影响淀粉酶酶活性的因素
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温度、PH值、金属离子等均能影响酶的活度,具体表现在以下几个方面:①温度:由于酶对热是不稳定的,所以在不同的温度下,酶的活度是不同的。
低温时,酶的活度很低,随着温度的升高,酶的活度逐渐增加,在某一温度下,酶的活度表现最高,此温度称为这种酶的最佳温度。
所谓稳定温度是指酶在该温度范围内是稳定的,不发生或极少发生失活现象。
每种酶都有它的稳定温度和作用最佳温度。
酶退浆应选择所用酶的最佳温度,以使酶的活性及活性的稳定性都具有较大的数值。
胰酶的耐热性较差,稳定温度若低于35℃,高于55℃,则即失活,它的最佳温度为40~55℃,而BF-7658淀粉酶的耐热性高,40~85℃活性较高,20℃时也有较高的活性,当温度为100℃时,其活性尚未完全消失。
酶的最佳温度可因加入某些活化剂而提高。
同时可因与淀粉作用的时间不同而不同。
表BF-7658淀粉酶的最佳温度与作用时间的关系与淀粉作用时间(min)作用最佳温度(℃)60 7030 8015 902-3 100由表可知,BF-7658淀粉酶的最佳温度随反应时间的缩短而提高。
在实际生产中,经常采用短时间高温的处理工艺。
如BF-7658淀粉酶在55~60℃轧酶后,再用汽蒸或热浴处理来求得快速退浆,使生产连续化,其机理是酶的破坏瞬间也是酶发挥最大作用的时间。
②pH值:pH值对酶的活性影响很大,不同PH值下测得酶的活度及稳定性是不同的。
酶具有最大活性与最大稳定性所需的PH值是不同的,但适当选择可兼顾活度与稳定性。
BF-7658淀粉酶在PH6.0~6.5范围内,其活度与稳定性可以兼顾。
胰酶在PH为6.8~7.3范围内,其活度与稳定性可兼顾。
③活化剂与抑制剂:淀粉酶对淀粉的消化作用常受到一些药品的影响而变得活泼或迟钝,这种现象叫活化(激化)或阻化(抑制),这种化学药品称为活化(激化)剂或阻化(抑制)剂。
例如一些轻金属盐类,都是活化剂,其中较常用的是氯化钠和氯化钙。
所以为了提高酶的活性,酶退浆时可用适当的硬水(含有一定量的Ca+、Mg1+等离子),而不必加软水剂。
探究影响酶活性的因素一、探究温度对酶活性的影响(一)实验原理(注:市售a-淀粉酶的最适温度约600C):1.淀粉遇碘后,形成紫蓝色的复合物。
2.淀粉酶可以使淀粉逐步水解成麦芽糖和葡萄糖,麦芽糖和葡萄糖遇碘后不显色。
(二)方法步骤:1、取3支试管,编上号(A、B、C),然后分别注入2mL可溶性淀粉溶液;2、另取3支试管,编上号(a、b、c),然后分别注入1mL新鲜淀粉酶溶液;3、将装有淀粉溶液和酶溶液的试管分成3组,A和a试管放入热水(约600C)、B和b放入沸水,C和c放入冰块中,维持各自的温度5min;思考题1、不能只用不同温度处理淀粉溶液或酶溶液,这是为什么4、分别将淀粉酶溶液注入相同温度下的淀粉溶液中,摇匀后,维持各自的温度5min;5、在3支试管中各滴入1-2滴碘液,摇匀后观察这3支试管中溶液颜色变化并记录;思考题2、在试管A、B、C中分别能观察到什么现象思考题3、通过上述实验,你能得出什么结论思考题4、在上述实验中,自变量是什么无关变量是什么思考题5、探究温度对酶活性的影响实验中是否可以用斐林试剂来检验实验结果为什么二、探究PH值对酶活性的影响(一)实验原理:思考题6、请依据下面所列实验操作步骤,写出该实验的实验原理。
步骤:用表格显示实验步骤:(注意操作顺序不能错)思考题7、请在上表中填入你所观察到的实验现象。
思考题8、通过上述实验,你能得出什么结论思考题9、在上述实验中,自变量是什么无关变量是什么思考题10、在设计“影响酶活性的条件”实验中最关键的一步是什么附加实验:思考题11、能否用淀粉酶探究PH对酶活性的影响1.(多选)在证明酶的催化作用受温度影响的实验时,有学生取两支试管分别将淀粉溶液与唾液混合后,分别将试管放在冰水、沸水中5min后,待试管冷却后分别加入3滴碘液,结果两支试管都变蓝,证明酶的催化作用需要适宜的温度。
此实验的不足之处是A.酶与淀粉不能在设置各自温度之前接触B.缺少温度为37℃的对照实验C.这两支试管都不应变蓝D.不能用碘液检验是否存在淀粉2.(多选)下图表示的是在最适温度下,反应物浓度对唾液淀粉酶所催化的化学反应速率的影响。
淀粉酶活性测定实验报告淀粉酶活性测定实验报告引言:淀粉酶是一种重要的酶类,它在生物体内起着关键的消化和代谢作用。
淀粉酶能够将淀粉降解为较小的分子,以供生物体吸收和利用。
因此,测定淀粉酶的活性对于了解生物体的消化系统以及酶的功能机制具有重要意义。
本实验旨在通过测定淀粉酶的活性,探究其在不同条件下的变化规律,从而加深对淀粉酶的认识。
材料与方法:1. 实验器材:试管、移液管、恒温水浴、分光光度计。
2. 实验试剂:淀粉溶液、淀粉酶溶液、碘液、磷酸盐缓冲液。
3. 实验步骤:a. 准备一系列稀释淀粉酶溶液,分别为0.1、0.2、0.3、0.4、0.5 mg/mL。
b. 取一定量的淀粉溶液置于试管中,加入相应浓度的淀粉酶溶液,混匀。
c. 将试管置于恒温水浴中,保持温度在37°C,反应10分钟。
d. 在反应结束后,加入适量的磷酸盐缓冲液停止反应。
e. 加入适量的碘液,使溶液变为蓝黑色。
f. 使用分光光度计测定溶液的吸光度,记录下吸光度值。
g. 重复以上步骤,分别测定其他浓度的淀粉酶溶液。
结果与讨论:通过实验测定,我们得到了不同浓度淀粉酶溶液的吸光度值,并以吸光度值作为淀粉酶活性的指标。
根据实验结果,我们可以得出以下结论:1. 淀粉酶活性与浓度呈正相关关系:实验结果显示,随着淀粉酶溶液浓度的增加,吸光度值也随之增加。
这表明淀粉酶的活性与其浓度呈正相关关系。
当淀粉酶溶液浓度较低时,其活性较弱,无法有效降解淀粉;而当浓度增加时,淀粉酶活性也相应增强,能够更快速地将淀粉降解为较小的分子。
2. 淀粉酶活性受温度影响较大:实验中将反应温度保持在37°C,这是因为淀粉酶在人体内的最适温度为37°C。
然而,当温度偏离最适温度时,淀粉酶的活性会受到显著影响。
过高或过低的温度都会导致淀粉酶的构象变化,从而影响其催化效率。
因此,合适的温度对于淀粉酶的活性至关重要。
3. 淀粉酶活性受pH值影响:酶活性与pH值之间存在一定的关系。
一、目的了解淀粉在水解过程中遇碘后溶液颜色的变化。
观察温度、pH、激活剂与抑制剂对淀粉酶活性的影响。
二、原理人唾液中淀粉酶为α—淀粉,在唾液腺细胞中合成。
在唾液淀粉酶的作用下,淀粉水解,经过一系列被称为糊精的中间产物,最后生成麦芽糖和葡萄糖。
淀粉→紫色糊精→红色糊精→麦芽糖、葡萄糖淀粉、紫色糊精、红色糊精遇碘后分别呈蓝色、紫色与红色,麦芽糖、葡萄糖遇碘不变色。
唾液淀粉酶的最适温度为37-40℃,最适pH为。
偏离此最适环境时,酶的活性减弱。
低浓度的氯离子能增加淀粉酶的活性,是它的激活剂。
铜离子等金属离子能降低该酶的活性,是它的抑制剂。
三、试剂和仪器1.碘液:称取2g碘化钾溶于5ml蒸馏水中,再加1g碘。
待碘完全溶解后,加蒸馏水295ml,混合均匀后贮存于棕色瓶内。
2.1%淀粉溶液:称取1克可溶性淀粉放入小烧杯中,加少量蒸馏水做成悬浮液。
然后在搅拌下注入沸腾的蒸馏水中,继续煮沸1分钟,冷后再加蒸馏水定容至100ml。
3.%的盐酸溶液4.%的乳酸溶液。
5.1%的碳酸钠溶液。
6.%的氯化钠溶液。
7.%的硫酸铜溶液。
8.仪器:试管试管架吸管玻璃棒白磁板烧杯漏斗恒温水浴量筒冰浴四、操作步骤1.淀粉酶液的制备:实验者先用蒸馏水嗽口,然后含一口蒸馏水于口中,轻嗽一、二分钟,吐入小烧杯中,用脱脂棉过滤,除去稀释液中可能含有的食物残渣。
最后将数人的稀释液混合在一起,再进行过滤,以避免个体差异。
2.pH对酶活性的影响取4支试管,分别加入%盐酸(pH=1),%乳酸(pH=5),蒸馏水(pH=7),与1%碳酸钠(pH=9)各2毫升,再向以上四支试管中各加入2毫升淀粉溶液及淀粉酶液。
混合摇匀后置于37℃水浴中保温。
2分钟后,从蒸馏水试管中取出一滴溶液,置于白磁板上,用碘液检查淀粉的水解程度,待蒸馏水试管内的溶液遇碘不再变色后,取出所有的试管,各加碘液2滴,观察溶液颜色的变化。
根据观察结果说明pH对酶活性的影响。
3.温度对酶活性的影响取3支试管各加入3毫升2%淀粉溶液,另取三支试管,各加入1毫升淀粉酶液。
唾液淀粉酶酶活性的影响因素及测定方法综述摘要:唾液淀粉酶是唾液蛋白的重要组成部分,并且唾液淀粉酶的活性是反映自主神经系统最为灵敏的指标,有理想的应用研究价值。
本文总结介绍了影响唾液淀粉酶的常见因素,以及五种唾液淀粉酶活性的测定方法,对于临床实验以及后续研究提供一定参考。
关键词:唾液淀粉酶,酶活性影响因素,淀粉酶活性测定一、引言生物酶几乎参与了生物体内所有的生物化学反应,并且酶是生命运动、细胞活动中的不可缺少的一部分。
它是一种具有生物催化活性的生物大分子[1]。
唾液淀粉酶(salivary alpha-amylase,sAA)是唾液蛋白的重要组成部分,约占唾液总蛋白的40% ~ 50%[2],常用作唾液蛋白分泌的主要指标。
交感神经系统与副交感神经系统协调作用于唾液蛋白的分泌[3],而唾液淀粉酶活性是交感神经最灵敏的指标。
随着技术发展,唾液淀粉酶的活性测定的准确度及可靠性日渐增加,且常被运用于中医脾虚证的临床辩证、治疗等方面[4]。
而唾液淀粉酶作为一种生物催化剂,具有专一性和高效性的同时,它相较于常见的化学催化剂更易受外界环境影响,导致其活性下降,甚至失活,为临床研究造成困扰。
本文就对常见的影响唾液淀粉酶活性的因素与其活性测定方法的相关资料进行了收集与整理,便于进行实验验证与探究。
二、影响唾液淀粉酶活性的因素(1)温度大多数生物酶的化学本质都为蛋白质,其抗热性较差。
在0℃~40℃的温度范围内,酶催化作用速度随着温度的升高而加快。
温度超过60℃时,绝大多数的酶都会失去活性。
唾液淀粉酶的最适温度约为37℃。
(2)pH值酶对环境中的pH十分敏感,只有在一定的pH范围内才能表现出活性,超过这个范围,酶就失活了。
一般酶的最适pH在4~8之间。
唾液淀粉酶的最适pH值约为6.8。
(3)AMY1基因拷贝数及多态性唾液淀粉酶的编码基因AMY1位于染色体1p21上,不同个体之间该基因的拷贝数存在差异,变化范围为2至15倍,研究显示口腔中的唾液淀粉酶含量与AMY1基因拷贝数正相关[5]。
影响淀粉酶酶活性的因素
一、目的
了解淀粉在水解过程中遇碘后溶液颜色的变化。
观察温度、pH、激活剂与抑制剂对淀粉酶活性的影响。
二、原理
人唾液中淀粉酶为α—淀粉,在唾液腺细胞中合成。
在唾液淀粉酶的作用下,淀粉水解,经过一系列被称为糊精的中间产物,最后生成麦芽糖和葡萄糖。
淀粉→紫色糊精→红色糊精→麦芽糖、葡萄糖
淀粉、紫色糊精、红色糊精遇碘后分别呈蓝色、紫色与红色,麦芽糖、葡萄糖遇碘不变色。
唾液淀粉酶的最适温度为37-40℃,最适pH为6.8。
偏离此最适环境时,酶的活性减弱。
低浓度的氯离子能增加淀粉酶的活性,是它的激活剂。
铜离子等金属离子能降低该酶的活性,是它的抑制剂。
三、试剂和仪器
1.碘液:称取2g碘化钾溶于5ml蒸馏水中,再加1g碘。
待碘完全溶解后,加蒸馏水295ml,混合均匀后贮存于棕色瓶内。
2.1%淀粉溶液:称取1克可溶性淀粉放入小烧杯中,加少量蒸馏水做成悬浮液。
然后在搅拌下注入沸腾的蒸馏水中,继续煮沸1分钟,冷后再加蒸馏水定容至100ml。
3.0.4%的盐酸溶液
4.0.1%的乳酸溶液。
5.1%的碳酸钠溶液。
6.%的氯化钠溶液。
7.%的硫酸铜溶液。
8.仪器:试管试管架吸管玻璃棒白磁板烧杯漏斗恒温水浴量筒冰浴四、操作步骤
1.淀粉酶液的制备:实验者先用蒸馏水嗽口,然后含一口蒸馏水于口中,轻嗽一、二分钟,吐入小烧杯中,用脱脂棉过滤,除去稀释液中可能含有的食物残渣。
最后将数人的稀释液混合在一起,再进行过滤,以避免个体差异。
2.pH对酶活性的影响
取4支试管,分别加入0.4%盐酸(pH=1),0.1%乳酸(pH=5),蒸馏水(pH=7),与1%碳酸钠(pH=9)各2毫升,再向以上四支试管中各加入2毫升淀粉溶液及淀粉酶液。
混合摇匀后置于37℃水浴中保温。
2分钟后,从蒸馏水试管中取出一滴溶液,置于白磁板上,用碘液检查淀粉的水解程度,待蒸馏水试管内的溶液遇碘不再变色后,取出所有的试管,各加碘液2滴,观察溶液颜色的变化。
根据观察结果说明pH对酶活性的影响。
3.温度对酶活性的影响
取3支试管各加入3毫升2%淀粉溶液,另取三支试管,各加入1毫升淀粉酶液。
将6支试管分为三组,每组中盛放淀粉溶液与淀粉酶液的试管各1支。
三组试管分别置于0℃、37℃、70℃的水浴中,5分钟后将各组中的淀粉溶液到入淀粉酶液中,继续保温。
2分钟后从37℃试管中取出一滴溶液,置于白磁板上,用碘液检查淀粉的水解程度,待37℃试管内的溶液遇碘不再变色后,取出所有的试管,各加碘液2滴,观察溶液颜色的变化。
根据观察结果说明温度对酶活性的影响。
4.激活剂与抑制剂对酶活性的影响
取3支试管按下表的规定加入各种试剂。
混匀后置于37℃的水浴中保温,1分钟后从1号试管中取出一滴溶液,置于白磁板上,用碘液检查淀粉的水解程度,待一号试管内的溶液遇碘不再变色后,取出所有的试管,各加碘液2滴,观察溶液颜色的变化。
根据观察结果说明激活剂与抑制剂对酶活性的影响。
pH 值对酶的活力的影响
项目
颜色 水(pH=7)
32a CO N (pH=9)
HCl (pH=1) 乳酸(pH=5)
淡黄色 深紫色 蓝色 浅蓝色
结果分析:由于淀粉水解,经过一系列被称为糊精的中间产物,最后生成麦芽糖和葡萄糖。
淀粉→紫色糊精→红色糊精→麦芽糖、葡萄糖,并且淀粉、紫色糊精、红色糊精遇碘后分别呈蓝色、紫色与红色,麦芽糖、葡萄糖遇碘不变色。
于是从上图的结果可以看出pH 为7这个pH 段的时候,淀粉酶的活力最强。
可见,淀粉酶有一个最适的酸碱度。
这是因为在过酸和过碱的环境下,溶液中的氢离子或者氢氧根例子会进攻酶蛋白分子,使其维持高级结构的化学键(例如氢键,范德华力)破坏,高级结构无法维持稳定,于是解构,最终是蛋白质分子失去活性,活力减弱。
激活剂对酶的影响
激活剂 颜色 水
淡色明蓝 深紫色 不变
结果分析:从上面结果可以看出,在有钠离子存在的情况下淀粉有一点的水解,在有铜离子存在的情况下完全没有水解,在纯水的环境中,酶将淀粉完全水解。
同时,结合资料,水为对照组可以了解到钠离子对酶有一点的抑制作用,铜离子就将酶完全一致了,可见此淀粉酶为金属依赖性的酶,不同的离子对酶的活性中心有抑制的作用,改变其构象影响了活性。
温度对酶的影响
温度
颜色 0摄氏度 37摄氏度 70摄氏度
深紫色 黄色 深紫
结果分析:从上表可以看出,在37摄氏度的时候,酶水解淀粉的能力最强。
由于温度体系中随着温度的升高,酶蛋白分子中维持构象的键由于分子间的碰撞和分子内离子的热运动由于能量的升高而挣脱互相的吸引而造成分子的解体蛋白变性。
总结:从以上实验可以得出影响酶的水解的活性的因素有激活剂,温度,酸碱度。
同时所得的启示就是在应用淀粉酶要注意在最适温度最适酸碱度还有排除抑制剂的干扰来提
高活力。