《影响酶活性的因素》PPT课件

选购试剂盒时
要仔细阅读试剂盒说明书；
了解试剂盒所用方法的原理、试剂配方等；
选择IFCC或中华医学会检验学会推荐的常规方 法，或选择公认的测定方法。
使用时
定期对试剂盒的质量进行监测；
准确性、重复性、稳定性好，线性范围宽；
正向型试剂空白吸光度低、反向型试剂空白吸 光度高、试剂空白速率低、瓶间差小等。
如RBC内的LD、AST和ALT活性分别较血清中高 100、15和7倍左右。
RBC释放的Hb在300～500nm可见光波段能 使吸光度值明显升高，干扰分光光度计的 测定。
.
6
1.1 Hb的吸光度曲线
.
7
1.1 溶血影响的控制
减少溶血
体外溶血可通过实施样品制备技术的标准化加 以克服；
分清体内溶血与体外溶血。
血清置于空气中时，
血中CO2丧失极快，pH可在15min内由 7.4增至8.0，从而使对碱性环境敏感 的ACP活性迅速下降。
某些酶易受光线破坏，
CK可因吸收蓝光而引起酶发生不可逆 地失活，其失活程度与暴光时间的长 短成正比。
.
15
1.5 副反应
副反应是指酶促反应体系中，除待测酶反应 外，其他非待测酶和物质引起的干扰待测酶 测定的反应。
ALT活性测定的反应式如下：
L 丙 2 氨 氧 酸 代 A 戊 L L T 谷 二 L 氨 丙 酸 酸
L 丙 N 酮 A H 酸 D L D H L 乳 N 酸 AD
.
17
1.5 副反应的控制
可通过加入副反应抑制剂， 或对样品进行预处理等方法给予排除。 双试剂底物启动模式因不增加成本、不耗
.
12
1.3 贮存不同室温体液酶的稳定性 （活性变化小于10%）

探究 影响(yǐngxiǎng)酶活性的条件
第一页，共48页。
考纲 考情
三年5考 高考指数：★★★☆☆ 探究影响酶活性的因素
第二页，共48页。
【实验原理】
1.温度对酶活性的影响(yǐngxiǎng)：
(1)反应原理：淀粉 淀粉酶 麦芽糖
碘液 碘液
无蓝色出现
_____ _蓝__色________(chūxiàn)
第二十九页，共48页。
二、实验(Leabharlann híyàn)步骤：步骤加入 试剂
设置反 应条件
剂量 观察气 泡产生
试管编号
a
b
c
d
3%H2O2 2 mL
第十一页，共48页。
2.在“比较过氧化氢(ɡuò yǎnɡ huà qīnɡ)在不同条件下的分解”实验 中，对实验的处理如表所示：
试管 组别
试管1 试管2 试管3 试管4
加入3%H2O2(mL) 2 2 2 2
实验处理
温度
加入试剂
常温
/
90℃
/
常温 常温
2滴3.5%FeCl3溶液 2滴20%肝脏研磨液
淀粉(diànfěn)的
(2)鉴定原理：温度影响(yǐngxiǎng)酶的活性，从而影响
水解
(yǐngxiǎng)___________，
滴加碘液，根据是否出现____蓝_及色_____蓝__色__的__深来浅判断酶的
活性。
第三页，共48页。
2.pH对酶活性的影响：
(1)反应原理：2H2O2 过氧化氢酶2H_2_O_+_O_2__。
第十二页，共48页。
对该实验的有关分析不正确的是( ) A.在上表的实验处理中，研究了温度和催化剂两个自变量 B.试管2中因为(yīn wèi)没有加入任何试剂，所以应为空白对照组 C.若试管4和试管1组成对照实验，可说明酶具有催化作用 D.若要研究酶的高效性，可选用的实验组合是试管4和试管3

(2012福建26).（28分）回答下列Ⅰ.Ⅱ题 Ⅰ. 大菱鲆是我国重要的海水经济鱼类。研究性学习小组尝 试对大菱鲆消化道中的蛋白酶的活性进行研究。 （1）查询资料得知，18℃时，在不同pH条件下大菱鲆消化道 各部位蛋白酶活性如图1。由图可知，在各自最适pH下，三种 蛋白酶催化效率最高的是__幽__门__盲__囊__蛋__白__酶___。
(3)林蛙体内雌性激素分泌后经 体液（或血液） 运输到靶细胞， 与靶细胞的_受__体__结合产生调节作用。
【解析】（1）由题中实验结果可知，双酚A进入雄蛙体内后， 可以提高雄蛙体内芳香化酶的水平，而芳香化酶能促进雄性激 素转化为雌性激素，所以双酚A进入雄蛙体内后，雌性激素含量 增加，要比较双酚A和雌性激素对精巢机能的影响，可设置水中 含有雌性激素的实验组作为条件对照，培养一段时间后精巢进 行镜检，观察实验结果； （2）减数分裂各时期主要根据染色体数目和行为特征来判断， 所以镜检用高倍镜观察细胞的染色体； （3）激素通过体液（或血液）运输到达相应的靶器官或靶细胞 ，与相应的受体结合，从而调节靶器官或靶细胞的生命活动；
“汉水丑生的生物同行”超级群大型 公益活动：历年高考题PPT版制作。 本课件为公益作品，版权所有，不得 以任何形式用于商业目的。2012年1月 15日，汉水丑生标记。
(2012江苏16). 下列关于“探究加酶洗衣粉和普通洗衣粉的洗
涤效果” 的叙述，合理的是（B
）
A. 先用热水溶解洗衣粉，再将水温调节到最适温度
Ⅱ.双酚A是一种化工原料，对动物生殖机能有影响。研究人员进行 “双酚A对中国林蛙精巢芳香化酶水平的影响”实验。主要过程是： 将性成熟雄蛙分组，实验组置于含双酚A的水体饲养，同时作空白对 照。一定时间后检测雄蛙精巢芳香化酶水平，并对精巢进行制片镜 检。结果显示，实验组芳香化酶水平高于空白对照组，且精子发育 异常。请回答： (1)已知芳香化酶能促进雄性激素转化为雌性激素。据此推测双酚A

答
2.实验步骤和结果 (1)探究温度对酶活性的影响
序号
实验操作内容
试管1
试管2
试管3
1 加入等量的可溶性淀粉溶液
2 mL
2 mL
2 mL
60 ℃热水(5分钟
2
控制不同的温度条件
沸水(5分钟) 冰块(5分钟)
)
1 mL(5分钟 3 加入等量的新鲜淀粉酶溶液 1 mL(5分钟) 1 mL(5分钟)
)
4
产物总量也不会1 2增3加4 5
解析
答案
(4)生物体内酶的化学本质是__蛋__白__质__或__R__N_A， 其特性有__高__效__性__、__专__一__性_(答出两点即可)。
12345
解析
答案
(排除温度干扰)，且将酶溶液的pH调至 预设 pH后再 滴入，
不宜在未达到预设pH前，让反应物与酶接触。
过氧 化氢
过
过酶
氧
氧
化
化
氢
氢
酶
酶
关键点拨
1.实验材料选择时的注意事项 (1)在探究温度对酶活性的影响的实验中，不宜选择过氧化氢 (H2O2)和过氧化氢酶作为实验材料，因为过氧化氢(H2O2)在常 温常压时就能分解，加热的条件下分解会加快，从而影响实 验结果。 (2)在探究pH对酶活性的影响实验中，不宜选用淀粉和淀粉酶 作为实验材料，因为在酸性条件下淀粉本身分解也会加快， 从而影响实验结果。
长句应命题探究 答突破简答 题
如图为不同条件下，某酶促反应生成物的浓度随时间的变化曲线，请分析：
1.若表示的是不同催化剂条件下的反应，③是不加催化剂， ②是加无机催化剂，①是加酶，这体现了酶的高效性， 酶具有该特性的原理是同无机催化剂相比，酶能显著降低化 学反应的活化能。

（4）在常规实验中，高温下淀粉无法与碘液形成稳定的蓝色复合物，因此常
见的处理办法是将各组试管都冷却至0 ℃后，再滴加碘液，但这样操作的弊端
考法1 围绕教材基础实验，考查实验探究 1．(2022·浙江选考)下列关于研究淀粉酶的催化作用及特性实验的叙述，正
确的是( B )
A．低温主要通过改变淀粉酶的氨基酸组成，导致酶变性失活 B．稀释100万倍的淀粉酶仍有催化能力，是因为酶的作用具有高效性 C．淀粉酶在一定pH范围内起作用，酶活性随pH升高而不断升高 D．若在淀粉和淀粉酶混合液中加入蛋白酶，会加快淀粉的水解速率
考法1 围绕教材基础实验，考查实验探究
2．(2022·山东烟台期末)下列关于酶的实验叙述，正确的是( A )
A．研究pH对酶活性的影响时，不宜用淀粉作为底物
B．可用过氧化氢酶和过氧化氢探究温度对酶活性的影响
C．用麦芽糖、淀粉、淀粉酶作为实验材料，验证酶的专一性时，可用碘液进
行检测
D．比较H2O2在加了新鲜肝脏研磨液和加热蒸馏水时的分解速率，可验证酶具 有高效性
实验结论
生成物量最多的一组，或底物剩余量最少的一组所处温度（或pH） 为最适温度（或pH）
2、探究酶的最适温度或pH
（2）操作实例
①探究酶的最适温度
②探究酶的最适pH
探究温度(pH)对酶活性影响的实 验设计思路与探究酶的最适温度(pH) 基本相同，只是无须设置一系列温度 (pH)梯度，设置几组温度(pH)做自变 量即可，其他操作过程基本相同。
⑤5 ＋
40
30
B．结合①、②组的相关变量分析，自变量为温度
C．该酶催化反应的最适温度为70 ℃，最适pH为9
D．尚需补充实验才能确定该酶是否能水解其他反应物

实验中出现的结果及分析 实际实验结果情况：（1）在100或60摄氏度中变蓝 （2）试管中的颜色偏紫色 实际实验结果分析：（1）冰水中的实验最不易做成，因为学生加的 酶过量或保温时间不够等。 （2）放置的时间不够 （3）在放置时弄混试管 （4）
你的困惑
1. 在探究温度和pH对酶活性的影响实验时，能否先将酶和反应物混合后再 分别放置在不同条件下处理？ —不能。因为酶具有高效性，把酶和反应物混合后就会立即发生催化反应。 2. 在探究温度对酶活性的影响时不宜选用过氧化氢酶催化H202，为什么？ ———因为H2O2加热的条件下分解会加快。如果要做的话，可以把猪肝研磨液 加热到100℃，等冷却后加入过氧化氢溶液中 。 3. 为什么在探究温度对淀粉酶活性的影响时要把3号试管取出待冷却后在 加入碘液？ ———因为碘预热易升华。
二、实验原理
• 酶的活性受温度和pH等条件的影响，适宜 的温度和pH有利于酶发挥活性。
• 温度对酶的影响是：
• pH值对酶的影响是：
三、实验材料及用具
试剂： 体积分数30％过氧化氢溶液 质量分数2%的新配制的淀粉酶溶液 质量分数3%的可溶性淀粉溶液 质量分数5％HCl溶液 质量分数5％NaOH溶液 新鲜的质量分数为20%的肝脏研磨液 蒸馏水 冰块 碘液
pH对过氧化氢酶活性的影响的实验现象
序号
1 2
项
目
A 1mL 2mL
试管 B 1mL /
C 1mL /
注入新鲜的肝脏研磨液 注入蒸馏水
3 ４
5
注入氢氧化钠溶液 注入盐酸
注入过氧化氢溶液
/ /
1mL
产生大量 气泡
2mL /
1mL
无气泡 产生
/ 2mL
1mL

实验记录
项目 底物 （/ml） 加入的 纳氏试剂 实验现象 pH和蒸 （/ml） 馏水 （/ml）
试管1 试管2 试管3 试管4
2、酶的活性受底物的特异性的影响 、
• 步骤 • 1、向四支10ml试管，分别标号1，2，3，4 • 2、向四支试管中分别加入3ml的蒸馏水， 1%淀粉液，1%蔗糖液， 0.1%尿素液 • 3、向四支试管中加入等量的大豆尿素酶溶 液五滴，轻摇后静置3分钟 • 4、向四支试管中加入等量的纳氏试剂2ml， 摇匀。 • 5、观察并记录实验现象
实验材料：
器材： 控温水浴锅（每个实验室3个），制冰机， 电磁灶，不锈钢锅，白瓷板，试管、滴管、 移液管（1-2ml） 试剂： 蒸馏水，1%淀粉液，1%蔗糖液，0.1%尿素液， 大豆尿素酶溶液，0.1%CuSO4，0.1%HgCl2， 0.1%NaCl，1M NaOH，0.5M H2SO4，纳氏 试剂，班氏试剂，各种pH缓冲液：5.0；6.8； 8.0
实验原理：
• 尿素在酸、碱、酶作用下（酸、碱需加热）能水解成氨和 二氧化碳 • 新鲜大豆中含有较高活性的尿素酶，可以水解尿素生成 NH3 • CO(NH2)2 + H2O ------ 2NH3 + CO2 • 尿素养在尿素酶作用下，在中性或酸性环境下生成碳酸胺， 在NaOH环境下生成Na2CO3和NH3、NH3与纳氏试剂作 用，生成棕黄色碘化双汞胺 尿素酶 NaOH • CO(NH2)2 + H2O ------------ ( NH4 )2CO3 -----------NH3 • NH3 + 纳氏试剂(HgI2.2KI) -----------NH2.Hg2I3 (棕 黄色)
酶活性的影、紫外线、重金属盐、抑制剂、激活剂 等通过影响酶的活性来影响酶促反应的速率；酶 的浓度、底物的浓度等不会影响酶活性，但可以 影响酶促反应的速率。 • 纳氏试剂（Nessler）是指一种利用红外－可见分 Nessler 光光度法原理用于测定空气中、水体中氨氮含量 的试剂。 • 碘离子和汞离子在强碱性条件下，会与氨反应生 成红棕色胶态化合物，此颜色在波长420nm左右 会有强烈的吸收。而生成的这类红棕色胶态化合 物的量会与其溶液的吸收值成正比，可用测试反 应液的吸收值而测定氨氮的含量。

1931年，德国化学家Michaelist和Menten根据中间产物学说对酶 促反应的动力学进行研究，推导出了整个反应中的底物浓度和反 应速度关系著名公式，即米氏方程
Km——米氏常数
Vmax——最大反应速率
Leonor Michaelis (1875-1949) Maud Menten (1879-1960
3、当反应速率等于最大速率一半时，即V=0.5Vmax时。则
Km=【S】
米氏方程所规定动力学规律，是酶促反应的一项基本熟悉属性
米氏常数的求法，双倒数作图法
可以将米氏方程的形式加以改变，将方程两边同时取倒数，使方 程变成y=ax+b的直线方程
米氏常数K,m的意义
由米氏方程可知，当反应速度等于最大反应速度的一半时，即
适合条件下，酶促反应速率最大，在不同的pH条件下，酶的活性
中心与底物之间形成氢键的能力和方向不同，其结果是影响了 酶——底物过渡态的形成和稳定程度，从而对酶的活性产物影响。
pH对于不同的酶也不一样
E-S复合物的形成的速率和酶与底物的性质有关。 3、当反应速率等于最大速率一半时，即V=0. 酶促反应的速率和影响因素 温度对酶促反应速率的影响有俩个方面 酶促反应的速率和影响因素 反应速率与底物浓度成正比； Leonor Michaelis (1875-1949) Maud Menten (1879-1960 反应速率与底物浓度成正比； 反应速率不再增加，达最大速率； 酶促反应的速率和影响因素 酶促反应的速率和影响因素 动物 最适温度＝35度-40度 pH对于不同的酶也不一样 少数酶特殊，如液化淀粉酶 的最适温度为90度 由米氏方程可知，当反应速度等于最大反应速度的一半时，即 适合条件下，酶促反应速率最大，在不同的pH条件下，酶的活性中心与底物之间形成氢键的能力和方向不同，其结果是影响了酶——底物过渡态的形成和稳定程度，从而对酶的活 性产物影响。 医学上，实验室中高温消毒，高温使酶蛋白变性 1931年，德国化学家Michaelist和Menten根据中间产物学说对酶促反应的动力学进行研究，推导出了整个反应中的底物浓度和反应速度关系著名公式，即米氏方程

思考：测定人体内某些酶的活性时，反应体系中温 度、pH值应如何设定，为什么？

通过实验了解温度、pH值对酶作用的影响。
1、酶的活性受到温度、pH值的影响 2、淀粉酶可催化淀粉逐步水解生成糊精，糊 精分子的大小不同，遇碘时呈现的颜色也不 同。 3、可根据颜色判断淀粉被水解的程度，从而 判断温度、pH值对酶活性的影响。

图中物质的背景颜色表示该物质遇碘时所呈现的颜色，无 底色表示为无色透明。
试管号
1
2
3
pH3.0缓冲溶液（d） pH6.8缓冲溶液（d） pH8.0缓冲溶液（d）
1%淀粉溶液（d） 稀唾液（d） 稀碘液（d） 观察颜色
20 10 5 1
20 10 5 1
20
10 5 1
混匀，37℃水浴10分钟
1、加入稀唾液后应充分混匀。 2、滴加稀碘液时注意不可摇晃试管。 3、碘液不能滴加太多。

试管号
1
2
3
pH6.8缓冲溶液（d） 1%淀粉溶液（d） 水浴
稀唾液（d） 水浴 稀碘液（d） 观察现象（颜色）
20 10 0℃水浴5分钟
10 37℃水浴5分钟
5 混匀后37℃水浴10 分钟 1
20 10 100℃水浴5分钟
5 混匀后100℃水浴10 分钟 1
1、1％淀粉溶液 2、稀碘液 3、pH3.0、pH6.8、pH8三种缓冲溶液 4、实验器材 试管，试管夹，冰浴，沸水浴，恒温水浴锅 (37℃),吸管，滴管，试管架，记号笔，120ml烧 杯一个（或一次性纸杯）

1、制备稀释唾液 漱口后含约20ml蒸馏水在口中做咀嚼动作，3 分钟后吐入120ml烧杯或纸杯中，备用。