体外培养大鼠心肌微血管内皮细胞缺氧模型的建立

大鼠视网膜微血管内皮细胞的分离培养及血管形成体系的建立【摘要】目的应用Matrigel建立大鼠视网膜微血管内皮细胞(Retinal Microvascular Endothelial Cells， RMECs)血管形成的体外培养体系，为进一步探讨视网膜相关疾病提供实验基础。

方法体外培养RMECs，在Matrigel上建立血管形成的体外培养体系。

结果经分离培养的RMECs在 Matrigel上培养形成管腔样结构。

结论 RMECs能够在Matrigel上形成血管腔。

【关键词】视网膜微血管内皮细胞;细胞培养;血管形成Abstract: Objective To induce Rat Retinal Microvascular Endothelial Cells (RMECs) to Form New Blood Vessels by setting up a stable angiogenesis culture system on Matrigel. It would be a basic experimental study for the retinal-related disease. Methods By culturing RMECs in vitro and setting up a stable angiogenesis culture system on Matrigel. Results RMECs were lumina formation on Matrigel. Conclusions RMECs can be induced to form mew blood vessels on Matrigel in vitro.Key words: Retinal Microvascular，Endothelial Cells; cell culture; angiogenesis血管内皮细胞密切参与糖尿病微血管病变和肿瘤血管新生等病理过程[1，2]。

成年大鼠心肌微血管内皮细胞的分离与培养陈小燕;樊梦雅;李慧;蒋易楠;靖静;张海龙【摘要】目的本文建立一种简便、高效的成年大鼠心肌微血管内皮细胞分离及培养的方法.方法选取7~8周龄Wistar大鼠,麻醉后开胸取出心脏,采用离体心脏灌流和酶消化法进行心肌微血管内皮细胞的分离;取第3代细胞观察其增殖特征并绘制增殖曲线;用免疫细胞化学和免疫荧光对细胞的第Ⅷ因子相关抗原和CD31进行鉴定,利用基质胶检验其血管形成能力.结果体外培养心肌微血管内皮细胞呈多边形或梭形,具有典型的铺路石样生长特点;同时,第Ⅷ因子相关抗原和CD31呈阳性;具备血管形成能力.结论本方法培养的成年大鼠心肌微血管内皮细胞具有较高的纯度,方法简便易行,可用于心血管疾病基础及临床研究.%Objective To establish a simple and efficient method for isolation and culture of adult rat cardiac micro-vascular endothelial cells. Methods Wistar rats were anesthetized and thoracotomy was performed. Cardiac micro-vascular endothelial cells were isolated by heart perfusion and enzyme digestion. The morphology and growth curve of the third generation cells were examined by inverted microsc opy. Its molecular markers factor Ⅷ-related antigen and CD31 were detected by immunocytochemistry and immunofluoresence. The angiogenic ability was examined by matrigel. Results The primary cultured cardiac microvascular endothelial cells in vitro were polygonal or fusiform with typical paving stone-like growth characteristics. At the same time,the cells were positive stained by factorⅧ-related antigen and CD31 and showed angiogenic ability. Conclusions Cardiac microvascular endothelial cells cul-tured by this method possess high purity. The method is easy tooperate and can be used for laboratory and clinical research of cardiovascular diseases.【期刊名称】《基础医学与临床》【年(卷),期】2018(038)004【总页数】5页(P530-534)【关键词】细胞培养;内皮细胞;成年大鼠;心肌微血管【作者】陈小燕;樊梦雅;李慧;蒋易楠;靖静;张海龙【作者单位】河南大学医学院抗体药物开发技术国家地方联合工程实验室河南省抗体药物国际联合实验室细胞与分子免疫重点实验室,河南开封475004;河南大学医学院抗体药物开发技术国家地方联合工程实验室河南省抗体药物国际联合实验室细胞与分子免疫重点实验室,河南开封475004;河南大学医学院抗体药物开发技术国家地方联合工程实验室河南省抗体药物国际联合实验室细胞与分子免疫重点实验室,河南开封475004;郑州大学基础医学院,河南郑州450001;河南大学医学院抗体药物开发技术国家地方联合工程实验室河南省抗体药物国际联合实验室细胞与分子免疫重点实验室,河南开封475004;河南大学医学院抗体药物开发技术国家地方联合工程实验室河南省抗体药物国际联合实验室细胞与分子免疫重点实验室,河南开封475004【正文语种】中文【中图分类】R331心肌微血管是深入心脏内的终末细小分支，在心脏内分布广泛，结构上与其他血管不同，由单层内皮细胞和细胞外基质组成；微血管内皮细胞在表型与功能上均表现出不同于大血管内皮细胞的异质性，且其性质与功能在不同组织器官之间也具有显著差异[1]。

第２７卷　第３期２０１２年７月北　京　农　学　院　学　报ＪＯＵＲＮＡＬ　ＯＦ　ＢＥＩＪＩＮＧ　ＵＮＩＶＥＲＳＩＴＹ　ＯＦ　ＡＧＲＩＣＵＬＴＵＲＥＶｏｌ．２７，Ｎｏ．３Ｊｕｌ．，２０１２ 收稿日期：２０１２－０４－２８ 基金项目：国家自然科学基金项目（３１１０１８５０）；北京市教委科技发展计划重点项目（ＫＺ２０１１１００２００２１）；兽医学（中医药）北京市重点实验室２００９年度开放课题（ＢＵＡ－ＴＣＶＭ－２００９０３） 作者简介：李杰（１９８７－），女，江苏人，硕士研究生，主要从事细胞微环境方面研究，Ｔｅｌ：１５２１０６４４９７５，Ｅ－ｍａｉｌ：ｌｉｊｉｅ＿１９８７０４＠ｙａｈｏｏ．ｃｏｍ．ｃｎ 通讯作者：穆祥（１９６０－），男，教授，主要从事细胞微环境方面研究，Ｔｅｌ：０１０－８０９７９４８０，Ｅ－ｍａｉｌ：ｍｕｘｉａｎｇ１１０９＠ｓｉｎａ．ｃｏｍ大鼠不同部位内皮细胞的体外培养李　杰，董　虹，张　涛，段慧琴，刘小瑜，许光勇，郭　洋，穆　祥＊（北京农学院动物科学与技术学院兽医学（中医药）北京市重点实验室，北京１０２２０６）摘　要：为了建立一种能有效分离、培养和获取较高纯度的大鼠心肌膜微血管内皮细胞（ＲＭＭＥＣｓ）、肠黏膜微血管内皮细胞（ＲＩＭＥＣｓ）、主动脉内皮细胞（ＲＡＥＣｓ）、后腔静脉内皮细胞（ＲＰＶＥＣｓ）的模型，自７ｄＳＤ大鼠分别取左心室壁、空肠、主动脉、后腔静脉，采用ＩＩ型胶原酶消化、差速贴壁、差速消化法获得较纯的ＲＭＭＥＣｓ、ＲＩＭＥＣｓ、ＲＡＥＣｓ、ＲＰＶＥＣｓ。

结果表明：通过形态学特征及微血管内皮细胞和血管内皮细胞相关特异性抗原检测证实，得到高纯度ＲＭＭＥＣｓ、ＲＩＭＥＣｓ、ＲＡＥＣｓ、ＲＰＶＥＣｓ。

结论：利用胶原酶ＩＩ型消化法成功分离并培养大鼠的ＲＭＭＥＣｓ、ＲＩＭＥＣｓ、ＲＡＥＣｓ、ＲＰＶＥＣｓ，为进一步开展内皮细胞的生物学特性的相关研究提供有效的方法。

关键词：ＳＤ大鼠；细胞培养模型；微血管内皮细胞；内皮细胞中图分类号：Ｒ３６５．５４３ 文献标志码：Ａ ｄｏｉ：１０．３９６９／ｊ．ｉｓｓｎ．１００２－３１８６．２０１２．０３．００９文章编号：１００２－３１８６（２０１２）０３－００２９－０３Ｃｕｌｔｕｒｅ　ｏｆ　ｖａｓｃｕｌａｒ　ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ　ｃｅｌｌｓ　ｆｒｏｍ　ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ　ｐａｒｔｓ　ｏｆ　ｒａｔｓ　ｉｎ　ｖｉｔｒｏＬＩ　Ｊｉｅ，ＤＯＮＧ　Ｈｏｎｇ，ＺＨＡＮＧ　Ｔａｏ，ＤＵＡＮ　Ｈｕｉ－ｑｉｎ，ＬＩＵ　Ｘｉａｏ－ｙｕ，ＸＵ　Ｇｕａｎｇ－ｙｏｎｇ，ＧＵＯ　Ｙａｎｇ，ＭＵ　Ｘｉａｎｇ＊（Ｂｅｉｊｉｎｇ　Ｋｅｙ　Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ　ｏｆ　Ｔｒａｄｉｔｉｏｎａｌ　Ｃｈｉｎｅｓｅ　Ｖｅｔｅｒｉｎａｒｙ　Ｍｅｄｉｃｉｎｅ，Ａｎｉｍａｌ　Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ　ｏｆＳｃｉｅｎｃｅ　ａｎｄ　Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，Ｂｅｉｊｉｎｇ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ　ｏｆ　Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒｅ，Ｂｅｉｊｉｎｇ　１０２２０６）Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ：Ｔｏ　ｅｘｐｌｏｒｅ　ａ　ｍｏｄｅｌ　ｗｉｔｈ　ｅｆｆｅｃｔｉｖｅ　ｓｅｐａｒａｔｉｎｇ，ｃｕｌｔｕｒｉｎｇ　ａｎｄ　ｇｅｔｔｉｎｇ　ｈｉｇｈｅｒ　ｐｕｒｉｔｙ　ｏｆ　ｒａｔ　ｍｙｏｃａｒｄｉｕｍ　ｍｉｃｒｏ－ｖａｓｃｕｌａｒ　ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ　ｃｅｌｌｓ（ＲＭＭＥＣｓ），ｒａｔ　ｉｎｔｅｓｔｉｎａｌ　ｍｉｃｒｏｖａｓｃｕｌａｒ　ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ　ｃｅｌｌｓ（ＲＩＭＥＣｓ），ｒａｔ　ａｏｒｔｉｃ　ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ　ｃｅｌｌｓ（ＲＡＥＣｓ），ｒａｔ　ｐｏｓｔｃａｖａｌ　ｖｅｉｎ　ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ　ｃｅｌｌｓ（ＲＰＶＥＣｓ）．Ｍｅｔｈｏｄｓ：Ｔｈｅ　ｌｅｆｔ　ｖｅｎｔｒｉｃｕｌａｒ　ｗａｌｌ，ｊｅｊｕｎｕｍ，ａｏｒｔａ，ｖｅｎａ　ｃａｖａ　ｗｅｒｅｃｏｌｌｅｃｔｅｄ　ｆｒｏｍ　７ｄＳＤ　ｒａｔｓ．Ａｆｔｅｒ　ｕｓｉｎｇ　ｔｙｐｅ　ＩＩ　ｃｏｌｌａｇｅｎａｓｅ　ｄｉｇｅｓｔｉｏｎ　ａｎｄ　ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｌ　ａｄｈｅｓｉｏｎ　ｍｏｒｅ　ｐｕｒｅｒ　ＲＭＭＥＣｓ，ＲＩＭＥＣｓ，ＲＡＥＣｓ，ＲＰＶＥＣｓ　ｗｅｒｅ　ｏｂｔａｉｎｅｄ．Ｒｅｓｕｌｔｓ：Ｔｈｅ　ｍｏｒｐｈｏｌｏｇｉｃａｌ　ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｓｔｉｃｓ　ａｎｄ　ｍｉｃｒｏｖａｓｃｕｌａｒ　ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ　ｃｅｌｌｓ　ａｎｄ　ｖａｓｃｕｌａｒｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ　ｃｅｌｌ－ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ　ｓｐｅｃｉｆｉｃ　ａｎｔｉｇｅｎ　ｔｅｓｔ　ｃｏｎｆｉｒｍｅｄ　ｔｈｅ　ｃｏｌｌｅｃｔｅｄ　ＲＭＭＥＣｓ，ＲＩＭＥＣｓ，ＲＡＥＣｓ，ＲＰＶＥＣｓ　ｗｉｔｈ　ｈｉｇｈ　ｐｕｒｉ－ｔｙ．Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ：Ｔｈｅ　ＲＭＭＥＣｓ，ＲＩＭＥＣｓ，ＲＡＥＣｓ，ＲＰＶＥＣｓ　ｗｉｔｈ　ｈｉｇｈ　ｐｕｒｉｔｙ　ｗｅｒｅ　ｉｓｏｌａｔｅｄ　ａｎｄ　ｃｕｌｔｕｒｅｄ　ｆｒｏｍ　ｔｈｅ　ｒａｔ，ｗｈｉｃｈｐｒｏｖｉｄｅｄ　ａ　ｕｓｅｆｕｌ　ｒｅｓｅａｒｃｈ　ｍｅｔｈｏｄ　ｆｏｒ　ｔｈｅ　ｆｕｒｔｈｅｒ　ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ　ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ　ｏｆ　ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ　ｃｅｌｌｓ．Ｋｅｙ　ｗｏｒｄｓ：ＳＤ　Ｒａｔ；ｃｅｌｌ　ｃｕｌｔｕｒｅ　ｍｏｄｅｌ；ｍｉｃｒｏｖａｓｃｕｌａｒ　ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ　ｃｅｌｌｓ；ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ　ｃｅｌｌｓ 血管内皮细胞（ＶＥＣ）位于血流和组织之间，为衬贴于血管内腔面的单层扁平细胞，其表面积可达１　０００ｍ２以上［１］。

大鼠血管内皮细胞培养研究血管内皮细胞是血管中重要的细胞类型，其在维护血管生理特性以及参与血管病理反应中都具有重要的作用。

大鼠作为实验动物，其血管内皮细胞的研究也是非常重要的。

在这篇文章中，我们将重点介绍大鼠血管内皮细胞的培养技术及其在血管生物学研究中的应用。

一、大鼠血管内皮细胞培养技术1.1 资源准备大鼠动脉、静脉组织、FBS、DMEM/F12、胰酶、胰酶抗性味粉、细胞凝集素、槲皮素、PBS、二氧化碳培养箱、显微镜、离心机、相位对比显微镜、细胞均质器等。

1.2 组织消化将新鲜的大鼠动脉或静脉取出，去除外膜及脂肪组织，用PBS缓冲液清洗数次。

接着，用胰酶液消化组织，割碎后转移到消化液中，37℃孵育1-2小时，直到组织消化完全。

1.3 筛选基质消化完全的组织过筛，筛子孔径为80目。

去掉筛子上的淋渣后，产出的细胞可以用显微镜观察并鉴定是否为血管内皮细胞。

1.4 细胞培养将产出细胞悬浮在完全培养基（DMEM/F12，10% FBS，100ug/mL嘌呤鸟嘌呤，100ug/mL青霉素和50ug/mL链霉素）中，在培养室内孵育。

按细胞密度不同，可选用不同的培养方法，比如单细胞悬浮培养、半贴壁培养和全贴壁培养等。

1.5 纯化细胞如果需要纯化大鼠血管内皮细胞，还需要使用血管壁内形成的凝集素贴壁分离技术，配合药物槲皮素进行消除非内皮细胞。

二、大鼠血管内皮细胞在血管生物学研究中的应用2.1 血管内皮损伤与修复在血管损伤修复研究中，常常会使用拉环法、加热法、切割法、放置血栓等手段产生不同程度的血管内皮损伤模型，进而观察、探究血管内皮细胞的响应和修复机制。

例如研究大鼠颈动脉内皮细胞在内膜损伤后的DNA修复机制是一个非常热门的研究课题。

2.2 血管疾病如高血压、动脉硬化、心血管疾病等，都与血管内皮细胞的损伤和功能异常有关。

通过培养大鼠血管内皮细胞，可以模拟这些血管疾病模型，如在培养基中将NO剂加入，从而模拟高血压或将脂质压入细胞内，模拟动脉硬化等，可以帮助我们更好的探究血管疾病的病理生理机制。

一种大鼠心肌缺血模型的制作方法目的：建立一种大鼠心肌缺血模型制作方法，保证模型制作的准确程度与术后大鼠存活率。

方法：大鼠麻醉后，先行明视经口气管插管，呼吸机供给氧气；次行开胸结扎冠状动脉左前降支术；再行肺复张术；另术前及术后三天予以抗生素注射与体温支持等措施。

结果：经过改进，造模准确率达到100%，术后四周存活率达到80%。

结论：控制结扎位置可提高模型准确率，术中供给氧气可提高大鼠存活率。

标签：心肌缺血；动物模型；大鼠；氧气；冠状动脉左前降支在心肌缺血（MI）动物模型制作中，SD大鼠是常用动物[1]，行结扎冠状动脉左前降支（LAD）手术是传统造模方法。

如何准确客观模拟心肌缺血的病理改变且提高大鼠术后存活率是模型制作的关键。

本研究课题组立足于本实验室实际并参考众多研究者经验[2、3]，建立了一种大鼠心肌缺血模型的制作方法，以期达到保证模型成功率与大鼠术后存活率的目的。

1实验材料与方法1.1实验材料1.1.1实验动物SD大鼠，20只，雌雄各半，2～4 月龄，体重250±30g，由四川省人民医院实验动物研究所中心提供（许可证号：SCXK（川）2013-15）。

动物在手术操作前适应饲养一周，饲养环境为自然光暗周期，温度23～26℃、相对湿度40%～70%，雌雄分开，5只/笼，自由饮水进食。

1.1.2手术器械及耗材显微持针钳，开睑器，7-0显微带线缝合针，4-0缝合线，○ 1/2 4×12医用逢合针，24G静脉留置针，铁丝，常规手术器械与耗材。

1.1.3药物水合氯醛、0.9%氯化钠注射液，注射用青霉素钠，碘伏、75%乙醇，PBS磷酸盐缓冲液、TTC染色液。

1.1.4仪器设备肯特Kent PhysioSuite （Monitor for Mice and Rats），氧气袋，CMA/450动物恒温控制器，BL-420S生物机能实验系统，自制鼠台，强光手电筒。

1.2实验方法1.2.1麻醉7%水合氯醛氯化钠溶液以280mg/kg（0.4ml/100g）比例对大鼠进行腹腔注射麻醉，再腹腔注射青霉素8万U预防感染，然后将其仰卧位固定于鼠台上，前胸部备皮，碘伏消毒。

大鼠心脏微血管内皮细胞原代培养方法研究朱慧;柳景华【期刊名称】《新乡医学院学报》【年(卷),期】2012(29)12【摘要】目的探讨大鼠心脏微血管内皮细胞的原代培养技术,以获取纯化的大鼠心脏微血管内皮细胞.方法应用体质量80 g的雄性Wistar大鼠左心室的微血管内皮细胞进行原代培养并传代培养；通过倒置显微镜扫描观察其形态,同时对培养细胞采用免疫组织化学荧光染色法进行内皮表面因子(vWF)鉴定,并用Hoechst染色,于荧光倒置显微镜下观察.结果体外培养的大鼠微血管内皮细胞呈梭形,形成单层后呈典型的鹅卵石样或铺路石样排列.采用Hoechst染色后,可见90％以上的细胞胞浆和核膜周围被染成红色,细胞核呈蓝色荧光；merge 3染色见细胞胞浆和核膜周围被染成黑色,细胞核呈蓝色；cy-3染色见细胞胞浆和核膜周围被激发出红色光.证明培养细胞为血管内皮细胞.结论通过改进的微血管内皮细胞分离方法培养获得的细胞,生长状态良好、纯度高,且能够稳定地传代培养.%Objective To study the primary culture methods for obtain purified cardiac microvascular endothelial cells in rats. Methods Microvascular endothelial cells of male rat's left ventricle were performed with primary culture and serial subcultivation. The cellular morphous was observed by inverted microscope scanning, vascular hemophilia factor was identified by immunofluorescence, and the result of Hoechst staining was observed by inverted microscope. Results The primary cultured cardiac endothelial cells in vitro were fusiform, and formed a monolayer of typical cobblestone orslabstone array. After Hoechst staining,above 90% of the cells were positive staining, red fluorescence existed in cytoplasm, and blue fluorescence existed in cell nucleus. The results of merge 3 staining showed black in cytoplasm and around caryotheca, and blue in cell nucleus. The result of cy-3 staining showed that the red fluorescence existed in cytoplasm and caryotheca. These results revealed that the cells were vascular endothelial cells. Conclusion The improvement methods can obtain the microvascular endothelial cells with good growth,highpurity,and stable serial subcultivation.【总页数】3页(P952-954)【作者】朱慧;柳景华【作者单位】首都医科大学附属北京安贞医院北京市心肺血管疾病研究所心内科28病区,北京100029;首都医科大学附属北京安贞医院北京市心肺血管疾病研究所心内科28病区,北京100029【正文语种】中文【中图分类】R331.3+2【相关文献】1.原代大鼠脑微血管内皮细胞的培养及鉴定 [J], 马华根;唐元瑜;纪立金2.新生大鼠心脏微血管内皮细胞原代培养 [J], 张滕;郭利平3.大鼠肺微血管内皮细胞原代培养方法研究 [J], 姜文4.原代SD大鼠视网膜微血管内皮细胞的培养及鉴定 [J], 林华城;刘海琴;马华根;唐元瑜5.原代SD大鼠视网膜微血管内皮细胞的培养及鉴定 [J], 林华城;刘海琴;马华根;唐元瑜因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

(10)申请公布号 (43)申请公布日 2014.04.30C N 103756953A (21)申请号 201410022374.3(22)申请日 2014.01.20C12N 5/071(2010.01)(71)申请人四川大学地址610065 四川省成都市武侯区一环路南一段24号(72)发明人杨春蕾 邵鑫(54)发明名称SD 大鼠体外心肌细胞缺血再灌注损伤模型的建立(57)摘要SD 大鼠体外心肌细胞缺血再灌注损伤模型的建立，是将SD 大鼠心肌细胞原代培养后，将其放在正常培养环境中培养。

之后，放在缺氧环境中培养一段时间，再放在正常培养环境中培养。

之后，通过电镜、MTT 实验、相关基因表达、WesternBlot和流式细胞术等方法对心肌细胞缺血再灌注后损伤情况进行观察和统计。

与以往常用的缺血再灌注损伤模型制备方法比较，本发明最突出的特点是实现了实验方法的标准化，可通过调整培养时间使损伤程度可调控，有很好的重复性。

(51)Int.Cl.权利要求书1页 说明书2页(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请权利要求书1页 说明书2页(10)申请公布号CN 103756953 A1/1页1.SD大鼠体外心肌细胞缺血再灌注损伤模型的建立，包括以下步骤：将SD大鼠的乳鼠处死后取心脏,对心肌细胞进行原代培养，将细胞放入培养箱中培养在培养一段时间之后更换培养液在培养几天之后，将细胞用缓冲液洗涤几次加入模拟缺血液，将细胞置于缺氧装置中，通入混合气体一段时间后停止通入气体并密封继续培养缺血缺氧24小时之后，更换等体积的含5%血清的模拟再灌注液，培养1小时将培养后细胞进行检测。

2.根据权利要求1所述的SD大鼠体外心肌细胞缺血再灌注损伤模型的建立，其特征是细胞置于缺氧装置中的时间为60分钟。

3.根据权利要求1所述的SD大鼠体外心肌细胞缺血再灌注损伤模型的建立，其特征是缺血缺氧条件为98%N2、2%CO2。

相类似。

本研究提示SARS 病毒并非来源于人工驯养的野生动物,而是来源于野生动物,其中蛇、鹰、蛤蚧、鳖最为可能。

广西原发病例接触病死猫后发病,因而老鼠仍很可能是SARS 病毒的最原始宿主,但其极低携带率和极低病毒量不但难于直接传给人类,而且也难检测到阳性老鼠。

SARS 抗体阳性的鹰,蛇、龟、蛤蚧均为食肉动物,而且高空飞翔的鹰和冬眠的蛇均有利于病毒繁殖和携带的低氧分压状态。

这些野生动物通过对鼠等动物的猎食而感染、富集。

然后在其体内繁殖和携带。

当被人类猎捕后,在冬末早春气温较暖湿度大的南方,长途运输严重缺氧使病毒发生变异,形成毒力和侵袭力强的SARS 病毒,在贩运人员和厨师近距离接触和捕杀过程中受伤感染而发病,然后通过家人护理或就医的医院医护人员诊疗中密切接触造成人间传播和暴发流行。

2003年我国成功扑灭SARS 的疫情,其中严格禁止捕猎贩运和宰杀野生动物是最主要的措施之一,与本研究结果相吻合。

因此,应禁止捕猎贩运和宰杀野生动物、每年冬春季节加强对发热肺炎病人监测,尤其是捕猎贩运和宰杀野生动物史或实验室病源研究史的发热肺炎病人监测排查、同时大搞爱国卫生运动、降低甚至消除鼠类等传播疾病的病原媒介是防范SARS 的发生和控制扑灭SARS 疫情的首要措施。

至于疑为SARS 病毒最原始宿主鼠类和蝙蝠及其通过食物链进入二级宿主野生动物的过程和机理仍有待以进一步的研究。

(参加本文工作的还有杨庆利、钟革、蓝光华、冯向阳、熊绮梦、陈岳波、韦东禄、刘志高、石友盟、李建民、蒙世安,在此一并致谢)参　考　文　献1　王汉章,王茂武,王建伟,等主编1传染性非典型肺炎防治培训教材(修订版).北京:中国协和医科大学出版社,2003.3210.2　廖祯华主编.广西壮族自治区地图集.北京.星球地图出版社.2003.42247.广西医科大学学报　2006Feb ;23(1)3广西区卫生厅资助课题(Z2002098)收稿日期:2005202201大鼠脑微血管内皮细胞的培养与鉴定3滕晓茗　周微雅　黄　燕　周祥祯(广西壮族自治区人民医院　南宁　530021)摘要　目的:探讨大鼠脑微血管内皮细胞体外培养方法,为血管内皮细胞的研究打下基础。

大鼠心肌微血管内皮细胞缺氧模型的建立翟仰魁;潘明政;张宏【期刊名称】《医学研究杂志》【年(卷),期】2013(042)005【摘要】目的对大鼠的心肌微血管内皮细胞(myocardial microvascular endothelial cells,MMVECs)离体培养方法进行改良,建立该细胞的缺氧模型.方法取出7日龄左右的Wistar大鼠的心脏,用胰蛋白酶和胶原酶二次消化法获得MMVECs,密度梯度离心法纯化细胞,计算细胞纯度;用免疫细胞化学方法检测微血管内皮细胞特异性第Ⅷ因子、CD34及CD31相关抗原;将原代培养的细胞置于持续通人体积分数为1％O2、5％ CO2和94％N2的自制缺氧装置中,并在37℃孵箱中分别缺氧处理4、6、12、18、24h,各时间段均设置正常对照组;用四甲基偶氮唑盐(MTT)比色实验检测缺氧对大鼠MMEVCs增值活力的影响,Hoechst33342染色观察缺氧诱导该细胞凋亡形态学变化.结果细胞形态特征及相关抗原检测证实:与仅用二次消化法培养细胞相比,密度梯度离心纯化后所得MMVECs纯度提高(P＜0.01);MTT比色实验:随着培养时间的延长,与正常对照组相比,各缺氧组OD值均有所降低,其中缺氧12、18和24h的OD值降低显著(P均＜0.01);从缺氧12h开始,各缺氧组的OD值逐渐降低,与12h相比均有显著差异(P＜0.01或P＜0.05);Hoechst33342染色:缺氧12h细胞开始出现核固缩、碎裂、蓝色浓染等典型的凋亡形态学变化,随着缺氧时间延长该变化更为明显.结论该原代离体培养方法可以获得纯度较高的MMVECs;缺氧对MMVECs的增殖有抑制作用,本方法可以简便、有效地建立MMVECs的缺氧模型.【总页数】4页(P128-131)【作者】翟仰魁;潘明政;张宏【作者单位】100032 中国医学科学院/北京协和医学院北京协和医院;100032 中国医学科学院/北京协和医学院北京协和医院;中国医学科学院/北京协和医学院基础医学研究所细胞中心【正文语种】中文【相关文献】1.低氧工作站建立大鼠原代心肌细胞缺氧模型 [J], 许瑞;陈希;蒋易楠;祝伟娜;王耀辉2.体外培养大鼠心肌微血管内皮细胞缺氧模型的建立 [J], 马培泽;宋宪波;刘宁;姜月华;戴国华3.厌氧培养箱法建立大鼠心肌细胞缺氧/复氧损伤模型 [J], 夏中元;王宇;刘菊英4.新生大鼠缺氧性脑损伤模型的建立及评价 [J], 李玉宇;徐剑文5.大鼠海马神经元原代培养方法及缺糖缺氧再灌注损伤模型的建立 [J], 宋宁宁;宋丽;李剑;刘向红因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

缺氧复氧对大鼠心肌微血管内皮细胞活力的影响及机制研究张春燕;陈秋萍;秦毅彬【期刊名称】《南通大学学报（医学版）》【年(卷),期】2012(032)002【摘要】目的:研究缺氧复氧对大鼠心肌微血管内皮细胞(MMECs)活力的影响及机制.方法:培养大鼠MMECs,制作缺氧复氧模型模拟缺血再灌注损伤.随机分为4组(n=24),正常对照组(N组)不作任何处理、缺氧复氧组(HR组)、LY294002预先给药+缺氧复氧组(LY294002组)、PDTC预先给药+缺氧复氧组(PDTC组),均进行缺氧2h复氧2h.复氧2h时后MTT法测定细胞活力,Hoechst染色观察凋亡细胞显微结构.结果:与N组比较,HR组细胞活力降低(P＜0.01)；与HR组比较,LY294002组细胞活力降低(P＜0.05),PDTC组细胞活力降低(P＜0.01)；与LY294002组比较,PDTC组组细胞活力降低(P＜0.01).结论:缺氧复氧可导致MMECs活力明显降低；PI3K/Akt/NF-κB信号通路参与了缺氧复氧调控过程,该通路可促进MMECs 活力增强.【总页数】4页(P113-115,封3)【作者】张春燕;陈秋萍;秦毅彬【作者单位】南通大学附属医院药剂科,南通226001;南通大学附属医院麻醉科,南通226001;南通大学附属医院麻醉科,南通226001【正文语种】中文【中图分类】R329.2【相关文献】1.二氮嗪预处理对缺氧复氧大鼠心肌微血管内皮细胞HIF-1α mRNA表达及增殖的影响 [J], 黄赛赛;陈秋萍;沈施仁2.Mito-KATP对缺氧复氧大鼠心肌微血管内皮细胞凋亡的影响及作用机制 [J], 姚菊;曹苏;沈施仁3.二氮嗪预处理缺氧复氧大鼠心肌微血管内皮细胞PI3K、Akt、FKN mRNA的表达 [J], 张永华;陈秋萍;曹苏;沈施仁4.二氮嗪预处理缺氧复氧大鼠心肌微血管内皮细胞P13K、Akt、FKN mRNA的表达 [J], 张永华;陈秋萍;曹苏;沈施仁5.利拉鲁肽对大鼠心肌微血管内皮细胞缺氧复氧损伤的影响 [J], 李丹丹;张颖;陈韵岱因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

用培养的大鼠血管内皮细胞建立血管紧张素转换酶体外模型初步研究王白岚;肖群;陈高明;陈致怀【期刊名称】《医学研究生学报》【年(卷),期】2001(014)0z1【摘要】目的:分离大鼠肺血管及腹主动脉的内皮细胞,建立研究血管紧张素转换酶(ACE)表达的体外模型.方法:分离大鼠肺血管内皮细胞采用活体胶原酶灌注法、腹主动脉内皮细胞采用贴壁法;二种方法均用胰酶不完全消化和加入血清或无血清培养相结合的方法得到纯化的内皮细胞.结果:肺血管内皮细胞灌注法细胞传代至第4代后其增生速度趋于稳定,内皮细胞纯度达到95%以上,冻存后细胞复苏率(0.816±0.085)和贴壁率(0.758±0.079)均较高、生长良好.腹主动脉内皮细胞贴壁法第4代传代后细胞增生速度较慢,纯度为78%,冻存后传代细胞复苏率为0.724.结论:肺血管内皮细胞灌注法分离到的大鼠肺血管内皮细胞,纯度高,可作为进一步研究ACE调控的良好体外模型.【总页数】3页(P37-39)【作者】王白岚;肖群;陈高明;陈致怀【作者单位】解放军第九四医院检验科,江西南昌,330002;解放军第九四医院检验科,江西南昌,330002;解放军第九四医院检验科,江西南昌,330002;解放军第九四医院检验科,江西南昌,330002【正文语种】中文【中图分类】Q253【相关文献】1.手术型高血压大鼠模型肾脏血管紧张素转换酶、血管紧张素转换酶2表达变化的研究 [J], 张昭强;孙晓;王炳香;张延玲;孙宪昌;迟相林2.下调大鼠血管内皮细胞血管紧张素转换酶的实验研究 [J], 周华;张翠芳;陈瑞瑞;高奋3.脂多糖对大鼠肺微血管内皮细胞ACE和ACE2表达的影响及血管紧张素转换酶抑制剂的干预作用 [J], 李亚春;李颖川;周明;江伟4.大鼠肺血管内皮细胞培养及血管紧张素转换酶表达特点的初步研究 [J], 陈高明;李春海;等5.大鼠脑微血管内皮细胞与星形胶质细胞共培养血脑屏障体外模型的建立 [J], 胡利民;范祥;张艳军;张伯礼;梅建勋;高秀梅因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

大鼠心脏微血管内皮细胞的培养
柳爱华;杨向红;王延琳;王跃中;张亚佳
【期刊名称】《中国医科大学学报》
【年(卷),期】2009(38)1
【摘要】目的培养大鼠心脏微血管内皮细胞,探讨其对研究血管病变的意义.方法采用Nishida的方法,在无菌条件下分离Wistar大鼠心脏,用胶原酶、胰酶进行消化,通过离心,收集细胞进行培养.结果培养的细胞呈单层贴壁生长,细胞初为圆形,贴壁后为短梭形,5～7 d呈"铺路石样"生长,培养的细胞在人工基膜(Matrigel)上形成管腔样结构.Ⅷ因子相关抗原免疫细胞化学鉴定为阳性.结论本方法简单易行,对血管病变的研究有重要意义.
【总页数】3页(P55-56,73)
【作者】柳爱华;杨向红;王延琳;王跃中;张亚佳
【作者单位】中国医科大学附属盛京医院病理科,沈阳,110004;中国医科大学附属盛京医院病理科,沈阳,110004;中国医科大学附属盛京医院病理科,沈阳,110004;中国医科大学附属盛京医院病理科,沈阳,110004;中国医科大学附属盛京医院病理科,沈阳,110004
【正文语种】中文
【中图分类】Q2
【相关文献】
1.新生大鼠心脏微血管内皮细胞原代培养 [J], 张滕;郭利平
2.大鼠心脏微血管内皮细胞原代培养方法研究 [J], 朱慧;柳景华
3.SD大鼠心脏微血管内皮细胞的分离及培养 [J], 朱世辉;苏波;唐洪泰;李元义;刘世康;陈玉林;葛绳德
4.新生大鼠心脏微血管内皮细胞的分离培养及鉴定 [J], 周燕琼;郭福晓;贾强用;张艳美;郑燕珊;李乐娜;石刚刚
5.内毒素、烫伤血清对培养的大鼠心脏微血管内皮细胞间连接的影响 [J], 王晓军;罗向东;梁光萍;罗勤;杨宗城
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未成熟鼠缺氧心肌模型的建立祝岩;谷天祥;汪曾炜;朱洪玉;王辉山;张南滨;方敏华【期刊名称】《中国组织工程研究》【年(卷),期】2006(010)041【摘要】目的:建立一种简便易行、稳定有效、易于重复的心肌缺氧模型.方法:实验于2000-01/03在中国医科大学药理教研室完成.选用出生5～7 d,清洁级健康雄性Wistar大鼠10只,随机数字表法分为2组,即缺氧组和对照组,每组5只.将缺氧组大鼠5只喂养于含低浓度氧气的混合气体(气体成分:体积分数为0.07 O2,体积分数为0.05 CO2,体积分数为0.88 N2)中5 h,对照组不予处理.观察缺氧前后呼吸频率、活动状态、心肌颜色、心率、心律等的变化,分别测血气、心肌组织ATP酶、心肌含水量,观察心肌细胞线粒体等心肌超微结构的改变.结果:实验大鼠10只全部进入结果分析.①两组大鼠缺氧前后呼吸频率、活动状态、心肌颜色、心率、心律变化:实验前呼吸平均112次/min.缺氧组置于缺氧环境1 min后呼吸频率明显增快;3 min后呼吸急促;缺氧30 min后呼吸平均178次/min;120 min后呼吸次数无明显增加(150～220次/min);缺氧5 h后开胸见心率快而不易数清,心肌收缩无力,节律不十分规则,偶有二联律出现,心肌及血液颜色呈暗红色,血液类似静脉血.对照组大鼠直接开胸取血时可见窦性心律250次/min,心搏有力,血液颜色鲜红.②两组大鼠血气分析和电解质测定结果:缺氧组pH,PaO2,PaCO2,SaO2,HCO3-低于对照组,缺氧组K+高于对照组(pH为7.27和7.37,PaO2为3.95和13.56kPa,PaCO2为3.20和5.00 kPa,SaO2为65%和99%,HCO3-为19.6和21.9 mmol/L,K+为5.3和4.5 mmol/L,P＜0.05).③两组大鼠心肌组织ATP酶活性:对照组高于缺氧组(0.57,0.42 μkat/g,P＜0.05).④两组大鼠心肌组织CK-MB含量:对照组与缺氧组间没有统计学差异(P＞0.05).⑤两组大鼠心肌组织超微结构改变:对照组可见线粒体分布均匀整齐,排列紧密,双层膜结构清晰,无明显肿胀;缺氧组可见线粒体轻度肿胀,密度降低,核膜清晰,核仁明显,染色质有边集.结论:单纯缺氧并不能导致心肌细胞的损伤.建立的模型技术操作容易,设备要求简单,各项指标易于控制,效果比较稳定、可靠,具有很好的可重复性,在一定程度上能够模拟临床缺氧患者的心肌损伤状况而以作为未成熟紫绀型先天性心脏病的实验基础.【总页数】2页(P74-76,插图41-4)【作者】祝岩;谷天祥;汪曾炜;朱洪玉;王辉山;张南滨;方敏华【作者单位】解放军沈阳军区总医院心血管外科,辽宁省沈阳市,110016;中国医科大学第一医院心血管外科,辽宁省沈阳市,110001;解放军沈阳军区总医院心血管外科,辽宁省沈阳市,110016;解放军沈阳军区总医院心血管外科,辽宁省沈阳市,110016;解放军沈阳军区总医院心血管外科,辽宁省沈阳市,110016;解放军沈阳军区总医院心血管外科,辽宁省沈阳市,110016;解放军沈阳军区总医院心血管外科,辽宁省沈阳市,110016【正文语种】中文【中图分类】R541【相关文献】1.缺氧盒在建立新生鼠神经干细胞缺氧细胞模型中的应用 [J], 陈长春;周勤;尹晓娟2.未成熟胎兔缺氧缺血性脑损伤模型的建立 [J], 南燕;唐震海;王能里;柳艳丽;叶伟;林锦;林振浪3.二氮嗪预处理在培养的未成熟鼠心肌细胞缺氧复氧损伤中的保护作用 [J], 张好生;张中明;董红燕4.SD鼠未成熟心肌细胞缺氧/复氧期c-fos,c-myc mRNA的表达 [J], 康进朝;刘维永;蔡振杰;李彤5.未成熟鼠缺氧心肌模型的建立 [J], 祝岩;汪曾炜;朱洪玉;王辉山;张南滨;方敏华因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

体外培养细胞缺氧模型及特点
龚敏;李树清
【期刊名称】《临床合理用药杂志》
【年(卷),期】2011(4)1
【摘要】细胞是形成生物体结构和功能的基本单位,是生命科学的研究基础。

体外培养是指将有机体的活细胞放在类似于体内环境的体外环境中生长和发育的方法,由于体外培养的细胞成分单一,易于控制环境因素、重复性好,
【总页数】2页(P157-158)
【关键词】体外培养;细胞;缺氧
【作者】龚敏;李树清
【作者单位】昆明医学院病理生理学教研室
【正文语种】中文
【中图分类】R817.33
【相关文献】
1.体外培养Schwann细胞缺氧模型的建立 [J], 朱浩;丁文龙;王文进;李锋
2.体外培养大鼠心肌微血管内皮细胞缺氧模型的建立 [J], 马培泽;宋宪波;刘宁;姜月华;戴国华
3.几种体外培养神经细胞缺氧模型效果的对比 [J], 任历;于洪儒;王洪新
4.少突胶质细胞体外培养、纯化、鉴定及缺氧模型建立 [J], 杨晖;王玮
5.缺氧对体外培养的早孕期细胞滋养细胞中缺氧适应相关部分基因表达及细胞浸润能力的调控 [J], 栾南南;乔宠;刘文辉;张斌;尚涛
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