认环境温度在15至35℃之间4）相对湿度在20%至80%之间2．配件安装：无3. 接线要求：1）高效液相色谱主机电源2）连接电脑主机和显示器电源4. 开机步骤：1）打开电脑电源，进入windows系统2）打开高效液相色谱电源，仪器开始自检（约5～6min），待仪器操作面板上出现“Idle”字样表示自检成功，仪器进入待命状态。

[测试步骤]1. 进入软件1）双击电脑桌面上的Empower快捷图标，出现Empower登陆窗口。

输入用户名与密码，默认账号为“system”，密码为“manager”，点击“OK”进入Empower 工作站。

2）选择“运行样品”界面，点击“确定”,然后选择待选定的操作项目以及色谱系统2 编辑仪器方法和方法组1）在“运行样品”界面中，监视区单击方法组编辑向导。

2）选择新建按钮，弹出仪器方法编辑器。

3）通用编辑页面中，可设置单次输送体积，查看脱气选项，确认设置正确，选择等度或者梯度，总流量以及流动相配比等选项。

4）单击2475图标，弹出2475编辑界面，在波长模式中选择相应的波长模式，单波长或者双波长，输入所需的波长，选择相应的采样速率，一般为2点/秒。

5）点击“文件”，选择“另存为”，输入仪器方法名称，点击“保存”，退出。

6）在被选项中选择所需的仪器方法名称，点击“下一步”。

7）在下拉菜单中选择所需的处理方法和报告方法（如果没有合适的方法选择"无处理"、"无报告"），点击“下一步”。

8）输入方法组名称，单击"完成"。

3 运行方法进样1）在“运行样品”界面中，选择相应的仪器方法，点击“监视器”，在监视窗口监视基线至系统平衡，停止系统监视状态，点击停止按钮。

单进样，点击参数编辑快捷方式进入定义单进样参数编辑界面，输入样品名、功能、方法组等参数。

第一部分：仪器准备1. 确保waters超高效液相色谱仪处于正常工作状态，检查仪器是否连接电源，是否有故障指示灯显示。

2. 打开色谱仪软件，检查仪器参数设置是否符合实验要求，包括流速、温度、检测波长等。

3. 准备所需的色谱柱、色谱柱连接器、进样器以及其他实验所需的耗材。

第二部分：样品准备1. 准备实验所需的样品，确保样品已经滤过或者处理过以去除杂质。

2. 根据实验要求，将样品溶解在适当的溶剂中，并进行稀释或者稀释。

第三部分：超高效液相色谱仪操作步骤1. 开始操作前，先进行系统平衡。

具体操作步骤为：将色谱柱连接至色谱柱连接器上，然后连接至色谱仪，用洗脱液平衡色谱柱。

2. 设置色谱仪的操作参数，包括流速、温度、检测波长等。

3. 进行样品进样，具体操作步骤为：将进样器连接至色谱仪，将稀释好的样品注入进样器中，设置好进样量。

4. 开始进行实验，监控色谱图谱的变化，记录实验数据。

5. 实验结束后，对色谱柱和色谱仪进行清洗和维护，确保仪器干净、整洁。

第四部分：数据处理和分析1. 对实验获得的数据进行处理和分析，比对标准曲线，计算样品中所含物质的浓度或者纯度。

2. 对实验结果进行统计分析，进行数据呈现，如绘制色谱图谱、制作数据统计图表等。

3. 通过数据处理和分析，得出实验结论，对实验结果进行解释和讨论。

第五部分：实验安全及注意事项1. 在操作过程中，注意个人安全，避免发生化学品溅泼或者接触有害物质。

2. 操作过程中需严格按照实验要求和操作规程进行，如有疑问请及时向实验指导老师或专业人士请教。

3. 实验结束后，及时清理实验台面和仪器设备，妥善存放试剂和耗材。

通过以上步骤的操作，可以保证在使用waters超高效液相色谱仪进行实验时，能够得到准确、可靠的实验结果，为科研工作和学术研究提供有力支持。

第六部分：精密控制与调试1. 在进行实验操作前，要确保色谱仪的各项参数已经精确调试完毕。

这包括流速、温度、压力、检测波长等参数的精准控制。

目的：建立高效液相色谱仪标准操作规程，规范操作。

范围：Waters高效液相色谱仪职责：操作人员。

规程：一、开机1、依次开启电脑、泵、检测器电源。

1.1 泵（2695）自检完成后出现以下画面：.按右侧按键面板上的Menu/Status 出现以下画面：按会出现选择图片中的3WetPrime点OK以替换系统中的溶剂。

选4PurgeInjector以新流动相替换样品定量环和注射器中的旧流动相。

完成此操作后即可设定流速走流动相。

1.2 紫外检测器（2489）自检完成后检测器面板显示如下：按数字键输入待测波长后按 Enter 即可。

1.3 蒸发光散射检测器（2424）自检完成后检测器面板显示如下：按数字键设定Gain (增益)，按箭头键移动光标同法设定 psi (气体压力)，每项设定均需按Enter 。

Neb (喷雾器温度)，Tube(漂移管温度)设定时需先按键再同前项方法进行设定。

二、检测2.1数据采集Empower工作站点击桌面上的图标出现只有在用户名及密码处输入操作人的用户名及密码才可进入工作站进行样品检测及数据处理先点击配置系统设置泵及将用检测器的连接，如下图设置完成后退出，再点击运行样品进行样品检测，如下选择所要运行的仪器连接及所保存的项目名点确定后出现下图点击创建方法组编辑样品检测方法文件，如下图设定流速，流动相，温度，波长等检测条件并保存方法。

如下图操作示例点击下图中的箭头处选定所设定的方法，并点击设置仪器即按所设方法运行，如想查看基线则点击监视器即可。

柱平衡完成后即可进样，进样可选择单进样，在下图中输入相关项目点击完成进样。

也可编辑样品组进样，点击出现下图按项目编辑完成保存后点击运行样品组即可对样品进行采集。

（样品的所有信息，如名称，批号都可以在“样品名称”项中体现）2.2数据处理访问数据的查看界面在下图中点击浏览项目选择目标项目出现下图点通道即可查看采集完成的样品（如未看到想要查看的样，点即可）使用向导建立处理方法处理方法中的峰宽参数处理方法中的阈值参数处理方法中的时间参数处理方法中的其他参数处理方法中的校正参数2.3数据输出选中所需输出的样品，如下图操作三、关机检测完成后，执行关机程序清洗仪器，全部完成后关闭工作站及仪器电源即可。

1目的规范Waters高效液相色谱仪使用操作。

2适用范围Waters高效液相色谱仪的使用操作。

3责任者质管部QC检验人员。

4内容4.1 系统进入4.1.1 依次开UPS电源、检测器、泵、打印机、电脑主机电源。

4.1.2 电脑进入自检，自检完成后，进入“ Program Ma nager ”窗口。

4.1.3 在“ Program Man ager” 窗口，双击“ Mille nn ium ”图标，进入相应窗口。

4.1.4 在“Millennium ”窗口，双击“ Session Manage” 图标，进入“ Millennium V2.10 ”窗口，进行内存自检。

4.1.5 内存自检完成后，进入“Millennium Login —Version2.10 ”窗口，在“User Name 输入“system”，在“Password”输入“manager”，按“ Login ” 进入“Millinniam Versi on 2.10 —Sessi on Man age—User System” 窗口，双击所选“ Project ”图标，即进入“ Project ”窗口。

4.2 进样4.2.1 在“ Project ”窗口下，按“ Tools ”图标群中“ Quickset ”图标进入“System-open” 窗口，选择“ PCM-410”。

4.2.2 按“OK加以确认，该窗口自动退出，进入自检。

4.2.3 自检完毕，进入“ Quick Set”窗口，按“ Mode'选择“ Quick Start ”进入“ Method Set ”窗口，选择“ Using Exiting Method ”自动进入“ Quick Set Acquisition ”窗口，按“ Set Up Instrument ”，进入仪器安装状态。

4.2.4 安装完毕，按“ Can cel”，退出“ Quick Set Acquisiti on ”窗口，在样品登记表上填写样品名、类别、进样体积、运行时间。

编写：审核：批准：日期：日期：日期：生效日期：1.目的：规范Waters1525型高效液相色谱仪的操作，确保检测设备安全稳定的运行。

2.范围：适用于Waters1525型高效液相色谱仪的操作使用。

3.职责：检验员负责本规程的执行。

4.操作步骤4.1开机前检查流动相对应泵单元放置，检查电源线接口连接完好4.2色谱柱的安装安装待测样品所需的色谱柱，注意色谱柱方向。

打开柱温箱电源开关，设置柱温箱温度。

4.3开机4.3.1泵单元打开泵电源，待自检通过后排气泡。

（注：上泵是B泵，一般放置水系流动相；下泵是A泵，一般放置有机系流动相。

）拧开上泵排液（空）阀螺旋，用注射器抽去管道及泵头内气泡，然后立即拧紧排液（空）阀螺旋。

下泵排气泡操作与上泵相同。

4.3.2打开检测器电源等待自检通过，大约5min。

4.3.3打开色谱工作站打开计算机电源，点击桌面图标，进入Breeze2 色谱工作站，用户名输入breeze，点击确定按钮，操作的项目选择“hd”，色谱系统选择“1525/2489”，点击确定。

4.4建立分析方法点击（调用方法组编辑器向导）图标，点击对话框中的“新建”，在电脑下方任务栏中出现（仪器方法编辑器），点开，设置波长等条件，再点击，设置A、B两泵的流速，然后点击保存图标，在对话框中输入此方法的名称，比如“亚麻酸方法”，再点击保存。

在“新方法组”的对话框中点击图标，选择“亚麻酸方法”，点击两次下一步，再点击完成。

4.5平衡仪器点击(平衡系统/监视基线图标)，在对话框中，选择方法如“亚麻酸方法”，点击设置。

等待仪器设置反应，再次点击（平衡系统/监视基线）。

等待基线平衡（一般约30-40min）。

4.6进样与数据采集：基线平衡后（30-40min），点击（中断正在运行的样品组或单进样）图标，结束平衡。

点击（单进样）图标，编辑样品名称、进样体积和运行时间，选择方法组，点击进样即可开始进样。

4.7谱图处理：点击图标，点，再点，双击所要查看的谱图。

Waters Alliance高效液相色谱系统操作规程1 仪器组成及开机1.1 仪器组成本系统由Waters 2695分离单元，Waters 2996二极管阵列检测器，Waters Empower 色谱工作站和打印机组成。

各部件均备有电源插头。

1.2 开机使用时，依次接通2695分离单元、检测器、打印机和计算机的电源。

2 配置2.1 2690分离单元包括四元梯度洗脱的溶剂输送系统，四通道在线真空脱其机，可容纳120个样品瓶的自动进样系统，柱温箱，内置的住塞杆密封垫清洗系统，溶剂瓶托盘，液晶显示器，键盘用户界面及软盘驱动器。

2.2 打开电源开关，接通2695分离单元，约20秒，仪器开始自检，约1分钟后，显示主屏幕，此时继续各部件的初始化，待主屏幕上方标题区显示时，仪器进入待命状态。

2.3 溶剂管理的准备（下述的内容为操作面板键，为屏幕键）2.3.1 流动相脱气按Menu/Status，进入“Status(1)”屏幕，游标选“Degasser”，按Enter，显示选项屏幕，游标下移选“on”，按Enter。

2.3.2 启动溶剂管理系统2.3.2.1 干启动在“Status(1)”屏幕下，按Direct Function，游标选“Dry Prime”，按Enter，显示“Dry Prime”屏幕，按欲启动的溶剂管路的屏幕键，如Open A，游标选“Duration”，按数字键输入5分钟，按continue，待限定时间结束后，重复操作，使实验所需的各溶剂管路均启动、排气并冲满流动相。

2.3.2.2 湿启动在“Status(1)”屏幕下，游标选“composition”中欲使用的流动相，输入100％，按“Direct Function”，游标选“Wet Prime”，按Enter，显示“Wet Prime”屏幕，输入7.5毫升/分和6分钟，按OK，待限定时间结束后，对每种流动相重复操作。

2.3.2.3 平衡真空脱气机在“Status(1)”屏幕下，游标选“composition”，输入流动相的组成，按Enter，再用游标选“Degasser”中的“Normal”，按Enter，按Direct Function，游标选“Wet Prime”，输入0.000毫升/分和10分种，按OK。

WATERS 2695/2487/2414/2998高效液相色谱仪操作规程1. 目的：为使对WATERS 2695/2487/2414高效液相色谱仪的使用规范化，特制定本规程。

2. 范围：涉及对WATERS 2695/2487/2414高效液相色谱仪的使用。

3. 职责：QC检验员应严格遵守本规程。

4. 内容：4.1开机4.1.1接通电源，打开电脑主机、显示器的开关，进入Windows画面。

4.1.2 打开Alliance 2695系统的电源，仪器进行自检，“Idle”状态表示开机测试正常。

4.1.3 Wet Prime冲洗：少量气泡，执行Wet Prime。

A利用方向键将光标移至“composition”字段，将欲Wet Prime的溶剂输入100%。

B按“Direct Function”功能键，选择Wet Prime，按“OK”。

C选择流速和冲洗时间，按“OK”。

D重复上述步骤直至所有溶剂做完Wet Prime。

4.1.4 Dry Prime冲洗：大量气泡或者通道走空，执行Dry Prime。

A按“Direct Function”功能键，选择Dry Prime，按Enter。

B利用方向键将光标移至各通道，选择待Dry Prime的通道。

B同时打开阀门，用注射器帮助排液D重复上述步骤直至所有溶剂做完Dry Prime。

4.1.5设定溶剂：在Status(1)画面，利用方向键将光标移至“composition”字段，将所需溶剂输入适当的百分比。

4.1.6设定流速：在Status(1)画面，利用方向键将光标移至“Flow”字段，输入所需流速。

4.1.7脱气：在Status(1)画面，利用方向键将光标移至“Degasser”位置，按Enter，利用上下键选择所需要的模式（On:除气装置开启；Off：除气装置关闭）4.1.8置入转盘A打开样品转盘舱门，屏幕会显示A、B、C、D、E五个转盘，按A可取出A盘（每个转盘上可放置24个样品瓶，共计120个）。

067Waters高效液相色谱仪标准操作程序SOP 浙江巨泰药业有限公司标准操作程序印数编号第份题目：Waters2695(Alliance) .Waters2489DET.液相色谱仪标准操作程序文件编码：SOP QC9-067-01 颁发部门：质量部起草人：年月日分发部门：质量部⑵、存档审核人：年月日QA审核：年月日批准人：年月日生效日期：年月日印数：3份共6页，第1页1 目的建立Waters2695(Alliance). Waters2489DET. 液相色谱仪使用维护保养规程，保证正确操作。

2 适用范围适用于Waters2695(Alliance). Waters2489DET液相色谱仪使用维护保养。

3 责任人QC员、QC主任。

4 程序4.1 基本操作规程4.1.1准备工作按流动相配制要求配好流动相，过滤，超声脱气，将吸滤头放入相应通道的流动相中。

4.1.2 仪器的启动打开Waters2695(Alliance).Waters2489DET.以及柱温箱的开关。

4.1.2.1 非Empower3软件的仪器启动程序依次打开电脑、Waters2695、Waters2489DET的开关。

波长的设置：在检测器自检完毕显示初始屏幕时，按▲或▼键，在λnm处输入所需波长值，再次按Enter键确认。

按▲或▼键在AUFS处输入所需的灵敏度。

其他设置参见2489检文件编码：SOP QC9-067-01 共6页，第2页测器说明书；2695系统的设置：系统初始化结束后，主屏幕上方标题区出现“Idle”时，仪器进入待命状态。

在初始屏幕按Menu/status键，进入status界面，在Flow : ML/MIN处设置流量；用▲或▼、或键上下左右移动，在A、B、C、D各通道处设置各通道的比例。

在sample处set ℃处设置样品室温度，在col Htr/clr set ℃处设置柱温。

在Degasser处按Enter键选择on打开脱气机。

WATERS高效液相的标准操作规程（SOP）适用于所有使用此仪器者1 流动相的处理1.1 过滤溶剂溶剂在使用前一定要用0.5μm的过滤器过滤，如果使用固体化学试剂（缓冲盐）配制流动相，过滤特别重要，不能让固体微粒污染泵，阻塞进样器和柱头过滤片。

本实验室有水溶性和脂溶性两种过滤膜供选择（反光面朝上），过滤水溶性流动相时（如甲醇/水），先用1-2ml甲醇润湿过滤膜，有助于快速抽滤。

1.2 保持储液瓶的清洁用普通溶剂瓶作流动相储液器应不定期废弃瓶子，最后一次应用HPLC级的水或溶剂清洗，不能在清洗过程中留下污迹。

1.3 保证溶剂的质量一定要用HPLC级的溶剂，水也应达到HPLC级，同样也要使用高纯度的缓冲盐。

1.4 故障及解决方法1.4.1 流动相脱气不充分流动相受热，或者流动相不同组分混合时会有气体产生，气泡进入泵内引起压力波动，增加噪音，色谱图上出现毛刺。

可试用下列方法解决问题：流动相再脱气；采用更有效的脱气方法或两种方法配合使用；改系统内混合为系统外预混合。

1.4.2 流动相供给不畅流动相用完，管道中吸入气体引起泵压力不稳。

应经常观察储液器中流动相的量，加足流动相保证所有的样品分析完毕。

输液管道上装沉子沉至瓶底，储液器盖上留一小孔正好夹住进液管，使其不能上下移动。

过滤器阻塞引起管道和泵腔空化，压力不稳。

过滤器被微粒所阻塞或长霉，去掉过滤器后如果系统运转正常，说明已找出问题，换上新的过滤器则可。

有时候换上新的过滤器仍然不畅，那就需要查查流动相的制备过程，或者换大孔径的过滤器。

不管如何，流动相都需要重新过滤。

流速过高、阻力大，造成空化现象，这是由于过滤器孔径、管道内径、流速和溶剂黏度等引起的。

如果流速大于10ml/min，常会出现这种现象。

使用下列方法解决：（1）使用低流速；（2）换大孔径的过滤器；（3）增加进液管道内径；（4）抬高或加压储液器；（5）不用过滤器，但流动相一定要先过滤；（6）储液器盖子太紧，在储液器内形成真空，打出的流动相不连续。