实验四、土壤中放线菌的分离

培养基高氏Ⅰ号培养基：可溶性淀粉20．00g、NaCl 0．50 g、KNO3 1．00 g、K2HPO4·3H2O 0．50 g、MgSO4·7H2O 0．50 g、FeSO4·7H2O 0．01g、琼脂粉18．00g，加去离子水定容至1 000 mL，调至pH 7．0，121 ℃高压灭菌20 min.
土壤取样方法：在水稻根部周围，先去除表面2厘米的土后，采用5点取样法取土，混匀。

稀释涂布分离法：取新鲜的土壤5g，与45ml的无菌水混合，摇床要20min，把摇好的10^-1的液体静置待颗粒沉淀后，取1ml加入到有9ml无菌水的试管中，混匀，就到10^-2的稀释液，再从10^-2的稀释液中吸取1ml加入到9ml无菌水的试管中，混匀，就到10^-3的稀释液，类推就可以得到10^-4、10^-5的稀释液。

把灭过菌的100ml的高氏Ⅰ号培养基带温度到60-70左右时加入过0.45um滤膜的0.05g/ml的高锰酸钾溶液100ul、0.1g的氯霉素、0.2ml的庆大霉素，摇匀，倒平板。

用10^-3、10^-4、10^-5三个浓度涂平板。

放线菌发酵：用不加琼脂高氏Ⅰ号培养基接入菌株，在28 ℃、280r/min 摇床培养7d。

过滤，取滤液。

滤液保存在4℃。

莴苣生测：菌液过0.45um的滤膜5ml，加入到有5棵冒芽的莴苣的组培瓶中（每个重复3次）。

稗草生测：与莴苣生测雷同。

实验报告课程名称：环境微生物学实验实验类型：综合实验实验项目名称：微生物的分离与培养与菌落观察学生姓名：专业：环境工程学号：同组学生姓名：指导老师：实验地点：实验日期：2018 年 10月16日一、实验目的和要求1.掌握微生物接种培养技术2.掌握微生物分离纯化技术3.学习并掌握放菌落形态结构的观察方法，认识并理解它们的形态特征。

二、实验内容和原理土壤是微生物生活的大本营，是寻找和发现具有重要价值微生物的主要菌源。

在不同土壤中，各类微生物的数量千差万别。

为了分离获得某种微生物,需要预先制备不同稀释度的菌悬液，并添加相应的抗生素抑制不需要的微生物，例如，添加链霉素25~50U/mL抑制细菌;添加0.5%重铬酸钾液或制霉素50 U/mL 抑制霉菌。

通过10倍稀释以及平板分离、平板涂布和平板划线等操作，微生物可在平板上分散成单个的个体，经过适宜条件培养，单个个体可形成单个菌落。

挑取单个菌落转接至新鲜平板上，即可使目的菌种纯化。

1.菌种的分离纯化：从混杂微生物群体中获得只含有某一种或某一株微生物的过程称为微生物分离与纯化。

在分子生物学的研究及应用中，不仅需要通过分离纯化技术从混杂的天然微生物群中分离出特定的微生物，而且还必须随时注意保持微生物纯培养物的“单一性”，防止其他微生物的混入。

2.平板涂布法：因为将微生物悬液先加到较烫的培养基中再倒平板易造成某些热敏感菌的死亡，且采用稀释倒平板法也会使一些严格好氧菌因被固定在琼脂中间缺乏氧气而影响其生长，因此在微生物学研究中常用的纯种分离方法是涂布平板法。

用途上，一般多用于从菌种的纯化;优点是可以观察菌落特征，对混合菌进行分离;但不能计数3.平板划线法：最简单的分离微生物的方法是平板划线法，其原理是将微生物样品在固体培养基表面多次作“由点到线”稀释而达到分离目的的。

划线的方法很多，常见的比较容易出现单个菌落的划线方法有斜线法、曲线法、方格法、放射法、四格法等。

用途一般多用于筛选菌株。

土壤中放线菌的分离实验目的：1掌握配制合成培养基的一般方法。

2掌握稀释倒平板法从土壤中分离放线菌的基本原理和基本操作技术。

3掌握平板划线法从土壤中分离放线菌的基本原理和基本操作技术。

4掌握涂布平板法从土壤中分离放线菌的基本原理和基本操作技术。

实验材料：药品：可溶性淀粉、KNO3、NaCI = K2HPO4?3H20、MgSO4?7H20、FeSO4?7H20、琼脂。

其他：高压蒸汽灭菌锅、扭力天平、药匙、烧杯、量筒、玻璃棒、三角瓶、试管、牛皮纸、硫酸纸、线绳、无菌培养皿、铁锹、小铲、酒精棉球、锈子、玻璃铅笔。

实验原理：高氏一号合成培养基是培养放线菌的培养基。

这种培养基是采用化学成分完全了解的纯试剂配制而成的培养基，高氏一号培养基：碳源为可溶性淀粉、氮源为KNO3、NaCI ・ K2HPO 4?3H20、MgSO4?7H20作为无机盐，FeSO4?7H20作为微生物的微量元素，提供铁离子等组成。

放线菌是重要的抗生素产生菌，主要分布在土壤中，其数量仅次于细菌，一般在中性偏碱性、有机质丰富、通气性好的土壤中含量较多。

由于土壤中的微生物是各种不同种类微生物的混合体，为了研究某种微生物，就必须把它们从这些混杂的微生物群体中分离出来，从而获得某一菌株的纯培养。

分离放线菌常用稀释倒平板法。

根据放线菌的营养、酸碱度等条件要求，常选用合成培养基或有机氮培养基。

如果培养基成分改变，或土壤预先处理（120C热处理1h），或加入某种抑制剂（如加数滴10%酚等），都可以使细菌，霉菌出现的数量大大减少，从而淘汰了其它杂菌。

再通过稀释法，使放线菌在固体培养基上形成单独菌落，并可得到纯菌株。

实验步骤：1 •咼氏一号合成培养基的制备高氏一号琼脂培养基（培养放线菌用）可溶性淀粉20g，硝酸钾1g,氯化钠0.5g, K2HPO4?3H2O0.5g MgSO4?7H2O0.5g，FeSO4?7H2O0・01g,琼脂20g,水1000ml, pH7.2〜7.4。

土壤中放线菌的分离
分离土壤中的放线菌的步骤如下：
1. 准备培养基：选择适合放线菌生长的培养基，常用的包括土壤提取物富集培养基、葡萄糖琼脂糖培养基、镜菌素琼脂糖培养基等。

2. 取样：在选择好的采样地点，使用消毒的工具（如消毒棉签或无菌铲子）采集土壤样品。

注意避免土壤样品的污染。

3. 预处理：将采集到的土壤样品放入无菌研钵中，加入合适的无菌生理盐水或者缓冲液，悬浮土壤样品，使放线菌被更好地释放出来。

可以对土壤样品进行稀释处理，以降低微生物密度。

4. 稀释平板法：将预处理好的土壤样品用无菌移液管分别
在培养基平板上均匀涂布。

然后放入恒温培养箱进行培养。

孵育时间一般为3-4周。

在培养箱内，放线菌会产生菌落
形成。

5. 单菌分离：在培养箱内观察到单个的放线菌菌落后，使
用消毒的工具将其分离到新的培养基上，形成纯种菌落。

这一步可以采用传统的传代分离法或微量分离法。

6. 纯种菌株保存：将得到的纯种菌株存储在适当的冻存管中，通过冻存进行长期保存。

需要注意的是，在进行上述步骤时，需要严格遵守无菌操
作的原则，避免样品或培养基的污染，以保证得到纯种的
放线菌菌株。

土壤、水质检测——放线菌、霉菌、大肠杆菌的分离方法微生物因为体积小、质量轻、适应性强、繁殖能力强等特点，广泛分布于自然界中。

它们存在于食品、化妆品、饲料、环境等人们能触及的各个角落中。

某些微生物对产品的污染，不仅影响到产品本身的质量，更严重的是它危及消费者的健康和安全。

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以下介绍几种菌的分离方法：一、从土壤中分离放线菌1.制作高氏一号培养基，趁热注入培养皿中，凝成平板，待用。

2.称取土壤10克，放入装有100毫升无菌水的锥形瓶中，并加入10%酚10滴，以抑制细菌生长。

振荡10分钟，制成10-1菌悬液。

按照连续稀释分离法，进一步制成10-3菌悬液。

3.用移液管吸取0.1毫升10-3菌悬液，注入平板培养基上，用无菌玻璃刮刀将菌悬液均匀涂抹在整个培养基上。

然后将培养皿倒置于25-30℃温箱中，培养7-10天，培养基上会出现微生物菌落。

如果菌落的硬度较大，干燥致密，且与基质紧密结合，不易被针挑起，这就是放线菌菌落。

4.挑取放线菌菌落，接种于斜面培养基上。

二、从土壤中分离霉菌1.制作豆芽汗葡萄糖培养基，并添加80%乳酸数滴，以抑制细菌生长。

将培养皿中，凝成平板，待用。

2.称取10克土壤，按上述分离放线菌的方法制成10-4或10-5的菌悬液。

3.取0.1毫升菌悬液注入培养皿内培养基上，用玻璃刮刀涂抹均匀。

然后将培养皿倒置于2 5-30℃温箱内培养3-4天。

培养基上会出现微生物菌落。

霉菌菌落常长成绒状、棉絮状或蜘蛛网状，可根据这一特征寻找霉菌菌落。

4.挑取培养皿内的霉菌菌落接种于斜面培养基上三、从饮水中分离大肠杆菌1.制作伊红美蓝培养基，趁热注入培养皿中，凝成平板，待用。

2.用灭过菌的锥形瓶盛取河水或沟水，按1:10稀释。

放线菌的分离和鉴定放线菌的分离和鉴定实验器材：1.⼟壤材料 5 ---10cm 处⼟壤，放于采集袋中带回实验室。

2.培养基淀粉琼脂培养基（⾼⽒Ⅰ号培养基( w /v)）可溶性淀粉2%，KNO3 0. 1%，NaCL 0. 05%，K2HP04 0. 05%，MgSO4 0. 05%，FeSO4 0. 001%，琼脂2% 3.溶液和试剂（1) 20% ⽢油( 2) 0. 1%美蓝 A 液: 美蓝0. 3g ，95% ⼄醇300ml;B 液: 0. 01% KOH 100ml 混合A 和B 液即成⾰兰⽒染液3( 1) 结晶紫染⾊液: 甲液结晶紫2g，95% ⼄醇20ml;⼄液草酸铵0. 8g，蒸馏⽔80ml。

甲⼄液先分别溶解，然后混合在⼀起，过滤除去残渣后装⼊滴瓶中备⽤。

( 2) 碘液: 碘1g，碘化钾2 个，蒸馏⽔100ml 先取少量蒸馏⽔加⼊碘和碘化钾，使碘完全溶解后再加⼊全部蒸馏⽔，分装于滴瓶中备⽤。

( 3) 复红酒精溶液: 碱性复红0. 4g，95%⼄醇100ml，溶解装⼊滴瓶备⽤。

4.仪器和其他⽤品⽆菌纸、带玻璃珠的三⾓烧瓶、1ml⽆菌吸管、⽆菌试管、⽆菌培养⽫⼀.⽬的要求：1. 掌握倒平板的⽅法和常⽤分离纯化微⽣物的基本操作。

2. 初步观察⼟壤中放线菌菌落形态。

3. 初步了解掌握微⽣物分类的基本⽅法。

⼆.实验原理：放线菌在⾃然界中主要⽣存于陆地和淡⽔中，⼟壤为这类微⽣物的主要习居场所，⽆论在种类和数量上都⽐其他地⽅繁多。

在中性或偏碱性的⼟壤和有机质等丰富的⼟壤中较多。

放线菌以孢⼦和菌丝⽚段的形式存在于⼟壤，每克⼟壤内含有数万、数⼗万的孢⼦。

放线菌的⽣活史和形态特征放线菌的孢⼦和孢囊孢⼦在适宜的环境下吸收⽔分，膨胀萌发，⽣出芽管1 －3 个，芽管伸长长出分枝，分枝越来越多，形态菌丝体。

因其菌丝体在培养基内，即基内菌丝或称营养菌丝体。

基内菌丝体⼀般没有横隔，由于菌丝体长⼊培养基内和培养基表⾯，并纠缠在⼀起形成密集的菌落，所以⽤接种针将整个菌落培养基挑起⽽不破裂。

放线菌实验报告放线菌实验报告一、引言放线菌是一类广泛存在于土壤和水体中的微生物，其具有重要的生物学意义和应用价值。

本次实验旨在通过对放线菌的培养、鉴定和抗菌活性测试，了解放线菌的特性和应用前景。

二、材料与方法1. 放线菌培养基的制备：将葡萄糖、酵母粉、肉膏粉、胰蛋白胨等按一定比例溶解于蒸馏水中，加热煮沸，倒入培养瓶中，待冷却后加入抗生素。

2. 放线菌的采集：在适宜的环境中采集土壤或水样，并将样品分装于离心管中。

3. 放线菌的分离：取适量样品并加入适量的生理盐水，摇匀后进行稀释，取适量稀释液分别均匀涂布于放线菌培养基上。

4. 放线菌的纯化：从培养基上挑选出单菌落，进行连续传代，直至获得纯种放线菌。

5. 放线菌的鉴定：通过形态特征、生理生化特性和分子生物学方法对放线菌进行鉴定。

6. 抗菌活性测试：采用平板扩散法或孔隙扩散法，将放线菌菌液或提取物涂布于琼脂平板上，观察抑菌圈的形成情况。

三、结果与分析经过培养和分离，我们成功获得了多个放线菌菌株。

在鉴定过程中，我们观察到这些放线菌菌株形态各异，有的呈现棕黄色，有的呈现淡黄色，有的呈现灰白色。

此外，通过生理生化特性的检测，我们发现这些放线菌菌株对某些碳源和氮源具有不同的利用能力。

进一步的分子生物学分析结果显示，这些放线菌菌株属于不同的物种。

在抗菌活性测试中，我们选取了几个放线菌菌株进行了评估。

结果显示，这些放线菌菌株对多种细菌具有一定的抑制作用。

其中，某一放线菌菌株对金黄色葡萄球菌表现出了较强的抗菌活性，形成了较大的抑菌圈。

这表明该放线菌菌株可能具有潜在的抗生素生产能力。

四、讨论与展望通过本次实验，我们成功地获得了多个放线菌菌株，并对其进行了鉴定和抗菌活性测试。

然而，由于时间和设备的限制，我们并未对放线菌的抗生素产物进行深入研究。

因此，未来可以进一步探索这些放线菌菌株的抗生素产物，并对其进行分离、纯化和结构鉴定，以期发现新的抗生素。

此外，放线菌不仅具有抗菌活性，还具有其他生物活性物质的合成能力，如抗肿瘤物质、抗病毒物质等。

土壤中放线菌的分离简介放线菌（Actinomycetes）是一类广泛存在于地球各种土壤中的微生物，具有丰富的生物活性代谢产物和生物学功能。

分离土壤中的放线菌对于获得新的生物活性物质和解析放线菌菌株有着重要意义。

本文将介绍土壤中放线菌的分离方法及过程，并提供一些实践经验。

分离方法样品收集选择合适的样品收集地点至关重要。

一般情况下，草地、农田、果园等土壤中含有较丰富的放线菌资源。

在进行样品收集前，应先清理收集工具和容器，并使用无菌绳固定收集区域，避免外界杂质污染。

样品处理1.从采集的土壤中取得样品，并将其放入无菌锥形瓶中。

2.将样品添加至无菌水中，形成土壤悬浮液。

可以通过搅拌或振荡等方式充分悬浮土壤颗粒。

3.通过离心的方法，去除悬浮液中的大颗粒和杂质。

分离培养基的制备分离出放线菌的选择培养基非常重要，一般常用的培养基有：•考马斯琼脂培养基（Koj A）•聚芽孢杆菌琼脂培养基（SGA）•苯丁三唑糖脂琼脂培养基（BIS）其中，考马斯琼脂培养基是最为常用的一种，可以选择性地培养出放线菌。

分离操作1.在无菌条件下，将处理好的土壤悬浮液均匀涂布于分离培养基上。

2.用一次性平皿、玻璃块或玻璃棍等工具均匀划开土壤悬浮液，以增加放线菌的分离点。

3.培养皿密封后，放入恒温培养箱进行培养，通常在28-30℃下培养7-10天。

鉴定和筛选在培养箱中培养的结果显示出放线菌的单独菌落后，可以进行以下鉴定和筛选步骤：1.观察和记录菌落形态特征，包括颜色、形状、质地等。

2.进行显微镜下的形态观察，例如菌丝形态、芽孢形态等。

3.进行生理生化特性的鉴定，包括酶活性、产生代谢产物等。

4.进行16S rRNA或其它分子生物学方法的鉴定，以确定放线菌属别。

实践经验1.分离培养基的配制需要细心严谨，避免污染。

最好在无菌工作台环境下操作。

2.鉴定放线菌时，不同菌株之间可能存在形态和生理差异，需要谨慎观察和鉴定。

3.放线菌培养需要一定的时间，早期菌落的筛选和鉴定需耐心等待。

放线菌的实验报告放线菌的实验报告一、引言放线菌是一类广泛存在于自然界中的微生物，以其独特的形态和生物学特性而备受研究者的关注。

本实验旨在通过对放线菌的分离培养、形态观察和抗生素产生能力的检测，进一步了解放线菌的特点和应用潜力。

二、材料与方法1. 放线菌分离培养：将土壤样品取自自然环境中，加入到含有适宜培养基的培养皿中，进行稀释均匀。

然后将培养皿密封，置于恒温培养箱中，在适宜的温度下培养一段时间，直至观察到单个菌落的形成。

2. 放线菌形态观察：取一颗单个菌落，用显微镜观察其形态特征，包括菌丝的形状、颜色、分枝情况等。

3. 抗生素产生能力检测：将分离得到的放线菌菌株接种到含有抗生素敏感菌株的琼脂平板上，观察菌落周围是否出现抑制圈。

三、结果与讨论1. 放线菌的分离培养：经过一段时间的培养，观察到培养皿中出现了单个菌落。

将这些菌落通过传代培养，得到纯种的放线菌菌株。

2. 放线菌的形态观察：在显微镜下观察到放线菌菌丝呈分枝状，颜色多样，有的呈白色、黄色或橙色。

菌丝通常呈直线状，但也有少数呈弯曲或环状。

3. 抗生素产生能力检测：将分离得到的放线菌菌株接种到含有抗生素敏感菌株的琼脂平板上，观察到菌落周围出现了抑制圈。

这表明放线菌具有抗生素产生的能力，可以对其他细菌产生抑制作用。

放线菌作为一类重要的微生物资源，具有广泛的应用前景。

其产生的抗生素被广泛应用于医药领域，用于治疗各种感染性疾病。

此外，放线菌还具有其他生物活性物质的合成能力，如抗肿瘤物质、抗氧化物质等。

因此，对放线菌的深入研究具有重要意义。

在本次实验中，我们成功地从自然环境中分离出了放线菌，并观察到了其形态特征和抗生素产生能力。

然而，实验中仍存在一些不足之处。

首先，由于实验时间有限，我们只对放线菌的形态进行了简单的观察，没有进行更深入的分类和鉴定。

其次，我们只检测了放线菌的抗生素产生能力，而未对其产生的抗生素进行具体的鉴定和分析。

为了更好地发掘和利用放线菌的潜力，今后的研究可以从以下几个方面展开：1. 对分离得到的放线菌菌株进行进一步的形态学和生理学研究，以了解其多样性和适应能力；2. 对放线菌产生的抗生素进行鉴定和分析，以寻找新的抗生素种类和开发新的药物；3. 利用基因工程技术改造放线菌，提高其抗生素产量和质量。

土壤中放线菌的采集、分离、培养、发酵及提取实验目的：1、从土壤中分离产抗生素的放线菌2、放线菌的培养3、放线菌的发酵产生活性物质4、放线菌产生的活性物质提取。

实验原理：放线菌是一类呈菌丝状生长，主要以孢子繁殖。

放线菌与人类的生产和生活关系极为密切，目前广泛应用的抗生素约80%是各种放线菌所产生的。

许多临床应用的抗生素均由土壤中分离的放线菌产生。

采用选择培养基可分离土壤中的放线菌。

产抗生素的放线菌经液体培养后，其分泌的抗生素存在于离心所得的上清液中，可采用微生物的抑菌试验进行检测，从而筛选到所需的抗生素产生菌，并对其进一步培养，繁殖，发酵，最终提取我们所需的抗生素。

实验器材：1、土壤2、培养基：高氏一号培养基、种子培养基、发酵培养基3、其他：重铬酸钾、培养皿、牛津杯、接种环、酒精灯，无菌涂棒、三角锥瓶、高压蒸汽灭菌锅、天平、药匙、烧杯、量筒、玻璃棒、试管、牛皮纸、线绳等。

实验步骤：一、土壤放线菌株的采集采集样品：选定取样点（最好是有机质含量高的菜地），按对角交叉（五点法）取样。

先除去表层约2cm的土壤，将铲子插入土中数次，然后取2～10cm处的土壤。

将5点样品约1kg充分混匀，除去碎石、植物残根等。

样品（土壤）处理：室温风干二、土壤中放线菌的分离、培养1、配制淀粉培养基淀粉琼脂培养基（高氏培养基）可溶性淀粉2g；硝酸钾0.1g；磷酸氢二钾0.05g；氯化钠0.05g；硫酸镁0.05g；硫酸亚铁0.001g；琼脂2g；水100ml.先把淀粉放在烧杯里，用5ml水调成糊状后，倒入95ml水，搅匀后加入其他药品，使它溶解。

加热到煮沸时加入琼脂，不停搅拌，待琼脂完全溶解后，补足失水。

调整PH到7.2-7.4，分装后灭菌，备用。

2、土壤悬液梯度稀释①将5.0g土壤加入到50ml灭菌的生理盐水中，震荡10min制备土壤悬液。

②用无菌吸管吸取1ml土壤悬液，加入到9ml灭菌的生理盐水中10倍稀释。

③按1：:1稀释至10-3、10-4、10-5，将3块灭菌平板分别标记10-3、10-4、10-5 ，稀释过程应在无菌条件下进行。