分离和鉴定微生物的方法

- 1 - / 12

一、目的要求[1]

1． 通过从土壤中分离纯化细菌，掌握培养基的制备与灭菌技术、微生物的分离纯化方法和无菌操作技术。

2． 掌握常用的微生物鉴定方法及革兰氏染色方法，掌握生理生化试验的原理与方法。

3． 掌握微生物的鉴定技术、菌种保藏技术。

二、基本原理

1． 培养基的配制与灭菌。

培养基是人工配制的适合微生物生长繁殖或积累代谢产物的营养基质，用以培养、分离、鉴定、保存各种微生物或积累代谢产物。在自然界中，微生物种类繁多，营养类型多样，加之实验和研究的目的不同，所以培养基的种类很多。但是，不同种类的培养基中，一般应含有水分、碳源、氮源、能源、无机盐、生长因素等。配制培养基是不仅需要考虑满足这些营养成分的需求，而且应该注意各营养成分之间的协调。此外不同微生物对 pH 要求不一样，酵母的培养基的 pH 一般是偏酸性的，而细菌和放线菌的培养基的 pH

一般为中性或微碱性 ( 嗜碱细菌和嗜酸细菌例外 ) 。所以配制培养基时都要根据不同微生物的要求将培养基的 pH 调到合适的范围。

配制培养基的流程如下：

原料称量→ 溶解 加琼脂熔化 调节pH值 分装 塞棉塞和包装 灭菌

由于配制培养的各类营养物质和容器等含有各种微生物，因此，已配制好的培养基必须立即灭菌，如果来不及灭菌，应暂存冰箱内，以防止其中的微生物生长繁殖而消耗养分和改变培养的酸碱度所带来不利的影响。

实验室最常用的灭菌方法是利用高温处理达到杀菌效果。高温的致死作用，主要是使微生物的蛋白质和核酸等重要大分子发生变性。高压蒸汽灭菌是微生物研究和教学中应用最广、效果最好的灭菌方法，本实验同样采用高压蒸汽灭菌。

2． 微生物的分离与纯化。 - 2 - / 12

自然界中各种微生物混杂生活在一起，要研究某种微生物的特性，首先须使该微生物处于纯培养状态。从混杂的微生物群体中获得只含有某一株微生物的过程称为微生物的分离与纯化。一般是根据微生物对营养、pH、氧气等要求的不同，供给它们适宜的生活条件，或加入某些抑制剂造成只利于该菌种生长，不利于其他菌种生长的环境，从而淘汰不需要的菌种。

环境微生物

综合性实验实验报告

班 级：

组 员：

指导教师：

学 年： 2012 – 2013

日 期： 2013-03-29

不同水体中微生物的分离与鉴定

摘要 水是微生物广泛分布的天然环境。各种天然水中常含一定数量的微生物。不同的水体由于受到物理、化学、生物等各个方面因素的影响,使其中所含微生物的种类和数量不同。本实验通过对雨水和湖泊水中微生物的培养、分离与鉴定，了解自然界中的不同水体中存在的微生物的种类和数量，比较两种水体中微生物群落的分布特点，进一步了解不同水体的清洁程度。

关键词 微生物 雨水 鱼塘水 种群

SOLATION AND IDENTIFICATION OF

DIFFERENT MICRO-ORGANISMS IN WATER

Abstract Water is the microorganism widely distributed natural

environment. A variety of natural water often contains a number of micro-organisms. Different bodies of water due to the influence of the physical,

chemical, biological and other factors, including the type and quantity of

microorganisms contained in different. In this study, rain and lake water

ＴＴ　技　术　通　讯ｖ　０Ｊ．２４　Ｎ。．６　Ｎ。　．，２０１３Ｓ　ＩＮ　ＢＩＯＴＥＣＨＮＯＬＯＧＹ　ＬＥＴＴＥＲ　０ｌ・　斗ｌ　ｏ・ｏ　ｌ　ｏＶ・，　８２５　

ｄｏｉ：１Ｏ．３９６９￣．ｉｓｓｎ．１００９—０００２．２０１３．０６．０１７　

２种太岁样　品中　微生物的分离和鉴定　

林涧　，熊向华　，葛欣　，汪建华　，苏昕　，张惟材　１．军事医学科学院生物工程研究所北京１０００７１；２．沈阳药科大学，辽宁沈阳１１００１６　研究报告　

［摘要］　目的：太岁是自然界中一种组成及分类尚不明确的生物体。采用分子生物学方法对２种不同来源地的太岁　样品进行菌种分离培养和分子鉴定。方法：太岁表面经７５％乙醇消毒处理后，用麦芽汁培养基分离可培养菌株，提取　太岁及分离菌株基因组ＤＮＡ，以之为模板，用１６Ｓ　ｒＤＮＡ、１８Ｓ　ｒＤＮＡ和ＩＴＳ通用引物进行ＰＣＲ扩增，扩增片段连入　ｐＭＤ１８Ｔ载体并测序，通过序列比对对太岁菌种组成进行初步鉴定。结果：从太岁ｌ号样品中分离到假丝酵母（Ｃａｎ—　ｄｉｄａ）和粘质红酵母（Ｒｈｏｄｏｔｏｒｕｌａ　ｍｕｃｉｌａｇｉｎｏｓａ），从太岁２号样品中分离到根癌农杆菌（Ａｇｒｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ　ｔｕｍｅｆａｃｉｅ　ｓ）和　粘质红酵母。结论：２种来源不同的太岁样品中均存在可培养的粘质红酵母。　［关键词］　太岁；生物多样性；培养；分子鉴定　［中图分类号］Ｑ７８　［文献标识码］Ａ　［文章编号］　１００９—０００２（２０１３）０６—０８２５—０３　

Ｉｓｏｌａｔｉｏｎ　ａｎｄ　Ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ　ｏｆ　Ｍｉｃｒｏｂｉａｌ　Ｓｔｒａｉｎｓ　ｉｎ　ＴＷＯ　Ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ　

Ｔａｉｓｕｉ　Ｓａｍｐｌｅｓ　

，ⅣＪｉａｎ　。。，ＸＩＯＮＧ　Ｘｉａｎｇ—Ｈｕａ　，ＧＥ　Ｘｉｎ　，ＷＡＮＧ　Ｊｉａｎ—Ｈｕａ　，ＳＵ　Ｘｉｎ　，ＺＨＡＮＧ　Ｗｅｉ—Ｃａｉ‘：ｌ：　

１．Ｂｅｉｊｎｇ　Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ　ｏｆ　Ｂｉｏｔｅｅｈｎｏｌｏｇｙ，Ｂｅｉｊｉｎｇ　１０００７１；２．Ｓｈｅｎｙａｎｇ　Ｐｈａｎｎａｅｅｕｔｉｃａｌ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｓｈｅｎｙａｎｇ　１１００１６；Ｃｈｉｎａ　Ｃｏｒｒｅｓｐｏｎｄｉｎｇ　ａｕｔｈｏｒ，Ｅ－ｍａｉｌ：ａｍｍｓｍｅｌａｂ＠１　２６．ｃｏｉｎ　

环境微生物技术实验总结报告

一、国内外研究进展：

①纤维素资源

据不完全统计，全球每年通过光合作用产生的植物物质高达1.8×1011 t，这些植物物质所含的能量相当于全球人类每年能量消耗量的20倍，食物中所含能量的200倍。纤维素是构成植物细胞的基本成分，纤维素占全球植物总干重的30%一50%，是地球上分布最广、含量最丰富的碳水化合物，它存在于所有植物当中。在生物界中，结合于有机体中的碳达27×1010t，在自然界有机体中构成纤维素的碳约占40%，据此估算，在植物界中纤维素的总量约达26.0×1010t，而且自然界中的植物原料是年复一年地不断生长和更新的，可以说，纤维素在自然界中是一种最丰富的可再生的有机资源。纤维素是一种不能被大多数动植物直接利用的多糖物质。但对人类来说只要能将其降解成小分子物质，纤维素就会成为一种有广阔应用前景的资源。而且这种潜在的资源数量是惊人的，其中的大多数作为绿色植物的成分在维持生态平衡中起作用而不宜利用，但是仍有数量可观的纤维素由人类生活和生产产生，它们主

要存在于农作物秸秆和城市垃圾之类的废弃物中。灾荒或战乱造成的粮食危机依然是正存在的和潜在的威胁;随着全球经济的飞速发展，地球上石油、煤炭的储量正以惊人的速度减少，能源危机成了世界大多数国家所面临的一个严峻问题;由于对资源的破坏性开采和利用，人类赖以生存的环境正在不断地恶化，对可再生资源利用的研究与开发的可持续发展战略己在世界各国逐步展开。如何处理和利用废弃纤维素将成为一个十分紧要的问题。

②农业废弃物资源的利用现状

植物纤维素资源的开发利用对解决粮食和能源短缺以及环境污染问题有极其深远的意义。我国的纤维素资源极为丰富，每年的农作物秸秆产量达5.7x107吨，约相当于北方草原年打草量的50倍。但是，农作物秸秆产生数量多且产生时间集中(每年到收获季节农村就会有大量的秸秆产生)，而我国的农作物秸秆主要用于燃料、畜禽饲料与自然堆肥，不仅利用效率低，而且随着农村生活水平的提高，农作物秸秆成为农村固体废弃物的主要来源。现阶段，农作物秸秆的最常用的处理和利用方法有: