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山羊痘病毒PCR检测方法的建立及应用白艳艳;张斌;郝玉青;高艳;刘万华;白崇生;刘健鹏;韩斌;杨德全【摘要】为了更快、更准确的诊断山羊痘(Goat pox),根据GenBank上已公布的山羊痘病毒(GTPV)的基因序列,针对p32基因的保守序列设计并合成一对能特异性扩增山羊痘病毒的引物,扩增产物大小约为983 bp.经过反应条件的优化,建立了山羊痘病毒PCR检测方法,对所建立的PCR反应体系的特异性和灵敏性进行了评价,并用此方法对9份临床样品进行了检测.结果显示,该诊断方法与3种非羊痘病毒不发生交叉反应.该方法最低浓度检测限为0.4 pg.在检测的临床样品中,GTPV阳性有3 份.结果表明,所建立的方法具有良好的特异性和敏感性,适合临床诊断应用.【期刊名称】《动物医学进展》【年(卷),期】2017(038)009【总页数】4页(P10-13)【关键词】山羊痘;聚合酶链反应;敏感性;特异性【作者】白艳艳;张斌;郝玉青;高艳;刘万华;白崇生;刘健鹏;韩斌;杨德全【作者单位】榆林市动物疫病预防控制中心,陕西榆林 719000;榆林市动物卫生监督所,陕西榆林 719000;榆林市动物疫病预防控制中心,陕西榆林 719000;榆林市动物疫病预防控制中心,陕西榆林 719000;榆林市动物疫病预防控制中心,陕西榆林719000;榆林市动物疫病预防控制中心,陕西榆林 719000;榆林市动物疫病预防控制中心,陕西榆林 719000;榆林市动物疫病预防控制中心,陕西榆林 719000;上海市动物疫病预防控制中心,上海 201103【正文语种】中文【中图分类】S852.659.1;S854.43山羊痘(Goat pox)是由山羊痘病毒(Goat pox virus,GTPV)引起的一种以发热、无毛或少毛部位皮肤出现痘疹为特征的急性、热性、高度接触性传染病，在世界许多国家和地区发生和流行，造成巨大的经济损失。
被世界动物卫生组织(OIE)列为必须报告的动物疫病，我国将其列为一类动物疫病[1-4]。
中-兽医科学2020,50(12): 153 卜 1536Chinese Veterinary Science网络首发时间：2020-10-16 D O I:10.16656/j.issn. 1673-4696.2020.0200 中图分类号：S852.659.1文献标志码：A文章编号：1673-4696 (2020)12-153卜06山羊痘病毒RPO30蛋白的原核表达及其单克隆抗体的制备陈冬杰，魏方，林祥梅，吴绍强*(中国检验检疫科学研究院动物检验与检疫研究所，北京100176)摘要：为了研究山羊痘病毒R N A聚合酶亚基R P O30蛋白功能，构建了其原核表达质粒p E T28a-R P O30 和p G E X-6p-卜R P O30,并进行了诱导表达和纯化。
将纯化的His-R P O30蛋白免疫B A L B/c小鼠，并将免疫小鼠脾细胞与骨髓瘤细胞S P2/0融合，通过筛选得到了能够稳定分泌与R P O30蛋白特异性反应的单克隆抗体的杂交瘤细胞株7E5。
对该单克隆抗体的轻链和重链类型进行测定，发现其重链为I g G2b亚型，轻链为k 亚型。
经测定，单克隆抗体7E5的腹水效价可达1 : 128 000。
R P O30单克隆抗体的制备将为该蛋白功能的研究提供有力工具。
关键词：山羊痘病毒；R P O30蛋白；原核表达；单克隆抗体Prokaryotic expression and monoclonal antibody preparation ofgoatpox virus RPO30 proteinCHEN Dong-jie,WEI Fang,LIN Xiang-mei,WU Shao-qiang*(The Institute o f A nimal Quarantine , Chinese Academy o f Inspection and Quarantine .Beijing \ 00176, China)Abstract：To study the function of goatpox virus RNA polymerase subunit RP030,the prokaryotic expression plasmids pET28a-RP030 and pGEX-6p-l~RP030 were constructed for further expression and purification. The purified His-RP030 was then used to immunize BALB/c mice. Through cell fusion of SP2/0 and the immunized mice spleen cells,we got the hybridoma cell strain 7E5 which could stably secrete monoclonal antibody and specially react with RP030. The determination of monoclonal antibody 7E5 heavy chain and light chain types indicated that the heavy chain was IgG2b subtype and the light chain was k subtype. The titer of the ascitic fluid could reach to 1： 128 000. The preparation of RP030 monoclonal antibody provides a powerful tool for its further functional study.Key words：goatpox virus；RP030 protein；prokaryotic expression；monoclonal antibody* Corresponding author：WU Shao-qiang, E-mail :sqwu@sina. com山羊痘（g〇a t p o x，G T P)是由痘病毒科山羊痘病毒属的山羊痘病毒（goatpox virus，G T P V)感染山羊引起的一种急性、热性和高度接触性传染病。
FOR RESEARCH USE ONLYGoat Brucella antibodyDrug NamesGeneric Name：Goat Brucella antibody(Brucella Ab)ELISA Kit.PurposeThis kit allows for the determination of Brucella Ab concentrations in Goat serum,and other biological fluids.Principle of the assayT he kit assay Brucella Ab level in the sample，use Purified Brucella antigen to coat microtiter plate wells,make solid-phase antigen,then add Brucella Ab to wells,Combined With Brucella Ab,after washing and removing non-combinative antibody and other components,then Combined Brucella antigen which with HRP labeled become antigen-antibody-enzyme-antigen complex,after washing Completely,Add TMB substrate solution,, TMB substrate becomes blue color At HRP enzyme-catalyzed,reaction is terminated by the addition of a sulphuric acid solution and the color change is measured spectrophotometrically at a wavelength pared with the CUTOFF value,according to this to judge Brucella Ab exist in the sample or not.Materials provided with the kitMaterials provided withthe kit48determinations96determinations Storage User manual11Closure plate membrane22Sealed bags11Microelisa stripplate112-8℃Negative control0.5ml×1bottle0.5ml×1bottle2-8℃Positive control0.5ml×1bottle0.5ml×1bottle2-8℃HRP-Conjugate reagent3ml×1bottle6ml×1bottle2-8℃Sample diluent3ml×1bottle6ml×1bottle2-8℃Chromogen Solution A3ml×1bottle6ml×1bottle2-8℃Chromogen Solution B3ml×1bottle6ml×1bottle2-8℃Stop Solution3ml×1bottle6ml×1bottle2-8℃wash solution （20ml×20fold）×1bottle（20ml×30fold）×1bottle2-8℃Specimen requirements1.serum-coagulation at room temperature10-20mins，centrifugation20-min at the speed of2000-3000r.p.m.remove supernatant,If precipitation appeared,Centrifugal again.2.plasma-use suited EDTA or citrate plasma as an anticoagulant,mix10-20mins,centrifugation20-min at the speed of2000-3000r.p.m.remove supernatant,If precipitation appeared,Centrifugal again.3.Urine-collect sue a sterile container,centrifugation20-min at the speed of2000-3000r.p.m.remove supernatant,If precipitation appeared,Centrifugal again.The Operation of Hydrothorax and cerebrospinal fluid Reference to it.4.cell culture supernatant-detect secretory components,collect sue a sterile container,centrifugation20-min at the speed of2000-3000r.p.m.remove supernatant,detect the composition of cells,Dilut cell suspension with PBS（PH7.2-7.4）,Cell concentration reached1million/ml,repeated freeze-thaw cycles,damage cells and release of intracellular components,centrifugation20-min at the speed of2000-3000r.p.m.remove supernatant,If precipitation appeared,Centrifugal again.5.Tissue samples-After cutting samples,check the weight,add PBS（PH7.2-7.4）,Rapidlyfrozen with liquid nitrogen,maintain samples at2-8℃after melting,add PBS（PH7.4）,Homogenized by hand or Grinders,centrifugation20-min at the speed of2000-3000r.p.m.remove supernatant.6.extract as soon as possible after Specimen collection,and according to the relevantliterature,and should be experiment as soon as possible after the extraction.If it can’t, specimen can be kept in-20℃to preserve,Avoid repeated freeze-thaw cycles.7.Can’t detect the sample which contain NaN3,because NaN3inhibits HRP active. Assay procedure1.Number:to sample correspond microtitration well and Number Sequence,each plate should be set feminine comparison2wells,masculine comparison2wells,blank comparison1 well(don’t add sample and HRP-Conjugate reagent to blank comparison well,other each step the operation are same).2.add sample：separately add Positive control and Negative control50μl to the Positive and Negative well.add Sample dilution40μl to testing sample well,then add testing sample10μl. add sample to the bottom of ELISA plates coated well,don’t touch the well wall as far as possible,and Gently mix.3.Incubate:After closing plate with Closure plate membrane,incubate for30min at37℃.4.Configurate liquid:30-fold(or20-fold)wash solution diluted30-fold(or20-fold)with distilled water until600ml,and reserve.5.washing：Uncover Closure plate membrane,discard Liquid,dry by swing,add washing buffer to every well,still for30s then drain,repeat5times,dry by pat.6.add enzyme：Add HRP-Conjugate reagent50μlto each well,except the blank well.7.incubate：Operation with3.8.washing：Operation with5.9.color：Add Chromogen Solution A50ul and Chromogen Solution B to each well,evade the light preservation for15min at37℃10.Stop the reaction：Add Stop Solution50μl to each well,Stop the reaction(the blue colorchange to yellow color).11.assay：take blank well as zero,Read absorbance at450nm after Adding Stop Solution and within15min.Determine the resultTest validity:the average of Positive control well≥1.00;the average of Negative control well ≤0.10.Calculate Critical(CUT OFF):Critical=the average of Negative control well+0.15.Negative control:sample OD<Calculate Critical(CUT OFF)is Brucella Ab Negative control.Positive control:ample OD≥Calculate Critical(CUT OFF)is Brucella Ab Positive control. Important notes1.Please according to use instruction strictly,Do not mix reagents with those from other lots.2.The kit takes out from the refrigeration environment should be balanced15-30minutes in the room temperature then use,ELISA plates coated if has not use up after opened,the plate should be stored in Sealed bag.3.washing buffer will Crystallization separation,it can be heated the water helps dissolve when dilute.Washing does not affect the result.4.Closure plate membrane only limits the disposable use,in order to avoid the overlapping pollution5.The substrate please evade the light preservation.6.The test result determination must take the microtiter plate reader as a standard,when use dual-wavelength to assay,Reference wavelength is630nm.7.All samples,washing buffer and each kind of reject should according to infective material process.Stopp Solution is2M sulphuric acid.You must pay attention to safe when use.Storage and validity 1．Storage：2-8℃. 2．validity：six months.羊布鲁氏菌抗体酶联免疫分析（ELISA）试剂盒使用说明书本试剂仅供研究使用目的：本试剂盒用于检测羊血清，血浆中布鲁氏菌抗体水平。
Toxoplasma IgG ELISA Catalog Number SE120126Storage Temperature 2–8 °CTECHNICAL BULLETINProduct DescriptionToxoplasma gondii causes toxoplasmosis, a common disease that affects 30–50 of every 100 people in North America by the time they are adults. The mean source of infection is direct contact with cat feces or from eating undercooked meats. Toxoplasmosis generally presents with mild symptoms in immunocompetent individuals. In the immunocompromised patient,however, the infection can have serious consequences. Acute toxoplasmosis in pregnant women can result in miscarriage, poor growth, early delivery, or stillbirth. Treatment of an infected pregnant woman may prevent or lessen the disease in her unborn child. Treatment of an infected infant will also lessen the severity of the disease as the child grows. IgG and IgM antibodies to Toxoplasma can be detected with 2–3 weeks after exposure. IgG remains positive, but the antibody level drops overtime. ELISA can detect Toxoplasma IgM antibody one year after infection in over 50% of patients. Therefore, IgM positive results should be evaluated further with one or two follow up samples if primary infection is suspected.The Toxoplasma IgG ELISA Kit is intended for the detection of IgG antibody to Toxoplasma in human serum or plasma. Diluted serum is added to wellscoated with purified Toxoplasma antigen. Toxoplasma IgG specific antibody, if present, binds to the antigen. All unbound materials are washed away and the enzyme conjugate is added to bind to the antibody-antigen complex, if present. Excess enzyme conjugate is washed off and substrate is added. The plate isincubated to allow the oxidation of the substrate by the enzyme. The intensity of the color generated isproportional to the amount of IgG specific antibody in the sample.ComponentsReagents and Equipment Required but Not Provided.1.Distilled or deionized water2.Precision pipettes3.Disposable pipette tips4.ELISA reader capable of reading absorbance at450 nm5.Absorbent paper or paper towel6.Graph paperPrecautions and DisclaimerThis product is for R&D use only, not for drug,household, or other uses. Please consult the Safety Data Sheet for information regarding hazards and safe handling practices.Preparation Instructions Sample Preparation1. Collect blood specimens and separate the serum.2.Specimens may be refrigerated at 2–8°C for up toseven days or frozen for up to six months. Avoid repetitive freezing and thawing.20x Wash Buffer ConcentratePrepare 1x Wash buffer by adding the contents of the bottle (25 mL, 20x) to 475 mL of distilled or deionized water. Store at room temperature (18–26 °C).2Storage/StabilityStore the kit at 2–8 °C.ProcedureNotes: The components in this kit are intended for use as an integral unit. The components of different lots should not be mixed.Optimal results will be obtained by strict adherence to the test protocol. Precise pipetting as well as following the exact time and temperature requirements is essential.The test run may be considered valid provided the following criteria are met:1.If the O.D. of the Calibrator is >0.250.2.The Ab index for Negative control should be <0.9.3.The Ab index for Positive control should be >1.2. Bring all specimens and kit reagents to room temperature (18–26 °C) and gently mix. 1.Place the desired number of coated strips into theholder.2.Negative control, positive control, and calibrator areready to use.Prepare 21-fold dilution of testsamples, by adding 10 µL of the sample to 200 µLof Sample Diluent. Mix well.3.Dispense 100 µL of diluted sera, calibrator, andcontrols into the appropriate wells. For the reagent blank, dispense 100 µL of Sample Diluent in 1Awell position. Tap the holder to remove air bubbles from the liquid and mix well. Incubate for20 minutes at room temperature.4.Remove liquid from all wells. Wash wells threetimes with 300 µL of 1x wash buffer. Blot onabsorbent paper or paper towel.5.Dispense 100 µL of enzyme conjugate to each welland incubate for 20 minutes at room temperature. 6.Remove enzyme conjugate from all wells. Washwells three times with 300 µL of1x wash buffer.Blot on absorbent paper or paper towel7.Dispense 100 µL of TMB substrate and incubate for10 minutes at room temperature.8.Add 100 µL of stop solution.9.Read O.D. at 450 nm using ELISA reader within15 minutes. A dual wavelength is recommendedwith reference filter of 600–650 nm.3ResultsCalculations1.Check Calibrator Factor (CF) value on thecalibrator bottle. This value might vary from lot tolot. Make sure the value is checked on every kit. 2.Calculate cut-off value: Calibrator OD x CalibratorFactor (CF).3.Calculate the Ab (Antibody) Index of eachdetermination by dividing the mean values of each sample by cut-off value.Example of typical results:Calibrator mean OD = 0.8Calibrator Factor (CF) = 0.5Cut-off Value = 0.8 x 0.5 = 0.400Positive control O.D. = 1.2Ab Index = 1.2/0.4 = 3Patient sample O.D. = 1.6Ab Index = 1.6/0.4 = 4.0Note:Lipemic or hemolyzed samples may cause erroneous results.InterpretationThe following is intended as a guide to interpretation of Toxoplasma IgG antibody index (Ab Index) test results; each laboratory is encouraged to establish its own criteria for test interpretation based on sample populations encountered.<0.9 –No detectable IgG antibody to Toxoplasma byELISA0.9–1.1 –Borderline positive. Follow-up testing isrecommend if clinically indicated.>1.1 –Detectable IgG antibody to Toxoplasma by ELISA References1.Wilson, M. et al., Evaluation of six commercial kitsfor detection of human immunoglobulin Mantibodies to Toxoplasma gondii. The FDAToxoplasmosis Ad Hoc Working Group.2.Obwaller, A. et al., An enzyme-linkedimmunosorbent assay with whole trophozoites ofToxoplasma gondii from serum-free tissue culturefor detection of specific antibodies. Parasitol. Res., 1995;81(5):361-4.3.Loyola, A.M. et al., Anti-Toxoplasma gondiiimmunoglobulins A and G in human saliva andserum. J. Oral Pathol. Med., 1997; 26(4):187-91. 4.Doehring, E. et al., Toxoplasma gondii antibodies inpregnant women and their newborns in Dar esSalaam, Tanzania. Am. J. Trop. Med. Hyg., 1995;52(6):546-8.5.Cotty, F. et al., Prenatal diagnosis of congenitaltoxoplasmosis: the role of Toxoplasma IgAantibodies in amniotic fluid [letter]. J. Infect. Dis.,1995;171(5):1384-5.6.Altintas, N. et al., Toxoplasmosis in last four yearsin Agean region,Turkey. J. Egypt. Soc. Parasitol.,1997;27(2):439-43.RGC,CH,MAM 10/14-1©2014 Sigma-Aldrich Co. LLC. All rights reserved. SIGMA-ALDRICH is a trademark of Sigma-Aldrich Co. LLC, registered in the US and other countries. Sigma brand products are sold through Sigma-Aldrich, Inc. Purchaser must determine the suitability of the product(s) for their particular use. Additional terms and conditions may apply. Please see product information on the Sigma-Aldrich website at and/or on the reverse side of the invoice or packing slip.。
山羊痘病毒酶联免疫试剂盒-Abbexa
产品名称：Goat Pox Virus ELISA Kit，山羊痘病毒酶联免疫试剂盒
货号：abx055279
规格：96次
检测：山羊痘病毒
反应物种：山羊
储存：2-8度，6个月
类型：定性
检测样品：血清，血浆，培养基或其他生物生物类液体
货期：1个月
羊痘简介：
山羊痘病毒(GPV)为痘病毒科，羊痘病毒属的一个成员，基因组呈线性，全长约150 kb，编码147个开放阅读框（启维益成有售）。
山羊痘病毒是痘病毒科(Poxviridae)、脊索动物痘病毒亚科(Chordopoxrinae)，羊痘病毒属(Capripox virus)成员。
GPV可以感染所有品种、性别和年龄的山羊，其中羔羊最易感，感染率可达100%。
GPV通过接触痘疹破损后的皮肤、呼吸道的吸入或者媒介的传播而感染其他山羊，同群间传播迅速，但一般不向其他羊群散播。
山羊痘病毒对干燥有较高的抵抗力，干燥痂皮内的病毒可以存活3个～6个月，在干热达100 ℃时，仍可存活5 min左右。
对常用消毒剂有较强的抵抗力，但500 mL/L酒精和0.1 g/L KMnO4可以在1 h内将其灭活。
对乙醚和氯仿敏感。
反复冻融对其没有明显的灭活作用。
GPV在鸡胚绒毛尿囊膜上生长，并产生痘斑和结节性病灶。
产品名称：小反刍兽疫抗体检测试剂盒（阻断法），elisa试剂盒,代测检测方法：ELISA检测法规格：96T/盒重要参数：PPRV Ab反应时间：30min-30min-10min检测样本：血清技术信息包被抗原：包被N蛋白。
结合物：HRP标记的N蛋白的特异性单抗。
特异性：高于99%。
敏感性：可检测感染或免疫后7天的抗体。
诊断敏感性高于98%。
样品稀释倍数：5倍检测时间:45min+30min+10min试剂使用：除洗涤液需25倍稀释，其它组分均直接使用，方便快捷。
用途：可评价小反刍动物的感染情况与免疫效果评估。
预期用途：小反刍兽疫是由小反刍兽疫病毒（Peste des Petits Ruminants Virus, PPRV）引起的一种急性接触性传染病，其特征为口腔、舌粘膜糜烂、流泪、流鼻液。
本病的易感动物为山羊，也可感染绵羊、白尾鹿等，但对牛无感染性。
羊小反刍兽疫病毒抗体检测试剂盒用于检测羊血清中小反刍兽疫病毒抗体，可用于小反刍兽疫疫苗免疫效果评价。
试剂盒原理：羊小反刍兽疫病毒抗体检测试剂盒系由预包被小反刍兽疫病毒重组抗原的酶标板、酶标记物及其他配套试剂组成，应用酶联免疫法（ELISA）原理检测羊血清、血浆样本中小反刍兽疫病毒抗体。
实验时在醉标板中加入对照血清和待检样本，经温育后若样品中含有小反刍兽疫病毒抗体，则将与酶标板上抗原结合，经洗涤除去未结合的其他成分后；再加入酶标记物，与酶标板上抗原抗体复合物发生特异性结合；再经洗涤除去未结合的酶标记物，在孔中加TMB底物液，与酶反应形成蓝色产物，显色深浅与样品中的特异性抗体含量成正相关；加入终止液终止反应后，产物变为黄色；用福标仪在450nm波长测定各反应孔中的吸光值，即可知样品是否含有小反刍兽疫病毒抗体。
试剂盒组成：酶标板、酶标记物、样品稀释液、浓缩洗涤液、底物液A、底物液B、阳性对照、阴性对照储存及有效期：于2〜8℃避光保存，有效期为12个月。
包被板开封后请于2〜8℃避光保存，避免受潮。
抗体试剂盒使用方法1. 引言抗体试剂盒是一种用于检测和定量分析特定抗体的工具，广泛应用于生命科学研究和临床诊断。
本文将详细介绍抗体试剂盒的使用方法，包括准备实验材料、样品处理、实验步骤、结果解读等内容。
2. 准备实验材料在开始实验之前，需要准备以下实验材料： - 抗体试剂盒：包括抗体、底物、缓冲液等。
- 样品：可以是血液、组织、细胞等。
- 实验仪器：如离心机、洗板机、显微镜等。
- 实验耗材：如离心管、试管、96孔板等。
- 实验液体：如去离子水、PBS缓冲液等。
3. 样品处理在进行抗体试剂盒实验之前，需要对样品进行处理。
处理步骤可以根据具体实验目的进行调整，但通常包括以下几个常见步骤： 1. 收集样品：根据实验需要，选择适当的样本收集方式。
例如，如果是血液样品，可以通过静脉采血或指尖采血收集。
2. 样品保存：根据实验要求，将样品储存于适当的条件下，如低温冷藏或冷冻保存。
3. 样品处理：根据实验需求，对样品进行处理，如离心、裂解、稀释等。
4. 实验步骤抗体试剂盒的使用方法通常包括以下几个步骤： 1. 准备工作台：清洁工作台，并准备所需实验仪器和试剂。
2. 样品加入：将待测样品加入到96孔板中。
根据实验要求，可以设置空白对照组和阴性对照组。
3. 加入抗体：向每个孔中加入适量的抗体试剂。
注意避免交叉污染。
4. 孵育反应：根据试剂盒说明书，设定适当的孵育时间和温度。
5. 洗涤步骤：用洗涤缓冲液洗涤孔板，去除未结合的物质。
6. 底物加入：加入底物溶液，在适当条件下进行反应。
7. 反应停止：停止底物反应，并记录反应时间。
8. 测量结果：使用合适的仪器，如酶标仪或荧光仪，测量吸光度或荧光强度。
9. 数据分析：根据试剂盒说明书提供的方法，对实验结果进行定量分析。
5. 结果解读抗体试剂盒的实验结果通常以定量的方式呈现。
根据试剂盒说明书提供的标准曲线或参考值范围，可以对样品中目标抗体的含量进行定量分析。
抗体试剂盒使用方法抗体试剂盒是一种用于检测特定抗体的试剂盒，广泛应用于医学、生物学、生物技术等领域。
本文将介绍抗体试剂盒的使用方法，包括试剂盒的准备、样品的处理、试剂的添加、反应的进行和结果的解读等方面。
一、试剂盒的准备在使用抗体试剂盒之前，需要准备好试剂盒和实验室必备的器材和试剂。
试剂盒通常包括抗体、标记物、底物、缓冲液、洗涤液等多种试剂，需要按照说明书中的要求进行保存和使用。
实验室必备的器材和试剂包括离心机、显微镜、移液器、离心管、试管、磁珠等。
二、样品的处理在进行抗体试剂盒检测之前，需要对样品进行处理。
样品可以是血清、血浆、尿液、组织等生物样品。
处理方法包括离心、稀释、加热、冷冻等。
离心可以去除悬浮在样品中的细胞和碎片，使样品更加纯净。
稀释可以使样品的浓度适合于试剂盒的检测范围。
加热可以使某些抗体变性，从而增加检测的灵敏度。
冷冻可以保存样品，以备后续的检测。
三、试剂的添加在样品处理完成后，需要将试剂添加到样品中进行反应。
试剂的添加顺序和量需要按照说明书中的要求进行。
通常情况下，先加入缓冲液，再加入标记物和底物，最后加入抗体。
试剂的添加需要注意避免污染和交叉反应。
四、反应的进行试剂添加完成后，需要将样品和试剂充分混合，并进行反应。
反应的时间和温度需要按照说明书中的要求进行。
通常情况下，反应时间为30分钟至2小时，反应温度为室温或37℃。
反应过程中需要轻轻摇动样品，以促进反应的进行。
五、结果的解读反应完成后，需要对结果进行解读。
抗体试剂盒的结果通常是颜色变化或荧光信号的出现。
颜色变化可以通过目视或光度计进行读取，荧光信号可以通过荧光显微镜进行观察。
结果的解读需要按照说明书中的要求进行，包括阳性、阴性和可疑等判断。
抗体试剂盒是一种简单、快速、灵敏的检测方法，广泛应用于医学、生物学、生物技术等领域。
正确的使用方法可以保证检测结果的准确性和可靠性。
山羊痘活疫苗使用说明书【兽药名称】通用名山羊痘活疫苗【主要成分与含量】本品含山羊痘弱毒株。
每头份病毒含量不少于103.5TCID50。
【物理性状】本品为微黄色海绵状疏松团块，易与瓶壁脱离，加稀释液后迅速溶解。
【作用与用途】用于预防山羊痘及绵羊痘。
注苗后4～5日产生免疫力，免疫期为12个月。
【用法与用量】按瓶签注明头份，用生理盐水（或注射用水）稀释为每头份0.5ml，无论羊只大小，一律在尾根内侧或股内侧皮内注射0.5ml。
【不良反应】一般无可见的不良反应。
【注意事项】1 本疫苗可用于不同品系和不同年龄的山羊及绵羊，也可用于孕羊。
但给怀孕羊注射时，应避免抓羊引起的机械性流产。
2 在有羊痘流行的羊群中，可用本疫苗对未发痘的健康羊进行紧急接种。
3 稀释后的疫苗须当日用完。
【贮藏与有效期】在-15℃保存，有效期为2年； 2～8℃保存，有效期为1年半。
【废弃包装处理措施】剩余的疫苗及空瓶不得任意丢弃，须经加热或消毒灭菌后方可废弃。
【规格与包装】 50头份/瓶，20瓶/盒。
山羊痘活疫苗使用说明书【兽药名称】通用名山羊痘活疫苗【主要成分与含量】本品含山羊痘弱毒株。
每头份病毒含量不少于103.5TCID50。
【物理性状】本品为微黄色海绵状疏松团块，易与瓶壁脱离，加稀释液后迅速溶解。
【作用与用途】用于预防山羊痘及绵羊痘。
注苗后4～5日产生免疫力，免疫期为12个月。
【用法与用量】按瓶签注明头份，用生理盐水（或注射用水）稀释为每头份0.5ml，无论羊只大小，一律在尾根内侧或股内侧皮内注射0.5ml。
【不良反应】一般无可见的不良反应。
【注意事项】1 本疫苗可用于不同品系和不同年龄的山羊及绵羊，也可用于孕羊。
但给怀孕羊注射时，应避免抓羊引起的机械性流产。
2 在有羊痘流行的羊群中，可用本疫苗对未发痘的健康羊进行紧急接种。
3 稀释后的疫苗须当日用完。
【贮藏与有效期】在-15℃保存，有效期为2年； 2～8℃保存，有效期为1年半。
山羊痘抗体( Pox-Ab)试剂盒使用说明书
本试剂盒仅供研究使用
使用目的：
山羊痘抗体试剂盒用于测定山羊血清、血浆及相关液体样本中山羊痘抗体
( Pox-Ab)含量。
实验原理
山羊痘抗体试剂盒应用双抗原夹心法测定标本中山羊痘抗体( Pox-Ab)水平。
用纯化的抗原包被微孔板，制成固相抗原，往包被单抗的微孔中依次加入山羊痘抗体( Pox-Ab)，再与 HRP标记的抗原结合，形成抗原 -抗体-酶标抗原复合物，经过彻底洗涤后加底物 TMB显色。
TMB在 HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。
颜色的深浅和样品中的山羊痘抗体( Pox-Ab)呈正相关。
用酶标仪在 450nm波长下测定吸光度( OD值)，通过标准曲线计算样品中山羊山羊痘抗体( Pox-Ab)浓度。
山羊痘抗体试剂盒组成
1 30倍浓缩洗涤液20ml×1瓶 7 终止液6ml×1瓶
2 酶标试剂6ml×1瓶 8 标准品( 120pg/ml) 0.5ml×1瓶
3 酶标包被板 12孔× 8条 9 标准品稀释液 1.5ml×1瓶
4 样品稀释液6ml×1瓶 10 说明书 1份
5 显色剂 A液6ml×1瓶 11 封板膜 2张
6 显色剂 B液6ml×1/瓶 12 密封袋 1个
标本要求
1．标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。
若不能马上进行试验，可将标本放于 -20℃保存，但应避免反复冻融
2．不能检测含NaN3的样品，因 NaN3抑制辣根过氧化物酶的( HRP)活性。
山羊痘抗体试剂盒操作步骤
1. 标准品的稀释：本试剂盒提供原倍标准品一支，用户可按照下列图表在小试管中进行稀释。
2.加样：分别设空白孔(空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同)、标准孔、待测样品孔。
在酶标包被板上标准品准确加样 50μl，待测样品孔中先加样品稀释液 40μl，然后再加待测样品 10μl(样品最终稀释度为 5倍)。
加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。
3. 温育：用封板膜封板后置37℃温育 3 0分钟。
4. 配液：将 30倍浓缩洗涤液用蒸馏水 30倍稀释后备用
5. 洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置 30秒后弃去，如此重复 5次，拍干。
6. 加酶：每孔加入酶标试剂 50μl，空白孔除外。
7. 温育：操作同3。
8. 洗涤：操作同5。
9. 显色：每孔先加入显色剂 A50μl，再加入显色剂 B50μl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色15分钟.
10. 终止：每孔加终止液 50μl，终止反应(此时蓝色立转黄色)。
11. 测定：以空白空调零， 450nm波长依序测量各孔的吸光度( OD值)。
测定应在加终止
60pg/ml 5号标准品 150μl的原倍标准品加入 150μl标准品稀释液
30pg/ml 4号标准品 150μl的 5号标准品加入 150μl标准品稀释液
15pg/ml 3号标准品 150μl的 4号标准品加入 150μl标准品稀释液
7.5pg/ml 2号标准品 150μl的 3号标准品加入 150μl标准品稀释液3.75pg/ml 1号标准品 150μl的 2号标准品加入 150μl标准品稀释液
液后 15分钟以内进行。
山羊痘抗体试剂盒注意事项
1．试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡 15-30分钟后方可使用，酶标包被板开封后如未用完，板条应装入密封袋中保存。
2．浓洗涤液可能会有结晶析出，稀释时可在水浴中加温助溶，洗涤时不影响结果。
3．各步加样均应使用加样器，并经常校对其准确性，以避免试验误差。
一次加样时间最好控制在 5分钟内，如标本数量多，推荐使用排枪加样。
4．请每次测定的同时做标准曲线，最好做复孔。
如标本中待测物质含量过高(样本 OD值大于标准品孔第一孔的 OD值)，请先用样品稀释液稀释一定倍数( n倍)后再测定，计算时请最后乘以总稀释倍数(×n×5)。
5．封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。
6．底物请避光保存。
7．严格按照说明书的操作进行，试验结果判定必须以酶标仪读数为准 .
8．所有样品，洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。
9．本试剂不同批号组分不得混用。
10. 如与英文说明书有异，以英文说明书为准。
保存条件及有效期
1．试剂盒保存：2-8℃。
2．有效期： 6个月。
