土壤中放线菌的筛选即其抗菌谱的测定实验论文

一、摘要筛选放线菌是新抗研究的重要课题之一。

迄今为止，已发现的抗生素有80%皆来自于放线菌。

放线菌主要存在于土壤中，并在土壤中占有相当大的比例。

一般地，放线菌在比较干燥、偏碱性、含有机质丰富的土壤中数量居多。

通常，随着地理分布、植被及土壤性质的不同，放线菌的种类、数量和拮抗性也各不相同。

土壤是微生物的大本营，其中的放线菌多以链霉菌为主，因此人们通常将除链霉菌以外的其它放线菌统称为稀有放线菌。

采用加热处理土样、选用特殊培养基或添加某种抗生素等方法时，均可提高稀有放线菌的获得率。

结果表明：在此方法下可以成功培养出放线菌。

二、关键词：放线菌、高氏一号培养基、预处理、抑制剂。

三、前言：放线菌与人类的生产和生活关系极为密切，目前广泛应用的抗生素约70%是各种放线菌所产生。

一些种类的放线菌还能产生各种酶制剂（蛋白酶、淀粉酶、和纤维素酶等）、维生素和有机酸等。

弗兰克菌属为非豆科木本植物根瘤中有固氮能力的内共生菌。

此外，放线菌还可用于甾体转化、烃类发酵、石油脱蜡和污水处理等方面。

少数放线菌也会对人类构成危害，少数放线菌也会对人类构成危害，引起人和动植物病害。

因此，放线菌与人类关系密切，在医药工业上有重要意义。

现有的放线菌分离培养基多达30余种，放线菌资源调查待分离土样数量很大，培养基种类过多将加大分离工作量，故筛选几种出菌率高、能将土壤中绝大多数种类放线菌分离培养出的代表性培养基，可在保证获得绝大部分放线菌资源信息的情况下，有效减少工作量，是当今放线菌分离的重要课题之一。

此外，增加可培养放线菌数量和抑制杂菌也是建立放线菌有效分离方法面临的重大问题之一。

关于放线菌的分离培养基及杂菌抑制方法我国许多研究者已进行了许多研究，但对代表性培养基的筛选、提高可培养放线菌数量及采用理化因子联合抑制杂菌的研究报道不多。

放线菌在人工培养基上不生长的原因很多，例如培养基养分不能满足某些放线菌的需求导致放线菌孢子不能萌发等为了分离出更多的未知放线菌，需要不断改进分离方法，以便将传统方法不可培养的放线菌分离出来。

2021人参根际土壤拮抗性放线菌的筛选、分离和鉴定范文 人参为五加科人参属多年生宿根性植物，是我国传统名贵中草药，有“百草之王”的美誉。

人参主要分布于东三省，其中，吉林省长白山区是人参的主产区，产量达全国总产量的70%-80%。

人参病害是影响人参产量与质量的一个重要因素。

目前，在人参中发现的侵染性和非侵染性病害有 50 余种，我国已报道的有 30 余种。

其中，立枯病、黑斑病、锈腐病、根腐病、疫病、菌核病及灰霉病是人参 7种主要真菌性病害。

常年发病率在 10%-30%，严重时达到 60%-70%，甚至绝收。

目前，对人参病害防控主要依靠化学农药。

化学农药防治人参病害虽然是很有效的方法，但是，长期使用化学农药不仅导致农药残留和环境污染，并且易诱导病原微生物产生抗药性。

开发环境友好的生防制剂成为替代化学农药的重要措施。

生物防治是以生态学原理为基础，利用生物物种间的相互作用，以一种或一类生物抑制另一种或另一类生物。

生物防治最大的优点是不污染环境，无农药残留，这是化学农药等非生物防治措施无法比拟的。

利用拮抗微生物防治病原微生物是生物防治技术的重要组成部分。

放线菌因其来源广泛，代谢产物活性较高等引起广泛关注，其拮抗机制和作用主要有抗生作用、竞争作用和重寄生作用。

放线菌能够产生抗生素、有机酸、甾体化合物及酶的抑制剂等多种生物活性物质，对植物病害产生抑制或杀灭作用。

目前，在人参生产中，使用的放线菌生防制剂还较少，而且均来源于农作物，无人参专用生防制剂。

为此，本研究对人参进行根际土壤拮抗性放线菌的筛选、分离和鉴定研究，旨在为开发人参专用放线菌制剂提供科学依据。

1、材料与方法 1.1材料 1.1.1供试病原菌引起人参的根腐病、锈腐病、疫病、菌核病、灰霉病、黑斑病和立枯病的主要病原真菌，分别是腐皮镰孢菌（Fusarium solani）、毁灭柱孢菌（Cylindrocarpon destructans）、恶疫霉菌（Phytophthora cactorum）、人参核盘菌（Sclerotiniaginseng）、灰葡萄孢菌（Botrytis cinerea）人参链格孢菌（Alternaria panax）、立枯丝核菌（Rhizoctoniasolani），均由吉林农业大学农学院植物病理教研室提供。

第1篇一、实验目的1. 掌握土壤中微生物的分离与纯化方法。

2. 了解不同微生物的形态特征和生理特性。

3. 筛选具有特定生理功能的菌株。

二、实验原理土壤中存在着大量的微生物，包括细菌、真菌、放线菌等。

通过选择合适的培养基和分离方法，可以从土壤中分离出具有特定生理功能的菌株。

本实验采用平板划线法、涂布分离法等方法，对土壤样品进行分离纯化，并对筛选出的菌株进行鉴定。

三、实验材料与仪器1. 材料：土壤样品、牛肉膏蛋白胨培养基、琼脂糖、无菌水、无菌平板、无菌试管、接种环、显微镜等。

2. 仪器：恒温培养箱、高压蒸汽灭菌锅、电子天平、显微镜等。

四、实验步骤1. 样品处理：取一定量的土壤样品，用无菌水进行稀释，制成10^-3、10^-5、10^-7等不同浓度的土壤悬液。

2. 分离纯化：（1）平板划线法：将不同浓度的土壤悬液涂布于牛肉膏蛋白胨琼脂平板上，用接种环进行划线分离，培养24小时后观察菌落形态。

（2）涂布分离法：将不同浓度的土壤悬液涂布于牛肉膏蛋白胨琼脂平板上，用无菌玻璃棒轻轻涂布，培养24小时后观察菌落形态。

3. 菌落鉴定：（1）形态特征观察：观察菌落的大小、形状、颜色、边缘、表面等特征，记录下来。

（2）生理生化试验：对筛选出的疑似菌株进行生理生化试验，如革兰氏染色、氧化酶试验、过氧化氢酶试验等，以确定菌株的属种。

4. 结果分析：根据形态特征和生理生化试验结果，对筛选出的菌株进行鉴定，并统计不同生理功能菌株的筛选数量。

五、实验结果与分析1. 菌落形态特征观察：在牛肉膏蛋白胨琼脂平板上，观察到不同形态的菌落，如圆形、卵圆形、长条形等，颜色有白色、黄色、红色等。

2. 生理生化试验结果：（1）革兰氏染色：部分菌株为革兰氏阳性菌，部分菌株为革兰氏阴性菌。

（2）氧化酶试验：部分菌株产生氧化酶，部分菌株不产生氧化酶。

（3）过氧化氢酶试验：部分菌株产生过氧化氢酶，部分菌株不产生过氧化氢酶。

3. 结果分析：根据形态特征和生理生化试验结果，筛选出以下具有特定生理功能的菌株：（1）革兰氏阳性菌：可能为葡萄球菌、链球菌等。

秦岭太白山土壤中促生放线菌的筛选及作用机制研究生物防治作为植物病害综合防治的重要组成部分,具有无污染、无公害、长效性等优点,是目前十分活跃的病害防治研究领域,而以放线菌活菌制剂以及产生的活性物质制剂来防治植物病害已经被证明是一项行之有效的措施。

尽管在放线菌资源的利用中已经取得了喜人的成果,但是还有无穷的资源有待开发,因而分离筛选新型有良好生防潜力的放线菌对我国生防研发工作具有奠基意义。

本研究以分离自秦岭太白山南坡和北坡不同植被类型的41份土壤中的136株放线菌为筛选对象,从对病原菌的拮抗和促进植物种子发芽两个方面进行潜在生防放线菌菌株的快速筛选,并利用盆栽小麦和白菜试验验证了筛选的3株潜力菌株的促生作用,同时分析了3株放线菌的促生作用机理。

取得的主要研究结果为:(1)分离的136株放线菌分属17个属,其中包含98株链霉菌、13株诺卡氏菌、6株拟无枝酸菌、3株北里孢菌和16株其他菌;对136株放线菌拮抗活性进行鉴定,67株供试放线菌对部分病原菌表现出拮抗活性,但大多数放线菌对1种或2种病原菌具有拮抗活性,其广谱抑菌性较弱;对136株放线菌促生活性筛选,46株放线菌不同稀释梯度无细胞发酵滤液对小麦种子发芽表现出明显的促生作用;结合拮抗活性和促生活性筛选出3株具有显著促生及拮抗功能的潜在生防放线菌菌株31-1、37-23和25-28。

(2)通过小麦盆栽试验研究31-1、37-23和25-28无细胞发酵滤液对小麦促生作用及机理,结果表明:(1)31-1、37-23、25-28无细胞发酵滤液对小麦植株均具有显著促进作用。

31-1、37-23和25-28无细胞发酵滤液处理小麦,较对照小麦幼苗茎叶鲜重提高37.26%~41.83%,根系鲜重提高38.10%~100.00%,SPAD提高20.78%~24.67%,根系活力提高2.69%~39.06,其中37-23无细胞发酵滤液促生效果最明显,各指标均达极显著水平;(2)浇灌3株放线菌无细胞发酵滤液可提高小麦PPO、POD、PAL和CAT防御酶活性,其中37-23无细胞发酵滤液处理效果最明显,使小麦PPO、POD、PAL和CAT活性较对照分别提高了6.67%、26.03%、45.25%和30.88%;(3)浇灌3株放线菌无细胞发酵滤液使小麦抗性基因AOS、LOX8,生长素相关基因KO-1、GA2oX8,抗性蛋白基因GLU2、PR-1和TLP表达量显著提高;(4)浇灌3株放线菌无细胞发酵滤液可改善小麦根际微生物群落结构,使固氮菌属、鞘氨醇菌属、溶杆菌属植物有益菌数量增加,使油壶菌属和小画线菌属植物有害菌数量下降。

可编辑修改精选全文完整版土壤中放线菌的分离和纯化实验（精选5篇）第一篇：土壤中放线菌的分离和纯化实验土壤中放线菌的分离和纯化实验一、实验目的1、制作MS培养基的方法，掌握母液的保存方法。

2、掌握培养基的灭菌方法。

掌握外植体的消毒和超净工作台的使用。

4、掌握放线菌的分离纯化及染色的基本流程；5、掌握高氏一号培养基的配制方法；6、复习分离纯化放线菌的基本操作技术、培养方学会使用高压蒸汽灭菌锅。

7、培养微生物实验的设计思路和动手能力。

二、实验材料高压蒸汽锅、培养瓶、石斛的愈伤组织、超净工作台，酒精灯、酒精棉球、镊子、电子天平、称量纸、烧杯、量筒、显微镜、三角锥形瓶、无菌培养皿、接种环、酒精灯、分析天平；接种环、载玻片、盖玻片、玻璃珠、移液枪、剪刀三、实验原理植物组织培养即植物无菌培养技术，又称离体培养，是根据植物细胞具有全能性的理论，利用植物体离体的器官(如根、茎、叶、茎尖、花、果实等）、组织（如形成层、表皮、皮层、髓部细胞、胚乳等）第 1 页或细胞（如大孢子、小孢子、体细胞等）以及原生质体,在无菌和适宜的人工培养基及温度等人工条件下，能诱导出愈伤组织、不定芽、不定根，最后形成完整的植株的学科。

四、实验步骤1、配制MS培养基8L，称取马铃薯1600g、香蕉400g、蔗糖240g、活性炭8半勺、琼脂80g、配制母液。

2、配制培养液时应注意：①在使用提前配制的母液时，应在量取各种母液之前，轻轻摇动盛放母液的瓶子，如果发现瓶中有沉淀、悬浮物或被微生物污染，应立即淘汰这种母液，重新进行配制；为防止母液被微生物污染，有机母液放在冰箱里4℃保存；②用量筒或移液管量取培养基母液之前，必须用所量取的母液将量筒或移液管润洗2次；③量取母液时，最好将各种母液按将要量取的顺序写在纸上，量取1种，划掉1种，以免出错。

溶化琼脂用粗天平分别称取琼脂9 g、蔗糖30 g，放入1 000 mL的搪瓷量杯中，再加入蒸馏水750 mL，用电炉加热，边加热边用玻璃棒搅拌，直到液体呈半透明状。

放线菌G30菌株发酵液抗菌谱及稳定性的研究摘要研究土壤放线菌G30次生代谢产物的抗菌谱及其发酵液的稳定性，采用抑制菌丝生长速率法、管碟法测定发酵液的生物活性，在不同条件下测定发酵液的稳定性。

结果表明：在对12种供试病原真菌的抑制效果中，6种菌丝生长的抑制率达到80%以上；在连续传代10代过程中，4 ℃及常温保存条件下，G30菌株的培养特征和抑菌活性基本没有变化；发酵液在60~100 ℃的温度梯度下没有丧失活性，在强酸（pH值2）、强碱（pH值12）条件下也都比较稳定。

G30菌株的代谢产物具有广谱抗菌活性和强稳定性，具有一定的开发价值。

AbstractAntimicrobial spectrum and stability of the fermentation extracts produced by actinomycete strain G30 were studied，by means of mycelium growth rate and cup-plate method，the fungicidal activity of bioassay was studied，the stability of the fermentation extracts in different condition was measured. The results showed that six kinds of pathogens with an inhibitory rate more than 80% in twelve kinds of pathogens；The cultural characteristics and bacteriostatic activity of strain G30 were not altered by ten serial subcultures or modifying the preserved temperature in 4 ℃or normal temperature；The fermentation liquid didn′t lose activity in high temperature（60～100 ℃），it was also been steady under the condition of strong acid （pH 2）and strong base（pH 12）. Metabolic products of actinomycete strain G30 had broad-spectrum antibacterial actirity and strong stability. The actinomycete strain G30 was worthy of develop.Key wordsactinomycete；strain G30；fermentation liquid；antimicrobial spectrum；stability农用抗生素是能够用来杀虫、灭菌、除草以及调节植物生长等的微生物活体及其代谢产物。

土壤中拮抗细菌的筛选及鉴定实验报告嘿，大家好！今天咱们要聊聊的是一个听起来有点儿高深的课题——土壤中拮抗细菌的筛选和鉴定。

别担心，听起来挺复杂，其实它跟我们生活中的一些小事儿，甚至是老百姓用的治病妙方都有关系。

你看，土壤里的细菌和我们生活中见到的那些微生物，可是有很多故事要讲的，它们之间的“斗争”有时候能帮助我们解决一大堆农业问题呢。

是不是有点儿像小时候看到的《小兵张嘎》，敌人不一定是外面的坏蛋，可能就在身边的土壤里呢！好啦，别跑题。

我们这次实验的目标是从土壤中筛选出那些能有效抑制其他病原菌的拮抗细菌。

简单点说，就是找到那些能保护植物的“英雄”细菌。

这些细菌可不像咱们常见的病菌那样坏，它们是土壤里的“守护神”。

不过，想要找到这些细菌可不容易，得先经过一番筛选。

一开始，咱们拿到的土壤样本可不少，来自不同地方的土壤，每一袋都像是宝贝一样珍贵。

拿到手之后，首先要做的就是进行培养，给细菌一个温暖的小家，好让它们能够愉快地繁殖。

就像是给花朵提供肥料一样，细菌们也需要一个适合它们生长的环境。

培养过程中，我们加入了一些特定的培养基，这样它们就能在咱们的实验室里舒服地生长了。

说白了，就是要给它们一个“舞台”，看看哪些细菌能站出来，像个明星一样吸引眼球。

我们要给这些细菌来点儿挑战。

要找那些能打败其他坏细菌的“硬核”细菌嘛。

所以，我们在培养基上放上了几种常见的病原菌，看看谁能从中脱颖而出。

如果一切顺利，能抑制病原菌生长的细菌就会在培养基上形成一圈“空白区”，这就是它们的“战绩”！嗯，这个空白圈就是“抑制圈”，代表着这些细菌确实能抑制病原菌的生长，真的是给我们找到了好帮手。

可就进入了最激动人心的部分——鉴定！就像明星选拔赛，最后这些拮抗细菌也得进行“体检”。

我们要用一些生物化学方法来确认它们到底属于哪一类细菌。

通过染色、酶反应等方法，我们能够分析它们的特征。

比如说，某些细菌是否能分泌抗生素？能不能在不同的温度和酸碱条件下存活？它们是喜氧还是厌氧？这些细节都能帮助我们确定它们的身份。

万寿菊内生和根际土壤放线菌的分离鉴定和抗菌活
性研究中期报告
本研究旨在从万寿菊根际土壤中分离鉴定具有抗菌活性的放线菌，
并研究其生物学特性和抗菌活性。

首先，从万寿菊根际土壤中分离了12株放线菌，并经过初步筛选，筛选出了3株具有抗菌活性的放线菌菌株（编号为J1、J2和J3）。

其次，对这3株放线菌菌株进行了形态学和生理生化特性鉴定。

结
果显示，这3株菌株的形态学特征各不相同，其中菌株J1、J2和J3的菌落形态呈灰色、黄绿色和灰白色。

生理生化特性方面，这3株菌株均呈
阳性反应，表明其为革兰氏阳性菌。

最后，在对这3株菌株的抗菌活性进行了初步评估。

结果表明，这
3株菌株均具有较强的抗菌活性，可以抑制多种青霉素、氨苄西林和头孢菌素等抗生素耐药菌株的生长。

其中，菌株J2表现出了最强的抗菌活性，其抑菌圈直径达到了25mm。

综上所述，在万寿菊内生和根际土壤放线菌的分离鉴定和抗菌活性
研究中期报告中，我们成功从万寿菊根际土壤中分离出了3株具有抗菌
活性的放线菌菌株，并对其进行了形态学和生理生化特性鉴定，初步评
估了它们的抗菌活性。

后续工作将继续对这3株菌株的抗菌活性进行深
入的研究和挖掘，旨在寻找新的、更有效的抗菌物质和药物。

土壤放线菌X1的筛选及其抑菌活性初探徐路明;郝明亮;王金果;王桂芳;罗兰【期刊名称】《中国农学通报》【年(卷),期】2011(27)9【摘要】筛选具有抑菌活性的放线菌是开发农用活性抗生素的基础。

笔者采用生长速率法和孢子萌发法,测定了从土壤中分离出的6株拮抗放线菌的抑菌活性,并对抑菌活性较好的放线菌X1菌株进行初步研究。

生长速率法试验表明,放线菌X1菌株发酵液对供试12种植物病原菌菌丝生长均有不同程度的抑制作用,发酵液对苹果腐烂病菌、苹果轮纹病菌和葡萄白腐病菌菌丝的抑制率均为100%。

孢子萌发试验表明,放线菌X1菌株发酵液对黄瓜枯萎病菌孢子萌发的抑制率为100%。

在浓度为1mg/mL时,放线菌X1菌株发酵液乙酸乙酯萃取物对苹果腐烂病菌、苹果轮纹病菌和葡萄白腐病菌菌丝的抑菌率均大于90%。

放线菌X1菌株抑菌谱较广,对植物病菌的防治有很大的研究开发潜力。

【总页数】6页(P195-200)【关键词】拮抗放线菌;筛选;发酵液;抑菌活性【作者】徐路明;郝明亮;王金果;王桂芳;罗兰【作者单位】青岛农业大学农学与植物保护学院【正文语种】中文【中图分类】S476.8【相关文献】1.94株土壤放线菌抑菌活性的初步筛选 [J], 宋洪允;韩立荣;冯俊涛;张兴2.金钗石斛根际土壤放线菌的分离及抑菌活性筛选 [J], 方正;詹伟;吴庆珊;安忠琦;牛晓娟;张传博;翁庆北3.放线菌JSD-1抑菌活性初探及影响其抑菌活性的发酵条件优化 [J], 赵里京;支月娥;刘焕然;张丹;周培4.土壤放线菌K2的筛选、鉴定及其抑菌活性初探 [J], 赵丽坤;田永强;高磊;孙盈5.海南省土壤拮抗放线菌的分离筛选及发酵液抑菌作用测定 [J], 史学群;宋海超;何秋香;杨成群;陈健;郑服丛因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

实验论文土壤中产抗生素放线菌的筛选及抗菌谱的测定作者：天奇6666662017 年06 月目录摘要 (3)1、引言 (4)2、实验材料与方法 (4)2.1材料 (4)2.1.1 土壤样品 (4)2.1.2 培养基 (4)2.2 实验方法及步骤 (5)2.2.1 放线菌的分离及最佳土壤稀释浓度的选择 (5)2.2.2放线菌纯化培养 (5)2.2.3 保存备用菌株 (5)2.2.4 供试菌液配置 (5)2.2.5进行拮抗试验 (5)3、实验结果与分析 (6)3.1实验结果表（表二） (6)3.2实验照片 (6)3.3实验结果分析 (7)4、结论与讨论 (7)4.1结论 (7)4.2讨论 (7)5、参考文献 (8)摘要本次实验选取了学校八个采样点进行采样，通过土壤悬液稀释进行固体培养基涂布培养，分离纯化出对其他微生物有拮抗作用的放线菌，使用牛肉膏蛋白胨固体培养基和PDA培养基进行抗菌谱测定。

本次实验以双管齐下的方式分别进行主实验与次实验，保证了实验重复性并极大节省了时间，实验过程分两批进行，主实验通过培养细菌与真菌菌液，涂布牛肉膏蛋白胨固体培养基平板分离出了五珠无拮抗作用的放线菌，次试验通过点接的PDA培养基的方式分离出一株对枯草芽孢杆菌有抗性而对黑曲霉有轻微抗性的放线菌菌珠。

关键词：土壤、放线菌、拮抗作用1、引言土壤----作为生物生存一种基本的资源，其中蕴藏着巨大的微生物资源，特别是以能产生多样的次级代谢产物而著称的放线菌，研究土壤沉积微生物，不仅可以发现新的放线菌资源，同时也可能发现新型活性产物，在医药、食品、化工、环保等行业意义巨大。

放线菌是具有巨大实用价值的一类微生物, 目前从微生物中发现的大约 8 000 种生物活性物质中, 近 70 % 是由放线菌产生的。

放线菌是一群革兰氏阳性、高( G + C) mol% 含量( >55% ) 的细菌。

放线菌因菌落呈放线状而的得名。

它是一个原核生物类群，在自然界中分布很广，主要以孢子繁殖，其次是断裂生殖。

放线菌P3-2的抗菌活性筛选及发酵液稳定性研究摘要对贵州高坡地区不同类型的土壤中分离出的256株放线菌进行发酵液拮抗性筛选,得到1株放线菌菌株P3-2。

采用菌丝生长速率法,对其抗菌活性进行研究,并在不同条件下测定发酵液的稳定性,结果表明,放线菌P3-2菌株发酵液对14种供试病原菌均具有不同程度的抑制作用,其10倍稀释液对其中9种病原真菌菌丝生长的抑制率达到85%以上,尤其对油菜菌核病菌和黄瓜灰霉病菌的抑菌效果最好,抑制率达到100%。

发酵液的稳定性测定结果表明,发酵液对热、酸和紫外线均较稳定,对碱稳定性较差。

该菌株的代谢产物具有广谱抑菌活性和较强的稳定性,具有一定的研究开发价值。

关键词放线菌;抗菌活性;发酵液;筛选;稳定性StudyonSelectionofAntibioticActivitiesandStabilityofFermentationBrothofActin omyceteP3-2WANG Jang-fengZHANG ling-lingHUANG Jian*(Center for Research and Development of Fine Chemicals,Key Laboratory of Green Pesticide and Bioengineering,Ministry of Education,Guizhou University,Guiyang Guizhou 550025)Abstract256 actinomycetes were isolated from different soil collected from Gaopo area in Guizhou province and one strain P3-2 was got.By means of mycelium growth rate,the antibiotic activities and stability of fermentation broth of strain P3-2 were studied.The antimicrobial test showed that:the inhibition rate of all the 14 strains were different and 9 of them was more than 85% when fermentation broths was diluted by 10 anize method tests showed that inhibition rate of fermentation broths of the strain P3-2 to Sclerotinia sclerotiorum and Botrytis cinerea was 100%.Through the research of stability of fermentation broths of actinomycete strain P3-2 to heat,acid,alkali and light,it had a stable activity to heat,acid and UV,but unstable to alkali.Antimicrobial spectrum of actinomycete strain P3-2 was widely and antimicrobial activity of fermentation broths was stable.The actinomycete strain P3-2 had some research value and was worth developing.Key wordsactinomycete;antibiotic ctivity;fermentation;selection;stability近年来,微生物源农药得到越来越多的关注,研制能防治各种农作物病虫害及作为除草剂的无公害农用抗生素,研制能防治家畜、家禽等疾病和促进其生长的畜用抗生素,是目前抗生素的一个重要的发展方向。

放线菌的分离与提纯摘要：放线菌是一类呈菌丝状生长，主要以孢子或菌丝状态存在于土壤、空气和水中，革兰染色为阳性的单细胞原核微生物，是细菌中的一种特殊类型。

放线菌与人类的生产和生活关系极为密切，在医药工业上有重要意义。

本实验我们主要采用无菌培养、稀释法等方法对放线菌进行培养、分离和纯化，经过倒平板、制备梯度稀释液、涂布、培养、挑单菌落、保存等步骤即可使放线菌在固体培养基上形成单独菌落，并可得到纯菌株。

关键词：放线菌分离无菌一、实验目的学习从土壤中分离放线菌。

二、实验原理放线菌是重要的抗生素产生菌，主要分布在土壤中（主要是链霉菌），其数量仅次于细菌。

一般在中性偏碱性、有机质丰富、通气性好的土壤中含量较多。

由于土壤中的微生物是各种不同种类微生物的混合体，为了研究某种微生物，就必须把它们从这些混杂的微生物群体中分离出来，从而获得某一菌株的纯培养。

根据放线菌的营养、酸碱度等条件要求，常选用合成培养基或有机氮培养基。

如果培养基成分改变，或土壤预先处理（120℃热处理1h），或加入某种抑制剂（如加数滴10%酚等），都可以使细菌，霉菌出现的数量大大减少，从而淘汰了其它杂菌。

再通过稀释法，使放线菌在固体培养基上形成单独菌落，并可得到纯菌株。

三、仪器与材料（一）培养基（二）．溶液或试剂10%酚液，盛9ml无菌水的试管，盛90ml无菌水并带有玻璃珠的三角烧瓶，4%水琼脂。

（三）.仪器无菌玻璃涂棒、无菌吸管、接种环、无菌培养皿、链霉素和土样、显微镜、电热恒温水浴锅涂布器等。

（四）.流程倒平板→制备梯度稀释液→涂布→培养→挑单菌落→保存四、操作步骤（一）．来源土壤中放线菌丰富，品种齐全，可以筛选出新的放线菌。

（二）．培养基的制备1、称量和溶化按配方先称取可溶性淀粉，放入小烧杯中，并用少量冷水将淀粉调成糊状，再加入少于所需水量的沸水中，继续加热，使可溶性淀粉完全溶化。

然后再称取其他各成分，并依次溶化，对微量成分FeSO4 ．7 H2 O可先配成高浓度的贮备液，按比例换算后再加入。

土壤中抗生素产生菌的分离与抗菌活性检测李若溪【摘要】放线菌是重要的抗生素产生菌.本实验利用牛肉膏蛋白胨培养基和高氏Ⅰ号培养基对土壤中的放线菌进行筛选,再通过平板涂布法、划线分离法对其进行分离纯化,发现培养基的成分会对放线菌的分离纯化效果产生直接影响,高氏Ⅰ号培养基分离出的放线菌较多.然后对其抗菌活性进行检测,发现放线菌能够产生抑制金黄色葡萄球菌和大肠杆菌生长的代谢产物,即抗生素.【期刊名称】《黑龙江科学》【年(卷),期】2019(010)014【总页数】2页(P40-41)【关键词】土壤;抗生素产生菌;抗菌活性检测【作者】李若溪【作者单位】西南大学,重庆400715【正文语种】中文【中图分类】Q931 引言放线菌在自然界中分布广泛，主要以孢子或菌丝状态存在于土壤、空气和水中，在含水量低、有机物含量高、中性或微碱性土壤中最为丰富。

本实验从土壤中分离微生物，找出能产抗生素的菌类，并对其进行分离纯化与抗菌活性检测。

在培养基上涂布大肠杆菌或金黄色葡萄球菌，并接种目标菌落，观察该菌落周围是否有抑菌圈产生，若有，即表明该菌落能产抗生素，可根据抑菌圈的大小、透明度、边缘整齐度来判断其抗菌活性的强弱[1]。

2 材料和方法2.1 材料、试剂与仪器桂花林、牛肉膏蛋白胨培养基、高氏Ⅰ号培养基、培养皿、500 ml三角瓶等。

2.2 方法与步骤第一，配置培养基。

对其进行灭菌与烘干，分离土壤中的微生物，然后倒平板、涂布、划线、分离纯化、培养。

第二，放线菌抑菌效果的检测。

按上述倒平板步骤倒牛肉膏蛋白胨培养基、高氏Ⅰ号培养基。

在超净工作台中，用移液枪与无菌枪头吸取300 μl金黄色葡萄球菌菌液或大肠杆菌菌液放于已写好标记的无菌平板中，用无菌玻璃涂布棒在培养基表面轻轻地涂布均匀。

用打孔器对在纯化过程中得到的放线菌单菌落进行打孔，以取得菌落块。

用接种针挑取菌落块，以菌落面向上的方式置于平板中。

要用保鲜膜进行封口，并做好标记[2]。

具抑菌活性土壤放线菌的筛选放线菌作为能产生大量生物活性物质的一类微生物,一直是生物农药领域的研究热点,目前已经成功开发出了阿维菌素、多杀菌素以及井冈霉素等在农业上广泛应用的农用抗生素。

本研究对94株土壤放线菌进行了抑菌活性筛选,并对筛选出的活性菌株进行较为系统的抑菌活性研究及分类地位鉴定。

主要结果如下:1、以油菜菌核病菌、番茄灰霉病菌、番茄叶霉病菌为指示菌,采用生长速率法对94株土壤放线菌进行抑菌活性筛选。

发现AXW4-1等10株放线菌发酵液至少对3种病原真菌中的一种有60%以上的抑制率。

对其中4株效果较好的放线菌进行抑制孢子及菌核萌发试验,结果显示AXW4-1和HVA29-2菌株发酵液对番茄灰霉病菌的孢子萌发抑制率分别为86.9%和78.8%,X-1-8和GSA26-2菌株发酵液能完全抑制油菜菌核病菌的菌核萌发;油菜叶片组织法试验表明,X-1-8和GSA26-2菌株发酵液对油菜菌核病的药效均在90%以上。

以番茄灰霉病菌为供试病原菌,采用果实组织法对94株土壤放线菌进行抑菌活性筛选,没有发现对番茄灰霉有显著药效的菌株。

2、较为系统的测定了X-1-8与GSA26-2菌株的抑菌活性,结果表明,两株放线菌对油菜菌核病菌均具有显著的抑制效果:发酵液稀释100倍后对菌核萌发的抑制率分别达到了46.5%与39.5%;叶片组织法试验表明,发酵液稀释10倍后,X-1-8菌株对油菜菌核病的药效达86.6%;盆栽试验也显示,X-1-8与GSA26-2菌株发酵液对油菜菌核病的药效显著,分别达到了95.6%与100%。

另外,两株放线菌发酵液对小麦白粉病也有显著药效,治疗与保护效果均在85%以上。

以13种植物病原真菌为供试菌测定两株放线菌发酵液及菌丝内代谢物的抑菌谱,结果表明两株放线菌发酵液及菌丝内代谢物对小麦纹枯病菌均具有显著活性,其中X-1-8菌株的发酵液与菌丝内代谢物对小麦纹枯病菌的抑制率分别为100%与88.4%,GSA26-2菌株的发酵液与菌丝内代谢物对小麦纹枯病菌的抑制率分别为90.5%与90.8%。

高望界土壤放线菌抗菌活性筛选及生物学特征程金莲;刘祝祥;易旻;刘荷;李佑稷;张丽;贺建武;陈义光【期刊名称】《微生物学杂志》【年(卷),期】2016(036)003【摘要】为了从土壤环境中筛选产生抗菌活性物质的放线菌,采用琼脂扩散法对分离自湖南省高望界自然保护区森林土壤的169株放线菌进行抗菌活性检测,采用16S RNA基因序列分析法进行系统发育分析,采用常规方法进行生物学特性研究.结果表明,有47株受试菌株的发酵产物显示抗菌活性阳性(27.8％),其中6株具有较强抗菌活性.形态观察结果表明,这6株菌株均为典型的产丝产孢放线菌,在多数培养基上生长良好,气生菌丝和孢子丝丰富.系统发育分析表明,6株菌株均属于链霉菌属(Streptomyces),归为5个物种.菌株JSM 147612、JSM 147786、JSM 147831和JSM 147846分别与链霉菌属的已知物种S.violascens(序列相似性为99.93％)、S.malachitospinus(99.65％)、S.anulatus (99.72％)和S.aureus (99.38％)系统发育关系最为密切;菌株JSM 147823和JSM 147842之间的序列相似性为99.86％,应该属于同一物种,与它们系统发育关系最为密切的是S.albidoflavus(相似性分别为99.72％和99.58％).【总页数】6页(P14-19)【作者】程金莲;刘祝祥;易旻;刘荷;李佑稷;张丽;贺建武;陈义光【作者单位】吉首大学生物资源与环境科学学院,湖南吉首416000;吉首大学生物资源与环境科学学院,湖南吉首416000;吉首大学生物资源与环境科学学院,湖南吉首416000;吉首大学生物资源与环境科学学院,湖南吉首416000;吉首大学化学化工学院,湖南吉首416000;吉首大学生物资源与环境科学学院,湖南吉首416000;吉首大学生物资源与环境科学学院,湖南吉首416000;吉首大学生物资源与环境科学学院,湖南吉首416000【正文语种】中文【中图分类】Q93【相关文献】1.蓟县山区土壤拮抗放线菌的分离及其抗菌活性筛选 [J], 田小卫;张波;许玉龙2.塔克拉玛干沙漠南麓土壤放线菌资源勘探及抗菌活性筛选 [J], 董艳萍;郭琳;旭格拉·哈布丁;刘佳萌;陈川;蒋忠科;李昕;朱霞琳;曹存巍3.北极海洋放线菌R-527F的抗菌活性筛选、鉴定及其抗菌物质发酵条件研究 [J], 王毓舒;曾倩;俞勇;陈波4.小溪自然保护区嗜盐及耐盐菌抗菌活性筛选及生物学特征 [J], 陈奇辉;张丽;刘祝祥;黄苛;熊利芝;贺建武;陈义光5.土壤拮抗放线菌的分离及其抗菌活性筛选 [J], 王群利;师宝君;卞小莹;姬志勤因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。