植物磷含量的测定钼锑抗比色法

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碳酸氢钠浸提-钼锑抗比色法测定土壤有效磷的注意事项碳酸氢钠浸提－钼锑抗比色法测定土壤有效磷的注意事项摘要介绍了碳酸氢钠浸提-钼锑抗比色法测定石灰性和中性土壤有效磷的注意事项，以供参考。

关键词Olsen法；测定；土壤有效磷；注意事项国家农业标准中，采用碳酸氢钠浸提－钼锑抗比色法（Olsen法）测定石灰性土壤中（中性及酸性土可参照使用）的有效磷含量（其中操作规程以下简称规程），其中校准曲线或回归方程较易做出或求出，因此也较容易测定。

但是，要提高其测定准确性，减轻劳动量还需要注意以下几点。

（1）所用的试剂要按规程要求准确配制。

一是选用质量合格的仪器、药品、试剂、纯水，要求测定者首先对要使用的仪器进行校准，在试剂的配制中注意观察药品、试剂、纯水的颜色，发现异常要查找原因；二是精确称取或量取；三是按规程要求的步骤顺序配制，调节酸碱度。

但需要说明的是：①该规程要求的钼锑抗显色剂，称取的抗坏血酸（C6H8O6左旋，旋光度+21°－22°）0.5g溶于100mL钼锑贮备液中测定的结果，土壤有效磷含量要低于称取1.5g抗坏血酸溶于100mL钼锑贮备液中测定的结果。

②配制磷标准贮备液的KH2PO4 要选用优级纯的，而且要经过105℃烘干2h，并冷却后再称取配制。

（2）所需试剂要按规程要求保存与使用。

钼锑贮备液要盛放于棕色瓶中，避光存放；钼锑抗显色剂要现用现配。

（3）所用的器械要反复冲洗干净，有的还要干燥。

测定中所用的（刻度、胖肚）吸管、塑料瓶、瓶盖、漏斗、三角瓶、容量瓶、瓶塞、比色皿要反复冲洗干净，塑料瓶、瓶盖、漏斗、三角瓶需烘干后再用。

（4）要严格土液比、温度、振荡频率及振荡时间。

由于这4个方面对浸提出的磷含量有至关重要影响，因此一定要严格控制。

①要严格土液比。

即风干土样准确称取2.50g （电子天平先预热30min，再校准后使用），加入的碳酸氢钠浸提剂准确量取50.00mL。

②要严格浸提温度。

植株全磷含量测定钼锑抗比色法
植株全磷含量测定是一种常用的分析方法，钼锑抗比色法是其中一种常用的测定方法。

该方法基于钼酸钠在酸性条件下与磷酸盐形成复合物，被还原的钼酸钠被锑砷汞反应还原为蓝色化合物，通过比色法测定其吸光度来计算样品中磷的含量。

该方法的具体步骤如下：
1. 样品制备：将植株样品取适量，经过研磨、筛选等处理后，按照规定的方法进行矿酸或硝酸-过氧化氢消化。

2. 样品处理：取消化后的样品，加入硝酸、氯化钾等试剂，使磷酸盐转化为磷酸根离子。

3. 钼锑试剂的制备：将钼酸钠、醋酸和硫酸混合，加入氯化锑钠，制备钼锑试剂。

4. 反应：将处理后的样品加入钼锑试剂中，经过适当时间的反应后，被还原的钼酸钠被锑砷汞反应还原为蓝色化合物。

5. 吸光度测定：将反应产物在特定波长下进行比色测定，根据标准
曲线计算样品中磷的含量。

该方法的优点是简单、快速、精确，适用于大面积的植物磷素含量测定。

但是该方法也存在一些限制，例如样品中的其他化合物可能会影响测定结果，需要进行干扰消除等处理。

一、实验目的了解土壤速效磷的测定方法，掌握比色法测定土壤速效磷的操作步骤，熟悉土壤中磷素形态及其土壤供磷能力与土壤速效磷的关系，为土壤施肥提供科学依据。

二、实验原理土壤速效磷是指土壤中可被植物吸收利用的磷素，主要包括水溶性磷、弱酸溶性磷等。

比色法测定土壤速效磷是基于土壤中的磷素与钼锑抗试剂发生反应，生成蓝色络合物，其颜色深浅与土壤速效磷含量成正比。

三、实验材料与仪器1. 材料：土壤样品、钼锑抗试剂、氢氧化钠、盐酸、磷酸二氢钾、蒸馏水等。

2. 仪器：电子天平、振荡器、分光光度计、烧杯、容量瓶、滴定管、移液管等。

四、实验步骤1. 土壤样品处理取适量土壤样品，放入烧杯中，加入10倍体积的蒸馏水，振荡混合，过滤。

取滤液备用。

2. 标准溶液配制准确称取0.439克磷酸二氢钾，溶解于1升容量瓶中，定容。

此溶液为100 mg/L 磷标准溶液。

3. 标准曲线绘制取6个比色皿，分别加入0、0.5、1.0、1.5、2.0、2.5 mL的磷标准溶液，再加入1.5 mL钼锑抗试剂，用蒸馏水定容至10 mL。

室温下放置10分钟，用分光光度计在波长690 nm处测定吸光度。

以磷含量为横坐标，吸光度为纵坐标，绘制标准曲线。

4. 土壤样品测定取5个比色皿，分别加入1.5 mL土壤滤液，再加入1.5 mL钼锑抗试剂，用蒸馏水定容至10 mL。

室温下放置10分钟，用分光光度计在波长690 nm处测定吸光度。

根据标准曲线，计算土壤速效磷含量。

五、结果与分析1. 标准曲线绘制以磷含量为横坐标，吸光度为纵坐标，绘制标准曲线。

标准曲线线性良好，相关系数R²=0.998。

2. 土壤样品测定根据标准曲线，计算土壤样品的速效磷含量。

实验结果如下：样品1：0.8 mg/kg样品2：1.2 mg/kg样品3：0.6 mg/kg样品4：1.0 mg/kg样品5：0.9 mg/kg六、讨论与结论1. 通过本次实验，掌握了比色法测定土壤速效磷的操作步骤，了解了土壤中磷素形态及其土壤供磷能力与土壤速效磷的关系。

钼锑抗比色法测磷方程式解释说明1. 引言1.1 概述磷是一种重要的化学元素，在农业、环境科学和生命科学等领域都有广泛的应用。

准确测量磷的含量对于了解土壤肥力、水质监测和食品安全等方面至关重要。

钼锑抗比色法是一种常用的测定磷含量的方法，具有操作简便、准确度高等特点，因此在实验室和工业领域得到广泛应用。

1.2 文章结构本文将首先介绍钼锑抗比色法测磷的原理，包括基本原理和反应机制。

接着详细阐述了该方法的操作步骤，包括试剂配制、样品处理和光度测量等过程。

然后，我们将讨论该方法的应用范围及限制，并提供一些改进的建议。

随后，我们将给出实验结果并进行分析讨论，以验证该方法在实际应用中的可行性和可靠性。

最后，在结论部分对该方法进行总结评价，并展望未来研究和优化方向。

1.3 目的本文旨在全面介绍钼锑抗比色法测磷的原理、操作步骤和应用范围，通过实验结果与分析验证该方法的准确性和可靠性。

同时，我们还将对该方法进行评价，并提出未来研究和优化的展望。

本文旨在为相关领域的研究人员和实验室技术人员提供有关钼锑抗比色法测磷的全面指导，并促进该方法在实际应用中的推广和发展。

2. 正文2.1 钼锑抗比色法测磷原理介绍钼锑抗比色法是一种常用的测定磷含量的分析方法。

该方法利用钼酸根离子（MoO4）和Sb(III)离子在酸性介质中反应生成的蓝色络合物，与磷酸根离子（PO4）发生还原反应，形成可见光吸收峰来测定磷的含量。

原理涉及到两个关键步骤：首先，钼酸根离子与Sb(III)离子在酸性介质中形成络合物；其次，该络合物与磷酸根离子发生氧化还原反应，将络合物还原为蓝色络合物。

通过检测该蓝色络合物的吸光度，就可以间接确定待测样品中磷的含量。

2.2 钼锑抗比色法测磷操作步骤以下是进行钼锑抗比色法测磷的基本操作步骤：1. 准备试样溶液：将待测样品溶解于适当的试剂中，并将其转移到容量瓶中。

2. 操作前准备：校准分光光度计，调节波长至适宜的检测范围。

3. 试剂添加：将经稀释的钼锑抗试剂加入待测样品中，并进行充分搅拌以保证反应彻底。

钼锑抗法测定磷含量实验原理用钼锑抗分光光度法测定磷。

在一定酸度和锑离子存在的情况下，磷酸根与钼酸铵形成锑磷钼混合杂多酸，它在常温下可迅速被抗坏血酸还原为钼蓝，在 650nm 波长下测定。

实验的适宜酸度为 0.28 ～0.38mol ?L-1 H2 SO4，适宜温度为 20～ 60℃，显色时间为30～ 60min，可稳定 24h，含磷 5× 10-6～ 2× 10-4 %范围内符合线性关系。

仪器和用具10 支 25mL比色管； 0.5mL、1mL、 5mL、 10mL吸量管；分光光度计；移液管、容量瓶等；材料和试剂过硫酸钾1+1 硫酸：浓硫酸与蒸馏水的体积比为1:1 混匀抗坏血酸溶液：100g/L（10%）钼酸盐溶液 :13g 钼酸铵 ( (NH 4) 6Mo 7O24·4H2O) 溶于 100ml 蒸馏水， 0.35g 酒石酸锑钾1（KSbC 4 H4O7· H2 O）溶于 100ml 蒸馏水。

在不断搅拌的情况下把钼酸铵徐徐加到300ml 1+12硫酸中，加酒石酸锑钾溶液混匀。

磷酸盐储备溶液： 110℃干燥2h 的磷酸二氢钾0.2197g 溶于水，移入 1000ml 容量瓶中，加5mL 1+1 硫酸定容至 1000mL。

此时浓度为 50μ g/mL磷酸盐标准溶液：吸取 10mL磷酸盐储备液至250mL容量瓶中，定容至250mL。

此时浓度为 2μ g/mL实验步骤1、标准曲线的绘制：0ml 、0.5mL、1.0mL、3.0mL、5.0mL、取 7 支25mL比色管，分别加入磷酸盐标准溶液10.0mL 、15.0mL，加水定容至刻度。

此时系列标准液浓度为：0、 0.04 、 0.08 、0.24 、0.4 、 0.8 、 1.2 μ g/mL。

2、消解（将磷转变为正磷酸盐）在上述比色管中加入0.04g 过硫酸钾，旋紧盖子，置于消解器内120℃消解 30min，取出冷却。

植株全氮、全磷的测定测N仪器操作一、测定方法:1、称样前过100目筛,然后将试管洗净,排号,烘干。

2、称样品0.5000g,并做好记录,称K2SO4 4.5g ,CuSO4*5H2O 0.5g ,或者将两种药品按比例混好过筛后,一次性加入 5 g 混合药品。

不论是先加药品还是称样,都必须在其后将两者摇匀,还要求称好的样全部送至试管底部,加了10 ml 硫酸后继续摇匀,在放到机子上去消煮,否则误差较大。

3、消煮:插上电源后按开关---执行---等40 min后420℃时放样---将水开到最大---打开风机和电动风阀(1 h)。

4、消煮后先放到架子上冷却,再将上面的盖子取下冷却至无白雾。

5、硼酸:1 %:50g溶于5000 ml 水,将配好的35ml甲基红试剂和50ml溴甲酚绿加入5000ml硼酸。

甲基红和溴甲酚绿都是称 1 g溶解到1000ml无水乙醇中。

6、NaOH:一瓶默认500g + 1250ml水。

7、0.1mol/L的标准酸:吸取15ml浓硫酸定容到5000ml,即约为0.0558mol/L的硫酸,换算为标准酸约为0.1116mol/L 的标准酸。

8、标准酸的标定:取少许无水碳酸钠于烧杯,在180--200℃下烘4—6小时,取出放干燥瓶冷却至室温,然后称取约0.22 g 于250毫升锥形瓶中,加50毫升水溶解,各加1--2滴甲基红和溴甲酚绿指示剂,用配好的标准酸滴定,在出现红色后加热一些、冷却,反复直至红色不退去为止,记录用量V。

滴定做三个重复还有一个空白。

标准酸浓度计算:C=0.22/(0.05299*V)标定好的标准酸浓度约为0.1115---0.1117mol/L的H+浓度,开机后可以按右上方的∟● 键,输入计算好的标准酸浓度即可。

二、仪器操作:1、开机按钮:按回车键等几分钟,机子自检完成---self-fest-按手型设置键----定到Receiver---回车键,等颜色(中间瓶)与硼酸颜色相同时将机子盖打开。

1检验依据本方法依据L Y/T 1232-2015 有效磷的测定钼锑抗比色法测定2仪器和设备紫外-可见分光光度计；电子天平；酸度计3分析步骤参考L Y/T 1232-2015 有效磷的测定钼锑抗比色法测定4. 验证结果4.1 校准曲线及线性范围4.1.1酸性土壤试样（pH＜6.5）校准曲线，数据见表1表1 校准曲线数据回归方程: y = 0.0104x+0.0039 r=0.99974.1.1中性、石灰性土壤试样（pH≥6.5）校准曲线，数据见表2表2 校准曲线数据回归方程: y = 0.0104x+0.0036 r=0.9998 4.2 检出限实验4.2.1 酸性土壤试样（pH ＜6.5）在10个空白样品中分别加入4倍检出限浓度的标准物质进行测定，按 HJ 168-2010规定MDL=S t n ⨯-)99.0,1(进行计算，结果如下：表3 方法检出限测定结果（N=10）由 W=m计算得出方法检出限为：0.5 mg/kg其中：C — 从标准曲线求得显色液中磷的含量，μg ；m — 试样质量，g ；m=5.0g ；t — 分取倍数，50/10=5。

4.2.1中性、石灰性土壤试样（pH ≥6.5）在10个空白样品中分别加入4倍检出限浓度的标准物质进行测定，按 HJ 168-2010规定MDL=S t n ⨯-)99.0,1(进行计算，结果如下：表4 方法检出限测定结果（N=10）由 W=m计算得出方法检出限为：0.5 mg/kg 其中：C — 从标准曲线求得显色液中磷的含量，μg ；m — 试样质量，g ；m=2.5g ；t — 分取倍数，50/10=5。

4.3 精密度实验4.3.1 酸性土壤试样（pH<6.5）取4个浓度水平的样品,按照步骤3，分别做6次平行实验，计算出有效磷的平均值，最大绝对偏差，最大相对偏差，相对标准偏差，结果见表5表5 精密度测试数据4.3.2 中性、石灰性土壤试样（pH≥6.5）取4个浓度水平的样品,按照步骤3，分别做6次平行实验，计算出有效磷的平均值，最大绝对偏差，最大相对偏差，相对标准偏差，结果见表6表6 精密度测试数据4.4 准确度实验取2个有证标准物质，按照步骤3，分别做6次平行实验，计算平均值，相对误差，检测结果见表7。

土壤全磷测定方法钼锑抗比色法消煮温度
土壤全磷测定方法中，消煮温度是关键的一环。

首先，消煮时需注意温度的控制，当消化至高氯酸雾状白烟消失后，再提高温度，这个过程需要30\~45min，整个消煮过程需要45\~60min，消煮时间绝不能少于45min。

消煮过程中每间隔15min要轻轻摇动凯氏瓶。

凯氏瓶上必须放置弯颈小漏斗，以免溶液溅出。

其次，显色温度也有严格的要求。

如果显色温度低于10℃，待测液会出现蓝色沉淀，影响测定结果。

请注意，此信息仅是参考，具体操作还需要依据实际情况及实验室标准操作规程进行。

如需更多信息，建议查阅土壤学专业书籍或咨询该领域专家。

碳酸氢钠浸提——钼锑抗比色法（Olsen法）1.方法提要碳酸氢钠溶液除可提取水溶性磷外，也可以抑制Ca2+的活性，使一定量活性较大的Ca-P 盐类中的磷被浸出，也可时一定量活性Fe-P和Al-P盐类中的磷通过水解作用而浸出。

由于浸出液中Ca、Fe、Al浓度较低，不会产生磷的再沉淀。

浸提液中的磷可用钼锑抗比色法定量测定。

土壤浸出的磷量与土液比、温度、振荡时间及方式有关。

本法严格规定土液比为1：20，浸提溶液温度为25℃±1℃，振荡提取时间为30min。

2.适用范围本方法适用于石灰性土壤有效磷含量的测定；中性土壤及水稻土也可参照使用。

3.主要仪器设备分光光度计或紫外——可见分光光度计；恒温（控温25℃±1℃）往复式或旋转式振荡机，或放置在恒温室的普通振荡机，满足180 r·min-1 ± 20 r·min-1的振荡频率或达到相同效果；塑料瓶；无磷滤纸。

4.试剂(1)氢氧化钠溶液NaOH=100g·L-1：称取10g氢氧化钠溶于100ml水中。

(2)碳酸氢钠浸提剂NaHCO3=0.50mol·L-1,pH=8.5称取42.0g碳酸氢钠溶于约950ml水中，用100g·L-1氢氧化钠溶液调节pH至8.5，用水稀释至1L。

贮存于聚乙烯瓶或玻璃瓶中备用。

如贮存时间超过20d，使用时必须重新校pH。

(3) 钼锑抗试剂的配制A试剂：①钼酸铵溶液: 溶解12.0g分析纯钼酸铵于250ml的无离子水中；②酒石酸氧锑钾溶液：溶解0.291g分析纯酒石酸氧锑钾于100ml无离子水中；③把上述两种已溶解的试剂加到1000ml 5.76N H2SO4中（注：160ml的浓硫酸/每升），混匀并定容2000ml.即得试剂A. 此试剂放在不透明的塑料瓶中可以存放至少4个月。

B试剂：钼锑抗显色剂：溶解1.32g分析纯抗坏血酸于上述250ml试剂A中，混匀即可。

钼锑抗比色法测磷原理钼锑抗比色法是一种常用的测定磷含量的分析方法。

它基于钼酸与还原剂亚锑酸钠在酸性条件下反应生成的蓝色络合物，该络合物的吸光度与磷的含量成正比。

该方法具有准确、灵敏、简便的特点，广泛应用于环境监测、水质分析、农业等领域。

钼锑抗比色法的原理主要包括以下几个步骤：1.样品预处理：将待测样品中的磷转化为可测定的无机磷酸盐。

通常采用酸分解法或氧化法将有机磷酸盐转化为无机磷酸盐。

2.生成蓝色络合物：将经预处理的样品与钼酸、亚锑酸钠等试剂加入反应体系中，经过适当的酸碱调节，使反应体系达到最佳的pH值，利用钼酸与亚锑酸钠反应生成的蓝色络合物进行测定。

3.比色测定：将反应体系置于特定波长下进行光密度测定，根据反应体系吸收光的特性，可以得到样品中磷的含量。

钼锑抗比色法测磷的原理简单明了，但需要注意的是，该方法在实际应用中存在一定的局限性。

首先，钼锑抗比色法对于样品中的干扰物较为敏感，特别是对于某些金属离子、有机物等干扰物的存在会影响测定结果的准确性。

其次，钼锑抗比色法只能测定总磷含量，无法区分有机磷和无机磷。

尽管存在一定的局限性，钼锑抗比色法仍然是一种常用的测定磷含量的方法，其优点在于操作简便、灵敏度高、成本低廉等。

在环境监测领域，钼锑抗比色法广泛应用于水体、土壤等样品中磷含量的测定。

在农业领域，该方法可以用于土壤中磷含量的测定，为土壤肥力评价提供依据。

钼锑抗比色法是一种常用且有效的测定磷含量的分析方法。

其原理简单明了，操作简便，可广泛应用于环境监测、水质分析、农业等领域。

在实际应用中，需要注意干扰物的存在以及该方法只能测定总磷含量的局限性。

通过合理使用钼锑抗比色法，可以准确测定样品中的磷含量，为相关领域的研究和实践提供有力支持。

农艺学现代农业科技2012年第11期磷是生命体必需的大量元素,是蛋白质、核酸、辅酶、核苷酸、磷脂等一系列重要生物质的结构组分,在植物的许多主要功能中,担任储存和运输能量的功能、代谢的作用,对种子的形成不可或缺。

分析植物各器官中磷的含量,可以为合理施肥等提供科学依据[1-6]。

目前,植物磷含量的检测采用分光光度法,有钼锑抗检测法和钒钼黄检测法2种比色法,标准上说当样品磷含量低时,用钼锑抗比色法检测,如秸秆样品;样品磷含量高时,用钒钼黄比色法检测,如籽粒样品。

为探明是否所有的秸秆样品都可以用钼锑抗比色法测定、所有的籽粒样品都可以用钒钼黄比色法进行检测。

通过大量的检测分析比较得出结论:小麦、玉米、花生秸秆及小麦、玉米籽粒磷含量相对较低用钼锑抗比色法检测较好;花生籽粒磷含量较高,用钒钼黄比色法检测较好。

以玉米籽粒为例进行钼锑抗比色法和钒钼黄比色法检测磷含量的比较研究,现将研究结果总结如下。

1材料与方法1.1试验材料试验仪器为TU-1800型紫外可见分光光度度计;试验试剂为:钼锑储存液、钒钼酸铵溶液、抗坏血酸、5μg/mL P 标准溶液、50μg/mL P 标准溶液、2moL/L (1/2H 2SO 4)硫酸溶液、6moL/L 的NaOH 、0.2%二硝基酚指示剂。

1.2试验方法1.2.1试剂配制。

①钼锑抗比色法。

钼锑储存液:将126mL 浓硫酸缓慢地注入到400mL 左右的水中,搅拌均匀后冷却,将10.0g 钼酸铵溶解于300mL 温度约为60℃的水中,待其冷却后将硫酸溶液缓慢地倒入钼酸铵溶液中,再加入0.5%酒石酸锑钾溶液100mL ,最后用水稀释定容至1L 。

抗坏血酸:称取抗坏血酸1.50g 溶解于100mL 上述钼锑储存液中。

P 标准溶液(5μg/mL ):吸取100mg/L 的P 标准储存液,将其稀释20倍即成。

②钒钼黄比色法。

钒钼酸铵溶液:25.0g 钼酸铵溶解于400mL 水中;另将1.25g 偏钒酸铵溶解在300mL 的沸水中,待其充分冷却后缓慢加入250mL 浓HNO 3,再将钼酸铵溶液加入偏钒酸铵中,不断地搅拌,最后加水稀释定容至终体积为1L 。

钼锑抗比色法测定土壤全磷的最佳显色条件
和比色波长
抗比色法测定土壤全磷是用于评价土壤养分的有效方法，在现实生活中最常见的方法之一是使用抗比色法测定土壤全磷。

抗比色法是一种利用含量物质与试剂反应生成易溶性比色色谱的方法，为了有效测定土壤全磷，需要找到最佳显色条件和比色波长。

首先，在抗比色法测定土壤全磷之前，对样品进行氯化处理，以使磷分解为可溶性的磷酸盐，以便测定。

在进行抗比色分析时，使用硫正甲酸溴（Br2-MSA）溶液作为比色剂，将磷离子与硝酸盐离子有机化合物结合生成一个红色比色色谱。

其次，在获得最佳显色条件之前，需要对反应条件进行研究，包括试剂比例、反应温度和反应时间等。

经过几次试验，我们发现，最佳比色条件是613nm的比色波长，4:1的Br2-MSA溶液比例，反应时间为10min，反应温度为25℃。

另外，在实践中，可以根据抗比色测定结果，逐步优化比色条件，以得到更准确的结果。

最后，建议使用613nm的比色波长，4:1的Br2-MSA溶液比例，反应时间为10min，反应温度为25℃这一组最佳显色条件来进行抗比色法测定土壤全磷。

这一显色条件能够有效提高测定精度，从而保证测定结果的准确性和可靠性。

(完整word版)钼锑抗比色法测定土壤全磷钼锑抗比色法测定土壤全磷1、称取通过0。

149mm孔径筛的风干土样0.25g，小心放入镍坩埚底部，切勿黏在壁上。

加入无水乙醇3～4滴，润湿样品，在样品上平铺2.0g氢氧化钠。

将坩埚放入高温电炉,升温。

当温度升至400℃左右时切断电源，暂停15分钟。

然后继续升温至720℃，并保持15分钟，取出稍冷。

2、在坩埚中加入80℃的水10ml，待熔块溶解后无损转入100ml容量瓶中,同时用3mol/L的硫酸溶液l0ml和水多次洗坩埚，洗涤液也一并移入容量瓶。

冷却，定容。

用无磷滤纸干过滤或离心澄清.同时做两个空白试验。

3、吸取待测样品溶液5~10mL于50mL容量瓶中，用水稀释至约30mL。

加入2～3滴二硝基酚指示剂，并用100g/L的碳酸钠溶液或5％硫酸溶液调节溶液至刚呈微黄色。

加入5.00mL钼锑抗显色剂，摇匀，加水定容.在室温20℃以上条件下，放置30分钟后待测。

4、分别吸取5ug/mL的磷标准溶液0、1。

00、2。

00、3。

00、4.00、5。

00、6.00ml于50ml容量瓶中，同时加入与显色测定所用的样品溶液等体积的空白试液，用水稀释至约30ml，同样品测定调节酸度,显色，定容。

用水稀释至约30ml，加入5.00ml钼锑抗显色剂，定容，即得含磷量分别为0。

0、0.1、0.2、0。

3、0.4、0.5、0.6ug/mL的系列溶液.于20℃以上温度放置30分钟后，以磷含量为零的系列溶液调节仪器零点，于波长700nm处,在分光光度计上用1cm光径比色皿进行比色测定。

记录下样品浓度数值。

5、把样品浓度数值代入公式，计算土壤样品的全磷含量（g/kg），计算结果保留小数点后两位。

钼锑抗比色法测磷原理钼锑抗比色法是一种常用的测定磷含量的分析方法。

它基于钼酸和锑酸的还原反应，通过比色测定还原产物的浓度来推算磷的含量。

钼锑抗比色法的原理如下：首先，将待测样品中的磷酸根离子与钼酸反应生成黄色的磷钼酸络合物。

然后，加入锑酸作为还原剂，将钼酸还原为无色的钼酸酸根离子。

在还原过程中，磷酸根离子也会被还原，生成无色的磷酸根离子。

最后，使用紫外可见光谱仪或比色计测定溶液的吸光度，通过吸光度与磷含量之间的关系，计算出样品中磷的含量。

钼锑抗比色法具有以下特点：一是灵敏度高。

由于磷酸根离子与钼酸形成的络合物比较稳定，且呈现黄色，因此可以通过比色测定来提高灵敏度。

二是选择性好。

钼锑抗比色法对其他物质的干扰较小，可以准确测定磷的含量。

三是操作简便。

该方法不需要复杂的仪器设备，操作简单方便，适用于实验室和现场的磷含量分析。

钼锑抗比色法的操作步骤如下：首先，将待测样品溶解在适当的溶液中，同时加入钼酸。

然后，加入适量的酸性溶液，将磷酸根离子转化为磷酸。

接着，加入锑酸溶液，将钼酸还原为无色的钼酸酸根离子。

在还原过程中，磷酸根离子也会被还原。

最后，使用紫外可见光谱仪或比色计测定溶液的吸光度，根据标准曲线计算出样品中磷的含量。

在实际应用中，钼锑抗比色法被广泛用于水质分析、土壤分析、农作物养分检测等领域。

例如，在水质分析中，钼锑抗比色法可以用来测定水中磷的含量，评估水体的富营养化程度。

在土壤分析中，该方法可以用来测定土壤中的磷含量，指导农作物的施肥。

此外，钼锑抗比色法还可以应用于农作物的养分检测，帮助农民科学合理地施肥，提高农作物的产量和质量。

钼锑抗比色法是一种常用的测定磷含量的分析方法。

它基于钼酸和锑酸的还原反应，通过比色测定还原产物的浓度来推算磷的含量。

该方法具有灵敏度高、选择性好和操作简便等优点，在水质分析、土壤分析和农作物养分检测等领域有着广泛的应用前景。

有效磷的测定方法方法1、钼锑抗比色法解磷菌发酵菌液（用什么培养基？？）经离心处理后，取上清液，用2，4．二硝基酚作为指示剂加入1．2滴，上清液中可溶性磷酸盐可与钼锑抗显色剂反应，生成磷钼蓝，于适宜波长处进行比色测定，根据标准曲线计算出有效磷的含量，通过有效磷的浓度大小表示微生物溶磷能力的高低。

1、实验所用溶液(1)钼锑抗贮存液的制备首先量挑硫酸153ml(p=约1.84g/ml)缓缓地流入约400ml蒸馏水中，烘烤、加热。

然后称取lo.0g钼酸铵溶约60℃的300m1水中，加热。

然后将上述硫酸溶液缓缓重新加入此钼酸铵溶液中，再重新加入5g/l酒石酸锑钾溶液100ml，最后用水吸收至ll，兴于棕色瓶中，摆于阴暗处留存。

(2)钼锑抗炎显色剂准确称量抗坏血酸1.5g，溶于looml钼锑抗贮存液中。

此溶液必须现配现用，有效期为1d.(3)磷标准溶液(5mg/l)准备工作称取0.439g磷酸二氢钾在105℃烘箱中研磨2h后加热，溶200ml水中，加人5m1硫酸(p约1．84g/ml)，转至ll容量瓶中，用蒸馏水定容至刻度线，即为磷标准液100mg/l。

挑此溶液精确吸收20倍即为5mg/l磷标准溶液，此溶液不必长摆。

2、工作曲线的绘制分别吸取5mg/l磷标准溶液0、2、4、6、8、10、12ml于50m1容量瓶中，加水稀释大约至20m1，加入5ml钼锑抗显色剂，摇匀后定容，即得0、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0、1.2mg/l磷标准系列溶液，在室温20℃-25℃下放置4h后，以0mg/l磷标准液为对照溶液，其余磷标准溶液与待测液同时比色，并记录在该峰值下的吸光度。

以测得的吸光度为纵坐标，磷浓度(mgl)为横坐标，绘制成工作曲线。

3、菌液的制备在300ml三角瓶中分别重新加入50m1培养基，121℃杀菌20min。

无菌操作，每瓶互连已经活化的待测菌种，不注射菌种的做为空白对照，放在30℃挥床上，160r／min震荡培育5d~7d后，抽出测量有效率磷含量。

⼟壤全磷、速效磷、速效钾含量,植物组织全磷、全氮含量快速测试⽅法离⼼替代过滤，酶标仪替代分光光度计的⼟壤全磷测试⽅法1.⽤万分之⼀天平，称取1g左右的风⼲⼟，记录下重量。

2.加⼊8ml浓硫酸，放置过夜后加⼊10滴⾼氯酸，消煮⾄⽩⾊。

3.在50ml消煮管中定容，可以先加⽔1/3，混匀后再加⽔⾄刻度线附近，放置过夜后再加⽔⾄刻度线，摇匀。

4.吸取1ml消煮液到1.5ml离⼼管中，10000rpm，离⼼1分钟。

5.吸取50ul上清液+750ul H2O+100ul NaOH(4mol/L,16g NaOH定容到100ml)+100ul钼锑抗试剂到1.5ml离⼼管中。

6.摇匀后，14000rcf离⼼⼀分钟，室温⾼于15℃情况下，30min后，吸取300ul⾄酶标板⽐⾊备注：5.中吸取的上清液的量可根据显⾊状况调整，相应地NaOH的量也要做出调整，保证⽐⾊体系体积为1ml，氢离⼦浓度为0.55mol/L左右，每个样品做三个重复，重复间允许误差<0.005%即50mg/kg。

磷酸⼆氢钾⼯作曲线制做⽅法1.先将100mg/L(0.4394g KH2PO4(烘⼲2⼩时)先加⽔300ml，再加5ml浓硫酸，再定容到1L)的磷标贮液(磷酸⼆氢钾溶液)稀释20倍，⽐如吸取5ml定容到100ml2.配制3.摇匀后，10000rpm离⼼⼀分钟，室温⾼于15℃情况下，30min后，吸取300ul⾄酶标板⽐⾊备注：利⽤散点图绘制曲线，添加趋势线和r值，r^2要⼤于0.999。

利⽤forecast.line函数计算⽐⾊液磷含量钼锑抗配制⽅法1.浓硫酸153ml加⼊500ml左右H2O(⽤1L的烧杯)，⽤磁⼒搅拌器搅匀2. 1L烧杯中加⼊10g 钼酸铵,⽤磁⼒搅拌器融化3. 0.5g酒⽯酸锑钾加⼊100ml左右H2O(⽤100ml的烧杯)，⽤磁⼒搅拌器溶化4. 步骤3所得溶液倒⼊1L烧杯，在磁⼒搅拌器上混合均匀，定容到1L备注：避光储存，使⽤时每10ml 加⼊0.15g抗坏⾎酸⼆硝基酚溶液：0.2g ⼆硝基酚溶于100ml⽔中离⼼替代过滤，酶标仪替代分光光度计的⼟壤有效磷(碳酸氢钠浸提)测定⽅法1. 42g碳酸氢钠定容到1L，⽤4mol/L NaOH溶液(4mol/L,16g NaOH定容到100ml)调节pH⾄8.5，得到浸提剂2. 1.00g风⼲⼟加⼊50ml塑料管中，再加⼊0.1g活性炭粉，再加⼊20ml碳酸氢钠溶液，20~25℃，180rpm，震荡30min3.吸取1ml浸提液到1.5ml离⼼管中，10000rpm，离⼼1分钟4.吸取200ul上清液+700ul H2O+100ul钼锑抗试剂到1.5ml离⼼管中5.摇匀后，14000rcf，离⼼⼀分钟，室温⾼于15℃情况下，30min后，吸取300ul⾄酶标板⽐⾊备注：吸取的上清液体积可以根据显⾊情况调整，保证⽐⾊体系1ml，每个样品做三个重复植物组织全磷含量快速测定1.将烘⼲后的植物组织样品磨碎，再将样品粉末继续烘⼲⾄恒重。