【CN109735650A】四种基于单核苷酸多态性的甜瓜抗蔓枯病分子标记及用途【专利】

宁夏农林科技，Ningxia Journal of Agri.and Fores.Sci.&Tech.2023，64（06）：5-8基金项目：宁夏回族自治区重大科技项目（2017DC55）、宁夏自然科学基金项目（2020AAC03503）。

作者简介：冯锡鸿（1982—），男，山东济南人，园艺师，研究方向为瓜菜育种栽培。

*通信作者：董建力（1956—），男，山西万荣人，研究员，研究方向为生物技术育种。

收稿日期：2022-04-24修回日期：2022-09-01甜瓜（Cucumis melo L.）果实香甜，深受广大消费者喜爱。

白粉病、枯萎病是甜瓜生产中影响其品质和产量的主要病害，在甜瓜的露地栽培、保护地栽培中广泛发生，使得甜瓜产量和品质严重下降[1-3]。

仅仅依靠化学制剂已不能根除诸多病原菌；且随着用药时间的延长，病原菌已产生耐药性，即使加大用药剂量也无济于事。

针对白粉病、枯萎病的为害，培育抗病的甜瓜新品种迫在眉睫。

因受到致病菌株和发病条件的限制，采用传统育种方法难以选择到聚合多个抗病基因的品种，更难以鉴定抗病基因的聚合体[4-6]。

研究表明，利用与抗病基因紧密连锁的分子标记辅助聚合多个抗性基因，可以提高选择的准确性，这是培育具有持久抗性和综合抗性品种（系）的方法[7-8]。

目前，甜瓜抗甜瓜抗病基因聚合体的分子标记辅助选择冯锡鸿1，申太荣1，王彦刚1，孙德祥1，景涛1，张晓丽1，董建力1，2*1.宁夏中青农业科技有限公司，宁夏银川7500012.宁夏农林科学院农业生物技术研究中心，宁夏银川750002摘要：【目的】为快速筛选出聚合抗白粉病、抗枯萎病基因的甜瓜材料。

【方法】以抗白粉病基因（Pm-2、Pm-6）和抗枯萎病基因（Fom-1）的甜瓜材料与优质、高产甜瓜材料进行复合杂交，采用早代抗病性鉴定及分子标记抗病基因检测的方法。

【结果】筛选出聚合Pm-2、Pm-6和Fom-1基因的材料2个（21T41、21T53），聚合Pm-6、Fom-1基因的材料2个（21T33、21T50），聚合Pm-2、Fom-1基因的材料1个（21T9）。

甜瓜SRAP多态性分析及在品种鉴定中的应用王掌军;王建设;刘生祥【期刊名称】《北方园艺》【年(卷),期】2011(000)018【摘要】以国家蔬菜工程技术研究中心甜瓜单倍体育种组提供的12份薄皮甜瓜,30份厚皮甜瓜,2份野生甜瓜为试材,该研究优化了甜瓜SRAP反应体系,筛选出10对引物组合,分析了甜瓜多态性并对品种进行鉴定.结果表明:10μL反应体系为1×Buffer lμL,引物组合各20 ng,模板DNA 20 ng,dNTPs 2.0 mmol/L,Taq DNA 聚合酶0.2U.10对引物组合在2份甜瓜上共扩增出166条带,其中多态性条带104条,每对引物组合平均能扩增出10.4个多态性位点.甜瓜间遗传距离在0.08～0.79(平均为0.357),54份甜瓜被分为二大类:Ⅰ类包括1份印度野生甜瓜和3份哈密瓜；Ⅱ类可再分为2个亚类:Ⅱ-1,是12份薄皮甜瓜；Ⅱ-2,包括1份中国野生甜瓜和37份厚皮甜瓜.引物组合m21e01、m21e10和m21e11区分率分别高达79.6％、81.5％和79.6％,有助于品种的高效鉴定.【总页数】6页(P129-134)【作者】王掌军;王建设;刘生祥【作者单位】宁夏大学农学院,宁夏银川 750021;国家蔬菜工程技术研究中心,北京100089;宁夏大学农学院,宁夏银川 750021【正文语种】中文【中图分类】S652【相关文献】1.山葡萄SRAP技术体系的建立及其在品种鉴定中的应用 [J], 金炳奎;宗成文;曹后男;朴日子;许雪2.粤东地区果梅主栽品种的SRAP标记多态性分析及指纹图谱构建 [J], 张平湖;刘冠明3.相关序列扩增多态性标记技术(SRAP)及其在植物中的应用 [J], 孙瑞;李袁4.SRAP技术在水稻品种鉴定和纯度检测中的应用研究 [J], 刘强;高新学;刘铁山;张成华;董瑞;郭庆法;叶金才;张春庆5.相关序列扩增多态性标记技术（SRAP）及其在植物中的应用 [J], 孙瑞;李袁因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

甜瓜抗枯萎病资源筛选及抗病生理指标相关性分析作者：刘泰王迪徐慧春杜志强胡禧熙张玲车野齐文举来源：《中国瓜菜》2024年第07期摘要：为明确黑龙江地区甜瓜枯萎病生理小种，探究枯萎病胁迫下甜瓜生理指标变化，完善甜瓜枯萎病抗病评价体系，利用表型鉴定结合分子标记辅助选择（MAS，marker-assisted selection）对24份甜瓜资源进行抗病筛选。

结果表明，黑龙江省尖孢镰刀菌甜瓜专化型Fm-1为1号生理小种。

分子标记辅助选择共筛选出抗病资源15份，感病资源9份，具有较高的筛选效率。

其中野生型资源1314抗性最强，发病率仅为10%；栽培种22-152的感病程度最高。

利用筛选的两个抗性极端材料在幼苗期接种病原菌并于根部取样，测定抗病生理指标并进行相关性分析。

结果表明，枯萎病胁迫下的抗病和感病材料生理指标响应差异显著，过氧化氢酶（CAT）、苯丙氨酸解氨酶（PAL）、超氧化物歧化酶（SOD）和过氧化物酶（POD）活性与发病率呈极显著负相关；丙二醛含量和相对电导率与发病率呈极显著正相关。

综上，利用功能性分子标记可在早期实现精准筛选甜瓜抗枯萎病品种，相对电导率和CAT及PAL活性可作为抗枯萎病评价的首选指标。

关键词：甜瓜；枯萎病；抗病资源筛选；生理指标测定；相关性分析中图分类号：S652 文献标志码：A 文章编号：1673-2871（2024）07-059-08Screening of melon resources resistant to Fusarium wilt and correlation analysis of physiological indexes of disease resistanceLIU Tai， WANG Di， XU Huichun， DU Zhiqiang， HU Xixi， ZHANG Ling， CHE Ye，QI Wenju（Daqing Branch， Heilongjiang Academy of Agricultural Sciences， Daqing 163711，Heilongjiang， China）Abstract： In order to identify the physiological race of melon Fusarium wilt in Heilongjiang province， and improve the evaluation system of melon Fusarium wilt disease resistance， 24 melon varieties were screened for disease resistance using phenotype identification combined with marker-assisted selection（MAS）. The results showed that the specific type Fm-1 of Fusarium oxysporum from Heilongjiang province was physiological race No. 1. A total of 15 resistant resources and 9 susceptible resources were screened by marker-assisted selection with high screening efficiency. The wild-type resource 1314 had the most resistant， the incidence of which was only 10%. The cultivated-type 22-152 had the highest degree of infection. Two resources with extreme resistance were inoculated with pathogens at seedling stage and sampled at root. The physiological indexes of resistance were determined and the correlation analysis was carried out. The results showed that the physiological indexes of resistant and susceptible materials were significantly different under wilt stress， and the activities of catalase（CAT）， phenylalanine aminolyase（PAL）， superoxide dismutase（SOD）and peroxidase（POD）were significantly negatively correlated with incidence rate. Malondialdehyde content and relative conductivity were significantly positively correlated with incidence rate. In conclusion， functional molecular markers can be used to accurately screen melon varieties resistance to Fusarium wilt at an early stage， and relative conductivity and CAT and PAL activities can be used as the preferred indicators for evaluation of Fusarium wilt resistance.Key words：Melon; Fusarium wilt; Screening of resistant resources; Physiological index determination; Correlation analysis甜瓜（Cucumis melo L.）是葫芦科甜瓜属一年生蔓性草本植物，具有极高的营养价值和经济价值[1]。

分子标记技术在甜瓜育种中的应用研究进展摘要：综述了DNA分子标记的优势、种类及DNA分子标记技术在甜瓜育种中的应用研究进展，对DNA分子标记在当前甜瓜育种应用中存在的问题进行了分析，并对甜瓜分子标记的应用前景进行了展望。

关键词：DNA；分子标记；甜瓜；育种近年来，生物技术的发展为植物遗传育种提供了基于DNA多态性的分子标记，分子标记技术作为常规育种有力的辅助工具，其重要性早已为国际瓜菜育种界所公认。

广义的分子标记(molecularmarker)是指可遗传的并可检测的DNA序列或蛋白质。

狭义的分子标记概念只是指DNA标记，而这个界定现在被广泛采纳。

分子标记是以个体间遗传物质内核苷酸序列变异为基础的遗传标记，是DNA水平遗传多态性的直接反映。

1分子标记的种类分子标记是遗传标记的一种，与形态标记、细胞标记、生化标记3种标记相比，分子标记具有显著的优越性：(1)大多数分子标记是共显性的，对隐性农艺性状的选择十分便利；(2)基因组变异极其丰富，分子标记的数量几乎是无限的；(3)在发育的不同阶段，不同组织的DNA都可用于标记分析。

使得对植株基因型的早期选择成为可能。

依据对DNA多态性的检测手段，目前DNA分子标记可分为4大类：第1类：为基于DNA-DNA杂交的DNA标记。

该标记技术是利用限制性内切酶酶解及凝胶电泳分离不同生物体的DNA分子，然后用经标记的特异DNA探针与之进行杂交，通过发射自显影或非同位素显色技术来揭示DNA的多态性。

其中最具代表性的是发现最早和应用广泛的RFLP标记。

第2类：为基于PCR的DNA标记。

根据所用引物的特点。

这类DNA标记可分为随机引物PCR标记和特异引物PCR标记。

随机引物PCR标记包括RAPD标记、ISSR标记等，其中RAPD标记使用较为广泛。

特异引物PCR标记包括SSR标记、STS标记等。

其中SSR标记已广泛应用于遗传图谱构建、基因定位等领域。

第3类：为基于PCR与限制性酶切技术结合的DNA标记。

一株甜瓜枯萎病拮抗菌的筛选、鉴定及生防效果作者：郝芳敏董文杰臧全宇马二磊丁伟红王毓洪来源：《中国瓜菜》2023年第12期摘要：为获得对甜瓜病原菌具有生防潜力的菌株，采用稀释涂平板和分子鉴定的方法，从连续多年种植甜瓜大棚的土壤中分离获得菌株Bc1-20，鉴定为铜绿假单胞菌（Pseudomonas aeruginosa）。

为筛选到对甜瓜多种病害的病原菌具有拮抗作用和对甜瓜具有促生作用的菌株，采用平板对峙法、苗期灌根和盆栽接种试验。

结果表明，Bc1-20对甜瓜多种真菌病害的病原菌均有抑制作用，例如，尖孢镰刀菌甜瓜专化型（Fusarium oxysporum f. sp. melonis）、黑点根腐病菌（Monosporascus cannonballus）、蔓枯病菌（Stagonosporopsis cucurbitacearum）、腐皮镰刀菌（F. solani）和亚洲镰刀菌（F. asiaticum）；Bc1-20处理甜瓜幼苗的茎粗、茎长、鲜质量、子叶长宽及最大真叶的长和宽方面都极显著高于空白对照，表明铜绿假单胞菌Bc1-20对甜瓜幼苗有促生作用；Bc1-20处理的甜瓜幼苗枯萎病的病情指数为40.80，空白对照组的病情指数为85.65，Bc1-20处理的相对防治效果为52.34%。

综上，铜绿假单胞菌Bc1-20具有生防潜力，可很好地防治甜瓜枯萎病。

关键词：甜瓜；铜绿假单胞菌；Bc1-20；甜瓜枯萎病；生防潜力中图分类号：S652 文献标志码：A 文章编号：1673-2871（2023）12-026-07Screening， identification and biocontrol effect of antagonistic bacteria against melon Fusarium wiltHAO Fangmin1， DONG Wenjie2， ZANG Quanyu1， MA Erlei1， DING Weihong1，WANG Yuhong1（1. Ningbo Key Laboratory of Characteristic Horticultural Crops in Quality Adjustment and Resistance Breeding/Ningbo Academy of Agricultural Sciences， Ningbo 315040， Zhejiang，China; 2. Zhejiang Wanli University， Ningbo 315040， Zhejiang， China）Abstract： To obtain effective biocontrol fungi against melon pathogens， dilute coated plates and molecular identification methods were used， strain Bc1-20 was isolated from the melon greenhouse planted for many years， and was identified as Pseudomonas aeruginosa. In order to screen the strains that have antagonistic and growth promoting effects， the experiments of plate confrontation， root irrigation and pot inoculation method were carried out. The result showed that Bc1-20 had good inhibitory effect on the pathogen of various fungal diseases of melon， such as Fusarium oxysporum， Monosporascus cannonballus， Stagonosporopsis cucurbitacearum， F. solani and F. asiaticum， and showed strong antagonistic activity on the plate. Furthermore， P. aeruginosa Bc1-20 could promote the growth of melon seedlings， and significantly increased the stem diameter， fresh weight， length and width of cotyledon and the length and width of the largest true leaf of melon seedlings compared with the control. In addition， pot experiment also showed that it had biocontrol potential to control the melon fusarium wilt and the relative control effect was52.34%. P. aeruginosa Bc1-20 has the potential of biocontrol and can effectively control muskmelon wilt.Key words： Melon; Pseudomonas aeruginosa; Bc1-20; Fusarium wilt; Biocontrol potential甜瓜是世界十大水果之一，也是我國广泛栽种的经济作物之一。

专利名称：一种SNP分子标记、检测甜瓜花性型的方法及应用专利类型：发明专利
发明人：张显,魏春华,王中元
申请号：CN201910057790.X
申请日：20190122
公开号：CN109652412A
公开日：
20190419
专利内容由知识产权出版社提供
摘要：本发明公开了一种SNP分子标记、检测甜瓜花性型的方法及应用。

所述的SNP分子标记的核苷酸序列为SEQ ID NO.1和SEQ ID NO.2，所述的SEQ ID NO.1所示核苷酸序列与甜瓜两性花性状高度连锁，SEQ ID NO.2所示的核苷酸序列与甜瓜单性花性状高度连锁。

利用本发明获得的SNP分子标记可以在甜瓜生长的任何时期快速、准确地鉴定其花性型，具有效率高、限制因素少等优点。

此外，SNP标记提高了选育甜瓜两性系的效率，缩短了育种周期，对甜瓜分子标记辅助选择育种，提高甜瓜杂交育种和制种效率，保障制种质量等方面具有重要意义，可以简便、快速、高通量地应用于甜瓜育种实践。

申请人：西北农林科技大学
地址：712100 陕西省西安市杨凌示范区邰城路3号
国籍：CN
代理机构：西安恒泰知识产权代理事务所
代理人：孙雅静
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甜瓜蔓枯病抗性QTL定位的研究刘龙洲;翟文强;陈亚丽;陈幼源;朱为民【期刊名称】《果树学报》【年(卷),期】2013(30)5【摘要】【目的】探讨甜瓜（Cucumis melo L.）蔓枯病抗性遗传规律并筛选出抗性连锁分子标记位点。

【方法】高抗蔓枯病品系JGD-3做母本，感蔓枯病品系S717做父本，杂交构建包含122个单株的R代群体，各单株分别自交得到相应的F，代家系；分别于2010年秋季和2011年春季叶片人工喷雾苗期接菌，完成蔓枯病抗性遗传规律鉴定；基于已构建对应分子标记连锁图谱，联合复合区间定位蔓枯病抗性数量基因位点（QTL）。

【结果】两种环境下共检测到甜瓜蔓枯病抗性5个QTL（gsb1．1，gsb2．1，gsb3．1，gsb5．1和gsb6．1）作用位点，位于连锁群1，2，3，5和6上，单个QTL解释贡献率于2．5％。

23．0％之间。

两种环境中稳定重复检测的QTL是gsb1.1和gsb6．1；gsb2．1在2010年秋季被检测出．gsb3．1和gsb5．1在2011年春季检测到。

两种环境下检测的QTL解释表型变异总和是42．0％（2010年秋季）和49．0％（2011年春季）。

【结论】以甜瓜JGD-3为抗源鉴定蔓枯病抗性为数量遗传性状由多基因共同控制，有2个QTL位点在两种环境中被重复检测；与QTLs紧密连锁的标记（〈5cM）为分子标记辅助选择（MAS）甜瓜抗蔓枯病品系和蔓枯病抗性基因分离、克隆提供了技术支撑。

【总页数】5页(P748-752)【关键词】甜瓜（Cucumis;melo;L;）;蔓枯病;数量性状基因（QTL）;F2;3家系【作者】刘龙洲;翟文强;陈亚丽;陈幼源;朱为民【作者单位】上海市农业科学院园艺研究所.上海市设施园艺技术重点实验室;新疆农业科学院哈密瓜研究中心;南京农业大学园艺学院【正文语种】中文【中图分类】S652【相关文献】1.水稻恢复系C161对条纹叶枯病的抗性遗传及相关QTL定位研究 [J], 郑文静;刘志恒;张燕之;刘欣;王昌华;赵家铭2.水稻籼粳交DH群体白叶枯病抗性的QTL定位 [J], 杨长登;曾大力;马良勇;季芝娟;郭龙彪;李西明;钱前3.利用水稻MAGIC群体关联定位白叶枯病抗性QTL和创制抗病新种质 [J], 陈天晓;朱亚军;密雪飞;陈凯;孟丽君;左示敏;徐建龙4.利用DH群体定位白叶枯病抗性QTL [J], 张剑霞;杨子贤;姜恭好;高冠军;何予卿5.浙江省西(甜)瓜蔓枯病菌对甲基硫菌灵和啶酰菌胺的抗性检测及抗性机制 [J], 吴倩倩;庄超杰;吴鉴艳;张传清因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请号 202010860895.1(22)申请日 2020.08.25(71)申请人 中国农业科学院郑州果树研究所地址 450009 河南省郑州市管城回族区未来路南端(72)发明人 王平勇　徐志红　徐永阳　付楠　赵光伟　贺玉花　孔维虎　张健　(74)专利代理机构 北京动力号知识产权代理有限公司 11775代理人 梁艳(51)Int.Cl.C12Q 1/6895(2018.01)C12N 15/11(2006.01)(54)发明名称用于检测甜瓜疫病抗性的CAPS标记及其应用(57)摘要本发明提供了一种与甜瓜抗疫病基因紧密连锁的CAPS标记，其特征在于，所述CAPS标记的多态性位点位于甜瓜基因组3.5.1版本12号染色体22,903,700的位置，为G/C多态性；本发明还提供了上述分子标记在甜瓜育种、品种鉴定以及制备相应试剂盒中的应用。

权利要求书1页 说明书6页序列表1页 附图1页CN 111763764 A 2020.10.13C N 111763764A1.一种与甜瓜抗疫病基因紧密连锁的CAPS标记，其特征在于，所述CAPS标记的多态性位点位于甜瓜基因组3.5.1版本12号染色体22,903,700的位置，为G/C多态性。

2.根据权利要求1所述的CAPS标记，所述CAPS标记以以下引物扩增获得：上游引物序列：5’-TATGTAACTGCTATCTCCCTAA -3’；下游引物序列：5’-GGTTACTGGAGCTTTGGCTC -3’。

3.根据权利要求2所述的CAPS标记，所述CAPS标记以Fau I酶切判断多态性。

4.根据权利要求1-3任一项的CAPS标记在甜瓜育种中的应用。

5.根据权利要求1-3任一项的CAPS标记在甜瓜品种鉴定中的应用。

6.根据权利要求4或5的应用，其中所述应用包括：使用以下引物扩增：上游引物序列：5’-TATGTAACTGCTATCTCCCTAA -3’；下游引物序列：5’-GGTTACTGGAGCTTTGGCTC -3’；将扩增产物以Fau I酶切判断多态性，酶切后形成一条220bp的条带和一条55bp的条带的为抗病材料，仅有275bp条带的为感病材料。

专利名称：与甜瓜抗蔓枯病基因Gsb-2连锁的分子标记及其应用
专利类型：发明专利
发明人：张永兵,伊鸿平,张龑,张学军,李寐华,吴海波,王登明
申请号：CN201010590684.7
申请日：20101216
公开号：CN102140506A
公开日：
20110803
专利内容由知识产权出版社提供
摘要：本发明公开了与甜瓜抗蔓枯病基因Gsb-2连锁的分子标记的方法及其应用。

本发明利用携带蔓枯病抗性基因Gsb-2的PI 157082与感病地方品种“白皮脆”构建F群体，通过苗期人工接种甜瓜蔓枯病菌分生孢子悬浮液，采用ISSR技术获得与Gsb-2连锁的分子标记ISSR-57。

将分子标记ISSR-57用于以PI 157082为亲本的甜瓜品种或品系的基因型检测，可以判断该品种或品系是否抗甜瓜蔓枯病。

本发明克服了现有技术在选育稳定甜瓜蔓枯病抗病品系难度较大、周期较长的缺陷，为甜瓜的蔓枯病抗病育种提供标记辅助选择的技术，从而降低成本、提高选择效率，加快培育优良抗蔓枯病甜瓜品系的进程。

申请人：新疆农业科学院哈密瓜研究中心
地址：830011 新疆维吾尔自治区乌鲁木齐市南昌路403号
国籍：CN
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单核苷酸多态性与甜瓜抗枯萎病分子育种研究王贤磊;李群;方勇;高小明;杨艳;李冠【期刊名称】《生物技术》【年(卷),期】2007(17)4【摘要】目的:结合单核苷酸多态性标记技术,利用甜瓜本身的抗病性以解决新疆甜瓜病害问题。

方法:对新疆甜瓜抗枯萎病基因Fom-2基因进行克隆分析,并根据Fom-2基因在不同抗性甜瓜亲本的单核苷酸多态性,设计检测SNP标记的PCR扩增引物,验证其多态性;并利用F2代分析该标记与筛选获得的甜瓜抗枯萎病基因连锁的SSR标记的遗传关系。

结果:在抗病与感病甜瓜品种中均扩增获得PCR条带,试验中设计单核苷酸多态性分子标记在抗病品种为显性,与筛选的和抗枯萎病基因紧密连锁的共显性标记SSR430共分离。

结论:不同抗性甜瓜品种均含有Fom-2基因或其高度同源序列,SNP显性标记和共显性标记SSR430均可用于甜瓜抗枯萎病分子标记辅助育种。

【总页数】4页(P31-34)【关键词】单核苷酸多态;枯萎病;抗病基因;分子育种【作者】王贤磊;李群;方勇;高小明;杨艳;李冠【作者单位】新疆大学生命科学与技术学院;国家瓜类工程技术研究中心【正文语种】中文【中图分类】Q341【相关文献】1.甜瓜抗枯萎病和白粉病育种研究进展 [J], 邱果;刘柳;李小梅;王学征2.甜瓜抗枯萎病的遗传与育种 [J], 孙玉宏;张国桥;杜念华;杜新宇;孟令洋3.单核苷酸多态性(SNP)分子标记在小麦遗传育种中的研究进展 [J], 吴澎;刘娟;田纪春4.单核苷酸多态性(SNP)分子标记在小麦遗传育种中的研究进展 [J], 吴澎;刘娟;田纪春;5.甜瓜抗枯萎病基因Fom-2分子标记及南通市枯萎病生理小种鉴定 [J], 邵元健;周小林;包卫红;蒋建芹;吴雯雯;王佩;张娟因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。