低分子量蛋白质Marker(14.4kD-97.4kD)使用说明

白灵菇蛋白质的理化及功能特性薛媛;杨沫;魏君慧;陈怡萌;徐怀德【摘要】为充分开发利用白灵菇蛋白质(Pleurotus nebrodensis proteins,FPs),以残次级白灵菇为原料,采用碱浸提分段盐析法依次制备60％、80％、90％盐饱和度析出蛋白质(F60、F80、F90),统称为分段盐析蛋白质组分(FPs),测定FPs的析出率、理化性及FPs中F60的功能特性.结果表明:F60的析出率最高,达65.62％.FPs 间的二硫键含量无显著性差异(p ＞0.05);FPs的蛋白质条带中共同含有分子量约为31 kDa的蛋白质条带,蛋白质条带间存在差异.F60较F80、F90富含分子量为14.4 kDa的蛋白质条带,具有较高的表面疏水性与荧光发射光谱峰值,β-折叠结构出现频率更高.F60具有优良的溶解性、起泡性、易消化水解,具有潜在的应用价值.白灵菇蛋白质是一种优质的新型蛋白质资源.【期刊名称】《食品工业科技》【年(卷),期】2018(039)016【总页数】5页(P37-41)【关键词】白灵菇;蛋白质提取;盐析;理化性质;功能性【作者】薛媛;杨沫;魏君慧;陈怡萌;徐怀德【作者单位】西北农林科技大学食品科学与工程学院,陕西咸阳712100;西北农林科技大学食品科学与工程学院,陕西咸阳712100;西北农林科技大学食品科学与工程学院,陕西咸阳712100;西北农林科技大学食品科学与工程学院,陕西咸阳712100;西北农林科技大学食品科学与工程学院,陕西咸阳712100【正文语种】中文【中图分类】TS209白灵菇(Pleurotus nebrodensis)在我国广泛种植,年产量超过18万吨,人工栽培产地遍及南北诸省,其中以豫、津、冀省区生产规模较大[1]。

白灵菇子实体肥大洁白,脆嫩可口,香味浓郁,营养丰富[2]。

其中,蛋白质含量占干菇的27.14%,氨基酸含量约167.2 g/kg,其中必需氨基酸占氨基酸总量的40.07%[3]。

PH0302|超低分子量蛋白Marker II(3.4-100kD)Ultra Low Molecular Weight Protein Marker货号：PH0302规格：☐10T（50ul）保存：Store@-20℃◆产品简介本产品包含5种多肽和3种低分子量蛋白质组成，分子量范围为3.4kD-100kD。

可以用来判断SDS-PAGE上多肽和小蛋白的分子量。

◆使用说明第一次收到该产品，室温融化后，彻底混匀，离心快甩将溶液完全收集到管底，根据需要适量分装成小管，-20℃贮存，每次取一小管使用；本产品为即用型，融化后既能使用，不能95℃加热处理。

一.制胶：I配制分离胶1．按照表一将不同体积的双蒸水、40%PAA（19:1）、凝胶缓冲液和乙二醇加入到小烧杯中混合。

2．加入10%APS和TEMED，立即混匀5-10秒，以使溶液充分混匀。

3．在凝胶模具中迅速灌入适量分离胶溶液，然后在分离胶溶液上轻轻覆盖一层1-3cm的水层，使凝胶表面保持平整。

4．静置30-60分钟，待分离胶和水层之间出现一个清晰的界面表示凝胶已聚合。

表一（一块0.75mm mini胶用量）分离胶浓缩胶18％T,5%C/6.0ml5％T,3.3%C/2ml 40%PAA（19:1） 2.7ml/40%PAA(29:1)/0.25ml4×凝胶缓冲液 1.5ml0.5ml乙二醇（电泳级） 1.8ml/ddH2O/ 1.25ml10％APS50-65μl20μlTEMED6μl2μl注：如非必须，不要使用1.0mm和1.5mm的凝胶，尽量使用厚度0.75mm的凝胶，这样会减少电泳后染色和脱色的时间。

II配制浓缩胶去除覆盖在分离胶上的水层，用滤纸将残留的水吸去。

1．按照表一将不同体积的双蒸水、40%PAA（29:1）和凝胶缓冲液加入到小烧杯中混合。

2．加入10%过硫酸铵和TEMED，立即混匀5-10秒，以使溶液充分混匀。

3．将梳子插入凝胶内，避免产生气泡。

蛋⽩Marker说明书PageRuler Prestained Protein LadderSM0671A prestained SDS-PAGE MW marker with contrasting colored reference bands at10 and 70kDa.The Thermo Scientific PageRuler Prestained Proteis a mixture of ten (10) blue-, orange- and green-srecombinant proteins (10 to 170kDa) for use as sizstandards in protein electrophoresis (SDS-PAGE)Western blotting.This prestained protein MW marker is designed fomonitoring the progress of SDS-polyacrylamide geelectrophoresis, for assessing transfer efficiency onylon and nitrocellulose membranes, and for estimapproximate size of separated proteins that have b visible with gel stains or Western blot detection reagents. The ladder contains one orange refer at 70kDa and one green band at 10kDa.Highlights:Size range– 10 proteins spanning 10 to 170kDaReady-to-use– supplied in a loading buffer for direct loading on gels; no need to boil Sharp bands– color-coded bands of similar intensity for easy visualizationQuality tested – each lot evaluated by SDS-PAGE and Western blottingTwo reference bands– orange at 70kDa and green at 10kDaMembrane-compatible– colored bands transfer to membranes for Western blotting Includes:Dye-stained proteins in 62.5mM Tris-H3PO4 (pH 7.5 at 25°C), 1mM EDTA, 2% SDS, 1 1mM NaN3 and 33% glycerol. Applications:Monitoring protein migration during SDS-polyacrylamide gel electrophoresisMonitoring protein transfer onto membranes after Western blottingSm1841The Thermo Scientific Spectra Multicolor Broad RangeProtein Ladder is a 4-color protein standard containing 10prestained recombinant prokaryotic proteins (10 to 260kDa)for use as size standards in gel electrophoresis and Westernblotting.This prestained protein MW marker is designed formonitoring the progress of SDS-polyacrylamide gelelectrophoresis, for assessing transfer efficiency onto PVDF,nylon and nitrocellulose membranes, and for estimating theapproximate size of separated proteins that have been made visible with gel stains or Western blot detection reagents. Four different chromophores (blue, orange, green, pink) are bound to the different component proteins, producing a brightly colored ladder with an easy-to-remember pattern.Highlights:Size range– 10 proteins spanning 10 to 260kDaMulticolor– four different colors for unambiguous band-size assignmentReady-to-use– supplied in a loading buffer for direct loading on gels; no need to boilSharp bands– color-coded bands of similar intensity for easy visualizationQuality tested – each lot evaluated by SDS-PAGE and Western blottingMembrane-compatible– colored bands transfer to membranes for Western blotting Includes:Dye-stained proteins in 62.5mM Tris-H3PO4 (pH 7.5 at 25°C), 1mM EDTA, 2% SDS, 10mM DTT, 1mM NaN3 and 33% glycerol.Applications:Monitoring protein migration during SDS-polyacrylamide gel electrophoresisMonitoring protein transfer onto membranes after Western blottingSizing of proteins on SDS-polyacrylamide gels and Western blotsProduct Details:Sm1811The Thermo Scientific PageRuler Plus Prestained ProteinLadder is a mixture of nine (9) blue-, orange- andgreen-stained recombinant proteins (10 to 250kDa) for useas size standards in protein electrophoresis (SDS-PAGE)and Western blotting.This prestained protein MW marker is designed formonitoring the progress of SDS-polyacrylamide gelelectrophoresis, for assessing transfer efficiency onto PVDF,nylon and nitrocellulose membranes, and for estimating theapproximate size of separated proteins that have been made visible with gel stains or Western blot detection reagents. A blue chromophore is bound to all proteins, except proteins of two reference bands of 70kDa and 25kDa that are colored with an orange dye and one green reference band of 10kDa. PageRuler Plus Prestained Protein Ladder is ready to use: no heating, further dilution or addition of a reducing agent is required before loading onto a gel.Highlights:Size range– nine proteins spanning 10 to 250kDaReady-to-use– supplied in a loading buffer for direct loading on gels; no need to boilSharp bands– color-coded bands of similar intesity for easy visualizationQuality tested – each lot evaluated by SDS-PAGE and Western blottingBright reference bands– orange at 70 and 25kDa, and green at 10kDaMembrane-compatible– colored bands transfer to membranes for Western blotting Includes:Dye-stained proteins in 62.5mM Tris-H3PO4 (pH 7.5 at 25°C), 1mM EDTA, 2% SDS, 10mM DTT, 1mM NaN3 and 33% glycerol.Applications:Monitoring protein migration during SDS-polyacrylamide gel electrophoresisMonitoring protein transfer onto membranes after Western blottingSizing of proteins on SDS-polyacrylamide gels and Western blotsProduct Details:。

超低分子量蛋白质Marker（3.3kD-20.1kD)使用说明货号：PR1300规格：15T(150µ1)保存：-20℃保存，有效期为一年。

产品简介::超低分子量蛋白质Marker（3.3kD-20.1kD)3种多肽和2种低分子量蛋白质组成，分子量范围为3.3kD-20.1kD。

可以用来判断SDS-PAGE上多肽和小蛋白的分子量。

本品为蛋白质和多肽混合物的冻干粉，每种蛋白含量约为15-22.5ug，配有一支1×上样缓冲液。

使用说明::1.开封后，溶于150µ11×上样缓冲液，于95℃水浴5分钟，可根据需要进行小量分装，每管10µl，-20℃贮存，每次取一管使用，避免反复冻融。

2.使用前取分装后的小管室温融化后，95℃预热5分钟即可上样电泳，用考马斯亮蓝G-250染色后可见5条蛋白带(见下示意图)。

凝胶的配置方法:分离胶夹层胶浓缩胶20%/4.5ml16.5%/4.5ml15.5%/4.5ml10%/2ml4%/2ml 49.5%T3%C///0.407ml0.160ml 49.5%T6%C 1.82ml 1.50ml 1.395ml//凝胶缓冲液 1.50ml 1.50ml 1.50ml0.667ml0.496ml 甘油0.48ml0.48ml0.48ml//ddHO0.70ml 1.02ml 1.125ml0.926ml 1.344ml210%APS40µl40µl40µl20µ|20µ| TEMED5µl5µl5µl3µl3µl凝胶制备及染色注意事项:1.先配制分离胶，聚合后再配制夹层胶，最后配制浓缩胶，3种胶的制胶体积比为4:1.5:1。

电泳时，30v跑1-2小时后，待指示前沿到达分离胶上沿时，把电压调至100v，至电泳结束，整个电泳过程大约需要6-8小时。

免疫印迹免疫印迹又常称Western blot，是一综合性的免疫学检测技术。

它利用SDS-PAGE技术将生物样品中的蛋白质分子按分子量的大小在凝胶上分离开，然后用电转移的方法将蛋白转移到固相膜上（NC、尼龙或PVDF膜），最后进行免疫学检测。

由于免疫学检测敏感性高，并且通过SDS-PAGE样品中的待检蛋白得到了浓缩，因此，Western blot的灵敏度特别高，可达到放射免疫的分析水平。

而使用一般的免疫学检测技术（如ELISA、放射免疫沉淀）检测时，由于要求被检测蛋白可溶、要求抗体效价高、亲和力高和特异性强，往往并不容易达到目的。

而Western blot却没有这些缺点。

因此，Western blot广泛应用于生物样品中是否存在某一蛋白质（抗原）的检测。

也可用于粗略测定抗原蛋白的相对含量和抗原多肽链的相对分子量。

一、原理是SDS-PAGE电泳与免疫检测相结合的一种蛋白质检测方法。

强阴离子去污剂SDS与还原剂并用，通过加热使蛋白质解离，大量的SDS结合蛋白质，使其带相同密度的负电荷，在聚丙烯酰胺凝胶电泳（PAGE）时，不同蛋白质的迁移率仅取决于分子量。

然后将蛋白质转移到膜上，继而用抗体进行检测。

经过PAGE分离的蛋白质样品，转移到固相载体（例如硝酸纤维素薄膜）上，固相载体以非共价键形式吸附蛋白质，且能保持电泳分离的多肽类型及其生物学活性不变。

以固相载体上的蛋白质或多肽作为抗原，与对应的抗体起免疫反应，再与酶或同位素标记的第二抗体起反应，经过底物显色或放射自显影以检测电泳分离的特异性目的基因表达的蛋白成分。

二、实验材料诱导与未诱导的带有口蹄疫病毒保护性抗原VP1与LTB融合蛋白基因的工程菌。

三、仪器、耗材与试剂（一）仪器、耗材DYY－6C电泳仪、DYCZ－24D垂直板电泳槽、封口机、DYCP－40C半干式转移电泳槽、5ml、1ml、200μl、50μl、10μl移液器及相应的Tip、50ml烧杯。

新华滤纸、PVDF 膜。

蛋白质电泳分子量标准（蛋白marker 14.4-97.4 kd）【篇名】：探究蛋白质电泳分子量标准1. 引言在生物学研究中，蛋白质电泳是一种重要的实验方法，用于分离和分析蛋白质。

而蛋白质电泳分子量标准（蛋白marker）则是在蛋白质电泳实验中用来确定待测蛋白分子量的重要工具。

本文将探讨蛋白质电泳分子量标准的概念、应用以及其在生物学研究中的重要性。

2. 蛋白质电泳分子量标准的概念蛋白质电泳分子量标准是一系列已知分子量的蛋白质，它们被用作电泳实验中的参照物。

常见的蛋白marker包括14.4-97.4 kd等不同分子量的标准物质，通过蛋白电泳实验，可以通过蛋白marker的分离情况来确定待测蛋白的分子量。

3. 蛋白质电泳分子量标准的应用蛋白质电泳分子量标准可用于验证电泳实验的准确性，评估蛋白质分子的大小和形状，以及在分析未知蛋白质时提供参照标准。

通过与已知分子量的蛋白marker进行对比，未知蛋白的分子量可以被确定，从而为后续的生物学研究提供重要参考。

4. 蛋白质电泳分子量标准在生物学研究中的重要性在生物学研究中，蛋白质电泳分子量标准的应用极其重要。

它不仅可以帮助科研人员确定蛋白质标准品的分子量，还可以作为蛋白质分析实验的质量控制工具，确保实验结果的准确性和可靠性。

蛋白marker在蛋白质电泳实验中的使用，也有助于扩大科学家对蛋白质研究的视野，从而推动生物学领域的进步。

5. 个人观点作为生物学研究领域的从业人员，我深刻理解蛋白质电泳分子量标准的重要性。

对于生物学实验来讲，实验结果的准确性是至关重要的，而蛋白marker作为质量控制的一个重要环节，能够有效提高实验数据的可信度，也为科研人员提供更可靠的实验结果。

6. 总结蛋白质电泳分子量标准在生物学研究中具有重要作用。

通过对蛋白marker的使用，科研人员可以准确地确定蛋白质的分子量，从而为生物学研究提供可靠的数据和结果。

深入了解和掌握蛋白质电泳分子量标准的实验原理和应用方法，对于开展生物学研究具有重要的意义。

LMW-SDS marker kit (17-0446-01)SDS低分子量标准试剂盒SDS低分子量标准试剂盒是由六种高纯度的已鉴定蛋白(分子量：14,400-97,000)的干粉混合物组成，用于SDS－PAGE电泳中分子量的测定。

通过比较待测蛋白和试剂盒中已知分子量蛋白的电泳迁移率，推出未知蛋白的分子量。

每瓶含有 576μg 蛋白混合物。

该试剂盒储存于2－8°C 。

SDS 低分子量标准 (14 000−97 000)蛋白分子量 来源 量（ug) Phosphorylase b 97 000 rabbit muscle 67 Albumin 66 000 bovine serum 83 Ovalbumin 45 000 chicken egg white 147 Carbonic anhydrase 30 000 bovine erythrocyte83 Trypsin inhibitor 20 100 soybean 80 α-Lactalbumin14 400bovine milk116两倍稀释后每个泳道上样3ul，采用自制的15％T，2.7%C凝胶在SE260电泳槽上20mA恒流电泳1小时55分钟,考染结果。

1. 重溶：按下述方法直接重溶，六种标准蛋白将溶于25％蔗糖溶液中，所以样品缓冲液中不必加入密度增强剂。

为了更好的重复性，避免反复冻溶蛋白溶液，最好将其分装，于-80ºC可保存3个月。

考马斯亮兰染色：对于Laemmli 胶,每支瓶加入 200 μl标准的1x样品缓冲液[0.0625 M Tris-HCl,2% SDS,10% (v/v) 甘油(可选的),0.1 M DTT 和 0.01% 溴酚蓝,pH 6.8]。

对于 PhastGel T M , ExcelGel T M 和 CleanGel T M 预制胶，每支瓶加入 200μl[10 mM Tris-HCl,2% SDS, 0.1 M DTT,0.01% 溴酚蓝和 1 mM EDTA, pH 8.0]。

换个姿势了解蛋白质Marker！蛋白分子量标准，常称之为蛋白Marker。

在免疫印迹（Western blot）试验中，分子量Marker虽不起眼，但意义重大，是阳性对照，是大小的标准，是必须的。

只有Marker精确无误了，实验结果才有说服力。

除此之外，蛋白Marker还能够提示电泳是否正常，转移是否成功等信息。

在实验中经常会说“跑”电泳我们可以用“团队障碍跑”来描述蛋白质在凝胶中的运动体型大的阻碍大，跑的慢体型小的阻碍小，跑的快对于未知蛋白组我们可以根据它的停止时位置分析和区分其中蛋白质的大小这就要求我们设置一个特殊的赛道“Marker组”让具有指示性的蛋白质组（Marker）一起移动在相同的时间内与蛋白质“裁判”跑一样距离的其分子大小也是一致的Marker组的分子大小我们是知道的就可以根据目的蛋白的大小进行筛选再对目的蛋白进行后期的分离与检测蛋白质电泳示意图蛋白Marker可分为两大类：1、未预染的Marker按照包含的蛋白质分子量大小来区分，又可以分为：宽分子量蛋白Marker、高分子量蛋白Marker以及低分子量蛋白Marker2、预染的Marker按照染料颜色的多少可以分为：单色预染和多色预染。

【未预染的Marker】这是最简单，也是最准确的一种。

由于没有附带染料分子或者是标记分子，所示大小正好是蛋白原本的大小，是精确判断蛋白大小所必须的。

1、宽分子量蛋白Marker如果从实验室总体考虑的，就选范围尽量宽，条带分布比较均匀的，这样你的蛋白无论在哪个区间都容易判断，避免落在一段空白区域中。

不过条带越多，每次上样量也就越大。

拿到Marker后，如果买的是大包装，就应该考虑分装，尽量避免反复冻融。

另外，宽分子量蛋白Marker不一定每一条都能够看到，特别是小分子量蛋白。

如果侧重大蛋白，那小的可能就已经跑掉了。

2、高分子量蛋白Marker通常在检测大分子量蛋白时使用高分子量蛋白Marker。

3、低分子量蛋白Marker在一般的蛋白电泳当中，更常用的是低分子量蛋白Marker，除了有指示蛋白大小的作用以外，有时还可用作粗略的定量。

蛋白质分子量标准(14.4-116kd, 非预染)
蛋白质分子量标准（14.4-116 kd，非预染）指的是一组用于电泳分析的标准蛋白质混合物，其分子量范围在14.4千道尔顿（kd）到116千道尔顿（kd）之间。

这些标准蛋白质通常用于凝胶电泳（如SDS-PAGE）中，以评估未知蛋白质的分子量大小。

这些标准蛋白质的分子量是已知的，因此可以通过与未知蛋白质在电泳凝胶上的迁移速度进行比较，来估算未知蛋白质的分子量。

这对于蛋白质研究和分析非常重要，因为分子量是蛋白质的一个重要属性，与其功能、结构和相互作用密切相关。

“非预染”指的是这些标准蛋白质没有预先用染料染色，因此在使用时需要与染料一起孵育，以便在凝胶上可视化。

常见的用于蛋白质染色的染料包括考马斯亮蓝和银染剂等。

请注意，具体的蛋白质分子量标准可能会因供应商和批次而异，因此在使用时应参考相关说明书和建议。

此外，对于某些特定的电泳条件和应用，可能需要使用不同分子量范围或类型的标准蛋白质。