皮质醇(cortisol)作业指导书

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牛皮质醇(Cortisol)酶联免疫分析(ELISA)试剂盒使用说明书本试剂仅供研究使用目的：本试剂盒用于测定牛血清，血浆及相关液体样本中皮质醇(Cortisol)的含量。

实验原理：本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中牛皮质醇（Cortisol）水平。

用纯化的牛皮质醇（Cortisol）抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入皮质醇（Cortisol），再与HRP标记的皮质醇（Cortisol）抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB显色。

TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。

颜色的深浅和样品中的皮质醇（Cortisol）呈正相关。

用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），通过标准曲线计算样品中牛皮质醇（Cortisol）浓度。

样本处理及要求：1. 血清：室温血液自然凝固10-20分钟，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。

仔细收集上清，保存过程中如出现沉淀，应再次离心。

2. 血浆：应根据标本的要求选择EDTA或柠檬酸钠作为抗凝剂，混合10-20分钟后，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。

仔细收集上清，保存过程中如有沉淀形成，应该再次离心。

3. 尿液：用无菌管收集，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。

仔细收集上清，保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。

胸腹水、脑脊液参照实行。

4. 细胞培养上清：检测分泌性的成份时，用无菌管收集。

离心20分钟左右（2000-3000转/分）。

仔细收集上清。

检测细胞内的成份时，用PBS（PH7.2-7.4）稀释细胞悬液，细胞浓度达到100万/ml左右。

通过反复冻融，以使细胞破坏并放出细胞内成份。

离心20分钟左右（2000-3000转/分）。

仔细收集上清。

保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。

5. 组织标本：切割标本后，称取重量。

加入一定量的PBS，PH7.4。

用液氮迅速冷冻保存备用。

小鼠皮质醇（Cortisol）ELISA检测试剂盒应用方法小鼠皮质醇（Cortisol）ELISA检测试剂盒说明书检测原理试剂盒采纳双抗体一步夹心法酶联免疫吸附试验（ELISA）。

往预先包被皮质醇（Cortisol）抗体的包被微孔中，依次加入标本、标准品、HRP标记的检测抗体，经过温育并彻di洗涤。

用底物TMB 显色，TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最后的黄色。

颜色的深浅和样品中的皮质醇（Cortisol）呈正相关。

用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），计算样品浓度。

样品收集、处理及保存方法1.血清：使用不含热原和内毒素的试管，操作过程中避开任何细胞刺激，收集血液后，3000转离心10分钟将血清和红细胞快速当心地分别。

2.血浆：EDTA、柠檬酸盐或肝素抗凝。

3000转离心30分钟取上清。

3.细胞上清液：3000转离心10分钟去除颗粒和聚合物。

4.组织匀浆：将组织加入适量生理盐水捣碎。

3000转离心10分钟取上清。

5.保存：假如样本收集后不适时检测，请按一次用量分装，冻存于20℃，避开反复冻融，在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。

自备物品1.酶标仪（450nm）2.高精度加样器及枪头：0.510uL、220uL、20200uL、2001000uL3.37℃恒温箱操作注意事项试剂盒保存在28℃，使用前室温平衡20分钟。

从冰箱取出的浓缩洗涤液会有结晶，这属于正常现象，水浴加热使结晶wan全溶解后再使用。

试验中不用的板条应立刻放回自封袋中，密封（低温干燥）保存。

浓度为0的S0号标准品即可视为阴性对比或者空白；依照说明书操作时样本已经稀释5倍，最结束果乘以5才是样本实际浓度。

严格依照说明书中标明的时间、加液量及次序进行温育操作。

全部液体组分使用前充分摇匀。

试剂盒构成名称96孔配置48孔配置备注微孔酶标板12孔×8条12孔×4条无标准品0.3mL*6管0.3mL*6管无样本稀释液6mL3mL无检测抗体HRP10mL5mL无20×洗涤缓冲液25mL15mL按说明书进行稀释底物A6mL3mL无底物B6mL3mL无停止液6mL3mL无封板膜2张2张无说明书1份1份无自封袋1个1个无注：标准品（S0S5）浓度依次为：0、0.75、1.5、3、6、12ng/mL试剂的准备20×洗涤缓冲液的稀释：蒸馏水按1：20稀释，即1份的20×洗涤缓冲液加19份的蒸馏水。

皮质醇（Cortisol）测定试剂盒(磁微粒化学发光免疫分析法) 适用范围：用于体外定量测定人血清中皮质醇（Cortisol）的含量。

1.1型号/包装规格
规格A：100人份/盒
规格B：100人份/盒
1.2主要组成成分
定标液和质控品的浓度具有批差异性，详见标签。

2.1 外观
试剂盒中的组分应澄清，应无沉淀和絮状物。

磁分离试剂摇匀后，应为均匀悬浊液，无明显凝集。

2.2 空白限
应不大于1ng/ml。

2.3 准确度
使用纯品作回收实验，其回收率应在(85%～115%)范围内。

2.4 线性
在[1,60]ng/ml测量范围内，剂量-反应曲线线性相关系数R≥0.9900。

2.5 重复性
用不同浓度的两个样本进行检测，各重复检测10次，其变异系数CV应不大于10%。

2.6 批间差
用三个批号试剂盒检测同一份样本，则三批试剂盒之间的批间变异系数CV 应不大于15%。

2.7 特异性
用测定试剂盒测定相应浓度的交叉反应物质，应满足下表要求：
2.8溯源性
根据GB/T 21415-2008及有关规定提供校准品的来源、赋值过程及测量不确定度等内容，溯源至企业内部工作校准品，并与已上市产品比对赋值。

2.9 稳定性
试剂盒在规定的2℃～8℃下保存，有效期为12个月。

取到效期后的产品进行检测，结果应符合2.1、2.2、2.3、2.4、2.5、2.7项的要求。

11875116 122 100测试主要用途用于体外定量检测人血清、血浆、尿液和唾液中皮质醇。

皮质醇检测用于鉴别和治疗肾上腺功能失调。

Elecsys和cobas e免疫分析仪的检测原理是电化学发光免疫法（ECLIA）。

概述皮质醇（氢化可的松）是机体最主要的糖皮质激素，对维持机体的多项生理机能有重要作用。

与其它糖皮质激素类似，皮质醇由共同的胆固醇前体在肾上腺皮质束状带合成。

血循环中约有90%的皮质醇与皮质类固醇结合球蛋白（CBG）和白蛋白结合后进行运输。

仅有少量的游离皮质醇与其受体发生反应。

1皮质醇最重要的生理作用是提高血糖水平（提高糖异生和糖分解）、抗炎和免疫抑制反应。

皮质醇由肾上腺合成和分泌并受下丘脑-垂体-肾上腺皮质-轴的负反馈调节。

如果血中的皮质醇浓度减低，下丘脑则分泌促肾上腺皮质激素释放激素（CRH）。

CRH能促进垂体释放促肾上腺皮质激素（ACTH）。

ACTH能促进肾上腺合成和分泌皮质醇。

皮质醇本身对垂体和下丘脑起负反馈作用。

此外压力能够促进皮质醇的分泌。

1血清皮质醇的浓度具有昼夜节律性变化。

1通常最高峰值出现在清晨（700nmol/L或25.4mg/dL），随后逐渐降低，到夜间可降至峰值浓度的一半左右。

因此在解释结果时，明确采血时间是很重要的。

检测患者血循环中皮质醇的含量可用于诊断肾上腺、垂体和下丘脑的机能是否正常。

2，3因此检测血清皮质醇的浓度可用监测多种疾病，如浓度明显增高的库欣氏综合征4，5或浓度明显降低的艾迪生病。

同时也可用于库欣氏综合征使用地塞米松抑制治疗或艾迪生病使用激素替代治疗的疗效监测。

库欣氏综合征实验室诊断的另一选择是检测24小时尿液中的皮质醇浓度，因为尿液中排泄的皮质醇不受昼夜节律性分泌的影响。

6这种方法能够准确的区分健康人与库欣氏综合征患者。

尿液中排泄的皮质醇均未与转运蛋白结合，因此被称为尿游离皮质醇（UFC）。

通常尿游离皮质醇与血中具有生物活性的游离皮质醇具有一定的比例关系。

兔子皮质醇（Cortisol）酶联免疫分析试剂盒使用说明书本试剂盒仅供体外研究使用!预期应用ELISA法定量测定兔子血清、血浆或其它相关生物液体中皮质醇（Cortisol）含量。

实验原理用纯化的抗体包被微孔板，制成固相载体，往包被抗皮质醇（Cortisol）抗体的微孔中依次加入标本或标准品、生物素化的抗皮质醇（Cortisol）抗体、HRP标记的亲和素，经过彻底洗涤后用底物TMB显色。

TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。

颜色的深浅和样品中的皮质醇（Cortisol）呈正相关。

用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），计算样品浓度。

试剂盒组成及试剂配制1.酶联板：一块（96孔）2.标准品（冻干品）：2瓶，每瓶临用前以样品稀释液稀释至1ml，盖好后静置10分钟以上，然后反复颠倒/搓动以助溶解，其浓度为180ng/ml，做系列倍比稀释（注：不要直接在板中进行倍比稀释）后，分别稀释成180ng/ml，90ng/ml，45ng/ml，22.5ng/ml，11.25ng/ml，5.63ng/ml，2.82ng/ml，样品稀释液直接作为标准浓度0ng/ml，临用前15分钟内配制。

如配制90ng/ml标准品：取0.5ml（不要少于0.5ml）180ng/ml的上述标准品加入含有0.5ml 样品稀释液的Eppendorf管中，混匀即可，其余浓度以此类推。

3.样品稀释液：1×20ml。

4.检测稀释液A：1×10ml。

5.检测稀释液B：1×10ml。

6.检测溶液A：1×120μl（1:100）临用前以检测稀释液A1:100稀释，稀释前根据预先计算好的每次实验所需的总量配制（100μl/孔），实际配制时应多配制0.1-0.2ml。

如10μl检测溶液A加990μl检测稀释液A的比例配制，轻轻混匀，在使用前一小时内配制。

7.检测溶液B：1×120μl/瓶（1:100）临用前以检测稀释液B1:100稀释。

EK8100-01Cortisol Competitive ELISA Kit检测试剂盒（酶联免疫吸附法）Catalog NumberEK8100-48EK8100-96定量检测血清、血浆和细胞培养上清中的皮质醇(Cortisol)浓度。

本产品仅用于科学研究，非诊断试剂，不能用于临床诊断。

一、产品介绍1.背景介绍皮质醇，也称为醋酸氢化可的松或化合物F，是糖皮质激素中的一种类固醇激素。

在人类中，它由肾上腺中的肾上腺皮质束状带产生，在压力和低血糖时释放，可作为压力的一个生物标志物。

皮质醇的产量与ACTH依赖的昼夜节律相关，在早晨达到峰值，随后逐渐降低。

皮质醇在很多基质中可被检测到，如血液、粪便、尿液和唾液。

血清中90-95%的皮质醇与蛋白结合，包括皮质类固醇结合球蛋白和血清白蛋白。

皮质醇主要参与代谢和免疫。

在代谢方面，它可促进糖异生、肝糖原沉积和降低葡萄糖利用率。

在免疫方面，作为重要的抗炎因子，在过敏、免疫抑制和疾病抵抗中发挥重要作用。

异常的皮质醇水平与许多状况有关，包括前列腺癌、抑郁症和精神分裂症。

身体组织中皮质醇过高是库欣综合征的诱因。

2.检测原理本试剂盒采用固相竞争酶联免疫吸附检测技术。

兔抗小鼠抗体预包被在高亲和力的酶标板上。

皮质醇特异性的单克隆抗体加入至孔中，经过孵育，与固相抗体结合。

洗涤后，加入辣根过氧化物酶标记的皮质醇和未标记的皮质醇或样本，竞争结合单克隆抗体上有限的结合位点。

在洗涤去除未结合的物质后，加入显色底物，颜色反应的深浅与皮质醇的浓度成反比。

加入终止液终止反应，在450nm波长(参考波长570-630nm)测定吸光度值。

本试剂盒已验证人、小鼠和大鼠血清样本，但其它物种的皮质醇预计也可被检测。

3.试剂盒检测的局限1)请在本试剂盒标示的有效期内使用。

2)试剂盒的试剂不能与其他批号的试剂或其他来源的试剂混合使用。

3)任何标准品稀释、操作人员、移液技术、洗涤技术、孵育温度、试剂盒保存时间的改变，都将影响结合反应。

儿童皮质醇试验操作方法
儿童皮质醇试验是一种用于检测儿童体内皮质醇水平的常见方法，通常用于评估儿童的肾上腺功能。

以下是儿童皮质醇试验的操作方法：
1. 试验前准备，在进行皮质醇试验之前，医生需要对患儿进行全面的身体检查，并了解其病史和用药情况。

对于儿童来说，家长需要被告知试验的目的、过程和可能的风险。

2. 试验前禁食，在试验前一晚，患儿通常需要禁食，以确保试验结果的准确性。

医生可能会给出具体的禁食时间要求。

3. 采集样本，在试验当天，医生会在患儿的手臂内侧或其他适合的部位清洁皮肤，并用一根小针头采集一小部分皮肤组织或进行刺激测试。

4. 皮质醇激发试验，在采集样本后，医生会在患儿的皮肤上涂抹一种含有皮质醇的药物，然后观察反应。

这种药物通常是皮质醇或类似物质。

5. 观察和记录，医生会在一定时间内观察患儿的皮肤反应，并
记录下任何出现的变化。

这些变化可能包括红肿、瘙痒或其他皮肤
反应。

6. 试验结束和随访，一旦试验结束，医生会根据观察到的结果
进行评估，并与家长讨论试验结果。

根据试验结果，医生可能会制
定进一步的治疗计划或建议。

需要注意的是，儿童皮质醇试验需要在专业医生的指导下进行，因为试验过程中可能会出现不良反应或并发症。

同时，家长和患儿
在试验前后也需要密切配合医生的指导，以确保试验的顺利进行和
患儿的安全。

批准文号：国药准字S1*******使用前请详细阅读此说明书皮质醇放射免疫分析药盒说明书Cortisol Radioimmunoassay Kit北京北方生物技术研究所一、概述及临床意义皮质醇(Cortisol, 缩写为：Cor.)是一种主要由肾上腺皮质束状带分泌的糖皮质激素，属于21碳类甾体激素，分子量363D。

人每日分泌量有昼夜节律性变化，一般早晨分泌量多。

准确测定皮质醇的含量，对下丘脑垂体—肾上腺皮质轴功能试验及其病理、生理研究和临床诊断有重要意义。

对柯兴氏综合症，原发性付肾皮质机能低下症(阿狄森氏病)鉴别诊断特别有效。

本药盒用于测定血清中皮质醇的含量。

血清样品不用稀释，不用预处理，血清或血浆直接加样。

采用放射免疫分析技术，具有用血样量少，操作方法简便，检验周期短，测定结果重复性好等优点。

二、测定原理应用竞争机制原理，标准或样品中的Cor.和加入的125I-Cor.共同与一定量的特异性抗体产生竞争性免疫反应。

125I-Cor.与抗体的结合量与标准或样品中Cor.的含量呈一定的函数关系。

用免疫分离试剂（PR）将结合部分（B）与游离部分（F）分离后，测定结合部分的放射性强度，并计算相应结合率B/B0。

用已知标准Cor.含量与对应结合率作图，即得标准抑制曲线。

从标准曲线上查知对应结合率的待测样品中Cor.的含量。

1四、试剂的配制、使用方法和保存1．Cor.标准品：将0标准1ml蒸馏水溶解，其余标准分别准确地加入0.5ml 蒸馏水溶解。

溶解15分钟后摇匀方可使用。

溶解后其浓度分别为0、10, 50, 100, 200, 500ng/ml。

标准复溶后2~8℃保存可稳定42天，冻干品-20℃保存有效期内稳定。

2．125I-Cor.标记物：冻干品用缓冲液溶解。

100管标记物加缓冲液10ml, 50管标记物加5ml，加样前摇匀。

100管标记物放射性不大于111KBq(3μCi)，2~8℃避光保存可稳定42天。