超广谱内酰胺酶(ESBLs)研究进展

超广谱β-内酰胺酶研究进展【摘要】超广谱β-内酰胺酶(extended-spectrum β-lactamases, esbls)是一类主要由革兰氏阴性杆菌产生，表现为对β-内酰胺类抗生素具有高度水解能力的特异性酶。

现阶段产esbls细菌引起的感染已趋于流行性，并且其耐药率逐年增高，为临床治疗带来极大的困难。

本文就近几年超广谱β-内酰胺酶及中药酶抑制作用的研究进展做一综述。

【关键词】esbls；细菌；研究进展【中图分类号】r446.5 【文献标识码】a 【文章编号】1004-7484（2012）08-0571-03the research progress on extended-spectrum β-lactamasesguo wei-hua,ma yong-bin,chen si-min（1. panzhihua central hospital of sichuan, panzhihua 610075, china,;617067）2.pharmacy college，chengdu university of traditional chinese medicine；the ministry of education key laboratory of standardization of chinese herbal medicine；state key laboratory breeding base of systematic research, development and utilization of chinese medicine resources, chengdu 610075, china）【abstract】extended-spectrum is a kind of composed mainlyof gram negative bacillus produces, for the performance of beta lactam antibiotics have a high degree of hydrolysis ability of the specificity of the enzyme, and the production of esbls infections caused by bacteria has become popular and its resistant rate increased year by year, brings great difficulties for clinical treatment. in recent years extended-spectrum review the progress in the research of.【key words】esbls；bacterium；research progreess超广谱β-内酰胺酶(extended-spectrumβ-lactamases,esbls)是一类主要由革兰氏阴性杆菌产生，表现为对β-内酰胺类抗生素有高度水解能力的特异性酶。

超广谱β-内酰胺酶（ESBL）测定作者：陈东科文章来源：《2005细菌耐药性监测培训班》点击数：更新时间：2005/9/19 单纸片扩散法（初筛试验）将0.5麦氏单位的待检菌液涂抹于MH琼脂平板上，稍干后，在琼脂培养基上贴头孢他啶(Ceftazidime,CAZ)、头孢噻肟(Cefotaxime,CTX)、头孢曲松(Ceftriaxone,CRO)、氨曲南(Aztreonam,ATM)、头孢泊肟(Cefprozil,CPD)纸片，置35℃过夜培养，若抑菌环直径CAZ≤22mm、CTX≤27mm、CRO≤25mm、ATM≤27mm、CPD≤22mm时可疑为产ESBLs菌株。

双纸片协同法（初筛试验）将0.5麦氏单位的待检菌液涂抹于MH琼脂平板上，稍干后，把含10μg/片克拉维酸纸片（Clavulanic Acid，CLA）贴于MH平板中央，于克拉维酸纸片周围分别贴上头孢他啶、头孢噻肟、头孢曲松、氨曲南、头孢泊肟纸片（纸片中心距离为20~24mm），置35℃过夜培养，观察有无协同现象，CLA与任何一种ESC（超广谱β-内酰胺类抗生素）有协同现象者可疑为产ESBL菌株。

双纸片协同法（初筛试验）双纸片增效法（确认试验）将0.5麦氏单位的待检菌液涂抹于MH琼脂平板上，稍干后，在琼脂培养基上分别贴头孢他啶/克拉维酸、头孢噻肟/克拉维酸、头孢曲松/克拉维酸、氨曲南/克拉维酸、头孢泊肟/克拉维酸纸片，置35℃过夜培养后量取抑菌环直径，与单纸片平皿对照，若加克拉维酸纸片较未加克拉维酸纸片抑菌环直径≥5mm，即为ESBL阳性。

双纸片增效法（确认试验）（续上）双片增效法（确认试验）（续上）稀释法（确认试验）琼脂稀释法：（略）肉汤稀释法：（略）Etest法：稀释法判断标准：加克拉维酸MIC值较未加克拉维酸MIC值小8倍以上（即<3个稀释度），即为ESBLs阳性。

以下图片为Etest法三维纸片法（初筛试验）方法：将0.5麦氏单位的标准大肠杆菌A TCC 25922菌液涂抹于MH琼脂平板上，稍干后，贴一片三代头孢菌素纸片（为待检菌耐药）于MH平板中央，用无菌纸片沾取待检菌贴在距抗生素纸片5mm处，置35℃过夜培养。

超广谱内酰胺酶(ESBLs)研究进展超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)是丝氨酸蛋白酶的衍生物,它能够水解青霉素、广谱及超广谱头孢菌素和单环β-内酰胺抗生素的β-内酰胺酶,且能被克拉维酸抑制。

ESBLs主要由肠杆菌科细菌产生,以肺炎克雷伯杆菌和大肠埃希菌为代表。

ESBLs基因由质粒介导,可通过接合、转化和转导等形式在细菌间扩散,给临床抗感染治疗造成极大的困难。

目前,ESBLs已成为细菌对β-内酰胺类抗生素产生耐药性的主要原因。

1.ESBLs类型自1983年德国学者首次从臭鼻克雷伯菌中发现了超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)SHV-2[1]以来,ESBLs种类已超过200多种。

其类型可以分为TEM 型、SHV型、OXA 型、CTX-M 型、其它型等5类。

其中TEM 和SHV型酶是临床较常见的。

1.1 TEM 型ESBLs:最早发现的TEM-3型对头孢噻肟耐药[2]2005年发现的TEM-94[3]对头孢泊肟和头孢噻肟耐药。

还有小部分是抑制剂耐药性酶(IRT)。

2005年F.Robin等[6]报道了一种新型的抑制剂耐药性酶TEM-109(CMT-5),它同时具有TEM-6的特性和TEM-33(IRT-5)对抑制剂的耐药性它代表了一种新型ESBLs的出现。

1.2 SHV 型ESBLs:SHV家族中第一个SHV型ESBLs是SHV-2。

SHV-2发生了Gly-238-Ser位点的突变,增加了对氧亚氨基类抗生素的亲和力和水解能力。

卢月梅等[4]同对新型β-内酰胺酶SHV-59的研究发现,其发生了A1a 134-Val和Pro 269-ku位点的变化,携带SHV-59基因的菌株对氨苄西林／舒巴坦耐药,对头孢噻肟中介,对其他药物均敏感。

1.3 OXA 型ESBLs:对酶抑制剂均耐药或仅低度敏感,特别是对青酶烷类抗生素（包括苯唑西林及相关复合制剂）有高度水解活性[5],主要涉及铜绿假单胞菌[6]和鲍氏不动杆菌[7-8]。

产超广谱β-内酰胺酶大肠埃希菌的治疗进展【摘要】产超广谱β-内酰胺酶（ESBLs）大肠埃希菌是一种临床常见多重耐药菌，可引起呼吸系统、泌尿系统等感染，在我国，大肠埃希菌的产ESBLs发生率约为45%左右，不同国家及地区存在明显差异性。

有研究显示，产ESBLs大肠埃希菌是导致易感人群感染的关键因素，同时也是医院内传播的主要病原菌，应引起广大医务工作者广泛重视。

为此，本院将具体对产ESBLs大肠埃希菌的流行病学特点、耐药现状、耐药机理、治疗药物做如下综述，以期为临床提供参考。

【关键词】超广谱β-内酰胺酶;大肠埃希菌;治疗进展DOI：10.14163/ki.11-5547/r.2019.23.103产超广谱β-内酰胺酶（extended-spectrum β-lactamase， ESBLs）大肠埃希菌是指能够产生灭活β-内酰胺类抗菌药物的大肠埃希菌，该菌可水解青霉素类、头孢菌素类、氨曲南等抗菌药物，有着较快通过质粒传播耐药基因的速度，为临床治疗带来较大困扰。

本文将对相关内容具体作如下综述。

1 产ESBLs大肠埃希菌的流行病学特点产ESBLs大肠埃希菌可通过尿液标本、血液标本、呼吸道标本检测出。

在医院中诸多科室均有分布，包括重症加强护理病房（ICU）、儿科、妇产科、泌尿外科等。

通常来说，高龄、免疫力低下、住院时间长、长时间应用广谱抗菌药物以及长时间应用糖皮质激素者与有创呼吸机辅助呼吸者是产ESBLs大肠埃希菌的高危感染人群。

因此，基于以上高危因素分布特征，需要结合具体情况尽早建立并实施耐药菌防控策略。

2 产ESBLs大肠埃希菌的耐药现状相关研究显示，产ESBLs大肠埃希菌对不同药物有着不同的耐药率，其中对第3代头孢菌素的耐药率为55.4%，对喹诺酮类药物的耐药率为50.0%，对碳青霉烯类药物的耐药率较低，即1.3%[1]。

因此，上述数据表明了产ESBLs大肠埃希菌对临床常用的抗菌药物均有较高的耐药水平。

超广谱β-内酰胺酶的检测及耐药性分析莫志航;宁炎【摘要】目的了解临床产超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)大肠埃希菌(E.coli)和肺炎克雷伯菌(K.pneumoniae)的发生率、耐药性,以便于对ESBLs进行监测和治疗.方法对102株E.coli和78株K.pneumoniae采用美国临床实验室标准委员会(NCCLS)规定的ESBLs表型筛选和确证试验确定ESBLs的发生率,并检测产ESBLs的E.coli 和K.pneumoniae的耐药性.结果 13.7％ (14/102)的大肠埃希菌和26.9％ (21/78)的肺炎克雷伯菌产ESBLs;产ESBLs菌株对亚胺培南耐药率为0％,除对阿米卡星、头孢西丁、替卡西林/克拉维酸联合酶抑制剂耐药率较低外,对三代头孢菌素、磺胺类和喹诺酮类药物均出现较高耐药.结论对产ESBLs菌株引起的感染,亚胺培南为首选.%Objective To investigate the prevalence of strains producing extended spectrum beta-lactamases (ESBLs) among Escherichia coil and Klebsiella pneumoniae, and to determine the drug resistance of the strans for better control and treatment of ESBLs. Methods One hundred and two strains of E. coli and 78 strains of K. pneumoniae were investigated for production of ESBLs by phenotypic screening and confirmatory test provided by the NCCLS. The drug resistance of ESBLs-producing strains was also investigated. Results 13.7% (14/102) of E. coli and 26.9% (21/78) of K. pneumoniae investigated were found to produce ESBLs. All ESBLs-producing strains were found to be susceptible to imipenem, relatively lowly resistant to of amikacin, cefoxitin, cefoperazone/β-lactamase inhibitor com-binations, and highly resistant to third generation cephalosporins, sulfonamides and quinolones. Conclusion Imipen-em isthe premium antibiotics for the treatment.of infection caused by ESBLs-producing strains.【期刊名称】《海南医学》【年(卷),期】2012(023)018【总页数】2页(P78-79)【关键词】超广谱β-内酰胺酶;大肠埃希菌;肺炎克雷伯菌;耐药性【作者】莫志航;宁炎【作者单位】增城市新塘医院检验科,广东增城511340;增城市新塘医院检验科,广东增城511340【正文语种】中文【中图分类】R446超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)主要由大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌产生，能水解青霉素类、头孢菌素类和单酰胺类抗生素，从而使之失效[1]。

两种筛选超广谱β-内酰胺酶方法的比较超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)是指由质粒介导产生的能赋予细菌对多类β-内酰胺类抗生素水解的一类酶，该酶能被棒酸等抑制剂抑制。

由于许多产生ESBLs菌株为革兰阴性杆菌，临床以肺炎克雷伯菌和大肠埃希菌中检出ESBLs较高。

我们采用双纸片协同试验和E-test法对产生ESBLs大肠埃希菌进行了比较测定，现报告如下。

1．材料与方法1.1材料1.1.1 菌株实验用大肠埃希菌50株，其中产生ESBLs25株，ESBLs阴性25株。

菌株鉴定和药敏实验确认均采用 Vitek32系统，为生物梅里埃公司产品，大肠埃希菌(Ecoli)质控菌株为ATCC25922、产ESBLs酶Ecoli为ATCC35218。

1.1.2 药敏纸片头孢三嗪、舒普深、头孢他啶、阿莫西林/棒酸(20μg／10g)、氨曲南、头孢噻肟、头孢哌酮。

1.1.3 MH肉汤和MH琼脂1.2方法1.2.1 抗生素敏感性试验纸片扩散法按美国临床实验室标准化委员会(NCCLS)推荐标准实施。

1.2.2 双纸片协同试验按常规氏片扩散法在MH上涂布好受试菌，先在平板中心贴上阿莫西林／棒酸纸片，而后在其上下左右贴30μg片头孢三嗪、头孢哌酮、头孢他啶和氨曲南纸片，各纸片中心距复合剂纸片中心为30mm或20mm，35℃卵育18～20h。

结果解释，如周围4个药敏纸片中有任何一个抑菌环在靠近复合剂纸片一侧的边缘出现扩大或加强，说明该菌产ESBLs。

1.2.3 E-test法E-test法试剂条含有两个梯度浓度，一端是头孢他啶(0．5～32μg/ml)，另一端是头孢他啶(0．125～8μg/ml)+4μg/ml棒酸。

如单独头孢他啶MIC与头孢他啶+棒酸MIC比值>提示菌株产ES- BLs。

4种方法检测结果菌株有差异，重复试验，仍是相同结果，才作为统计数据。

2．结果2.1双纸片协同试验25株中检出23株产ESBLs的菌株，有2株产ESBLs菌株未被检出，25株ESBLs阴性株中，有1株假阳性结果。

产超广谱β—内酰胺酶大肠埃希菌感染的预防与控制目的：分析产超广谱β-内酰胺酶（ESBLs）大肠埃希菌感染情况，为临床预防控制ESBLs大肠埃希菌感染提供可参考的依据。

方法：分析产ESBLs大肠埃希菌患者情况，根据卫生部门制定的医院感染诊断标准判断，并按照感染患者抗菌药物临床的使用分类。

结果：检出ESBLs大肠埃希菌主要分布科室为重症医学科、泌尿外科，感染部位主要为泌尿道、下呼吸道，医院感染病例33例，占ESBLs大肠埃希菌检出率31.7%。

结论：为了有效防控感染发生，应根据ESBLs 大肠埃希菌感染情况，采取相应措施，有效减少病菌感染。

标签：超广谱β-内酰胺酶；大肠埃希菌；预防与控制大肠埃希菌是临床感染常见病原菌，近年来随着抗菌药物广泛和不规范的使用，产超广谱β-内酰胺酶（Extended-Spectrum β-lactamase，ESBLs）的大肠埃希菌在医院内引起感染日益增多，增加了医院感染防控的困难。

本研究分析了ESBLs大肠埃希菌感染情况，并提出了相应的防控措施，现总结如下。

1资料与方法1.1临床资料分析研究我院2013年血液科、呼吸内科、普外科、泌尿科、重症医学科检出的产ESBLs大肠埃希菌的104例患者，回顾性分析临床资料。

1.2方法通过我院自制ESBLs大肠埃希菌感染病例调查表，收集患者的一般临床资料、侵入性操作、手术情况、抗菌药物应用情况，并统计2013年ESBLs 大肠埃希菌感染情况。

1.3评价标准根据卫生部门制定的医院感染诊断标准判断，并按照感染患者抗菌药物临床的使用分类。

2结果2.1产ESBLs大肠埃希菌检出情况医院微生物室检出产ESBLs大肠埃希菌104例，男性64例，女性40例，年龄为6～80岁。

检出产ESBLs大肠埃希菌主要分布科室为：重症医学科32例（308%），泌尿外科29例（279%），普外科24例（23.1%）。

感染部位主要为：泌尿道32例（308%），下呼吸道30例（288%），结果见表1。

大肠埃希菌耐药性研究进展摘要：综述了大肠埃希菌耐药性研究进展，分析其生物学特性、分布规律、实验研究进展、细菌耐药机制、药敏结果及抗菌药物使用情况。

总结细菌主要耐药机制：抗菌药物作用靶位改变；产生灭活酶使抗菌药物失活；降低细菌外膜通透性；影响主动外排系统；细菌生物被膜耐药屏障。

在抗菌药物的临床应用中，应以药敏实验结果为基础，结合相关抗菌药物的代谢动力学特点与PK/PD参数制定合理的给药方案，对防止耐药菌的产生，降低不良反应的发生率，减轻患者的医疗负担具有重要作用。

关键词：大肠埃希菌；细菌耐药；感染因素[Abstract]This is a review of research progress in STEC’s drug resistance and makes analysis of its biological characteristics，regularities of distribution，research progress of experiment，bacterial resistance mechanisms，drug susceptibility results，service condition of antibacterial agents，etc.The main resistance mechanism include following tips：Antibacterial drugs targeted to change，produce inactivated enzyme inactivation antimicrobial drugs，reduce bacterial outer membrane permeability，affect the active efflux system，bacterial biofilm resistance barrier.In the clinical application of antibacterial agents，the dosage regimen should be based on the drug sensitive experiment results and combined with the kinetics characteristics of related antibacterial agents and its PK/PD parameters.Then，the generation of drug-resistant bacteria could be well prevented，the incidence of adverse reactions could be reduced，and so does the medical burden of patients.[Keywords]STEC（Escherichia coli），Drug-resistance，Infection factors大肠埃希菌（EC0）是临床感染中最常见的革兰阴性杆菌，也是医院感染最常见病原菌，可引起人体各部位感染，以尿路感染为主。

ES BLs 的研究进展张　剑1　杜英姿1　王能一1　刘永杰2　胡志东31(山东省淄博市临淄区人民医院检验科,淄博255400)2(陕西省出入境检验检疫局,陕西710068)3(天津医科大学总医院检验科,天津300203) 超广谱β-内酰胺酶(extended spectrum beta -lactamases ,ES BLs )是由质粒介导的能赋予细菌对多种β-内酰胺类抗生素和单酰环类抗生素耐药的一类酶,它主要由革兰阴性细菌产生,可来源于T BM 和SHY 酶(由于其固有序列的基因点突变导致),该酶最早发现于肺炎克雷伯菌中[1],可水解头孢菌素及单酰胺类抗菌药物,特别表现在对头孢噻肟、头孢他啶利氨曲南的耐药[2],并可引起对氨基糖苷类等抗菌药物的多重耐药.产ES BL 要的医院耐药问题之一,本文就其分型及耐药机制作一综述。

1　β-内酰胺酶分类 β-内酰胺酶种类较为复杂,几乎所有的肠杆菌细菌其β-内酰胺酶阳性,到目前已发现有二百多种。

对它的分类方法有多种,而主要分类方法有二种:一种为分子生物学的分类,根据末端氨基酸序列及编码基因的位点来分,可分为四类:A 类,丝氨酸酶,由质粒编码。

B 类,金属酶,由染色体编码。

C 类,丝氨酸酶,由染色体编码。

D 类,丝氨酸酶,由质粒编码[3]。

另一种为临床上较为实用的分类方法,即1989年Bush 创建的方法[4],此分类方法是根据各种酶的等电点、水解底物、是否被克拉维酸抑制及酶的分子结构类别来分,分成五类:①CEP -N 酶,②PE N 叫酶,③BS D -Y 酶,④E BS Y 酶ES 2BLS (超广谱酶),⑤金属酶。

表1　两种分类方法间关系及酶的主要作用底物如下表β-内酰胺酶种类Bush 方法分子生物方法水解底物种类①CEP -N 酶(头孢曲素酶)C 类酶(G roupl )能水解头孢菌素,对青霉素水解作用很弱,不能被棒酸等抑制②PE N -Y 酶(青霉素酶)A 类酶(G roup 2a )主要水解青霉素,能被棒酸(克拉维酸)所抑制③BS D -Y 酶(广谱酶)A 类酶(G roup2b )能水解青霉素类和头孢菌素类,能被克拉维酸抑制④E BS -Y 酶(超广谱酶)A 类酶(G roup 2b )能水解耐酶的头孢菌素、单酰胺菌素等,能被克拉维酸、舒巴坦所抑制⑤金属酶(金属β-内酰胺酶)B 类酶(G roup 3)能水解包括碳青霉烯类的一大类β-内酰胺类抗菌素,对酶抑制剂敏感性差2　ES BL 的分类及分型 超广谱β-内酰胺酶(ES BLs )是以能灭活窄谱和广谱头孢菌素、单酰环类抗生素及革兰阴性细菌等抗生素为特征的β-酰胺酶,属于Ambler 分类的A 类,按Bush 分类属2be 群[3]。