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食品中三氯蔗糖的测定HPLC法序列号：DM-P-125 1、适用范围本方案适用于液态奶、酸奶、酱油、醋、饼干、奶酪、奶茶、可乐和果冻中三氯蔗糖的检测，方法定量限7.5 mg/kg。
（GB 22255-2014 食品安全国家标准食品中三氯蔗糖（蔗糖素）的测定中提取为75%甲醇水溶液，减压浓缩过程中暴沸严重，不易操作。
）2、标准品配制标准储备溶液：准确称取标准品，用水配制成10 mg/mL的储备液，吸取一定体积10 mg/mL储备液用水配成浓度为1000 ug/mL的储备液。
3、提取3.1 含蛋白脂肪类液体：液态奶、酸奶、酱油和醋10 mL样品，加入8 mL 水和2 mL 200 g/L乙酸铅溶液，振荡2 min，超声提取5 min，6000 rpm离心5 min，取10 mL上清液，待净化。
3.2 含蛋白脂肪类固体：饼干、奶酪和奶茶5 g样品，加入8 mL 水和2 mL 200 g/L乙酸铅溶液，振荡2 min，超声提取5 min，6000 rpm离心5 min，取10 mL上清液，待净化。
3.3 饮料：可乐（量取前超声排气泡）10 mL样品，加入10 mL 水，混匀，取10 mL，待净化。
3.4 果冻5 g样品，加入5 mL 水，热水超声溶解，混匀，趁热净化。
4、净化ProElut 200 mg/6 mL PLS（Cat#68012）(1)活化：依次向柱中加入5 mL甲醇、5 mL水，弃去流出液；(2)上样：将待净化液加入柱中，弃去流出液（控制流速不超过每秒1滴）；(3)淋洗：(4)洗脱：向柱中加入5 mL20%甲醇水溶液，弃去流出液；向柱中加入3 mL甲醇，收集流出液。
(5)定容：将洗脱液在50℃下减压蒸干，用流动相定容至1 mL，供HPLC分析。
5、色谱条件色谱柱：Diamonsil C18(2) 150×4.6 mm，5 μm（Cat.#：99601），流速：1.0 mL/min，进样量：20 μL，柱温：35 ℃，检测器：SEDEX LT-ELSD，温度：40℃，压力：3.5 bar，Gain：6流动相：A：水；B：乙腈梯度设置食品中三氯蔗糖的HPLC检测的添加回收结果0102030Time (min)0.00.20.40.6V o l t s 1三氯蔗糖标准(100 ug/mL)液相色谱图0102030Time (min)0.0200.0220.0240.0260.0280.0300.032V o l t s 1三氯蔗糖标准(50 ug/mL)液相色谱图0102030Time (min)0.0200.0220.0240.0260.0280.0300.032V o l t s 1三氯蔗糖标准(37.5 ug/mL)液相色谱图0102030Time (min)0.0200.0220.0240.0260.0280.0300.032V o l t s 11 三氯蔗糖1 三氯蔗糖1 三氯蔗糖1 三氯蔗糖102030Time (min)0.0200.0220.0240.0260.0280.0300.032V o l t s 1添加水平为(20 mg/kg)早餐奶中三氯蔗糖检测的液相色谱图0102030Time (min)0.020.040.060.080.0100.0120.014V o l t s 1早餐奶中三氯蔗糖检测(空白样品)的液相色谱图0102030Time (min)0.020.040.060.080.0100.0120.014V o l t s添加水平为(20 mg/kg)巧克力奶中三氯蔗糖检测的液相色谱图0102030Time (min)0.020.040.060.080.0100.0120.014V o l t s 11 三氯蔗糖1 三氯蔗糖1 三氯蔗糖1 三氯蔗糖0102030Time (min)0.020.040.060.080.0100.0120.014V o l t s添加水平为(20 mg/kg)咖啡奶中三氯蔗糖检测的液相色谱图0102030Time (min)0.020.040.060.080.0100.0120.014V o l t s 1咖啡奶中三氯蔗糖检测(空白样品)的液相色谱图0102030Time (min)0.020.040.060.080.0100.0120.014V o l t s添加水平为(200 mg/kg)养乐多中三氯蔗糖检测的液相色谱图102030Time (min)0.00.20.40.6V o l t s 11 三氯蔗糖1 三氯蔗糖1 三氯蔗糖1 三氯蔗糖102030Time (min)0.00.20.40.6V o l t s 1添加水平为(200 mg/kg)酱油中三氯蔗糖检测的液相色谱图102030Time (min)0.00.20.40.6V o l t s 1酱油中三氯蔗糖检测(空白样品)的液相色谱图102030Time (min)0.00.20.40.6V o l t s 1添加水平为(20 mg/kg)醋中三氯蔗糖检测的液相色谱图0102030Time (min)0.000.020.04V o l t s 11 三氯蔗糖1 三氯蔗糖1 三氯蔗糖1 三氯蔗糖102030Time (min)0.000.020.04V o l t s添加水平为(20 mg/kg)饼干中三氯蔗糖检测的液相色谱图102030Time (min)0.022V o l t s 1饼干中三氯蔗糖检测(空白样品)的液相色谱图102030Time (min)0.022V o l t s添加水平为(20 mg/kg)奶酪中三氯蔗糖检测的液相色谱图0102030Time (min)0.022V o l t s 11 三氯蔗糖1 三氯蔗糖1 三氯蔗糖1 三氯蔗糖102030Time (min)0.022V o l t s添加水平为(20 mg/kg)奶茶中三氯蔗糖检测的液相色谱图0102030Time (min)0.0220.0240.0260.0280.0300.032V o l t s 1奶茶中三氯蔗糖检测(空白样品)的液相色谱图0102030Time (min)0.0220.0240.0260.0280.0300.032V o l t s添加水平为(20 mg/kg)酸奶中三氯蔗糖检测的液相色谱图102030Time (min)0.0220.0240.0260.0280.0300.032V o l t s 11 三氯蔗糖1 三氯蔗糖1 三氯蔗糖0102030Time (min)0.0220.0240.0260.0280.0300.032V o l t s添加水平为(20 mg/kg)可乐中三氯蔗糖检测的液相色谱图0102030Time (min)0.0220.0240.0260.0280.0300.032V o l t s 1可乐中三氯蔗糖检测(空白样品)的液相色谱图0102030Time (min)0.0220.0240.0260.0280.0300.032V o l t s添加水平为(20 mg/kg)果冻中三氯蔗糖检测的液相色谱图0102030Time (min)0.0220.0240.0260.0280.0300.032V o l t s 11 三氯蔗糖1 三氯蔗糖1 三氯蔗糖1 三氯蔗糖0102030Time (min)0.0220.0240.0260.0280.0300.032V o l t s1 三氯蔗糖1 三氯蔗糖。
三氯蔗糖含量测定方法
嘿，朋友们！今天咱就来聊聊三氯蔗糖含量测定方法。
这可关系到好多方面呢，比如说在食品行业，要是不知道怎么准确测定三氯蔗糖含量，那生产出来的东西能靠谱吗？就好像做菜不知道放多少盐一样，那味道能好吗！
先来说说一种常见的方法——高效液相色谱法。
就好像在一个大迷宫
里找特定的宝藏一样，通过这种方法可以把三氯蔗糖从一堆其他东西里精准地揪出来并测定它的量。
比如说，你可以拿一杯加了三氯蔗糖的饮料，通过这个方法就能知道里面到底有多少三氯蔗糖呀！
还有分光光度法，这就像是给三氯蔗糖穿上一件特殊的“衣服”，让它在特定的光线照射下“闪闪发光”，从而被我们发现和测量。
哎呀，你想想啊，要是没这个办法，我们怎么能搞清楚那些复杂混合物里三氯蔗糖的含量呢！
总之，这些方法都超级重要的！它们就像是我们了解三氯蔗糖的“眼睛”和“手”，帮助我们准确把握它的情况。
所以说，一定要好好掌握这些测定方法呀！。
QB 中华人民共和国轻工行业标准QB×××--××××食品添加剂三氯蔗糖Sucralose(征求意见稿)××××--××--××发布××××--××--××实施中华人民共和国国家发展和改革委员会发布QB×××--××××前言本标准为首次制定。
本标准的技术要求等效采用美国《食品用化学品法典》第五版（FCCV，1996）本标准的主要内容有：——三氯蔗糖技术要求，包括三氯蔗糖感官要求、理化要求和卫生要求。
在卫生要求中基本按FCCV项目修订指标，增加砷、菌落总数、酵母菌、霉菌、大肠菌群、致病菌项目。
——三氯蔗糖的检验方法。
——三氯蔗糖的检验规则及标签、包装、运输、和贮存的要求。
本标准由中国轻工业联合会提出。
本标准由全国食品工业标准化委员会制糖分技术委员会归口。
本标准由全国甘蔗糖业标准化中心、××××××××××××××××等单位起草。
本标准主要起草人：×××××××××××××××××××××。
食品添加剂三氯蔗糖1 范围本标准规定了食品添加剂三氯蔗糖的技术要求、试验方法、检验规则、标志、包装、运输贮存及保质期的要求。
本标准适用于以蔗糖为原料经酯化、氯代等工艺制成的一种非营养型强力甜味剂，用作食品添加剂，该产品可在饮料、酱菜、复合调味剂、配制酒、冰淇淋、糕点、水果罐头、饼干及面包等2 分子式、结构式：分子式：C12H19Cl3O8,分子量：397.64,化学名:4，1'，6'，-三氯-4，1'，6'，-三脱氧半乳型蔗糖。
1色泽、组织状态1.1仪器洁净的白搪瓷托盘1.2试剂无1.3实验步骤取20g样品置于清洁、干燥的白瓷盘中，在相同的自然或照明光线下，观察其色泽和组织状态。
1.4注意事项确保使用的取样签、取样袋干净无污染，取完样后立即扎紧袋口。
2气味2.1仪器留样瓶2.2试剂无2.3实验步骤三氯蔗糖倒入留样瓶中，在塑料留样瓶中嗅其味。
2.4注意事项确保使用的取样签、取样袋干净无污染，留样瓶无污染。
3含量3.1 仪器和设备高效液相色谱仪（配备示差折光检测器）、电子天平3.2试剂色谱纯乙腈、三氯蔗糖标准品。
3.3实验步骤参考色谱条件a) 色谱柱：SUPELCOSILTMLC-18 4.6*250 5μm。
或其他等效色谱柱。
b) 流动相：将150mL 乙腈与850mL 水混合均匀后，用0.45μm 滤膜过滤，超声脱气后备用。
c) 柱温：30℃。
d) 流动相流速：1.0 mL/min。
e) 进样量：60 μL。
f) 三氯蔗糖保留时间：9min 左右，为确保获得所需的保留时间，必要时可以调整流动相的比例。
注：系统适用性为重复注入标准溶液两次，所得响应面积的RSD不大于2.0％。
分析步骤标准溶液的制备：称取0.1500g 三氯蔗糖标准品（精确至0.0001g），溶于预先准确称取的49.0000g纯水中，所得溶液用0.45μm 滤膜过滤，滤液备用。
试样液的制备：称取约0.1500试样（精确至0.0001g），溶于预先准确称取的49.0000g纯水中，所得溶液用0.45μm 滤膜过滤，滤液备用。
测定在3.3 参考色谱条件下，分别对标准溶液和试样液进行测定，进样量为60 μL，重复进样一次，计算出其主峰面积平均值。
计算结果X1=A U*M S*P/（A S*M U）*100式中：X1——试样中三氯蔗糖的含量，%；A U——试样液色谱主峰面积的平均值；M S——称取三氯蔗糖标准品质量，g；P——三氯蔗糖标准品的含量，%；A S——标准溶液色谱主峰面积的平均值；M U——称取的试样质量，g；实验结果以平行测定结果的算术平均值为准。
1 色泽、组织状态1.1仪器洁净的白搪瓷托盘1.2试剂无1.3实验步骤取20g样品置于清洁、干燥的白瓷盘中，在相同的自然或照明光线下，观察其色泽和组织状态。
1.4注意事项确保使用的取样签、取样袋干净无污染，取完样后立即扎紧袋口。
2 气味2.1仪器留样瓶2.2试剂无2.3实验步骤三氯蔗糖倒入留样瓶中，在塑料留样瓶中嗅其味。
2.4注意事项确保使用的取样签、取样袋干净无污染，留样瓶无污染。
3 含量3.1 仪器和设备高效液相色谱仪（配备示差折光检测器）、电子天平3.2试剂色谱纯乙腈、三氯蔗糖标准品。
3.3实验步骤参考色谱条件a) 色谱柱：SUPELCOSILTMLC-18 4.6*250 5μm。
或其他等效色谱柱。
b) 流动相：将150mL 乙腈与850mL 水混合均匀后，用0.45μm 滤膜过滤，超声脱气后备用。
c) 柱温：30℃。
d) 流动相流速：1.0 mL/min。
e) 进样量：60 μL。
f) 三氯蔗糖保留时间：9min 左右，为确保获得所需的保留时间，必要时可以调整流动相的比例。
注：系统适用性为重复注入标准溶液两次，所得响应面积的RSD不大于2.0％。
分析步骤标准溶液的制备：称取0.1500g 三氯蔗糖标准品（精确至0.0001g），溶于预先准确称取的49.0000g纯水中，所得溶液用0.45μm 滤膜过滤，滤液备用。
试样液的制备：称取约0.1500试样（精确至0.0001g），溶于预先准确称取的49.0000g纯水中，所得溶液用0.45μm 滤膜过滤，滤液备用。
测定在3.3 参考色谱条件下，分别对标准溶液和试样液进行测定，进样量为60 μL，重复进样一次，计算出其主峰面积平均值。
计算结果X1=A U*M S*P/（A S*M U）*100式中：X1——试样中三氯蔗糖的含量，%；A U——试样液色谱主峰面积的平均值；M S——称取三氯蔗糖标准品质量，g；P——三氯蔗糖标准品的含量，%；A S——标准溶液色谱主峰面积的平均值；M U——称取的试样质量，g；实验结果以平行测定结果的算术平均值为准。
三氯蔗糖的色谱柱三氯蔗糖检测需要采用HPLC法，并选择适用于HPLC法的色谱柱。
常用的色谱柱有C18色谱柱、phenomenex luna C18色谱柱和zorbax eclipse plus C18色谱柱，需要根据实际情况选择。
其中，C18色谱柱价格低廉，能够提供较好的分离效果。
在选择色谱柱时，需要考虑样品的性质和目标分析物的性质。
对于三氯蔗糖的检测，需要选择具有良好耐受性的色谱柱，以避免在分析过程中出现柱效下降或柱寿命短等问题。
同时，还需要考虑色谱柱的粒径和填料性质等因素，以获得最佳的分离效果和峰形。
在三氯蔗糖的检测中，还需要注意以下几点：1. 样品处理：对于含有三氯蔗糖的样品，需要进行适当的处理以去除杂质和干扰物质，以避免对分析结果产生影响。
常用的处理方法包括提取、净化、浓缩等步骤。
2. 流动相选择：在HPLC分析中，流动相的选择对于分离效果和峰形都有重要影响。
需要选择适宜的流动相配比和溶剂强度，以达到最佳的分离效果。
3. 检测器选择：对于三氯蔗糖的检测，需要选择合适的检测器以获得准确的定量结果。
常用的检测器包括紫外检测器、示差折光检测器和蒸发光散射检测器等。
4. 校准曲线：在进行三氯蔗糖检测时，需要建立合适的校准曲线以确定样品中三氯蔗糖的含量。
校准曲线的线性范围应覆盖实际样品的浓度范围，并使用标准品进行制备。
5. 重复性：在进行三氯蔗糖检测时，需要考察方法的重复性，以确保分析结果的可信度和可重复性。
可以通过对同一批次样品进行多次分析或对不同批次样品进行分析来评估方法的重复性。
总之，在三氯蔗糖的检测中，选择合适的色谱柱是关键之一，需要考虑样品的性质和目标分析物的性质等因素。
同时，还需要注意样品处理、流动相选择、检测器选择、校准曲线和重复性等方面的问题，以确保获得准确可靠的分析结果。
1 色泽、组织状态仪器洁净的白搪瓷托盘试剂无实验步骤取20g样品置于清洁、干燥的白瓷盘中，在相同的自然或照明光线下, 观察其色泽和组织状态。
注意事项确保使用的取样签、取样袋干净无污染，取完样后立即扎紧袋口。
2气味仪器留样瓶试剂无实验步骤三氯蔗糖倒入留样瓶中，在塑料留样瓶中嗅其味。
注意事项确保使用的取样签、取样袋干净无污染，留样瓶无污染。
3含量仪器和设备高效液相色谱仪(配备示差折光检测器) 、电子天平试剂色谱纯乙腈、三氯蔗糖标准品。
实验步骤参考色谱条件a)色谱柱：SUPELCOSILTMLC- *250 5 卩m 或其他等效色谱柱。
b)流动相：将150mL乙腈与850mL水混合均匀后，用卩m滤膜过滤，超声脱气后备用。
c)柱温：30C。
d)流动相流速：mL/min 。
e)进样量：60卜L。
f)三氯蔗糖保留时间：9min 左右，为确保获得所需的保留时间，必要时可以调整流动相的比例。
注：系统适用性为重复注入标准溶液两次，所得响应面积的RSD不大于％。
分析步骤标准溶液的制备：称取三氯蔗糖标准品(精确至) ，溶于预先准确称取的纯水中，所得溶液用卩m滤膜过滤，滤液备用。
试样液的制备：称取约试样(精确至) ，溶于预先准确称取的纯水中，所得溶液用口m滤膜过滤，滤液备用。
测定在参考色谱条件下，分别对标准溶液和试样液进行测定，进样量为60□ L,重复进样一次，计算出其主峰面积平均值。
计算结果X1=A U*M S*P/ （A S*M U）*100式中：X1 ――试样中三氯蔗糖的含量，%A U――试样液色谱主峰面积的平均值；M S称取三氯蔗糖标准品质量，g ；P――三氯蔗糖标准品的含量，%A S――标准溶液色谱主峰面积的平均值；M U---- 称取的试样质量，g；实验结果以平行测定结果的算术平均值为准。
注意事项a）系统适应性为重复注入标准溶液两次，所得响应面积的RSD^大于％。
b）进样时不得有气泡,并且进样速度保持匀稳推进。
含乳食品中三氯蔗糖的快速测定徐镇【摘要】近年来,随着我国经济的发展,食品安全问题日益受到社会大众与政府的关注,而食品问题的不断暴露也让业内人士反思食品安全控制问题及方法的改进.三氯蔗糖作为食品中使用频率较高的甜味剂,在物化性质等方面契合食品加工流程及条件,在食品中应用广泛,但长期摄取三氯蔗糖会对人体造成不同程度的危害,因此,国家对食品中三氯蔗糖的使用用量、测定等做出了规定与指导.本文以含乳食品中三氯蔗糖的快速测定为核心展开论述,笔者基于多年实践经验,参考国家相关标准关于三氯蔗糖测定的指导,对测定方法做出一定的优化,提出具体的测定方法并分析其应用性.【期刊名称】《食品安全导刊》【年(卷),期】2017(000)036【总页数】2页(P83-84)【关键词】三氯蔗糖;含乳食品;测定【作者】徐镇【作者单位】宿迁市产品质量监督检验所【正文语种】中文1 三氯蔗糖及其测定三氯蔗糖（Sucralose或TGS CNS：19.016；INS：955），又称蔗糖素、蔗糖晶、三氯半乳糖，是由英国泰莱公司（Tate&Lyie）与伦敦大学共同研制并于1976年申请专利的一种新型甜味剂。
三氯蔗糖通常为白色粉末状，其物化性质与蔗糖相似，高温、酸碱性、温度、pH值对其影响几乎可以忽略，适用于食品加工中的诸多环节。
在不同条件下，三氯蔗糖的甜度约为蔗糖的400～800倍，甜味在纯正感、呈现速度、感受强度、持续时间、无任何后苦味等甜味特性上与蔗糖也保持着高度的相似性，目前是世界上公认的强力甜味剂。
在我国，三氯蔗糖是批准使用的甜味剂，在食品加工与储存过程中表现稳定[1]。
但三氯蔗糖作为食品制作中的原材料之一，其摄入随着摄入量的增加也可能会对人体产生不同程度的影响，研究发现三氯蔗糖及其水解产物有可能会造成DNA的损伤[2]。
基于以上三氯蔗糖的性质、应用及其可能存在的危害，国家对食品中三氯蔗糖的含量、测定等方面做出了相应的规定。
1 色泽、组织状态1.1仪器洁净的白搪瓷托盘1.2试剂无1.3实验步骤取20g样品置于清洁、干燥的白瓷盘中，在相同的自然或照明光线下，观察其色泽和组织状态。
1.4注意事项确保使用的取样签、取样袋干净无污染，取完样后立即扎紧袋口。
2 气味2.1仪器留样瓶2.2试剂无2.3实验步骤三氯蔗糖倒入留样瓶中，在塑料留样瓶中嗅其味。
2.4注意事项确保使用的取样签、取样袋干净无污染，留样瓶无污染。
3 含量3.1 仪器和设备高效液相色谱仪（配备示差折光检测器）、电子天平3.2试剂色谱纯乙腈、三氯蔗糖标准品。
3.3实验步骤参考色谱条件a) 色谱柱：SUPELCOSILTMLC-18 4.6*250 5μm。
或其他等效色谱柱。
b) 流动相：将150mL 乙腈与850mL 水混合均匀后，用0.45μm 滤膜过滤，超声脱气后备用。
c) 柱温：30℃。
d) 流动相流速：1.0 mL/min。
e) 进样量：60 μL。
f) 三氯蔗糖保留时间：9min 左右，为确保获得所需的保留时间，必要时可以调整流动相的比例。
注：系统适用性为重复注入标准溶液两次，所得响应面积的RSD不大于2.0％。
分析步骤标准溶液的制备：称取0.1500g 三氯蔗糖标准品（精确至0.0001g），溶于预先准确称取的49.0000g纯水中，所得溶液用0.45μm 滤膜过滤，滤液备用。
试样液的制备：称取约0.1500试样（精确至0.0001g），溶于预先准确称取的49.0000g 纯水中，所得溶液用0.45μm 滤膜过滤，滤液备用。
测定在3.3 参考色谱条件下，分别对标准溶液和试样液进行测定，进样量为60 μL，重复进样一次，计算出其主峰面积平均值。
计算结果X1=A U*M S*P/（A S*M U）*100式中：X1——试样中三氯蔗糖的含量，%；A U——试样液色谱主峰面积的平均值；M S——称取三氯蔗糖标准品质量，g；P——三氯蔗糖标准品的含量，%；A S——标准溶液色谱主峰面积的平均值；M U——称取的试样质量，g；实验结果以平行测定结果的算术平均值为准。
论蔗糖合成甜味剂——三氯蔗糖的测定方法文章标题：论蔗糖合成甜味剂——三氯蔗糖的测定方法摘要:采用高效液相色谱法，Sugar-PakTM1色谱柱，以二次水为流动相，示差折光仪为检测器，外标法进行定量分析，测定三氯蔗糖含量，相对标准偏差为0.11(n=5)，线性相关系数为0.99990，最小检测浓度为0.2µg/mL。
该方法准确、可靠且无毒，是测定三氯蔗糖含量的有效方法。
关键词:三氯蔗糖，高效液相色谱法，Sugar-PakTM1色谱柱作者简介：王桂华，男，２８岁：研究生学历，在广州甘蔗糖业研究所工作，研究方向：糖品检测和标准化。
三氯蔗糖是以蔗糖为原料经氯代而制得的一种非营养型强力甜味剂，其化学名4，1’，6’—三氯—4，1’，6’—三脱氧半乳型蔗糖。
目前三氯蔗糖已广泛应用于饮料、口香糖、乳制品、蜜饯、糖浆、面包、糕点、冰淇淋、果酱、果冻、布丁等加工食品中。
另外，三氯蔗糖是一种新型非营养性甜味剂[1，2]，是肥胖症、心血管病和糖尿病患者理想的食品添加剂，因此它在保健食品和医药中的应用不断扩大。
我国卫生部在1997年颁发的《食品添加剂使用卫生标准》规定，可在饮料、酱菜、复合调味剂、配制酒、冰淇淋、糕点、水果罐头、饼干及面包中使用该产品，允许添加量为0.25g/kg，在改性口香糖、蜜饯中的添加量为1.5g/kg。
由于目前食品添加剂三氯蔗糖含量的检测无标准或行业标准方法,相关的报导较少。
我们用Waters高效液相色谱仪，以Sugar-PakTM1为色谱柱,水为流动相，示差折光检测器检测,外标法进行定量分析,建立了三氯蔗糖的含量测定方法,该方法简便，可靠且无毒，分离效果好,适用于生产过程及其应用厂家的监测。
1实验部分1.1仪器和试剂Waters1525HPLC,Waters2414示差折光检测器,WatersEmpower色谱管理软件；二次水（0.45µm水相滤膜过滤），三氯蔗糖标样（美国SIGMA公司）。
T logy科技分析与检测1 引言三氯蔗糖（Sucralose）是以蔗糖为原料的新型甜味剂[1-2]，由于食用后不会引起血糖波动的特点[3-4]，深受糖尿病患者青睐；同时它也不受温度环境的影响[5-6]，具有高稳定性，商家比较喜欢，在乳制品、水果罐头、酱油、酒类、坚果类以及酱腌菜等食品中均有添加。
但它毕竟是一种添加剂，少量添加能改善食品的口感，增加人们的食欲，但如果添加太多，会对味觉造成刺激，因此国家标准GB2760-2014中对不同食品中的三氯蔗糖添加量规定了最大使用量，实验主要研究了酱腌菜中三氯蔗糖的含量，标准中规定其最大使用量为0.25g/kg。
2 实验部分2.1 材料与仪器实验试剂：乙腈（德国默克），色谱纯；亚铁氰化钾（天津市恒兴化学制造有限公司）分析纯；乙酸锌（天津市恒兴化学制造有限公司）分析纯；标准品（DR公司），纯度99%。
实验仪器：液相色谱串联质谱仪（Thermo TSQ Quantum），配有电喷雾离子源；分析天平（美国奥豪斯）；冷冻离心机（美国贝克曼）。
2.2 标准溶液的配置标准品溶液：称取10mg（精确至0.001mg）三氯蔗糖标准品置于100mL容量瓶中，先用少量水溶解，再用水定容至刻度，混匀，配成100mg/L的标准溶液。
标准工作液：分别量取50、100、200、400、600 μL与1000 μL的标准溶液于10mL容量瓶中，加水定容至刻度，配成0.5、1、2、4、6 mg/L和10 mg/L的标准工作溶液。
2.3 样品的处理准确称取均匀样品1.0g（精确至0.01g）于50mL刻度离心管中，加10mL水涡旋混匀，于超声波中超声30min，冷却，加亚铁氰化钾及硫酸锌各1mL（蛋白质多的样品），8000r/min离心5min，取上清液过0.22μm滤膜，上机检测。
2.4 色谱质谱条件液相条件：C18色谱柱，流动相为水和甲醇，流速0.3 mL/min，梯度洗脱。
质谱条件：电喷雾离子源，负离子扫描，多反应监测，喷雾电压、鞘气、辅助气、毛细管传输温度以及碰撞能量调节使质谱灵敏度达到最佳。
测评三氯蔗糖的原理
测评三氯蔗糖的原理主要包括以下几个方面：
1. 高效液相色谱法（HPLC）：HPLC是通过样品在固定相（如色谱柱）中的慢速流动，利用不同化学物质在固定相中的分配、吸附和洗脱特性的差异来分离和定量化合物的方法。
对于三氯蔗糖，可以采用HPLC进行分析和定量，通过分离并检测三氯蔗糖分子在色谱柱中的保留时间和检测信号强度来确定其含量。
2. 紫外-可见吸收光谱法（UV-Vis）：三氯蔗糖在紫外-可见光谱范围内具有特定的吸收特性，可以利用该特性进行测评。
通过测定三氯蔗糖溶液对特定波长光线（如254 nm）的吸光度，可以推算出其浓度。
3. 核磁共振波谱法（NMR）：核磁共振技术是一种通过观察原子核在外加磁场下的行为来研究化合物的结构和特性的方法。
通过采集三氯蔗糖样品的核磁共振谱图，可以进一步确认分子中各原子的类型和位置，从而推导出其浓度。
4. 总体测评法：除了直接检测三氯蔗糖的含量，还可以通过一系列宏观指标来综合评估三氯蔗糖的品质。
比如，可以测定三氯蔗糖的水分、溶解度、糖度等指标，从而评估其纯度和适用性。
需要注意的是，具体使用哪种方法进行测评还取决于所需的精确度、分析时间、仪器设备的可用性以及实验室的专业技术和经验。
液相色谱-串联质谱法测定饮料中三氯蔗糖发布时间：2021-03-02T07:51:11.659Z 来源：《中国科技人才》2021年第3期作者：张玲1* 张万层2 [导读] 建立了液相色谱-串联质谱法测定饮料中三氯蔗糖的分析方法。
样品用水提取，经HLB固相萃取小柱净化，过0.22μm滤膜后上机分析。
采用C18柱为分离柱，甲醇-0.1%氨水溶液梯度洗脱，在ESI负离子模式下进行测定，外标法定量。
结果表明，三氯蔗糖在工作曲线范围内相关系数良好，大于0.9990，加标回收率范围在89.8%～102.0%，其相对标准偏差（n=6）为2.0%～3.3%。
该方法前处理步骤简单，准确度高，灵敏度强。
张玲1* 张万层2天津量信检验认证技术有限公司天津 300462摘要：建立了液相色谱-串联质谱法测定饮料中三氯蔗糖的分析方法。
样品用水提取，经HLB固相萃取小柱净化，过0.22μm滤膜后上机分析。
采用C18柱为分离柱，甲醇-0.1%氨水溶液梯度洗脱，在ESI负离子模式下进行测定，外标法定量。
结果表明，三氯蔗糖在工作曲线范围内相关系数良好，大于0.9990，加标回收率范围在89.8%～102.0%，其相对标准偏差（n=6）为2.0%～3.3%。
该方法前处理步骤简单，准确度高，灵敏度强。
关键词：三氯蔗糖；饮料；液相色谱-串联质谱仪1.引言三氯蔗糖，俗称蔗糖素，是一种高倍甜味剂[1]，其甜度约为蔗糖的600倍，因其性质稳定，耐酸，耐高温，耐贮藏[2]，低热量，无任何异味等特点，因此被广泛用于各种水果罐头及饮料中。
但是近期研究发现三氯蔗糖存在消灭肠道的有益细菌、释放毒素、降低药效等风险[3]，对人体健康产生一定的危害，所以我国对三氯蔗糖的添加有一定的限量。
目前食品中三氯蔗糖测定方法主要使用蒸发光散射检测器或示差折光检测器的高效液相色谱法，此方法检出限（0.0025g/kg）高，加上其高甜度的特征，使得检测结果容易出现假阴性的情况，无法满足某些饮料的定量分析；另外，液相色谱仪只能通过保留时间来定性，且其方法相比较质谱来说，平衡时间较长且灵敏度低，故而容易出现假阳性的问题。
食品中三氯蔗糖（蔗糖素）的测定（可编辑优质文档）(可以直接使用，可编辑完整版资料，欢迎下载）食品安全国家标准食品中三氯蔗糖（蔗糖素）的测定（征求意见稿）中华人民共和国卫生部发布前言本标准代替GB/T 22255-2021《食品中三氯蔗糖(蔗糖素)的测定》。
本标准与GB/T 22255-2021相比，主要变化如下：——增加了含20%以上糖或糖醇的试样的制备步骤；——高效液相色谱分离采用了等度洗脱。
食品安全国家标准食品中三氯蔗糖（蔗糖素）的测定1 范围本标准规定了食品中三氯蔗糖的液相色谱测定方法。
本标准适用于食品中三氯蔗糖的测定。
2原理三氯蔗糖是水溶性物质，易溶于水和甲醇。
试样经75%（V+V）甲醇水溶液提取并去除蛋白，含脂肪高的样品再以正己烷萃取去除脂肪，水相经水浴蒸干，加水定容（可根据需要采取中性氧化铝固相萃取柱净化或者C18固相萃取柱富集净化），过滤后进高效液相色谱仪，经反相C18色谱柱分离后，由蒸发光散射检测器检测，根据保留时间定性,以峰面积定量。
3 试剂和材料除非另有说明，本方法所用试剂均为分析纯，水为GB/T 6682规定的一级水。
3.1 甲醇（CH3OH）。
3.2 乙腈（CH3CN）：色谱纯。
3.3正己烷（C6H14）。
3.4商品化中性氧化铝固相萃取柱（2 g装）。
3.5 C18固相萃取柱（3 mL,500 mg）使用前依次用4 mL甲醇，4 mL水活化。
3.6 三氯蔗糖标准品（C12H19C l3O8）：纯度≥99%。
3.7 标准溶液的制备三氯蔗糖贮备液（0.50 mg/mL）：精确称取三氯蔗糖对照品0.0500 g，用水定容至100 mL，混匀，其中三氯蔗糖浓度为0.50 mg/mL。
贮备液置于4 ℃冰箱中保存。
三氯蔗糖工作液：分别吸取0.0 mL、1.0 mL、3.0 mL、5.0 mL、8.0 mL三氯蔗糖贮备液于10 mL容量瓶中，用水定容至刻度。
其中三氯蔗糖工作液浓度分别为0.00 mg/mL、0.050 mg/mL、0.15 mg/mL、0.25 mg/mL、0.40 mg/mL。
1 色泽、组织状态仪器洁净的白搪瓷托盘试剂无实验步骤取20g样品置于清洁、干燥的白瓷盘中，在相同的自然或照明光线下，观察其色泽和组织状态。
注意事项确保使用的取样签、取样袋干净无污染，取完样后立即扎紧袋口。
2 气味仪器留样瓶试剂无实验步骤三氯蔗糖倒入留样瓶中，在塑料留样瓶中嗅其味。
注意事项确保使用的取样签、取样袋干净无污染，留样瓶无污染。
3 含量仪器和设备高效液相色谱仪（配备示差折光检测器）、电子天平试剂色谱纯乙腈、三氯蔗糖标准品。
实验步骤参考色谱条件a) 色谱柱：SUPELCOSILTMLC-18 *250 5μm。
或其他等效色谱柱。
b) 流动相：将150mL 乙腈与850mL 水混合均匀后，用μm 滤膜过滤，超声脱气后备用。
c) 柱温：30℃。
d) 流动相流速：mL/min。
e) 进样量：60 μL。
f) 三氯蔗糖保留时间：9min 左右，为确保获得所需的保留时间，必要时可以调整流动相的比例。
注：系统适用性为重复注入标准溶液两次，所得响应面积的RSD不大于％。
分析步骤标准溶液的制备：称取三氯蔗糖标准品（精确至），溶于预先准确称取的纯水中，所得溶液用μm 滤膜过滤，滤液备用。
试样液的制备：称取约试样（精确至），溶于预先准确称取的纯水中，所得溶液用μm 滤膜过滤，滤液备用。
测定在参考色谱条件下，分别对标准溶液和试样液进行测定，进样量为60 μL，重复进样一次，计算出其主峰面积平均值。
计算结果X1=A U*M S*P/（A S*M U）*100式中：X1——试样中三氯蔗糖的含量，%；A U——试样液色谱主峰面积的平均值；M S——称取三氯蔗糖标准品质量，g；P——三氯蔗糖标准品的含量，%；A S——标准溶液色谱主峰面积的平均值；M U——称取的试样质量，g；实验结果以平行测定结果的算术平均值为准。
注意事项a)系统适应性为重复注入标准溶液两次，所得响应面积的RSD不大于％。
b)进样时不得有气泡，并且进样速度保持匀稳推进。
高效液相色谱法测定三氯蔗糖一、三氯蔗糖概述三氯蔗糖，又名蔗糖素，三氯半乳糖。
英文名为Surcalose，分子为C12H19C3O8，相对分子质量为397.64。
三氯蔗糖通常用作食品调味剂，甜度是蔗糖的600-650倍，其甜味曲线与蔗糖几乎重叠，毫无生涩感。
通过大白鼠和人体临床试验，对人体机能无损害，并且不会引起血糖波动，尤其适合糖尿病人食用。
其安全性被100多分科学权威科学报告证实了其作为食品添加剂的安全性。
三氯蔗糖广泛用于饮料、糖浆、面包、冰激凌等甜味食品当中。
三氯蔗糖于1976年在英国Tate&Lyie公司诞生，1991年加拿大批准食用，我国内陆于1997年批准食用。
目前三氯蔗糖全市需求量为46亿人民币，在3000多种食品、保健品、医疗和日化产品中应用。
二、食品中三氯蔗糖检测1.仪器与试剂型号为Agilent-1200的高效液相色谱仪1台，规格为4.6mm×250mm，5μm的C18色谱柱1套，型号为ELSD蒸发光检测仪1台。
取Dr.Ehrenstorfer公司生产的纯度为98.5%三氯蔗糖标准物质，用容量瓶配置成2.0mg/mL的标准贮备溶液。
2.色谱环境取C18色谱柱，水浴加热维持柱温35℃，色谱柱中流动相为乙腈水溶液，溶液流量为1.0mL/min，蒸发管温度为60℃，气态流量3.5L/min，进样量为20μL，放大倍数为10倍。
3.实验过程取配料中含有三氯蔗糖的饮料，移取一定体积的待测样品（精确到0.01g），视其需要调节pH值或加适量沉淀剂，经过0.45μm滤膜过滤的超纯水后进行超声波溶解，定容至一定体积，再通过0.45μm滤膜过滤用作色谱分析。
4.实验结果分析4.1样品预处理按照国标GB/T 22255-2008《食品中三氯蔗糖的测定》，为了除去蛋白质和脂肪，用75%甲醇水处理使蛋白分解，用正己烷除去脂肪，水相经水浴蒸干，最终发现除蛋白效果不理想，而且含糖量高的饮料处理蒸干后很难进行准确定容与过滤。
1 色泽、组织状态1.1仪器洁净的白搪瓷托盘1.2试剂无1.3实验步骤取20g样品置于清洁、干燥的白瓷盘中，在相同的自然或照明光线下，观察其色泽和组织状态。
1.4注意事项确保使用的取样签、取样袋干净无污染，取完样后立即扎紧袋口。
2 气味2.1仪器留样瓶2.2试剂无2.3实验步骤三氯蔗糖倒入留样瓶中，在塑料留样瓶中嗅其味。
2.4注意事项确保使用的取样签、取样袋干净无污染，留样瓶无污染。
3 含量3.1 仪器和设备高效液相色谱仪（配备示差折光检测器）、电子天平3.2试剂色谱纯乙腈、三氯蔗糖标准品。
3.3实验步骤参考色谱条件a) 色谱柱：SUPELCOSILTMLC-18 4.6*250 5μm。
或其他等效色谱柱。
b) 流动相：将150mL 乙腈与850mL 水混合均匀后，用0.45μm 滤膜过滤，超声脱气后备用。
c) 柱温：30℃。
e) 进样量：60 μL。
f) 三氯蔗糖保留时间：9min 左右，为确保获得所需的保留时间，必要时可以调整流动相的比例。
注：系统适用性为重复注入标准溶液两次，所得响应面积的RSD不大于2.0％。
分析步骤标准溶液的制备：称取0.1500g 三氯蔗糖标准品（精确至0.0001g），溶于预先准确称取的49.0000g纯水中，所得溶液用0.45μm 滤膜过滤，滤液备用。
试样液的制备：称取约0.1500试样（精确至0.0001g），溶于预先准确称取的49.0000g纯水中，所得溶液用0.45μm 滤膜过滤，滤液备用。
测定在3.3 参考色谱条件下，分别对标准溶液和试样液进行测定，进样量为60 μL，重复进样一次，计算出其主峰面积平均值。
计算结果X1=A*M*P/（A*M）*100USSU式中：X1——试样中三氯蔗糖的含量，%；A——试样液色谱主峰面积的平均值；U M——称取三氯蔗糖标准品质量，g；S P——三氯蔗糖标准品的含量，%；A——标准溶液色谱主峰面积的平均值；S M——称取的试样质量，g；U实验结果以平行测定结果的算术平均值为准。
DOI：10.13995/jc cnklc11-1802/ts.019979QuEChERS萃取-液相色谱法测定酱油和酱制品中三氯蔗糖宋佳，李锦清，李聪，周勇，黄翠莉，棊艳*（广东产品质量监督检验研究院，国家食品质量监督检验中心（广东），广东佛山，528300）摘要建立了QuEChERS萃取-苯相色谱法测定酱油和酱制品中三氯蔗糖含量的分析方法。
样'以乙睛作为萃取溶剂，采用改进的QuEChERS方法进行萃取。
以乙睛和水为流动相，C h色谱柱分离，液相色谱-蒸发“散射检测'进行检测"三氯蔗糖在20~1500!0/mL呈良好线性关系，相关系数（"）＞0.99；3个水平下的加标回收率为83.2%-95.4%；相对标准偏差（RSD）为4.1%~6.3%；方法检出限为1mg/kg，定量限为3mg/kg；方法简单、快速、准确可靠，适用于酱油及酱制'中三氯蔗糖的快速检测。
关键词QuEChERS；酱油和酱制';三氯蔗糖；蒸发“散射检测'三氯蔗糖极易溶于水,具有甜味纯正，化学稳定,下变，甜度稳定,无毒副作用等优点［1-2］,广泛应用于酱油、饮料、乳制品、饮料酒'一4（和果酱等加工食品中，在国内外使用的各种甜味剂中，三氯蔗糖是特征性优点最多的一种％我国GB 2760—2014《食品安全国家标准食品添加剂使用标准》对酱油和酱制品中三氯蔗糖的添行规定，规定其最大使用得超过0.25g/kg［5］。
目前食品中三氯蔗糖检测标准有国家强制性标准GB22255—2014［6］和地方标准DBS52/007—2014［7］%GB22255—2014标准规定含有蛋白脂肪样品、酱酱制品、醋、酱、饮料等样品采用填料为Z乙烯基毗咯烷酮和基苯亲水亲衡型填料的固相萃取柱进行净化、富，含酒的试用蒸干后用液的前处理方法％DBS52/ 007—2014规酒样品采用水稀释后直接检测的前处理方法％另外，国献报道的食品中三氯蔗糖提取方法有甲醇、乙醇取法［8-10］、固相萃取法［11-12］、接稀释法［13-14］、沉淀接测［15-18］等，其中以固相萃取法为主，使用的固相萃取柱有HLB柱［19］、中铝柱［20］、Cn固相萃取柱［21］等。
1色泽、组织状态仪器洁净的白搪瓷托盘试剂无实验步骤取20g样品置于清洁、干燥的白瓷盘中，在相同的自然或照明光线下，观察其色泽和组织状态。
注意事项确保使用的取样签、取样袋干净无污染，取完样后立即扎紧袋口。
2气味仪器留样瓶试剂无实验步骤三氯蔗糖倒入留样瓶中，在塑料留样瓶中嗅其味。
注意事项确保使用的取样签、取样袋干净无污染，留样瓶无污染。
3含量仪器和设备高效液相色谱仪（配备示差折光检测器）、电子天平试剂色谱纯乙腈、三氯蔗糖标准品。
实验步骤参考色谱条件a) 色谱柱：SUPELCOSILTMLC-18 *250 5μm。
或其他等效色谱柱。
b) 流动相：将150mL 乙腈与850mL 水混合均匀后，用μm 滤膜过滤，超声脱气后备用。
c) 柱温：30℃。
d) 流动相流速： mL/min。
e) 进样量：60 μL。
f) 三氯蔗糖保留时间：9min 左右，为确保获得所需的保留时间，必要时可以调整流动相的比例。
注：系统适用性为重复注入标准溶液两次，所得响应面积的RSD不大于％。
分析步骤标准溶液的制备：称取三氯蔗糖标准品（精确至），溶于预先准确称取的纯水中，所得溶液用μm 滤膜过滤，滤液备用。
试样液的制备：称取约试样（精确至），溶于预先准确称取的纯水中，所得溶液用μm 滤膜过滤，滤液备用。
测定在参考色谱条件下，分别对标准溶液和试样液进行测定，进样量为60μL，重复进样一次，计算出其主峰面积平均值。
计算结果X1=A U*M S*P/（A S*M U）*100式中：X1——试样中三氯蔗糖的含量，%；A U——试样液色谱主峰面积的平均值；M S——称取三氯蔗糖标准品质量，g；P——三氯蔗糖标准品的含量，%；A S——标准溶液色谱主峰面积的平均值；M U——称取的试样质量，g；实验结果以平行测定结果的算术平均值为准。
注意事项a)系统适应性为重复注入标准溶液两次，所得响应面积的RSD不大于％。
b)进样时不得有气泡，并且进样速度保持匀稳推进。
