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植物细胞工程-开题报告学校：海南大学学院：农学院专业：08生物技术（2）班姓名：金丽勇学号：2008 0104B 075指导老师：莫廷辉2010年12月10日芦荟组织培养的研究一、项目研究的目的意义芦荟属（学名：Aloe）通称芦荟，原产于地中海、非洲，为独尾草科多年生草本植物，据考证的野生芦荟品种300多种，主要分布于非洲等地。
这种植物颇受大众喜爱，主要因其易于栽种，为花叶兼备的观赏植物。
可食用的品种只有六种，而当中具有药有价值的芦荟品种主要有：洋芦荟(又名巴巴多斯芦荟或翠叶芦荟Aloe Barbadensis/Aloe Vera)库拉索芦荟(分布于非洲北部、西印度群岛)，好望角芦荟(分布于非洲南部)，元江芦荟等。
芦荟是百合科芦荟属多年生常绿多肉质草本植物。
近年来，由于芦荟化学及药理学研究的深入，巳形成了一股世界性的芦荟保健热。
据科学研究，发现芦荟中有不少成分对人体皮肤有良好的营养滋润作用，且刺激性少，用后舒适，对皮肤粗糙、面部皱纹、疤痕、雀斑、痤疮等均有一定疗效[1]。
因此，其提取物可作为化妆品添加剂，配制成防晒霜、沐浴液等。
至于轻度的撞伤、挫伤、香港脚、冻伤、皮肤龟裂、疣子等，都可以使用芦荟来治疗，效果不错。
现代研究显示，其叶含芦荟大黄素、异芦荟大黄素及芦荟苦味素等，药理实验有泻下、抗癌作用。
芦荟花性寒，味苦涩，有清热、止咳、止血功效，可治疗咳嗽、吐血[2]。
芦荟的栽培产业也已开始在我国兴起，但由于芦荟不能自花授粉结实，因此，用种子繁殖非常困难。
目前的繁殖方法主要是分株和分蘖，但难以快速、大量地繁殖种苗，这也是当前芦荟种苗昂贵的重要原因之一[3]。
本文介绍一种对芦荟茎尖进行组织培养快速繁殖试管苗的技术，利用这项技术可在短期内繁殖上百万株的种苗，具有成本低，效益高的特点。
二、国内外技术发展概况及趋势（附主要参考文献及出处）很多学者对芦荟不同外植体进行比较试验，苏海等[4]认为，二年生的库拉索芦荟(A. barbadensis)茎尖比茎段更容易诱导出不定芽，而且芦荟快速繁殖宜通过茎尖诱导出不定芽而获得无菌苗，这样省去了诱导愈伤组织步骤，缩短了诱导时间，而且可以减少种苗变异率。
不同浓度NAA诱导芦荟叶片愈伤效果的研究王玉梅广东第二师范学院生物系09园艺技术广州510303摘要：采用浓度差的方法，考察了0mg/L、0.5mg/L、1mg/L、1.5mg/L四种浓度的NAA对中华芦荟叶片愈伤组织的诱导效果的影响。
结果表明：在MS+0.2mg/L6-NA基本培养基中，1mg/L的NAA对愈伤的诱导效果最好。
关键词：芦荟（Aloe）叶片愈伤组织诱导芦荟（Aloe）为百合科芦荟属植物，含有七十多种对人体有益物质，在医学、食用、美容等多方面都具有广泛的实用价值【1】。
芦荟的繁殖一般采用扦插和分株繁殖，然而这些方法受繁殖基数的限制，初期繁殖速度较慢，而且容易是病毒积累，影响植株生长，甚至退化【2】。
采用叶片经愈伤组织诱导再促进长芽、生根的培养方法，不仅可以为生产提供一条在短期内繁殖出大量种苗的途径，以加速新品种的推广，而且还可以解决大规模快速繁殖中材料不足的问题。
该试验以中华芦荟为材料，采用浓度差的方法，探究不同浓度NAA在MS+0.2mg/L6-BA基本培养基中对中华芦荟叶片愈伤组织诱导效果，以期获得最佳浓度。
1 材料与方法1.1 实验材料中华芦荟的幼嫩叶片采自广东第二师范学院生物楼6楼顶1.2 实验方法1.2.1 培养基的配置以MS为基本培养基，其中添加0.2mg/L的6-BA和4个不同浓度的NAA组合（见表1），蔗糖3%，琼脂1%，PH5.8,培养基经高温杀毒30min备用。
表1 培养基与激素组合组名瓶数培养基 6-BA(mg/L) NAA(mg/L)A 10 MS 0.2 0B 10 MS 0.2 0.5C 10 MS 0.2 1D 10 MS 0.2 1.51.2.2 材料灭菌处理取芦荟幼嫩叶片，用自来水洗干净再在流水下冲刷3h, 再用75%的酒精进行表面消毒30s，然后用0．1％的升汞液消毒9min，最后用无菌水冲洗7～8次，洗去植物表面的升汞残液，放人无菌培养皿中，用无菌滤纸吸干水分备用。
芦荟、紫苏组织培养实验报告一、实验目的与实验要求1、学习MS培养基母液的配制方法。
2、学习用母液法配制培养基以及掌握培养基灭菌的方法。
3、初步掌握外植体芦荟、紫苏等植物材料消毒、接种的无菌操作技术以及外植体初代培养的方法。
4、认识植物组织培养技术在生产实践中起的作用，尤其在于保存珍贵物种和生产研究方面的应用。
5、体验开放式实验教学，培养生物实验意识，提高学习的主动性、获取实验知识的能力和撰写实验报告水平。
二、实验方案1、实验仪器冰箱，分析天平，烧杯（50mL，100mL，500mL，1000mL），量筒(1000mL，100mL，25mL)，容量瓶(1000mL，500mL，100mL)，磨口试剂瓶(500mL，1000mL)，药勺、称量纸、精密pH试纸，滴管、玻璃棒、电炉，微波炉、移液管（10mL，5mL，2mL，1mL，0.5mL），吸耳球，滴瓶，锥形瓶、纱布，耐热橡皮筋，线绳，高压灭菌锅，标签纸，记号笔、解剖工具、托盘、棉花、超净工作台2、实验药品NH4NO3, KNO3, CaCl2•2H2O, MgSO4•7H2O, KH2PO4, KI, H2BO3，MnSO4•4H2O,ZnSO4•7H2O, Na2•MoO4•2H2O, CuSO4•5H2O, CoCl2•6H2O, Na2•EDTA•2H2O，FeSO4•7H2O,烟酸,甘氨酸, 维生素B1,维生素B6 ,肌醇, 蒸馏水, 琼脂,蔗糖,NAA，6-BA，1mol/LHCl，1mol/LNaOH, 升汞,吐温-803、实验原理(1)母液法配制培养基原理在实验中常用的培养基，可将其中的各种成分配成10倍、100倍的母液，放入冰箱中保存，用时可按比例稀释。
配制母液有2点好处：一是可减少每次配制称量药品的麻烦，二是减少极微量药品在每次称量时造成的误差。
母液可以配单一化合物母液，但一般都配成以下四种不同混合母液。
应注意以下几个方面：A.药品称量应准确，尤其微量元素化合物应精确到0.0001克，大量元素可精确到0.01克。
一、实验简介实验名称：芦荟组织培养实验实验目的：了解芦荟组织培养的基本原理和方法，掌握植物组织培养技术，探索芦荟快速繁殖和优良品种选育的新途径。
实验时间：2023年X月X日至2023年X月X日实验地点：XX大学植物组织培养实验室二、实验材料与仪器1. 实验材料：- 芦荟植株：新鲜、无病虫害的健康芦荟植株- 诱导培养基：MS培养基（改良Skoog和Lisense培养基）- 细胞分裂素：6-苄基腺嘌呤（BAP）- 脱分化培养基：1/2MS培养基- 生根培养基：1/2MS培养基+IAA（吲哚乙酸）- 营养液：1/2MS培养基+植物激素- 灭菌剂：70%酒精、0.1%氯化汞2. 实验仪器：- 恒温培养箱- 离心机- 超净工作台- 剪刀、解剖刀、镊子、剪刀等三、实验方法1. 材料处理- 将芦荟植株洗净，用70%酒精消毒后，用0.1%氯化汞浸泡5分钟，再用无菌水冲洗3次。
- 将消毒后的芦荟植株切成小块，每块含有1-2个腋芽。
2. 芦荟组织培养- 将芦荟小块接种于诱导培养基上，置于恒温培养箱中，培养温度为25℃，光照时间为12小时/天。
- 在诱导培养基中，细胞分裂素浓度为0.5mg/L，培养7天后，观察愈伤组织的形成情况。
3. 愈伤组织分化- 将愈伤组织接种于脱分化培养基上，继续培养，观察愈伤组织分化成丛生芽的情况。
- 在脱分化培养基中，细胞分裂素浓度为0.1mg/L，生长素浓度为0.1mg/L，培养14天后，观察丛生芽的形成情况。
4. 丛生芽生根- 将丛生芽接种于生根培养基上，置于恒温培养箱中，培养温度为25℃，光照时间为12小时/天。
- 在生根培养基中，生长素浓度为0.5mg/L，培养10天后，观察生根情况。
5. 炼苗与移栽- 将生根后的芦荟幼苗移栽到土壤中，进行炼苗。
- 注意保持土壤湿润，适当遮荫，促进幼苗生长。
四、实验结果与分析1. 芦荟愈伤组织形成- 在诱导培养基中，芦荟愈伤组织形成较为良好，愈伤组织呈白色，质地柔软。
芦荟是百合科芦荟属多年生常绿多肉质草本植物。
近年来，由于芦荟化学及药理学研究的深入，巳形成了一股世界性的芦荟保健热。
芦荟的栽培产业也已开始在我国兴起，但由于芦荟不能自花授粉结实，因此，用种子繁殖非常困难。
目前的繁殖方法主要是分株和分蘖，但难以快速、大量地繁殖种苗，这也是当前芦荟种苗昂贵的重要原因之一。
本文介绍一种对芦荟茎尖进行组织培养快速繁殖试管苗的技术，利用这项技术可在短期内繁殖上百万株的种苗，具有成本低，效益高的特点。
一、材料和培养基
MS+BA3. 0mg/L+NAA0 .2mg/L+3％蔗糖+0.8％琼脂”为中华芦茎较优的初代培养基
． MS+BA3.0mg/L+NAA0.2mg/L+3％蔗糖+0.8％琼脂”为中华芦荟较优的继代培养基。
KC+NAAl.0mg/L+3％蔗糖+0 8％琼脂”更佳，诱导15d即可生根25d分化根量平均达4．8条，且根的分支较多，吸收能力强。
筛选到中华芦荟丛生芽诱导的最优培养基为:MS十2.0mg/L 6-BA+ 0.3mg/LNAA+ 30G/L 蔗糖。
筛选到中华芦荟丛生芽生根的最优培养基是:1/2 MS+0.05% PVP+ 0.2mg/L NAA+0.2mg/L IBA+30g/L蔗糖。
l0-l5cm高的芦荟幼苗;愈伤组织诱导培养基为MS+(1一6mg/ L)BA+(0.1一0.5mg/L)NAA;分化培养基为MS+(2-4mg/L)BA+ (0.1-0.5mg/L)NAA;生根培养基为MS+(0.1一0.5mg/L)IBA+(2一5mg/L)PP33。
二、繁殖方法
(一)愈伤组织培养将准备好的芦荟幼苗在清水中冲洗数次，剪去叶片和大部分茎段，取茎尖部分，再冲洗1-2次，淋干。
在超净台上，先用75%的乙醇将
茎尖浸泡30-60s，再用升汞浸5-l0min，最后用无菌水冲洗数次。
用解剖刀取出包括茎尖生长点的组织切块，接种到愈伤组织诱导培养基上。
培养条件为:每天光照 10-12h，光照度为 1000一2000Lx，温度(25士)2℃。
大约15-25d后，试管中接种的外植体就可以膨大，形成愈伤组织。
愈伤组织的形成标志着接种的外植体的生长状态已脱离分化状态，开始重新恢复分生能力。
愈伤组织形成1周后，就可将愈伤组织转管进行继代培养或分化培养。
(二)继代培养将愈伤组织在无菌条件下，从试管中取出，用镊子和解剖刀剔除附着在愈伤块上的培养基，并用无茵水反复清洗数次，直至愈伤块上无残留培养基为止。
用解剖刀将愈伤块切成数个小块，再接种到装有愈伤组织诱导培养基的三角瓶中，在与诱导愈伤组织相同的培养条件下继续培养。
几天后，三角瓶中的小愈伤块即可逐渐长大，这一过程称作继代培养，可反复操作。
通过愈伤组织的继代培养，原来接种的1个芦荟茎尖组织可繁殖出大量的新接种材料来，用于分化培养。
(三)分化培养将愈伤组织在无菌条件下，从试管或三角瓶中取出，用无菌水洗净，切成小接种块，接种到装有分化培养基的三角瓶中，分化培养的条件同愈伤组织培养。
大约30-50d后，愈伤组织就可分化出芽，并继续长出小叶片。
当分化出的幼苗长到一定高度或分化出一定数量后，将这些小幼苗在无菌条件下取出，进行生根培养或重新诱导分化。
(四)生根培养当三角瓶中的幼苗叶片长到3cm左右时，将幼苗在无菌条件下取出，放入装有生根培养基的三角瓶中培养，培养条件同分化培养。
大约半个月后，幼苗即可生根。
(五)炼苗当幼苗的根长到一定长度，幼苗形体已显健壮时。
将幼苗取出，在清水中洗除附着在根上的培养基(注意:一定要严格洗净，否则会烂根)。
将洗净的幼苗排好，用清水喷湿，在15-25℃、湿度60%- 80%的条件下炼苗24h，也可视情况缩短为l2h。
(六)移栽炼苗后，将幼苗移栽入由蛭石组成的驯化苗圃中驯化，每天定期给幼苗喷施驯化培养液和清水，大约15-20d后，视幼苗长势，即可移栽到苗圃中。
三、注意事项
1、配制培养基时，要严格精确地称取各种化学试剂。
培养基中的蔗糖可用市售白糖来替代，从而降低成本。
高压灭菌条件为120℃，1.5kg/cm2，3Omin。
每次接种前都要对接种室进行甲醛熏蒸和紫外线灭菌。
2、在培养中，如果出现杂菌污染，应立即将该污染试管或三角瓶中的培养物倒掉并将试管或三角瓶洗净，烘干备用。
对于愈伤组织或试管苗长势良好，仅有局部杂菌污染的试管或三角瓶，也可在无菌条件下，将愈伤组织或试管苗取出，重新放入装有相应培养基的试管或三角瓶中，继续培养。
3、炼苗后，也可先将试管苗浸泡在溶解有生根粉的清水中1-2h，再移栽到驯化苗圃中。
在驯化过程中，除要注意环境湿度、温度和光照外，还要注意防止各种病虫害的发生。
芦荟的虫害主要是红蜘蛛和蚜虫，可喷施40%的氧化乐果乳油1200倍液防治。
芦荟的病害主要是黑斑病，可喷施50%多菌灵可湿性粉剂1000倍液防治。
二、繁殖方法
( 一) 愈伤组织培养将准备好的芦荟幼苗在清水中冲洗数次，剪去叶片和大部分茎段，取茎尖部分，再冲洗1-2 次，淋干。
在超净台上，先用75% 的乙醇将茎尖浸泡30-60s ，再用升汞浸5-l0min ，最后用无菌水冲洗数次。
用解剖刀取出包括茎尖生长点的组织切块，接种到愈伤组织诱导培养基上。
培养条件为: 每天光照10-12h ，光照度为1000 一2000Lx ，温度(25 士)2 ℃。
大约15-25d 后，试管中接种的外植体就可以膨大，形成愈伤组织。
愈伤组织的形成标志着接种的外植体的生长状态已脱离分化状态，开始重新恢复分生能力。
愈伤组织形成 1 周后，就可将愈伤组织转管进行继代培养或分化培养。
