荧光法研究盐酸拓扑替康_盐酸依利替康喜树碱类药物和牛血清白蛋白的相互作用

荧光猝灭法研究α_1受体拮抗剂与牛血清白蛋白的相互作用安普丽;张剑;蒋晔;任淑萌;李珺沬【期刊名称】《华西药学杂志》【年(卷),期】2008(23)1【摘要】目的研究α1受体拮抗剂(盐酸特拉唑嗪、盐酸哌唑嗪、盐酸阿夫唑嗪)与牛血清白蛋白(BSA)的相互作用及机制。

方法用荧光猝灭反应和F rster非辐射能量转移机制。

结果α1受体拮抗剂与BSA间的猝灭过程是静态猝灭过程;求得25℃时与BSA间的结合常数KA分别为1.8×104、2.0×104、2.5×104L.mol-1;结合位点数n分别为1.29、1.14、1.32;结合距离r分别为4.91、4.69、4.71 nm;能量转移效率分别为0.058、0.078、0.085。

结论α1受体拮抗剂与BSA间的主要结合力为静电作用力,与蛋白结合作用机制相似。

【总页数】4页(P37-40)【关键词】盐酸特拉唑嗪;盐酸阿夫唑嗪;盐酸哌唑嗪;荧光猝灭;牛血清白蛋白【作者】安普丽;张剑;蒋晔;任淑萌;李珺沬【作者单位】河北医科大学药学院;河北医科大学科技总公司【正文语种】中文【中图分类】R917;R96【相关文献】1.荧光猝灭法研究大黄酚与牛血清白蛋白的相互作用 [J], 陈小睿;徐沉思;王平;陈瑛;孟宪丽2.荧光猝灭法研究2,6-二(邻甲基苯亚甲基)环己酮与牛血清白蛋白的相互作用 [J], 方强;汤从海;郭明;陈静;孙珊;杨绪红3.荧光猝灭法研究5-甲基-2-苯基-4-(苯氨基-苯亚甲基)吡唑-3(2H)-酮与牛血清白蛋白的相互作用 [J], 王红玲;王翔;杨绪红4.采用荧光猝灭法研究穗花杉双黄酮与牛血清白蛋白的相互作用 [J], 陈科力;赵平5.荧光猝灭法研究二氢槲皮素和二氢杨梅素与牛血清白蛋白的相互作用 [J], 樊超;钟艺青;粟芸;李会娟;吴方评;金苹因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

2006年第64卷化学学报V ol. 64, 2006第7期, 679～685 ACTA CHIMICA SINICA No. 7, 679～685* E-mail: liuyongming100@Received July 21, 2005; revised September 13, 2005; accepted December 6, 2005.680化学学报V ol. 64, 2006数百种新的喜树碱衍生物或类似物, 从中筛选出多种药效好、毒副作用小的抗癌新药. 其中盐酸拓扑替康(Topotecan hydrochloride, 简记为THC)、盐酸依利替康(Irinotecan hydrochloride, 简记为IHC)两种喜树碱类药物在抗癌方面已显示出较好的应用前景[2]. 其结构式见Scheme 1.图式1盐酸拓扑替康和盐酸依利替康的分子结构Scheme 1 Molecular structure of topotecan hydrochloride and irinotecan hydrochloride化学小分子与生物大分子的相互作用是当前生命科学领域经常遇到的主要化学问题之一. 白蛋白是主要的血清蛋白, 具有贮运内源代谢产物和外源药物小分子等重要生理功能. 目前比较关注天然药物与生物大分子的相互作用[3,4]. 本文应用分子荧光法研究了牛血清白蛋白(BSA)与喜树碱类药物的结合反应, 计算了其平衡常数及结合点位, 并根据能量转移机制计算了喜树碱类药物与BSA结合时的作用距离. 同时研究了几种离子对喜树碱类药物与BSA结合作用的影响, 推测了二者之间的主要作用力, 对探讨喜树碱类药物作用机理提供了可资参考的实验数据与理论根据.1 实验部分1.1 仪器和试剂瓦里安CARY Eclipse型荧光光度计; 日立U-3400型UV-Vis分光光度计.牛血清白蛋白(BSA, 北京军区兽医防治中心生物工程研究室, 纯度＞98%, 分子量68000), 加蒸馏水配制成1.00 mg/mL储备溶液, 置于1～4 ℃冰箱中保存. 盐酸拓扑替康(C23H23N3O5•HCl, 457.61), 盐酸依利替康(C33H38N4O6•HCl, 622.85)由成都力智天成科技有限公司提供, 用蒸馏水配制成1.00×10－4 mol/L的溶液, 暗室中常温保存. KCl, CaCl2, FeCl3, ZnCl2, CuCl2溶液浓度均为1.00×10－4 mol/L.实验用水为蒸馏水, 其余试剂均为分析纯或化学纯.1.2 实验方法移取1.00 mg/mL的牛血清白蛋白0.2 mL 于10 mL的比色管中, 依次加入一定量1.00×10－4 mol/L的盐酸拓扑替康溶液, 0.5 mL pH＝7.4的Tris-HCl缓冲溶液,以蒸馏水定容至刻度, 在瓦里安CARY Eclipse型荧光光度计上以1 cm石英比色皿测定荧光强度, 狭缝宽为5nm, λex为225 nm, λem为345 nm.分别加入KCl, CaCl2, FeCl3, ZnCl2, CuCl2溶液测定金属离子对喜树碱类药物猝灭BSA荧光的影响.移取1 mL 1.00×10－4 mol/L的盐酸拓扑替康于10mL比色管中, 加入0.5 mL pH＝7.4的Tris-HCl缓冲溶液, 以蒸馏水定容至刻度, 在日立3400型UV-Vis分光光度计上进行吸光度测定.用相同实验方法测定了盐酸依利替康与牛血清白蛋白的相互作用.2 结果与讨论2.1 喜树碱类药物与牛血清白蛋白的相互结合反应蛋白质中由于色氨酸、酪氨酸和苯丙氨酸的存在,使其具有内源荧光(牛血清白蛋白λex＝225 nm, λem＝345 nm). 随着喜树碱类药物浓度的增加, 白蛋白的内源荧光强度有规律地降低, 且激发峰与发射峰的峰位与峰形均不变, 如图1所示, 说明喜树碱类药物对牛血清白蛋白的荧光有猝灭作用.比较不同温度时BSA及其与两种喜数碱类药物相互作用体系的荧光强度, 可以发现, 同一体系的相对荧光强度均随温度的升高而降低. 这是由于温度升高, 使BSA分子间或BSA与两种喜数碱类药物分子间碰撞加剧, 从而部分猝灭体系的荧光.温度一定时, 引起BSA荧光猝灭的原因可能有动态猝灭和(或)静态猝灭. 动态猝灭是一种能量转移或电子转移过程, 不影响蛋白质的结构和生理活性; 静态猝灭则是由于发生了配合作用, 通常是产生了不发荧光的配合物, 对蛋白质的二级结构可产生影响, 并可影响其生理活性. 荧光猝灭符合下式[3]:F0/F＝1＋K[Q] (1)式中, F0是猝灭剂不存在时的荧光强度, F为加入猝灭剂后的荧光强度, K为猝灭常数, [Q]为猝灭剂浓度. 根据式(1), 对于单一的动态猝灭或静态猝灭过程, 以荧光分子的荧光强度变化F0/F对猝灭剂浓度[Q]作图应为直线关系, 直线斜率代表荧光猝灭过程猝灭常数K.No. 7李桂芝等：荧光法研究盐酸拓扑替康、盐酸依利替康喜树碱类药物和牛血清白蛋白的相互作用681图1 喜数碱类药物对牛血清白蛋白的荧光猝灭作用Figure 1 The effect of camptothecin derivatives on fluorescence spectra of BSA(a) 25 ℃; (b) 37 ℃. λex /λem ＝225 nm/345 nm; c (BSA): 3×10－7 mol/L in all cases; 105c (topotecan hydrochloride)/(mol•L －1), from 1 to 11: 0, 0.1, 0.2, 0.3, 0.4, 0.5,0.6, 0.7, 0.8, 0.9, 1.0; 105c (irinotecan hydrochloride)/(mol•L －1), from 1 to 11: 0, 0.2, 0.4, 0.8, 1.0, 1.2, 1.4, 1.6, 1.8, 2.0实验测定了BSA 的荧光强度F 0/F 随喜树碱类衍生物浓度的变化, 结果见Stern-Volmer 曲线(图2). 随着喜树碱类药物浓度的增加, F 0/F 逐渐增大, 且二者呈良好线性关系, 由Stern-Volmer 曲线拟合得到的Stern-Volmer 方程和猝灭常数, 结果列于表1. 由于生物大分子的最大动态猝灭过程的猝灭常数 K ＜100 L/mol, 因此, 对于猝灭常数大于100 L/mol 的荧光猝灭过程不可能是动态猝灭而只能是静态猝灭过 程[5].由表1可以看出, 猝灭常数比荧光动态猝灭过程猝表1 喜树碱类药物对牛血清白蛋白猝灭的Stern-Volmer 方程与猝灭常数Table 1 The Stern-Volmer equations of BSA quenched by camptothecin derivativesPharmaceutical T /℃ F 0/F ～105c equationK /(L•mol －1)25 y ＝0.9200x ＋0.9587 (R 2＝0.9985) 9.2000×104 Topotecan hydrochloride 37 y ＝1.1546x ＋1.0330 (R 2＝0.9895) 1.1546×105 25 y ＝1.1403x ＋0.8494 (R 2＝0.9926) 1.1403×105 Irinotecan hydrochloride37y ＝1.0619x ＋0.8796 (R 2＝0.9925) 1.0619×105682化学学报V ol. 64, 2006图2 喜树碱类药物对牛血清白蛋白猝灭的Stern-Volmer图Figure 2The Stern-Volmer curves of BSA quenched by camp-tothecin derivativesc(BSA): 3.0×10－7 mol/L in all cases. (a) Topotecan hydrochloride; (b) iri-notecan hydrochloride灭常数大2～3个数量级, 所以猝灭不是由于喜树碱类药物对BSA动态碰撞引起的动态猝灭, 而是由于喜树碱类药物与BSA形成了配合物引起的静态猝灭. 盐酸依利替康在37 ℃时的猝灭常数比室温时小, 进一步说明了该过程是静态猝灭过程. 而在37 ℃时盐酸拓扑替康对BSA的猝灭常数比室温时略大, 这可能是由于盐酸拓扑替康水溶性较好, 在37 ℃时存在部分动态猝灭[6].2.2 求算喜树碱类药物与BSA的结合数n、结合平衡常数K0对于静态猝灭, 荧光强度与猝灭剂的关系由荧光分子与猝灭剂之间的结合平衡常数表达式推导求出[7].设生物大分子B有n个相同且独立的结合点位, 则与喜树碱类药物间的猝灭反应可表示为Q B Q B nn＋(2) 平衡常数K0为K0＝[Q n B]/[Q]n[B] (3) 式中[B]是游离荧光体浓度, [Q]是猝灭剂浓度, [Q n B]是配合物浓度, 若荧光体总浓度为[B0], 则[B0]＝[Q n B]＋[B], 当[Q]>>[B0]时, 以猝灭剂的起始浓度代替其平衡浓度n 在静态猝灭中, 荧光体系的荧光强度与其游离浓度呈正比(所生成的配合物是非荧光性的)[B]/[B0]＝F/F0 (5)由(4)和(5)可得lg[(F0－F)/F]＝lg K0＋n lg[Q] (6)喜树碱类药物在345 nm没有荧光, 其与BSA的结合物也没有荧光, 可以通过上述推导的方法, 计算平衡常数及结合点位. 在实验中我们所用的猝灭剂, 其中盐酸拓扑替康浓度最小的为BSA浓度的3.35倍, 最大的为33.5倍; 而盐酸依利替康浓度最小的为BSA浓度的6.7倍, 最大的为67倍. 以猝灭剂的起始浓度代替其平衡浓度进行计算是合理的. 由图1统一读取225 nm/345nm处的荧光强度, 按式(6)进行数据处理并作图3.图3lg[(F0－F)/F]与lg[Q]关系曲线Figure 3 Plots of lg[(F0－F)/F] vs. lg[Q][Q]＝c(Pharmaceutical); F0 is fluorescence intensity on [Q]＝0;c(BSA):3.0×10－7 mol/L in all cases. (a) Topotecan hydrochloride; (b) irinotecanhydrochloride由lg[(F0－F)/F]－lg[Q]曲线拟合得到的方程、平衡常数与结合数, 结果列于表2. BSA与喜树碱类药物的结合数n均等于1, 说明每一个BSA分子与一个药物分子结合形成配合物.从表2得出, 当温度相同时, THC与BSA的结合平衡常数K0大于IHC. 这是由于THC的水溶性和极性比IHC强, 其与BSA 的极性基团之间的偶极-偶极作用比No. 7李桂芝等：荧光法研究盐酸拓扑替康、盐酸依利替康喜树碱类药物和牛血清白蛋白的相互作用683IHC 强, 因此其结合作用亦较强. 比较不同温度时THC 及IHC 与BSA 的平衡常数K 0 的变化可以发现, 温度升高平衡常数K 0 均减小, 但变化幅度不大. 这可以理解为当温度升高, 更有利于THC 及IHC 与BSA 的结合产物的离解, 使平衡常数K 0减小; 而THC 及IHC 与BSA 的结合同时存在疏水作用, 即THC 及IHC 进入BSA 的疏水腔中, 因此温度的变化对其与BSA 的结合作用影响较小. 由此得出药物分子与BSA 的作用是复杂的, 既有电荷吸引(或偶极-偶极)作用, 亦有疏水作用. 2.3 喜树碱类药物和BSA 作用距离计算对于药物分子与血清白蛋白结合形成配合物, 根据偶极-偶极非辐射能量转移理论即Förster 理论[5,8], 可以求出结合位置与蛋白质分子中发荧光基团之间的距离, 距离越小, 药物分子越有利于被蛋白质存储与转运, 越能发挥其药理作用. 能量转移效率E 与给体-受体间的距离r 的关系为:E ＝1/[1＋(r /R 0)6](7)能量转移的效率(E )为50%的临界距离R 0(福斯特距离)为60R ＝8.8×10－25(K 2n －4 ΦD J ) (8)式中, K 为供体受体各项随机分布的取向因子, n 为介质的折射指数, ΦD 为给体的荧光量子产率, J 表示供体的发射光谱与受体的吸收光谱二者重叠积分.4D ΑD ()()/()v v v J F v F v v ε∆∆∑∑－＝ (9)F D (v )为供体在v 至v ＋d v 波数间隔内的校正荧光强度, 荧光总强度归一化为1; εA (v )为受体在波数v 的摩尔吸光系数. 能量转移效率E 可用式(10)计算.E ＝1－F /F 0(10)只要得到E , K 2和n 并通过测定光谱求出积分J , 就可以计算得到R 0与r . 牛血清白蛋白的荧光光谱图和喜树碱类药物的吸收光谱图如图4.图4 BSA 的荧光光谱(1)与喜树碱类药物的吸收光谱(2)Figure 4 The fluorescence emission spectra of BSA (1) and the absorption spectra of camptothecin derivatives (2)c (BSA)＝1×10－5mol/L, c (topotecan hydrochloride)＝1×10－5mol/L;c (BSA)＝2×10－5mol/L, c (irinotecan hydrochloride)＝2×10－5mol/L. (a) Topotecan hydrochloride; (b) irinotecan hydrochloride将光谱重叠部分分割成极小的矩形, 通过式(9)求得光谱的重叠积分J . 上述实验条件下, 供体受体各项随机分布的取向因子平均值K 2＝2/3, n (折射指数)取水和有机物平均值n ＝1.336, ΦD ＝0.15[5], 将上述数值代入式(8)求得R 0; 再通过喜树碱类药物与BSA 物质的量比为1∶1时配合物的荧光强度, 通过(10)式计算得到能量转移效率E ; 经式(7)求得喜树碱类药物距色氨酸残基最短距离r . J , R 0, E 和r 的数值列于表3.表2 由图3曲线拟合得到的方程、结合平衡常数K 0和结合数n Table 2 Equations, K 0 and n obtained by fitting the curves in Figure 3Pharmaceutical T /℃ lg[(F 0－F )/F ]～lg[Q] equation K 0/(L•mol －1)n25 y ＝1.1850x ＋5.8884 (R 2＝0.9965) 7.73×105 1.1850 Topotecan hydrochloride37 y ＝1.1762x ＋5.8427 (R 2＝0.9928) 6.96×105 1.1762 25 y ＝1.1385x ＋5.6752 (R 2＝0.9977) 4.73×105 1.1385 Irinotccan hydrochloride37y ＝1.1286x ＋5.6040 (R 2＝0.9928) 4.02×105 1.1286684化学学报V ol. 64, 2006表3由图4得到的重叠积分J, 能量转移效率E, R0和空间距离rTable 3 J, E, R0and r of pharmaceutical-BSA systems ob-tained from Figure 4Pharmaceutical J/(cm3•L•mol－1) E/% R0/nm r/nm Topotecan hydrochloride 3.6031×10－140.26 3.16 3.75 Irinotecan hydrochloride 3.3008×10－140.51 3.11 3.08在实验条件下, BSA的荧光主要来自第212位的色氨酸残基, 该残基位于BSA的疏水腔内, 所求得的r值为结合部位与该残基之间的距离. 实验表明THC的水溶性较IHC的水溶性强, 化学极性THC亦强于IHC. THC与IHC相比较, 较难进入BSA的疏水腔内, 因此其结合距离大于IHC.2.4 共存离子对喜书碱类药物与牛血清白蛋白相互结合反应的影响人体内含有许多微量元素, 它们共同参与了人体的各项生理活动, K＋, Ca2＋, Fe3＋, Zn2＋, Cu2＋与人类的生存密切相关, 深入研究它们的溶存状态对阐明无机离子在体内的生化、生理作用, 以及它们对各种物质间的结合、储存、转运、吸收、代谢等的影响均具有重要意义. 在本实验中, 将上述五种离子(0.5 mL 1.00×10－4 mol• L–1)分别加入5个盛有等量BSA溶液的10 mL比色管后, BSA的激发峰与发射峰的波长均无改变, 荧光强度被不同程度地猝灭, 其荧光强度分别为Cu2＋ (70.406), Fe3＋ (117.831), Zn2＋ (136.646), K＋ (167.535), Ca2＋ (169.870); 五种离子对BSA猝灭能力的大小顺序为Cu2＋＞Fe3＋＞Zn2＋＞K＋＞Ca2＋. 同时, 本实验还考察了25 ℃时该五种离子(0.5 mL 1.00×10－4 mol•L–1)对喜树碱类药物与牛血清白蛋白结合反应的影响, 得到了猝灭过程的猝灭常数K和平衡常数K0 , 其数值列于表4.由表4和表2可以看出, 在25 ℃时, 金属离子的加入均减弱THC与BSA的结合作用而增强IHC与BSA 的作用. 金属离子(特别是Fe3＋)与THC之间的络合作用(或静电结合作用)较强, 减小了药物与BSA的结合常数; 而IHC与金属离子之间的作用力较弱, 金属离子对IHC猝灭BSA的影响小, 且金属离子的协同猝灭作用使得结合常数增大[9]. 这一推断与2.3节所述THC的极性大于IHC及其二者与BSA的结合作用距离THC大于IHC, 即THC较IHC难进入BSA的疏水腔内的实验结果一致. 对于THC, 金属离子的加入减小了结合作用, 缩短了药物在血浆中的贮运时间, 增加了药物的最大作用强度, 这对希望短期提高药物的临床治疗是有效的. 而IHC则相反.2.5 BSA与喜树碱类药物作用力的推测药物与生物大分子之间的作用力包括氢键、van der Waals力、静电引力、疏水作用力等, 药物不同, 与蛋白质作用力类型也不同. 在配合物的形成过程中, 热力学关系为:G∆ ＝－RT ln K0＝H∆ －T S∆0,20,11212ln(/)RT T K KHT T∆＝－H GST∆∆∆－＝式中G∆ 为反应的标准摩尔吉布斯自由能变, H∆ 为焓变, S∆ 为熵变. 当温度变化不大时, 结合反应的焓变H∆ 可看成一个常数, 根据热力学公式可以得到结合反应的G∆ , H∆ , S∆ 等热力学函数的变化值, 列于表5.两种喜树碱类药物与BSA结合过程的G∆ ＜0, 表明其作用过程是一个自由能降低的自发分子作用过程. 喜树碱类药物扦插到BSA分子的疏水腔内部以及由药物分子引发的BSA分子构象改变, 都可使部分结合水分子得以释放, 故S∆ ＞0. 而H∆ ＜T S∆ , 即H∆ 对G∆ 的贡献相对较小, 所以两种喜树碱类药物与BSA的自发分子作用过程主要是熵增加所驱动的.表4 25 ℃时共存离子对荧光猝灭过程常数的影响Table 4 The effect of some coexisting ions on the constants of the fluorescence quenching process at 25 ℃Topotecan hydrochloride Irinotecan hydrochlorideIonK/(L•mol－1) K0/(L•mol－1) K/(L•mol－1) K0/(L•mol－1) Ca2＋ 9.144×104 9.120×104 1.213×105 1.760×106 K＋ 8.652×104 7.890×104 1.062×105 5.750×105 Zn2＋ 9.730×104 2.610×105 1.636×105 2.150×106 Fe3＋ 8.856×104 3.830×104 1.277×105 6.420×105 Cu2＋ 1.057×105 4.700×105 1.369×105 7.090×105No. 7李桂芝等：荧光法研究盐酸拓扑替康、盐酸依利替康喜树碱类药物和牛血清白蛋白的相互作用685表5 药物-BSA 结合过程的热力学参数Table 5 Thermodynamic parameters of pharmaceutical-BSA binding procedurePharmaceutical T /℃1/(kJ mol )H ∆ －1/(kJ mol )G ∆ －1/(J mol K )S ∆ －－１25 －6.72 －33.4 89.5 Topotecan hydrochloride37 －6.72 －34.7 90.2 25 －10.4 －32.4 73.8 Irinotecan hydrochloride37－10.4－33.273.5在熵驱动下, 喜树碱类药物进入BSA 分子的疏水腔内以疏水作用相结合. 同时, THC 和IHC 分子中存在羟基和羰基等强极性基团, 使其与BSA 分子间除疏水作用外, 必然存在偶极-偶极相互作用[4]. 这与上述2.2节中由表2得出的推论一致.References1 Hsiang, Y. 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Fluorescence Analytical Methods , Science Press, Bei-jing, 1990, p. 122 (in Chinese).(陈国珍, 黄贤智, 许金钩, 郑朱梓, 王尊本, 荧光分析法, 科学出版社, 北京, 1990, p. 122.)9Xu, W.-X.; Pang, Y.-H.; Shuang, S.-M. Chin . J . Anal . Chem . 2004, 32(12), 1571 (in Chinese).(徐文祥, 庞月红, 双少敏, 分析化学, 2004, 32(12), 1571.)(A0507211 LI, L. T.; LING , J.)。

盐酸拓扑替康与人血清白蛋白的相互作用及分子模拟刘永明;李桂芝;宋万坤;王进军【期刊名称】《物理化学学报》【年(卷),期】2006(22)12【摘要】用荧光光谱法、分光光度法研究了盐酸拓扑替康(topotecan hydrochloride,简记为THC)与人血清白蛋白(humah serum albumins,HSA)的相互结合反应.计算了反应的结合常数、结合位点数和热力学常数.盐酸拓扑替康在人血清白蛋白上的结合位置与色氨酸残基间的距离为3.63 nm.分子模型研究表明,盐酸拓扑替康与人血清白蛋白的亚结构域IIA结合,二者间的作用力主要为疏水作用,此外,蛋白质的丙氨酸(Ala-291)残基和天冬氨酸(Asp-256)残基与盐酸拓扑替康之间还存在氢键作用力.【总页数】4页(P1456-1459)【作者】刘永明;李桂芝;宋万坤;王进军【作者单位】烟台大学化学学院,山东,烟台,264005;烟台大学化学学院,山东,烟台,264005;烟台大学化学学院,山东,烟台,264005;烟台大学化学学院,山东,烟台,264005【正文语种】中文【中图分类】O6【相关文献】1.基于光谱法与分子模拟技术的双氢青篙素与人血清白蛋白的相互作用研究 [J], 何丽君;霍彩霞;孙看军;王永红;李生英;2.多光谱法和分子模拟技术研究氟罗沙星与人血清白蛋白的相互作用 [J], 董澄宇;徐佳;周珊珊;刘颖3.多光谱技术结合分子模拟研究头孢唑林和头孢曲松与人血清白蛋白的相互作用[J], 王艺润;黄芳;刘颖4.多光谱和分子模拟技术研究全氟十二酸与人血清白蛋白的相互作用 [J], 胡涛英;王艺润;周珊珊;刘颖5.基于光谱法与分子模拟技术的双氢青篙素与人血清白蛋白的相互作用研究 [J], 何丽君;霍彩霞;孙看军;王永红;李生英因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

荧光法研究茶碱与牛血清白蛋白的相互作用李改仙;李建晴;卫艳丽【摘要】应用荧光和紫外光谱法研究了茶碱(TH)与牛血清白蛋白(BSA)相互作用的光谱特性.测定了TH与BSA在10℃、28℃和40℃温度下的结合常数KΛ分别为1.96×104L/mol、3.80×104L/mol,1.57×105 L/mol,结合位点数n分别为1.0,1.1,1.2.实验表明:TH对BSA内源荧光的猝灭机理主要为静态猝灭;计算得到热力学参数H为26.229 KJ/mol,S为174.809J/(mol·K).TH主要以疏水作用力与BSA相互作用;同步荧光技术研究表明,BSA的荧光主要源于TH色氨酸残基,表明TH对BSA的构象有影响.【期刊名称】《海南师范大学学报（自然科学版）》【年(卷),期】2010(023)004【总页数】4页(P396-399)【关键词】茶碱;牛血清白蛋白;荧光光谱法;紫外光谱;静态猝灭【作者】李改仙;李建晴;卫艳丽【作者单位】晋中学院化学,化工学院,山西,晋中,030600;晋中学院化学,化工学院,山西,晋中,030600;山西大学,环境科学与工程研究中心,山西,太原,030006【正文语种】中文【中图分类】O657.31茶碱（Theophylline，TH）属黄嘌呤甲基衍生物，是目前常用的平喘药之一，具有较强和持久的利尿作用，以及扩张冠状动脉、兴奋心肌的作用[1].血清白蛋白是血浆中含量最丰富的蛋白质，具有贮运内源代谢产物和外源药物小分子等重要生理功能.因此进行蛋白质的定量测定，研究蛋白质与其他物质的相互作用具有十分重要的意义[2-3].本文运用荧光光谱、紫外可见光谱研究了茶碱与牛血清白蛋白（BSA）的相互作用，基于荧光猝灭现象计算了TH与BSA的表观结合常数KA 和结合位点数n，从药物小分子结构角度讨论了药物-蛋白质作用规律，进一步对黄嘌呤甲基衍生物类药物与BSA作用机理的研究提供了实验数据.1.1 仪器与试剂CARY Eclipse荧光分光光度计（自带恒温装置，美国VARIAN公司）；pHS-2ST 数显酸度计（上海天达仪器有限公司）.茶碱（SIGMA公司，配成1.0×10-3mol/L的储备液，使用时稀释），牛血清白蛋白（BSA，上海伯奥生物科技有限公司，配成1.0×10-4mol/L的储备液，使用时适当稀释），Britton-Robison缓冲溶液.其余药品均为分析纯.实验用水为亚沸二次蒸馏水.所用溶液于4℃下保存.1.2 实验方法1.2.1 TH-BSA的荧光光谱10 mL比色管中依次加入1.0 mLBSA储备液、不同量的TH储备液、2mLpH=7.4的B-R缓冲溶液，蒸馏水定容，室温下放置30 min.在λex/λem=280/350 nm处扫描BSA的荧光光谱及BSA在TH作用下的荧光猝灭光谱.在Δλ=15 nm和Δλ=60 nm扫描酪氨酸和色氨酸的同步荧光光谱.1 cm比色皿，激发和发射狭缝均为5.0 nm.1.2.2 TH-BSA的紫外光谱10 mL比色管中依次加入0.5 mLTH储备液，不同量的BSA储备液，3.0 mL pH=7.4的B-R缓冲溶液，蒸馏水定容，以与试样中BSA浓度相对应的BSA溶液作参比，放置30 min.在室温下，考察不同浓度BSA对TH紫外吸收光谱的影响.2.1 TH-BSA的荧光光谱选用pH=7.4的酸度条件，固定BSA的浓度，改变TH的浓度，测得含不同浓度TH时BSA荧光光谱如图1.由图1可见，随着TH的浓度的增加，BSA的荧光逐步被猝灭.BSA的峰形变化不大，发射峰的位置λem没有显著移动，表明TH与BSA发生了作用.2.2 BSA的荧光猝灭机理及猝灭常数的确定引起BSA荧光猝灭有静态猝灭和动态猝灭[4]，动态猝灭符合Stern-Volmer方程：F0/F=1+KSV[Q]=1+Kqτ0[Q].静态猝灭符合Lineweaver-Burk 双倒数方程：1/（F0/F）=1/F0+KD/（F0[Q]）.分别测定10、28、40℃下TH与BSA的荧光猝灭光谱，以F0/F对[Q]作Stern-Volmer曲线.以（F0-F）-1对[Q]-1作Lineweav⁃er-Burk双倒数曲线.其线性回归方程、相关系数r见表1，猝灭常数KSV及解离常数KD见表2.2.3 TH与BSA作用的结合常数KA、结合位点数n[5]假设探针小分子Q与生物大分子B存在n个等同且独立的结合位点，Q与B之间相互作用关系符合Langmuir单分子吸附模型：log（（F0-F）/F）=log⁃KA+nlog[Q].由log((F0-F)/F)对log[Q]作图，由直线截距可得结合常数KA，斜率可求得结合位点数n，不同温度下的结果见表3.2.4 TH与BSA作用方式的热力学研究探针小分子与蛋白质之间的作用力包括氢键作用力，范德华力，静电作用和疏水作用[6].由Gibbs-Helmholtz方程lnK=-ΔH/RT+ΔS/R计算可得其热力学参数进行推断.实验条件下的KA值（表3）所示，以lnK对1/T作图.由直线的斜率和截距可计算出TH与BSA作用的热力学函数，结果见表2.结果表明：TH与BSA之间的作用力主要以疏水作用为主[7].2.5 TH对BSA构象的影响蛋白质在溶液中存在同分异构体，随溶液环境的变化表现出可以逆转的构象.由Δλ=15 nm所得的同步荧光只显示蛋白质酪氨酸残基的荧光.Δλ=60 nm所得的同步荧光只显示蛋白质色氨酸残基的荧光[8].图2、3分别为TH存在时BSA酪氨酸和色氨酸残基的荧光光谱.由于药物分子与BSA的结合，导致BSA的色氨酸残基所处环境的疏水性降低，最大发射波长发生红移.TH存在时酪氨酸残基的发射波长也略有移动.在此实验条件下，BSA的荧光主要来源于色氨酸残基，药物分子的加入引起了BSA构象的变化.2.6 TH与BSA相互作用的紫外光谱法验证研究[9-10]依据实验方法得到TH与不同浓度BSA结合后的紫外吸收光谱图（图4）.BSA与TH的结合常数，可以通过BSA与TH相互作用前后的吸光度值与BSA浓度之间的关系求出：其中A0为BSA不存在时的体系吸光度，A为加入不同量BSA后体系的吸光度. 由图4可见，TH在205nm处的吸收峰均有规律的降低且发生显著红移.说明TH 与BSA形成了配合物.以上述波长处的吸收峰值考察BSA浓度对TH紫外吸收性质的影响.作（A0-A）-1对[BSA]×10-5的Lineweaver-Burk双倒数曲线图，可得KA，结果见表4.2.6共存物质的影响实验在前面的实验条件下，对常见的几种生物体有机物质和共存无机离子的干扰进行了测定，测定以相对误差±5%左右为标准，计算共存物质存在的浓度，结果列于表5.表42种光谱法测得TH-BSA相互作用体系的结合常数、线性回归方程和相关系数r Tab.4 Binding paraments,regression equations and correlation coefficient(r)of the interaction systerm studied by different methods作用体系方法 KA(L/mol) 线性回归方程相关系数r TH-BSA 3.9428×1045.3672×105 FS UVS log（F0-F）/F=1.0655log[Q]+4.5958（A0-A）-1=1.5197[Q]-1+0.861 0.9979 0.9965表5 共存物质的影响Tab.5 Influence ofcoexisting substances（CTH=1.0×10-5mol/L）coexisting substances Cu2+ Fe3+ Pb2+ Al3+ Zn2+ Ca2+Mg2+ Ni2+ DL-半光氨酸柠檬酸 L-苯丙氨酸 DL-苹果酸C共存(×10-5mol/L) 0.6 0.5 0.8 6.8 13.7 110 2400 1.8 3.65 860 15.6 820结果表明：由于BSA可与许多金属离子发生作用，各种金属离子与BSA的结合部位不同，结合力也有差别.金属离子的存在会影响TH与蛋白的结合能力，即影响TH与BSA的结合常数.【相关文献】[1]国家医药管理总局中草药情报中心站.植物有效成分手册[M].北京:人民卫生出版社,1986:16-40.[2]景顺杰,李建晴,王淑芬,等.6-糠氨基嘌呤与牛血清白蛋白相互作用的研究[J].分析科学学报,2008,24(2):181-184.[3]李建晴,朱海斌,卫艳丽.可可碱与牛血清白蛋白作用光谱特性的研究[J].分析科学学报,2009,25(3):301-304.[4]许金钩,王尊本.荧光分析法[M].3版.科学出版社,2006:64-72.[5]Alain M,Mkhel B,Michel D.How to Illustrate Li⁃gand-Protein Binding in a Class Experiment[J].Journal of Chemical Education,1986,63(4):365-366.[6]Orwcora J,Bochs B.In silico prediction of drug-binding strengths to human serum albumin[J].J Chromatogr B.Biomed Appl.,1996,677(1):1-28.[7]郭兴家,李晓舟,徐淑坤,等.荧光猝灭法研究胆红素与牛血清白蛋白的相互作用[J].分析试验室,2007,26(4):11-15.[8]Dockal M,Carter D C,Ruker F.Conformational Tran⁃sitions of the Three Recombinant Domains of Human Se⁃rum Albumin Depending on pH[J].Biol Chem,2000,275:3042-3050.[9]谭韬,黄锐,夏之宁.改进荧光光谱法研究药物与血清白蛋白的相互作用[J].分析化学,2007,35(10):1415-1420.[10]刘丽珍,郑思宁,彭亦如.2,10,18,26-四磺酸基酞菁锌的合成及其与牛血清白蛋白的作用[J].分子科学学报,2005,21(5):156-62.。

荧光光谱法研究盐酸青藤碱与牛血清白蛋白的相互作用尚永辉;杨婷;李进【期刊名称】《咸阳师范学院学报》【年(卷),期】2010(25)6【摘要】采用荧光光谱技术研究了在pH7.40的Tris-HC1缓冲介质中盐酸青藤碱与牛血清白蛋白(BSA)的相互作用.实验发现:盐酸青藤碱对BSA的荧光具有较强的猝灭作用,根据不同温度下盐酸青藤碱猝灭BSA荧光过程的Stem-Volmer方程,得到盐酸青藤碱对BSA的荧光猝灭属于静态猝灭过程:根据Ftirster非辐射能量转移理论计算出盐酸青藤碱与BSA间的结合距离r=2.22 nm:根据结合过程的热力学数据表明二者主要靠氢键和范德华力结合;另外采用同步荧光光谱技术探讨了盐酸青藤碱对BSA构象的影响.【总页数】4页(P30-33)【作者】尚永辉;杨婷;李进【作者单位】咸阳师范学院化学与化工学院,陕西,咸阳,712000;西北大学分析科学研究所,陕西,西安,710069;咸阳师范学院化学与化工学院,陕西,咸阳,712000;咸阳师范学院化学与化工学院,陕西,咸阳,712000【正文语种】中文【中图分类】O656【相关文献】1.荧光光谱法研究24(R)-拟人参皂苷元DQ与牛血清白蛋白的相互作用 [J], 杨洁;范晓丽;林佳丽;曹旭蓉;赵二劳2.三维荧光光谱法和圆二色谱法研究氨基比林与牛血清白蛋白分子的相互作用 [J], 王晓霞;李松波;马力通;郭贵宝;刘金彦;王正德;闫慧3.牛血清白蛋白与荧光增白剂相互作用的荧光光谱法研究 [J], 潘可亮;李树伟4.光谱法研究Fe^(3+)/Fe^(2+)离子对CS-Fe_3O_4@ZnS:Mn/ZnS磁性荧光复合纳米粒子与牛血清白蛋白相互作用的影响（英文） [J], 彭茂民;夏虹;刘丽5.荧光光谱法研究荧光桃红与牛血清白蛋白的相互作用 [J], 郭彦青;李建晴;卫艳丽;董川因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

孔雀石绿与牛血清白蛋白相互作用的电化学研究郑晶晶;陈毅挺;潘彦;李金凰【摘要】运用微分脉冲伏安法对孔雀石绿(MG)与牛血清白蛋白(BSA)的相互作用进行了研究,考察了两者在不同温度、酸度下的结合常数Kα和结合位点,并实现了其热力学常数的测试.结果表明,MG与BSA之间形成近似1:1的复合物,从而造成MG峰电流的降低,两者之间的结合主要依靠疏水作用力和静电作用力.该研究有利于从分子水平上了解有MG和BSA之间的结合作用,为更进一步了解孔雀石绿的生物代谢机理提供一定的理论参考.【期刊名称】《闽江学院学报》【年(卷),期】2017(038)002【总页数】6页(P60-65)【关键词】孔雀石绿;牛血清蛋白;相互作用;结合常数【作者】郑晶晶;陈毅挺;潘彦;李金凰【作者单位】闽江学院化学与化学工程系,福建福州350108;闽江学院化学与化学工程系,福建福州350108;绿色染整福建省高校工程研究中心,福建福州350108;闽江学院化学与化学工程系,福建福州350108;闽江学院化学与化学工程系,福建福州350108【正文语种】中文【中图分类】O657.1孔雀石绿(Malachite green, MG)属于三苯甲烷类染料，常被应用于纺织业、皮革业、制陶业等[1].特别因其具有杀虫、抗菌等药效，曾被人们大量用于水产养殖中.目前，MG已被确认具有致畸、致癌、致突变等危害.探索MG与蛋白质之间的结合行为，对于了解其在生物体内的作用机制具有一定的意义.血清白蛋白是血浆中含量最丰富的重要载体蛋白，而牛血清白蛋白(bovine serum albumin, BSA)具有和人血清白蛋白(human serum albumin, HSA)相似的结构，因此被广泛用作模型蛋白,研究其与小分子之间的相互作用[2].常用于探究分子与牛血清白蛋白结合作用的方法有分光光度法[3]、荧光光谱法[4]、圆二色光谱法[5]、核磁共振法[6]、毛细管电泳法[7]、电化学法[8-9]等.其中，电化学法由于灵敏度高、检测限低而被用于各种理化常数及相互作用行为的研究.彭贞等[10]曾经使用线性扫描极谱法证明MG能与BSA相互作用形成复合物，但并未对结合行为进行研究.本文采用电化学方法初步研究了MG与BSA 的相互作用，测定了这种作用的结合常数及结合位点数.1.1 仪器与试剂CHI 760D(上海辰华仪器有限公司)；三电极体系：玻碳电极(φ3 mm，上海辰华仪器有限公司)为工作电极,饱和甘汞电极(232型，上海恒誉水分析仪器厂)为参比电极,铂丝电极(1×37 mm，上海辰华仪器有限公司)为辅助电极.孔雀石绿(标准品)购自上海阿拉丁生化科技股份有限公司；牛血清白蛋白(相对分子质量65 000，生化试剂)、三羟甲基氨基甲烷、氢氧化钠购自国药集团化学试剂有限公司；盐酸购自上海成海化学工业有限公司.所有试剂未注明的均为分析纯，实验用水均为去离子水.1.2 实验方法玻碳电极在测定之前，先用 Al2O3悬浊液在麂皮上抛光至镜面，用去离子水冲洗干净，用氮气吹干后置于待测溶液中进行电化学测量.在10 mL的容量瓶中，依次加入MG储备液和BSA储备液，用Tris-HCl缓冲液定容，在水浴恒温振荡器中恒温震荡1 h，取出静置5 min，在最优参数下(脉冲周期为0.04 s、电位增量为0.01 V、采样宽度为0.006 s、振幅为0.22 V、电位范围为0～-0.6 V)进行微分脉冲伏安法扫描.根据加入BSA前后MG峰电流的差值，测得MG与BSA相互作用的结合常数与结合数.2.1 微分脉冲伏安法参数的优化固定MG的浓度为2.0×10-4mol/L，对溶液进行微分脉冲伏安扫描，通过改变脉冲周期、电位增量、采样宽度、振幅、终止电位、起始电位，考察了不同参数对MG峰电流的影响，结果如图1所示.由图1可见，当脉冲周期为0.04 s、电位增量为0.01 V、采样宽度为0.006 s、振幅为0.22 V、电位范围为0～-0.6 V时MG的峰电流最高.2.2 MG与BSA相互作用的微分脉冲伏安研究对MG与BSA二者的反应体系进行了电化学研究，结果如图2所示，MG在-0.24 V附近有一灵敏的不可逆还原峰.当加入BSA后，MG的峰电流明显减弱，峰电位略微发生位移，这说明MG与BSA的结合生成了一种非电活性复合物，二者结合后使得游离的MG浓度降低，从而导致相应的还原峰电流降低.根据加入BSA前后MG溶液所测得的峰电流差值ΔI，可以得到图3的曲线.由文献[11]的方法，假定MG与 BSA 只形成一种简单的化合物 BSA-nMG，即可通过式(1)求出反应中MG与BSA之间的结合常数和结合数.式中ΔI 表示引入 BSA 前后MG峰电流的差值，ΔImax表示的是峰电流的最大差值，n为结合数，β为反应平衡常数，这里相当于结合常数.由图3可得其线性方程为log[ΔI/(ΔImax-ΔI)]=1.357×log[MG]+5.632，因此,结合常数为4.285×105L/mol，结合数为n=1.357≈1.由所得的结合常数及结合位点数可推断MG与BSA之间形成了较强的结合作用，结合位点数为1.BSA的空间结构由3 个结构域组成，每个结构域有2 个亚结构域，以槽口相对的方式形成圆筒状结构，几乎所有疏水性氨基酸残基都包埋在圆筒内部，构成疏水性腔[12-13]，MG易进入蛋白的疏水空腔中，从而使其电活性基团隐藏于BSA 内部导致峰电流的下降，因此MG在BSA 分子上的结合位点可能主要位于BSA 疏水腔内[14].2.3 环境酸度和温度对MG与BSA相互作用的影响为了研究体系环境对MG与BSA相互作用的影响，考察了不同酸度和温度下MG-BSA的结合常数和结合数，结果见表1和表2.由于牛血清白蛋白的pI在4.6～5.8之间，当pH高于5.5后，MG与BSA结合常数和结合位点基本不变，但是与pH 4.6时的数据相比则有所增强，估计是由于此时MG带正电，而BSA带负电，两者之间的静电作用使得结合常数Ka略有上升[15].由表2可见，温度对MG 与BSA 的结合行为有所影响.随着温度的升高，MG与BSA的结合常数呈逐渐降低的趋势，这与MG和BSA由于形成复合物而引起BSA 荧光的静态猝灭现象相符[16].2.4 作用力类型的判定小分子与蛋白质之间的作用力主要包括疏水作用力、静电相互作用、氢键以及范德华力.可以根据反应热力学参数的大小和正负来判断染料分子与蛋白质结合的主要作用力类型.当温度变化不大时, 热力学参数可通过下列公式求得[17]：式中：Ka为结合常数；R为气体常数.以lnK对1/T作图，由所得曲线的斜率和截距可以获得焓变ΔH与熵变ΔS，进而求得反应的自由能ΔG，其结果如表3所示. 根据反应前后的焓变ΔH 和熵变ΔS，可以判断MG与BSA之间的主要作用力类型.ΔH<0，ΔS>0，且ΔS对ΔG的贡献明显大于ΔH对ΔG的贡献(ΔH<TΔS)，因此可以判断MG与BSA的结合主要是熵增加所驱动的，在熵驱动下，MG进入BSA分子主要依靠疏水作用力和静电作用力[18].利用微分脉冲伏安法研究了孔雀石绿与牛血清蛋白的相互作用.实验结果表明，MG 与BSA之间形成近似1∶1的复合物，从而造成孔雀石绿峰电流的降低，两者之间的结合主要依靠疏水作用力和静电作用力.该研究有利于从分子水平上更进一步了解孔雀石绿的生物代谢机理，并提供一定的理论参考.【相关文献】[1] CULP S J, BELAND F A. Malachite green: a toxicological review[J]. International Journalof Toxicology,1996,15(3):219-238.[2] 吴春惠，叶红德，吴德洪，等．荧光光谱法研究新型碳硼烷金属有机衍生物与牛血清白蛋白的相互作用[J]．光谱学与光谱分析，2013，33(1)：120-125.[3] 陈金蓉，刘家琴，罗英，等．大豆黄素解离常数的分光光度法测定[J]．绵阳师范学院学报，2008，27(2)：64-66.[4] 孟丽艳，屈凌波，杨冉，等.紫外吸收光谱和荧光光谱法研究大黄酚与牛血清白蛋白相互作用机制[J].理化检验-化学分册，2009，45(10)：1 169-1 173.[5] 张根成，项尚.2, 4-二氯苯氧乙酸与牛血清白蛋白的相互作用[J].理化检验-化学分册，2010，46(11)：1 241-1 244.[6] 吴丽敏，张美玲，娄依依，等.小檗碱与牛血清白蛋白的相互作用的核磁共振研究[J].分析化学，2011，39(8)：1 223-1 227.[7] 李玉琴，张传港，宗素艳，等.高效毛细管电泳法测定磺胺类药物的离解常数及其制剂的含量[J].药物分析杂志，2008，28(2)：243-246.[8] 陶慧林，徐铭泽，黎舒怀，等.镉离子对三种黄酮小分子与蛋白质相互作用的生物无机化学效应[J]. 理化检验-化学分册，2013，49(10)：1 149-1 154.[9] 曹团武，杨季冬．孔雀石绿与牛血清白蛋白的相互作用[J]．物理化学学报，2008，24(4)：715-719．[10] 彭贞，郑钰琴．孔雀石绿与蛋白质相互作用的电化学行为的研究[J]．化学试剂，2009，31(1)：49-51．[11] CHEN J H, ZHANG J, ZHUANG Q, et al. Electrochemical study of bergenin on a poly[4-(2 -pyridylazo)-resorcinol] modified glassy carbon electrode and its determination in tablets and urine[J]. Talanta,2007,72(5):1 805-1 810.[12] BROWN J R. Structural origins of mammalian albumin[J].FederationProceedings,1976,35(10):2 141-2 144.[13] 黄波，邹国林，杨天鸣．阿霉素与牛血清白蛋白结合作用的研究[J].化学学报，2002，60(10)：1 867-1 671.[14] 郑新宇，妍岩，郑舒艳，等．丹皮酚与牛血清蛋白相互作用的电化学学研究[J]．吉林林业大学学报，2012，34(4)：409-412．[15] 武海，彭丽，都浩来，等．基于蛋白构象变化研究pH值对茜素红与牛血清白蛋白相互作用的影响[J]．分析测试学报，2014，33(4)：475-478．[16] 安道利，李建晴，郭文奎.孔雀石绿与牛血清白蛋白作用的光谱研究[J].化学研究与应用，2008，20(11)：1 410-1 414.[17] 杨曼曼，杨频，张立伟．荧光猝灭和荧光加强理论公式的等效性论证[J]．科学通报，1994，39(1)：31-35．[18] 李桂芝，刘永明，虢新运，等．荧光法研究盐酸拓扑替康、盐酸依利替康喜树碱类药物和牛血清白蛋白的相互作用[J].化学学报，2006，64(7)：679-685．。

光谱法研究羟喜树碱与牛血清白蛋白的相互作用苑莉莉;刘雄;张业中;戴捷【摘要】在模拟人体生理条件下,采用光谱法研究了羟喜树碱(HCPT)与牛血清白蛋白(BSA)的相互作用,计算了不同温度下的结合常数及△Hθ、△Gθ、△Sθ等热力学参数.结果表明,HCPT对BSA的猝灭是由于形成HCPT-BSA复合物而引起的静态猝灭；△Hθ(-35.91 kJ·mol-2)和△Sθ(-24.30 J·mol-1·K-1)的值表明氢键和范德华力在HCPTBSA的结合中起主要作用;圆二色谱和三维荧光光谱表明,在与HCPT结合后,BSA中的α-螺旋含量减少、微环境和二级结构均发生改变.%The interaction between 10-hydroxycamptothecin(HCPT) and bovine serum albumin(BSA) was investigated by spectrometry under simulated physiological conditions. The association constant and the thermo-dynamic parameters ΔH6, ΔG6, ΔS8 at different temperatures were calculated. It was proved that the fluores-cence quenching of BSA by HCPT was a result of the formation of HCPT-BSA complex. The mechanism was a static quenching procedure. The value of ΔHθ( - 35. 91 kJ·mol-1) and AS,( - 24. 30 J ·mol-1 · K-1) indicated that hydrogen bonds and van der Waals interactions were the predominant intermolecular forces in stabilizing the complex. Circular dichroism and three-dimensional fluorescence spectra showed that the a-helical content of BSA decreased, some microenvironment and secondary structure of BSA molecules changed in the presence of HCPT.【期刊名称】《化学与生物工程》【年(卷),期】2012(029)004【总页数】5页(P18-22)【关键词】羟喜树碱;牛血清白蛋白;荧光猝灭;圆二色谱;三维荧光光谱【作者】苑莉莉;刘雄;张业中;戴捷【作者单位】长江大学化学与环境工程学院,湖北荆州 434023;长江大学化学与环境工程学院,湖北荆州 434023;长江大学化学与环境工程学院,湖北荆州 434023;长江大学化学与环境工程学院,湖北荆州 434023【正文语种】中文【中图分类】O657喜树碱(Camptothecin,CPT)是从珙桐科植物喜树的树干、树皮和果实中提取的一种具有抗肿瘤作用的生物碱[1，2]，羟喜树碱(10-Hydroxycamptothecin，HCPT)是将喜树碱基本环A环中9位的-H由-OH取代而成。

盐酸异丙肾上腺素与牛血清白蛋白相互作用刘春叶;卫引茂;苗延青;张缓【期刊名称】《理化检验-化学分册》【年(卷),期】2013(049)001【摘要】采用荧光猝灭法和毛细管区带电泳法研究了盐酸异丙肾上腺素(IH)与牛血清白蛋白(BSA)的相互作用.荧光猝灭法研究表明:IH对BSA有较强的荧光猝灭作用,根据Stern-Volmer方程得到猝灭速率常数(Kq)为2.53×1013L·mol-1·s-1,该荧光猝灭属于静态猝灭.采用位点结合模型公式计算得结合常数为1.72×104L·mol-1,结合位点数n为1;毛细管区带电泳法研究表明:IH与BSA的结合常数为4.07×104L·mol-1,结合位点数n为1.【总页数】4页(P87-90)【作者】刘春叶;卫引茂;苗延青;张缓【作者单位】西安医学院药学院,西安710021;西北大学化学与材料科学学院,西安710025;西安医学院药学院,西安710021;西安医学院药学院,西安710021;西安医学院药学院,西安710021【正文语种】中文【中图分类】O657.8【相关文献】1.多光谱法与分子对接法研究盐酸四环素与牛血清白蛋白的相互作用 [J], 王晓霞;聂智华;李松波;马力通;刘金彦;王正德;闫慧2.盐酸异丙肾上腺素与牛血清蛋白相互作用的光谱研究 [J], 刘春叶;卫引茂;张雪娇;刘勇3.毛细管电泳法对盐酸维拉帕米与牛血清白蛋白相互作用的研究 [J], 张剑;张博;唐一梅;匡元元;刘春叶4.荧光法研究盐酸拓扑替康、盐酸依利替康喜树碱类药物牛血清白蛋白的相互作用[J], 李桂芝;刘永明;虢新运;王进军5.毛细管电泳法研究牛血清白蛋白与盐酸异丙肾上腺素的相互作用 [J], 刘春叶;张雪娇;苗延青;赵灵芝;赵敏因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。