多发性骨髓瘤免疫表型及胞浆轻链检测的临床意义
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游离轻链检测对多发性骨髓瘤诊断的临床意义翟玉华;梁玉芳;陈文明;王清涛【摘要】目的评价免疫固定电泳、尿液轻链定量及血清游离轻链检测在多发性骨髓瘤(MM)患者轻链检测中的价值.方法用速率散射比浊法进行重链、轻链及游离轻链定量,用蛋白电泳及免疫固定电泳法对M成份做定性分析,对多发性骨髓瘤患者轻链型21例,完整型29例(其中IgG、IgA型19例;IgD型10例)标本分别做免疫固定电泳,尿轻链定量及游离轻链检测,然后比较三种方法的检出率和灵敏度.结果对于轻链型骨髓瘤患者,免疫固定电泳、尿轻链定量及血清游离轻链检测三种方法的轻链检测阳性率分别为90.5 %(19/21); 80.9 %(17/21);100%(21/21).对于完整型骨髓瘤患者三种方法的游离轻链检测(免疫固定电泳法检测与重链结合的单克隆轻链的阳性率100%)阳性率分别为20.7 %(6/29); 41.4 %(12/29);82.7 %(24/29).结论血清游离轻链检测较另外两种方法检测游离轻链更为灵敏,其与免疫固定电泳法结合检测对多发性骨髓瘤患者的明确诊断、疗效观察及改善预后起重要作用.%Objective Evaluation of the tests of Immunofixation Electrophoresis(IFE ) ,urine light chain quantitive analysis and serum free lightchain immunoassay form easurement of free lightchain in multiple myeloma patients .M ethods Turbidimetric method was used to quantify heavy chains ,and total light chains(free and combined light chains) ,protein electrophoresis(PE ) and IFE were used to identify and type the M proteins in 21 light chain multiple myeloma (LCMM )and 29 intact imm unoglobulin multiple myeloma (IIMM )patients ;Detection rate and accuracy of the three kinds of tests were compared .Results In LCMM patients ,the detection rate for immunofixation Electrophoresis ,urinelight chain quantitive analysis and serum free light chain immunoassay were 90 .5 % (19/21) ;80 .9 % (17/21) ;100% (21/21)and were20 .7 %(6/29) ;41 .4 % (12/29) ;82 .7 % (24/29)in IIMM patients ,and all the combining monoclonal light chains were detected by IFE .Conclusion Serum free light chain immunoassay was more sensitive than the other two ,if combining with IFE ,they will help to diagnose ,monitor and improve prognosis of multiple myeloma patients .【期刊名称】《中国实验诊断学》【年(卷),期】2011(015)009【总页数】3页(P1525-1527)【关键词】多发性骨髓瘤;游离轻链;免疫固定电泳【作者】翟玉华;梁玉芳;陈文明;王清涛【作者单位】首都医科大学附属北京朝阳医院,检验科,北京100020;首都医科大学附属北京朝阳医院,检验科,北京100020;首都医科大学附属北京朝阳医院,血液科;首都医科大学附属北京朝阳医院,检验科,北京100020【正文语种】中文【中图分类】R733.3多发性骨髓瘤(MM)是一种好发于中老年的单克隆浆细胞异常增生的恶性疾病。
多发性骨髓瘤免疫表型特征及其临床意义张翠萍;汪鹏;李庆;徐修才;胡超杰;郑南【摘要】目的:探讨流式细胞术检测多发性骨髓瘤(MM)的免疫表型特征及其临床意义。
方法应用多参数流式细胞术(MP-FCM),采用 CD138/CD45/SSC 设门,检测40例 MM患者和20例正常献髓者骨髓细胞免疫表型。
结果MM患者抗原异常表达率由高到低分别为 CD45 dim +/-(95%)、CD81 dim +/-(80%)、CD56+(70%)、CD27 dim +/-(50%)、CD200++(48%)、CD33+(40%)、CD28++(35%)、CD117+(18%)、CD19+(5%)和 CD20+(3%)。
CD56+、CD200dim +、CD28dim +在正常浆细胞的表达率分别为10%、10%和5%。
结论应用 MP-FCM检测 MM细胞免疫表型,可准确地鉴别良恶性浆细胞,有助于 MM的诊断、预后判断及靶向治疗。
%Objective To explore the immunophenotype and its clinical significant of Multiple Myeloma (MM).Methods The immunophenotype of 40 patients with MMand 20 normal volunteers were detected by multipa-rameter flow cytometry(MP-FCM).Results The abnormality expression of antigens sequence of patients with MMwas CD45 dim +/-(95%),CD81 dim +/-(80%),CD56 + (70%),CD27 dim +/-(50%),CD200 ++ (48%),CD33 + (40%), CD28 ++(35%),CD117 +(18%),CD19 +(5%),CD20 +(3%)in order.However the positive rations of CD56 +, CD200dim +and CD28dim + were10%,10%and 5%,respectively.Conclusion MP-FCM inspections can accurately discriminate the benign and malignant plasma cell,and provide evidence for prognosis evaluation and targeted therapy.【期刊名称】《中国临床保健杂志》【年(卷),期】2016(019)003【总页数】4页(P228-231)【关键词】多发性骨髓瘤;免疫表型分型;浆细胞;流式细胞术【作者】张翠萍;汪鹏;李庆;徐修才;胡超杰;郑南【作者单位】安徽医科大学附属省立医院安徽省立医院,中心实验室,合肥230001;安徽医科大学附属省立医院安徽省立医院肾脏内科,合肥 230001;安徽医科大学附属省立医院安徽省立医院,中心实验室,合肥 230001;安徽医科大学附属省立医院安徽省立医院,中心实验室,合肥 230001;安徽医科大学附属省立医院安徽省立医院,中心实验室,合肥 230001;安徽医科大学附属省立医院安徽省立医院,中心实验室,合肥 230001【正文语种】中文【中图分类】R733.3多发性骨髓瘤(MM)是骨髓内单一浆细胞株异常增生,并伴单克隆免疫球蛋白增多和溶骨性病变为特征的一种恶性肿瘤。
35例多发性骨髓瘤患者血清轻链检测及结果分析
潘继文;王娟;王艾丽;熊华
【期刊名称】《现代诊断与治疗》
【年(卷),期】2003(014)004
【摘要】目的评价检测多发性骨髓瘤(MM)患者血清轻链含量及其比值的临床意义.方法用速率散射比浊法测定35例MM病人血清中轻链κ、λ含量,并计算κ/λ值.结果骨髓瘤多为κ或λ含量高于或低于甚至等于正常值,但κ/λ值异常.结论轻链蛋白是MM患者肾功能损害的重要致病因素,测定血清或尿液中的轻链含量并计算
κ/λ值是诊断MM及判断其预后的重要指标.
【总页数】2页(P214-215)
【作者】潘继文;王娟;王艾丽;熊华
【作者单位】合肥市第一人民医院检验科,安徽,合肥,230061;南京军区南京总医院全军医学检验中心,江苏,南京,210002;南京军区南京总医院全军医学检验中心,江苏,南京,210002;南京军区南京总医院全军医学检验中心,江苏,南京,210002
【正文语种】中文
【中图分类】R733.3
【相关文献】
1.血清免疫固定电泳和血清游离轻链检测在辅助诊断多发性骨髓瘤中的价值 [J], 李小燕;周铁成;程晓东
2.血清游离轻链检测在轻链型多发性骨髓瘤诊治中的应用 [J], 陈耐飞;李薇;姚迪;
冀旭峰;崔久嵬
3.35例多囊卵巢综合征患者血清抑制素b与激活素α检测结果分析 [J], 黄同森
4.血清尿酸、β2微球蛋白和尿液轻链联合检测在多发性骨髓瘤早期诊断中的应用[J], 朱清红; 李德奎; 罗英
5.血清总轻链与游离轻链定量检测在多发性骨髓瘤诊断中的临床价值探讨 [J], 霍豆;秦爽;吴永昌;刘杨;邢瑞青;彭道荣;赵茜
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多发性骨髓瘤患者血液异常分离结果的临床意义褚娜利1范洪1郭丽2许迪2张华2张靖宇S1.河北省沧州中西医结合医院实验诊断科,河北沧州061001;2.河北省沧州中西医结合医院血液科,河北沧州061001[摘要]目的探讨多发性骨髓瘤(MM)患者血液异常分离结果的临床意义。
方法选择河北省沧州中西医结合医院2008年3月一2019年10月收治的282例MM患者(IgG型152例、IgA型92例、IgD型6例、轻链型32例)以及同期200例自身免疫性疾病患者和200名健康体检者为研究对象。
采用分离胶真空采血管采集空腹静脉血,离心后观察血液分离结果。
根据血液分离结果将其分为对照组和异常组,比较两组检验免疫球蛋白(Ig)、总蛋白(TP)、血红蛋白(Hb)、血细胞比容(H cl)、血小板计数(PLT)、纤维蛋白原渊Fig)水平的差异。
结果自身免疫病患者、健康体检者及部分MM患者血液分离正常,分3层,自上而下依次为:血清、分离胶、红细胞,血清和红细胞比例适当;血液分离异常者均为MM患者,异常血液分离为4层,自上而下依次为:血清、红细胞、分离胶、红细胞,上层有少量血清,其下红细胞增多,底层有少量红细胞。
282例MM患者中血液异常分离有46例(16.31%)。
异常分离现象仅见于IgG型(28例)和IgA型(18例),所占比例分别为60.87%.和29.13%■遥异常组TP、Ig水平高于对照组,Hb、Hci水平低于对照组(均P<0.05)遥结论MM患者分离胶真空采血管可能存在血液分离异常现象遥日常工作中遇到血液分离异常现象时,应及时与临床医师沟通并进一步进行确诊试验遥[关键词]多发性骨髓瘤;分离胶;真空采血管;血液分离;临床意义[中图分类号]R733.3[文献标识码]A[文章编号]1673-7210(2020)12(a)-0157-04Clinical significance of abnormal blood separation in multiple myelomaCHU Nall'FAN Hong GUO Li2XU Di2ZHANG Hua2ZHANG Jingy'u.,k1.Deparlmenl of Laboratory Diagnosis,Cangzhou Hospital of Integrated Traditional Chinese and Western Medicine ofHebei Province,Hebei Province,Cangzhou061001,China;2.Department of Hematology,Cangzhou Hospital of Integrated Traditional Chinese and Western Medicine of Hebei Province,Hebei Province,Cangzhou061001,China[Abstract]Objective To investigate the abnormal blood separation in multiple myeloma(MM).Methods A total of282 MM patients(152cases of IgG type,92cases of IgA type,6cases of IgD type and32cases of light chain type),200 autoimmune diseases patients and200healthy physical examinees were selected from Cangzhou Hospital of Integrated Traditional Chinese and Western Medicine of Hebei Province from March2008to October2019.Fasting venous blood was collected by vacuum blood collection with separation gel,and the results of blood separation were observed after centrifugation.The patients were divided into the control group and the abnormal group according to the blood separation results,and the differences of immunoglobulin(Ig),total protein(TP),hemoglobin(Hb),hematopoietic volume (Hct),platelet count(PLT),and fibrinogen(Fig)levels were compared between the two groups.Results The blood of patients with autoimmune disease,healthy physical examinees and partial MM patients were divided into three layers, followed by serum,separation glue and red blood cells from top to bottom,and the proportion of serum and red blood cells was appropriate.Patients with abnormal blood separation were MM patients,and the abnormal blood was separated into four layers,successively from top to bottom:serum,red blood cell,separation glue and red blood cell.There was a small amount of serum in the upper layer,a increase of red blood cells in the lower layer,and a small amount of red blood cell in the bottom layer.Abnormal blood separation was found in46cases of the282MM patients(16.31%).Abnormal separation was found only in IgG(28cases)and IgA(18cases),accounting for60.87%and29.13%,[基金项目]河北省人才工程培养资助项目(A201901110);respectively.The levels of TP and Ig in the abnormal河北省医学科学研究课题计划项目(20191283);河北省沧group were higher Lhan Lhose in Lhe conlrol group,州市科学技术研究与发展指导计划项目(172302167)。
多发性骨髓瘤轻链逃逸型复发的实验室表现与临床价值探讨多发性骨髓瘤(Multiple Myeloma, MM)是一种由恶性浆细胞在骨髓内过度增殖所导致的血液系统恶性肿瘤。
虽然多发性骨髓瘤一度被认为是一种终末疾病,但近年来研究表明,MM 并非完全不可治愈,且可以出现不同的复发模式。
研究发现,多发性骨髓瘤中存在复发的一种模式是轻链逃逸型复发(light chain escape relapse)。
轻链逃逸型复发是指在治疗前后,由于某些机制导致患者体内的恶性浆细胞中轻链逃逸,并且进一步增殖和蔓延,引发病情的恶化和复发。
轻链逃逸型复发是多发性骨髓瘤治疗失败的一种特殊类型,对于患者的治疗和预后具有重要的临床价值。
实验室检查是诊断多发性骨髓瘤以及评估复发情况的重要手段之一。
对于轻链逃逸型复发的患者,实验室检查可以发现以下几个方面的异常。
首先,血清蛋白电泳和免疫固定电泳检查。
多发性骨髓瘤患者的血清蛋白电泳和免疫固定电泳结果通常呈现单克隆蛋白条带。
但是,当出现轻链逃逸型复发时,血清蛋白电泳和免疫固定电泳结果可能出现没有单克隆蛋白条带或仅出现微弱条带的情况。
这种情况下需要结合其他检查结果进行综合判断。
其次,尿液免疫固定电泳检查。
多发性骨髓瘤患者的尿液免疫固定电泳检查通常呈现单克隆蛋白带。
但是,在轻链逃逸型复发时,尿液免疫固定电泳检查结果可能出现没有单克隆蛋白带或仅出现微弱带的情况,与血液检查结果相似。
此外,骨髓穿刺检查。
多发性骨髓瘤患者的骨髓穿刺检查通常显示大量的恶性浆细胞。
但是,在轻链逃逸型复发时,骨髓穿刺检查的结果可能显示恶性浆细胞数量降低或无法检测到恶性浆细胞,这可能是由于轻链逃逸导致的恶性浆细胞免疫表型的改变所致。
以上实验室表现提示了轻链逃逸型复发的可能性,但需要注意的是,并非所有患者都会出现这些异常实验室表现。
因此,对于高度怀疑可能存在轻链逃逸型复发的患者,临床医生还需要结合临床症状和其他影像学检查结果进行全面评估。
[文章编号]1006-2440(2021)03-0254-03[引文格式]岑海燕,黄红铭,王信峰.多发性骨髓瘤患者血清游离轻链水平及其临床意义[J].交通医学,2021,35(3):254-255,258.多发性骨髓瘤(multiple myeloma,MM)是我国第三位常见的血液恶性肿瘤,随着全球范围内老年人口不断增加,MM发病率也随之逐年增高[1]。
MM以骨髓中恶性浆细胞克隆增殖为特征,起病隐匿,临床表现复杂,涉及多个系统,可表现高钙血症、肾功能不全、贫血或骨病等。
MM实验室诊断主要采用血清蛋白电泳(serum protein electrophoresis,SPE)和免疫固定电泳法(immunofixation electrophoresis,IFE)检测异常血清蛋白,但敏感性低,特异性不强,易造成漏诊[2]。
我国MM患者初诊时误诊率高达55.13%,国外仅50%患者发病6个月内明确诊断。
免疫球蛋白(Ig)由轻链和重链构成,血清游离轻链(serum freelight chain,sFLC)异常增高表明Ig合成异常。
有研究表明,sFLC水平与MM病情及预后密切相关[3]。
近年来临床广泛开展sFLC检测,在MM诊断和治疗中发挥重要作用[4-5]。
本研究收集2016年9月—2020年9月在南通大学附属医院及分院初诊MM患者43例,分析化疗前后sFLC水平的变化及其在疗效观察中的意义。
1资料与方法1.1一般资料初诊MM患者43例(MM组)均符合MM诊断标准,其中男性26例,女性17例;年龄42~80岁,平均65.2±7.9岁;临床分型:IgG型24例, IgA型13例,轻链型5例,无分泌型1例。
Durie-Salmon分期:Ⅰ期6例,Ⅱ期17例,Ⅲ期20例。
以健康体检者20例为对照组。
1.2治疗方法和疗效判断MM患者43例中32例接受化疗,采用硼替佐米为主方案(硼替佐米+地塞米松,硼替佐米+吡柔比星+地塞米松),治疗3~6个疗程,平均5个疗程。
血清游离轻链检测在多发性骨髓瘤的临床意义血清游离轻链检测在多发性骨髓瘤的临床意义摘要】目的探讨血清游离轻链(sFLC) 检测对于多发性骨髓瘤(MM) 诊断的临床意义。
方法选择2012 年8 月至2015 年10 月在我院收治的32 例初发MM 患者;正常对照26 例,为我院体检中心体检结论正常的健康人。
采用免疫比浊法测定病例组及对照组sFLC-κ、sFLC-λ,计算sFLC-κ/λ 比值(rFLC),比较两组间差异。
同时检测病例组尿轻链(uFLC )、血清总轻链(sTLC)、免疫固定电泳(IFE)、血清蛋白电泳(SPE),分别与血清FLC 检测法比较敏感性。
结果病例组sFLC 及rFLC 与正常对照组比较有明显统计学差异(P<0.001)。
32 例初发MM患者sFLC、rFLC 31 例阳性,阳性率96.9%;应用血清总轻链法检测有24 例检测出异常轻链,检出率为75%,两组检出率比较存在统计学差异(P<0.05)。
应用尿轻链测定法检测25 例存在异常轻链,检出率为78%;应用SPE 检测有26 例为阳性,阳性率为84%,以上两种检测方法与血清FLC 法检出率比较均存在统计学差异(P<0.05)。
应用血清IFE 检测法有30 例为阳性,阳性率为93.8%,与血清FLC 法检出率比较无统计学差异(P>0.05)。
结论sFLC 检测是一种高度敏感的定量检测方法,与免疫固定电泳结合,可以提高疾病检出率,有助于MM 患者的诊断。
【关键词】多发性骨髓瘤;血清游离轻链;血清游离轻链比值【中图分类号】R2 【文献标号】 A 【文章编号】 2095-9753(2016)4-0108-02多发性骨髓瘤(multiple myeloma,MM) 是一种恶性克隆性浆细胞肿瘤, 主要特征是正常免疫球蛋白分泌受抑制,出现了单克隆B淋巴细胞恶性增殖, 产生大量单克隆免疫球蛋白分子(Ig), Ig 由2条重链和2 条轻链构成。
多发性骨髓瘤临床实验多发性骨髓瘤(Multiple Myeloma,简称MM)是一种常见的骨髓恶性肿瘤,主要起源于浆细胞,具有高度异质性和复杂的疾病机制。
由于该疾病的高度侵袭性及耐药性,传统治疗手段效果有限。
为了寻找更有效的治疗方法,临床实验成为了一项重要的研究方向。
1. 免疫治疗免疫治疗作为一种新兴的抗癌手段,近年来受到了广泛的关注。
在多发性骨髓瘤的临床实验中,免疫治疗方案呈现出良好的潜力。
其中,单克隆抗体检测(Monoclonal Antibody,简称mAb)被广泛应用于多个临床试验中。
通过识别并与特定的抗原结合,mAb可以直接杀伤癌细胞或激活免疫系统,从而提高治疗效果。
同时,免疫细胞工程和疫苗疗法也在多发性骨髓瘤的临床实验中具有潜力。
2. 细胞治疗细胞治疗是指利用体外培养的免疫细胞或合成的基因工程细胞,来治疗恶性肿瘤的一种新兴疗法。
在多发性骨髓瘤的临床实验中,常见的细胞治疗方式包括造血干细胞移植和嵌合型抗原受体(Chimeric Antigen Receptor,简称CAR)T细胞疗法。
这些治疗方案可以通过提高免疫细胞的抗肿瘤活性,有效清除癌细胞并提高患者的生存率。
虽然目前仍面临着一些技术和安全性的挑战,但细胞治疗在多发性骨髓瘤的临床实验中显示出了巨大的治疗潜力。
3. 靶向治疗靶向治疗是根据癌细胞的分子特征,选择性地干扰或抑制特定的信号通路或靶点,从而阻断肿瘤细胞的增殖和生存。
在多发性骨髓瘤的临床实验中,多种分子靶向药物已经得到了广泛的研究和应用。
比如,蛋白酶体抑制剂、HDAC抑制剂和PI3K/AKT/mTOR信号通路抑制剂等,通过干扰细胞增殖、凋亡和细胞周期等关键的生物学过程,有效抑制了肿瘤的生长和扩散。
此外,信号途径抑制剂和免疫调节剂等靶向药物也在多发性骨髓瘤的临床实验中取得了一定的进展。
4. 小分子药物除了靶向治疗,小分子药物在多发性骨髓瘤的临床实验中也扮演着重要的角色。
近年来,依托于对疾病致病机制的深入了解,多种新型小分子药物被研发出来并逐步应用于临床。
多发性骨髓瘤免疫表型及胞浆轻链检测的临床意义朱杰;赵成艳;王敏;高艳飞;常青燕【摘要】目的研究多发性骨髓瘤(multiple myeloma,MM) 细胞的免疫表型特点及胞浆内轻链的表达.方法采用四色流式细胞仪,用CD45-APC/SSC及CD38/CD56联合设门,对45 例MM 患者的骨髓标本进行CD38、CD56、CD19、CD138、CD45、轻链(κ链、λ链)及胞浆内轻链(cκ链、cλ链)的检测.结果 45例骨髓瘤患者中分泌型为37例(其中IgG型为27例,IgA型为10例),轻链型为5例(λ链型4例,κ链型1例),不分泌型3例,其免疫表型出现的频率为:其中表型为CD38+CD56+CD19-CD45-:分泌型为37/37(100%),轻链型2/5(40%),不分泌型0/3(0%),表型为CD38+CD56-CD19-CD45-:轻链型3/5(60%),不分泌型3/3(100%),CD138+:45/45(100%),膜表面轻链(κ链、λ链):0/45(0%),胞浆轻链(cκ链、cλ链):45/45(100%),其中分泌型:cκ链10/37(27%);cλ链:27/37(73%);轻链型:cκ链1/5(20%);cλ链:4/5(80%);不分泌型:cκ链1/3(33%);cλ链:2/3(67%).结论用流式细胞术分析多发性骨髓瘤的细胞免疫表型及胞浆轻链的表达对骨髓瘤的临床诊断有很大的帮助,特别是对不分泌型的骨髓瘤诊断的临床价值更大.【期刊名称】《中国实验诊断学》【年(卷),期】2013(017)006【总页数】4页(P1068-1071)【关键词】多发性骨髓瘤;免疫表型;胞浆轻链;流式细胞术【作者】朱杰;赵成艳;王敏;高艳飞;常青燕【作者单位】大连医科大学第二临床学院,检验科,辽宁,大连116027;大连医科大学第二临床学院,检验科,辽宁,大连116027;大连医科大学第二临床学院,检验科,辽宁,大连116027;辽河油田第二医院,检验科,辽宁,盘锦,124000;大连市第六人民医院,药剂科,辽宁,大连116021【正文语种】中文【中图分类】R733.3多发性骨髓瘤(multiple myeloma,MM)是以克隆性恶性浆细胞(骨髓瘤细胞)在骨髓中异常增殖,并伴有单克隆免疫球蛋白(monoclonal immunoglobulin)增多为特征的疾病[1],其发病机制尚不清楚。
特点是单克隆的浆细胞在骨髓中异常增殖(可达骨髓内细胞总数的90%),破坏骨髓造血功能并分泌单克隆免疫球蛋白或或其多肽链亚单位(如轻链,light chain,L),并通过多种机制产生临床症状及体征。
多发性骨髓瘤多发于中老年人,临床表现多种多样,主要表现为骨髓瘤细胞增生、浸润和破坏骨组织及髓外其他组织,出现骨痛、病理性骨折、贫血、出血,以及骨髓瘤细胞产生大量单克隆免疫球蛋白而出现感染、高钙血症、肾脏病变、高粘滞血症、淀粉样变等,尤其在疾病早期,表现无特异性,极易漏诊和误诊,延误治疗、错误治疗增加患者痛苦。
国内一般通过三色流式细胞术来对MM患者的骨髓细胞进行免疫表型特点的研究,而本实验是通过四色流式细胞术对其进行免疫表型分析,以期望为MM的诊断提供高可靠的依据和方法。
1 材料与方法1.1 研究对象样本来源:2011年1月至2011年12月大连医科大学附属第二医院住院MM患者45例,其中女性12例,男性33例,中位年龄60岁;均为初诊患者,骨髓细胞学检查瘤细胞占(15-95%),其中分泌型为37例(IgG型为27例,IgA型为10例)轻链型为5例(λ链型4例,κ链型1例),不分泌型3例。
1.2 仪器流式细胞仪:FACSCalibur美国BD公司。
1.3 试剂CD38-FITC/CD56-PE/CD19-Percp、 CD138-PE、CD45-APC、κ-FITC/λ-PE/ CD19-Percp、κ-FITC/λ-PE、IgG2a-FITC、IgG1-PE,溶血素、破膜剂,以上试剂均购自美国BD公司。
1.4 标本的采集无菌操作抽取0.2ml骨髓液涂片作显微镜形态学检查。
另抽取2ml置于EDTA-K2抗凝血常规管作免疫分型,6h内完成检验。
1.5 标本的处理骨髓涂片行瑞氏-吉姆萨染色,显微镜下观察并分类计数200个有核细胞。
抗凝的骨髓液l ml,加3 ml PBS液,混匀后,在水平离心机上离心(1 500r/min,5min),弃去上清液,加1ml PBS液,计数白细胞数,调节至5×106/ml,制成细胞悬液备用。
1.6 实验方法1.6.1 胞膜的标记及胞浆内轻链的标记(1)胞膜的标记:每管100μl细胞悬液分别加入(IgG2a-FITC、IgG1-PE、CD45-APC)、(CD38-FITC /CD56-PE/CD19-Percp、 CD45-APC )、(CD138-PE、CD45-APC)、(κ-FITC/λ-PE/ CD19-Percp、CD45-APC)各20μl,混匀避光15min,加配置好的溶血素2ml,避光10min,在水平离心机上离心(1 500r/min,5min),弃去上清液,加1ml PBS液,混匀备用。
(2)胞浆内轻链的标记:取两只试管,每管100 μl细胞悬液分别加入 CD45-APC 20μl,避光15 min,再加入破膜剂A液100μl,避光10min,加溶血素2ml,避光10min,在水平离心机上离心(1 500 r/min,5min),弃去上清液,加入溶血素B液50μl,分别加入(IgG2a-FITC、IgG1-PE)、(κ-FITC/λ-PE),避光15min,加2ml PBS洗涤,在水平离心机上离心(1 500r/min,5min),弃去上清液,加1ml PBS液,混匀备用。
1.6.2 流式细胞仪测定用荧光微球校准仪器及补偿后,用Cellquset软件收取10000个细胞,通过CD45/SSC和CD38/CD56联合设门,确定瘤细胞的位置及抗原表达情况。
1.7 数据分析每个抗体阳性率>20%为阳性,反之阴性。
2 结果2.1 免疫表型的检测结果每例标本先在CD38/CD56图中确定瘤细胞(CD38+CD56+或 CD38+CD56-细胞群),然后在CD45/SSC图中标记其瘤细胞位置,并根据此圈定瘤细胞群并设门,为以后的各图分析做好准备,其瘤细胞比率占10.56%-75.45%,平均35.23%。
见图1和图2、图3和图4。
图1 中R1群为CD38+CD56+细胞群,在图2中(CD45/SSC)表现为R3的位置为CD45-。
图3R1群为CD38+CD56-细胞群,在CD45/SSC图4中表现为R3的位置为CD45-。
2.2 多发性骨髓瘤瘤细胞免疫表型及胞浆轻链表达见表1。
其中轻链型胞浆内轻链的表达类型与血清蛋白电泳表达的完全一致。
表1 多发性骨髓瘤细胞免疫表型及胞浆轻链的表达分型例数 CD38+CD56+CD19-CD45(%)CD38+CD56-CD19-CD45-(%)CD138+(%)CD19+(%)κ链、λ链(%)胞浆轻链(cκ链)(%)胞浆轻链(cλ链)(%)分泌型 37 100(37/37)0(0/37)100(37/37)0(0/37)0(0/37)27(10/37)73(27/37)轻链型 5 40(2/5)60(3/5)100(5/5)0(0/5)0(0/5)20(1/5)80(4/5)不分泌型 3 0(0/3)100(3/3)100(3/3)0(0/3)0(0/3)33(1/3)67(2/3)3 讨论关于瘤细胞的比率的问题,在骨髓片中的人工计数和流式细胞仪的计数中,由于留给做流式细胞术的骨髓液中常常混血的程度大于骨髓细胞学的人工计数的骨髓片,而且程度不一,所以无法比较二者的关系。
临床上,诊断多发性骨髓瘤(MM)一般根据骨髓细胞学和应用免疫学方法分析检测血和尿的异常M蛋白及轻链。
然而,有时形态学偏成熟的骨髓瘤细胞与正常的浆细胞在形态上难以区分。
而采用免疫分型法对MM进行分析,是使之有效的方法。
文献报道[2,3]正常的浆细胞表达 CD38+、CD19+、CD138+、CD56-。
我们对45例MM 患者的检测结果表明:典型的骨髓瘤细胞免疫表型为CD45-/±、CD38+、CD56+/-、CD138+、cκ+/-或cλ+/-、CD56+/-,而CD19-。
Van Camp等[4]报道多数(43/55,78%)MM患者有CD56+表达,而正常浆细胞没有CD56的表达。
因此,有的人认为CD56是区分正常与恶性浆细胞的重要标志之一[5]。
我们检测的结果与Van Camp的相似,但CD56+的细胞占(87%,39/45),比报道高。
因此提示,虽然CD56是区分正常与恶性浆细胞的重要标志,CD56阳性有助于MM 的诊断,但CD56阴性不能除外MM的诊断,还应该结合其它特性进行综合分析,这与黄春妮等人[6]的观点一致。
CD19是包括正常浆细胞在内的B细胞系的一个重要标志,但在我们检测的45例MM标本中,无一例细胞具有 CD19+表征,Adam[7],Harada[8],Ely SA[9]也表明CD19在MM中几乎不表达。
因此,应用多参数流式细胞术,根据特定细胞群CD56和CD19表型可以明确MM骨髓中瘤细胞的负荷量。
本文中6例CD56MM中,3例为轻链型,3例为不分泌型,并且临床表现较一致,均是外周血三系减少的病例,那么CD56-是否与疾病的不良过程有关,因本文的病例较少,需要长期的临床观察。
CD38:研究表明CD38是NAD糖基水解酶,与细胞增殖和激活有关。
在人的正常骨髓中,无论是髓系或B淋巴系前体细胞以及成熟的淋巴细胞、单核细胞、粒细胞,CD38均有不同程度的表达,但仅在浆细胞表面可被检测到超强表达,被认为是特异性的浆细胞表面标志[10]。
CD38与多发性骨髓瘤的瘤细胞关系最为密切,常被用作骨髓瘤细胞的鉴定指标,一般认为,CD38在稳定期仍高表达,表明稳定期中虽然患者的临床症状有所改善,骨髓中浆细胞比例恢复正常,但肿瘤克隆细胞仍没有被完全清除[11]。
CD45:即白细胞分化抗原,是单链跨膜糖蛋白,属于蛋白酪氨酸磷酸酶家族的成员,它广泛地存在于除了成熟红细胞和血小板之外所有的造血系细胞表面,在淋巴细胞的发育激活中起重要作用。
其广泛表达于浆细胞表面,而在MM细胞中呈阴性或弱阳性表达。
CD45是近期骨髓瘤免疫表型研究的一个新的热点,CD45设门常被应用到MM的流式免疫分型中,但近年来发现[12]有相当比例的MM病人可监测到CD45高强度表达,而几乎所有的MM患者均含有一小群有增殖活性的浆细胞,此类细胞的表型特点为CD45强阳性,因此目前多结合CD138或CD38等其他表型抗原设门来提高流式免疫分型检测的精确性。