成 都 医 学 院 教 案 首 页
2006 级药学专科 专业1.2 班 任课教师：冷言冰
课程 毒理学基础 题目 经口染毒半数致死剂量测定 学时 讲授 3
实验
练习
行课时间 2007年11月23 日第6节至8节 课次 第5次
教 材 《毒理学基础》王心如主编 人民卫生出版社
教 具 黑板、电子课件
教 学
目 的
要 求 了解药物LD50测定的意义、方法、计算过程。
LD50是指使一群体动物中半数死亡的剂量，是衡量药物毒性大小的指标，是评价药物优劣的重要参数。了解药物单次给药或短时间内多次给药后动物所产生的毒性反应及其严重程度，为临床安全用药及监测提供一定的参考。
教学重点
难点及其
解决方案 实例说明、讨论发言
参 考
资 料 《卫生毒理学》人民卫生出版社
网络精品课程
实 施
情 况
小 结
教研室主任签名： 200 年 月 日 成 都 医 学 院 教 案 续 页
教学过程、内容及时间分配 教学方法与手段
【实验动物】小白鼠，体重18-22g，♀♂各半，实验前禁食12 h，不禁水。
【实验器材和药品】 计算机（BL-410机能实验系统）、计算器、电子秤、量筒（10ml）、注射器（1ml）、小鼠笼；盐酸普鲁卡因（procaine hydrochloride）。
【实验步骤和观察项目】
一、预备实验
1.探索剂量范围：根据经验或文献找出动物100%及0%死亡的剂量，即上下限剂量（Dm,Dn）。对于无毒性参考资料的药物，一般先配制最大浓度药剂，然后按等比关系（如2：1）稀释成多个剂量，方法是每组取4～10只小鼠，按估计剂量给药，如果全死则降低剂量，如果全活则增加剂量，进而确定出Dm, Dn。
５４ 南ＩＩｚ－ｌ ２０１５年．第９期 ｊ ¨¨ ｊ ＊ 一 ｌ ｌｌ 叠 一 ¨ｌ ｌｌｌｌ 伊维菌素半数致死量的测定 ◇四川农业大学药物制剂专业吴玉 。 ｊ 曩 ≤曩 董爱；＿ ： １ 伊维菌素是新型的广谱、高效、低毒抗生素类抗寄生虫 药，对体内外寄生虫特别是线虫和节肢动物均有良好驱杀作 用。但对绦虫、吸虫及原生动物无效。大环内酯类抗寄生虫药 对线虫及节肢动物的驱杀作用，在于增加虫体的抑制性递质 一 氨基丁酸（ＧＡＢＡ）的释放，以及打开谷氨酸控制的ｃ１离子通 道，增强神经膜对ｃｌ的通透性，从而阻断神经信号的传递，最 终神经麻痹，使肌肉细胞失去收缩能力，而导致虫体死亡。但 超剂量可引起中毒，无特效解毒药。 １伊维菌素的研究现状 伊维菌素（Ｉｖｅｒｍｅａｉｎ）系放线菌新种阿维链霉菌（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ ａｖｅｒｍｉｔｉｌｉｓ）的发酵产物。药理作用本品为阿维菌素的衍生物， 属口服半合成的广谱抗寄生虫药，本品具有选择性的抑制作 用，通过与无脊柱动物神经细胞与肌肉细胞中谷氨酸为阀门的 氯离子通道的高亲和力结合，从而导致细胞膜对氯离子通透性 的增加，引起神经细胞或肌肉细胞超极化，使寄生虫麻痹或死 亡。本品的选择性是因为一些哺乳动物体内没有谷氨酸一氯离子 通道，且阿维菌素对哺乳动物配体一氯离子通道仅有低亲和力。 本品不能穿透人的血脑屏障。但如过量使用，可能产生包括共 济失调、呼吸缓慢、震颤、眼睑下垂、活动减少、呕吐及瞳孔 散大。处理：如发生药物过量，应尽快催吐及洗胃，如需要可 再给导泻药及进行其它常规抗毒治疗。如发生意外中毒，可根 据需要进行支持疗法（包括补充体液及电解质，氧气或进行机 械性通气）。如出现临床明显低血压应给予升压药。 ２实验的主要内容 对于伊维菌素的毒力，我做了急性毒性实验来得出伊维菌 素具体的毒性数据，即半数致死量的测定，致死剂量通常用半 数致死剂量ＬＤ ，最大耐受量：最大耐受剂量法是指用最大使用 浓度和最大灌胃容量给予２０只受试动物后，连续观察７一ｌ４天， 未见任何动物死亡，￣Ｉ］ＭＴＤ大于ｘｘ ｇ／ｋｇ体重。 ３实验方法 本实验中我通过经口一次性伊维菌素灌胃给予小鼠后，在 短时间观察动物所产生的毒性反应，包括致死的和非致死的指 标参数，主要目的在于了解新药急性毒性的强弱为长期毒性试 验和特殊毒性试验剂量设置提供依据获得新药毒性反应信息。 主要采取的具体方法如下。 我选用了成年小鼠体重均在１８—２２ ｇ之间，采用随机分配 法，即体重按四舍五入：１９．９ ｇ和２０．４ ｇ为２０ ｇ，小鼠体重相同做 相同的标记，巡回顺序分组。从６０只小鼠（其中雌雄各３０只） 中分配出ｌ０只小鼠（雌雄各五只），分成六组，做六个不同浓 度的伊维菌素急性毒性实验。母液按下述类似计算配比。 （１）已知Ｄｍａｘ＝５００ｍｇｋｇ，Ｄｉｍｎ＝５０ｍｇｋｇ，相差ｌ（借， 选择ｌ：ｒ＝ｌ：０．７。 （２）Ｇ＝７—８组的方案。 （３）用药容量：ｄ＝０．２ ｍＬ／１０ｇ。 （４）每组药液量（Ｖ）ｖ＝每组动物数 动物体重 ｄ。 Ｖ＝２０ ２０＊０．２ ｍＬ／１０ ｇ＝８ ｍＬ，为了使Ｖ能被１一ｒ整除，所以 每组配制９ ｍＬ药液。 （５）计算母液药液量剂浓度： ｖ母液＝ｖ／（１一ｒ） Ｃ母液＝Ｄｍａｘ／ｄ Ｖ母液＝９ｍＬ／（１—０．７）３０ｍＬ Ｃ母液＝（５００ｍｇ／ｋｇ）／（０．２ｍＬ／ｌＯｇ）＝２５ｍｇ／ｍＬ＝２．５％。 （６）低比列稀释。母液中吸取６ ｍＬ为ｌ号液，在余下的１４ ｍＬ中］／Ｉ］６ ｍＬ生理盐水混匀吸取６ ｍＬ为２号液，在余下的１４ ｍＬ中 ］Ｊ［１６ ｍＬ生理盐水混匀吸取６ ｍＬ为３号液，在余下的ｌ４ ｍＬ中］／１１６ ｍＬ为４号液，以此类推，直至配出所有所需溶液。实验所相差 ６倍，选择１：ｒ＝ｌ：０．７，Ｇ＝６组的方案，称取伊维菌素重量 １０４．１６６７ ｎｇ，溶剂是水：聚乙二醇４（）：６Ｏ，总溶液２０ ｍ１，每组 分配了六毫升的药液，得出稀释的浓度如下所示（单位： ｍｇ／ｍＬ）。 组数 一组 二组 三组 四组 五组 六组 浓度 ０．５ ０．３５ ０．２５ ０．１ ７ ０．１２ ０．０８ 每组按上述浓度给小鼠灌胃给药，连续观察３天小鼠的行 为，食量，与死亡数量，并纪录实验动物中毒表现和死亡情 况。观察纪录应尽量准确、具体、完整，包括出现的程度与时 间，对死亡动物可作大体解剖。 ４实验结果 其中—组（第四组）实验动物的状况如下所示。 观察天数 小鼠情况 第一天 灌胃药之后，各小鼠均背毛凌乱，打堆，不好动。 五个小时之后，小鼠活动好转，饮食正常，＝便也正常， 第＝天 早上时死亡一只小鼠脑袋被其它小鼠吭食为雌性，体重为１４．８６ｇ。 另一只小鼠打颤，背毛立起，大便失禁，身体卷曲，体重为１６．０３ｇ， 较昨天下降２．６ｇ为雄性，但没过多久就死亡，两只小鼠解剖的结果 是，肝颜色为暗红色，肺充血全浮，其它内脏均正常 其余小鼠均活动正常，且活动正常小鼠体重均升高 第三天 剩下小鼠活动均正常，无异常反应。 第四天 剩下小鼠活动均正常，无异常反应。 第五天 剩下小鼠活动均正常，无异常反应。 第六天 剩下小鼠活动均正常，无异常反应 第七天 剩下小鼠活动均正常，无异常反应。体重均上升。解剖两只小鼠后 内脏出现肺水肿，全浮，其它均正常，图片如下．
普鲁卡因半数致死量(LD50)的测定
【实验目的】
了解药物LD50测定的意义、方法、计算过程。
【实验原理】
量-效关系：量反应：血压、心率、血糖等；质反应：有或无、阴性或阳性、死亡或存活等。
药物的剂量与死亡率之间呈常态分布曲线，与累积死亡率之间呈长尾“S”形曲线；
药物的对数剂量与累积死亡率之间呈对称“S”形曲线。此量效曲线两端平坦，反应灵敏度差，中间段陡，反应灵敏。而以50%处最敏感，剂量稍有变化，死亡率就有明显变化。
故常以引起半数动物死亡(LD50)或半数动物产生阳性效应 (ED50)的剂量作为衡量药物毒性或效应大小的最常用、最恰当的指标。
LD50是指使—群动物中半数死亡的剂量，是衡量药物毒性大小的指标，是评价药物毒性的重要参数。
可了解药物单次给药或短时间内多次给药后动物所产生的毒性反应及其严重程度，为临床安全用药及监测提供一定的参考。由于生物间存在个体差异性，因此LD50常需要一批相当数量的实验动物才能测得。最大耐受量
LD50的测定方法很多，较为常用的有寇氏法、简化概率单位法、序贯法、孙瑞元点斜法和Bliss-Finney法。由于寇氏法常用，并有计算简便，结果较准确等特点，故本实验主要介绍寇氏法。
【实验对象】
小白鼠，体重18～22g，♀♂各半。实验前禁食12h，不禁水。
【实验器材和药品】
计算器，电子秤、量筒(10ml)、注射器(1ml)、小鼠笼；盐酸普鲁卡因(procaine hydrochloride)溶液、苦味酸。
【实验条件】
1． 剂量必须按等比级数（剂量对数按等差级数）分组。
2． 各组动物数应相等。
3． 反应大致呈正态分布。最小剂量组的死亡率（Pn）应为0，最大剂量组的死亡率（Pm）应为100%。如果Pn＜20%或Pm＞80%需要用校正公式计算。
【实验步骤和观察项目】
(一)预备实验
1．探索剂量范围 根据经验或文献找出动物100％及0％死亡的剂量，即上下限剂量(Dm、Dn)。对于无毒性参考资料的药物，一般先配制最大浓度药剂，然后按等比关系(如2：1)稀释成多个剂量。方法是，每组取4～10只小白鼠，按估计剂量给药，如果全死则降低剂量，如果全活则增加剂量，进而确定出Dm，Dn。
常见的药物半数致死量(LD50)的测定
1. 阿司匹林
阿司匹林作为一种常见的解热镇痛药，其LD50值为每千克体重250500毫克。在大鼠体内进行的实验表明，口服阿司匹林的LD50值约为每千克体重200400毫克。
2. 青霉素
青霉素是一种广泛应用的抗生素，但其对某些动物（如小鼠、大鼠）的LD50值较高，约为每千克体重500010000单位。需要注意的是，青霉素的毒性因物种而异，对人类的毒性较低。
3. 地高辛
地高辛是一种用于治疗心脏病的药物，其LD50值为每千克体重13毫克。在犬体内的实验显示，地高辛的LD50值约为每千克体重0.52毫克。
4. 吗啡
吗啡是一种强效镇痛药，其LD50值为每千克体重300500毫克。在大鼠体内进行的实验表明，口服吗啡的LD50值约为每千克体重400600毫克。
5. 苯巴比妥
苯巴比妥是一种镇静催眠药，其LD50值为每千克体重200500毫克。在小鼠体内进行的实验显示，苯巴比妥的LD50值约为每千克体重300400毫克。
需要注意的是，LD50值并非绝对固定，它受实验条件、给药途径、动物种类等多种因素影响。因此，在评估药物安全性时，应以实际实验结果为准，并结合其他毒性指标进行综合分析。同时，我们还需关注药物在人体内的实际毒性，以确保用药安全。
当然，让我们继续探讨药物半数致死量(LD50)的测定，并补充一些额外的信息。
6. 氯霉素
氯霉素是一种广谱抗生素，其对小鼠的LD50值为每千克体重250300毫克。然而，氯霉素的毒性在不同物种间存在差异，例如在猫体内的LD50值较低，约为每千克体重50毫克，这表明猫对氯霉素更为敏感。
7. 哌甲酯（利他林）
哌甲酯是一种用于治疗注意力缺陷多动障碍（ADHD）的药物，其LD50值为每千克体重190毫克（大鼠口服）。需要注意的是，哌甲酯的毒性作用可能与其药理作用相似，因此在用药时需严格控制剂量。
8. 硫酸亚铁
硫酸亚铁是一种常用的补铁药物，其对大鼠的LD50值为每千克体重250300毫克。硫酸亚铁的毒性主要与其在体内的铁含量有关，过量摄入可能导致铁中毒。
