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. Reed-Muench法
物受到病毒感染后，体内产生特异性中和抗体，并与相应的病毒粒子呈现特异性结合，因而阻止病毒对敏感细胞的吸附，或抑制其侵入，使病毒失去感染能力。中和试验 (Neutralization Test)是以测定病毒的感染力为基础，以比较病毒受免疫血清中和后的残存感染力为依据，来判定免疫血清中和病毒的能力。
中和试验常用的有两种方法：一种是固定病毒量与等量系列倍比稀释的血清混合，另一种是固定血清用量与等量系列对数稀释(即十倍递次稀释)的病毒混合；然后把血清－病毒混合物置适当的条件下感作一定时间后，接种于敏感细胞、鸡胚或动物，测定血清阻止病毒感染宿主的能力及其效价。如果接种血清病毒混合物的宿主与对照(指仅接种病毒的宿主)一样地出现病变或死亡，说明血清中没有相应的中和抗体。中和反应不仅能定性而且能定量，故中和试验可应用于：
1.病毒株的种型鉴定：中和试验具有较高的特异性，利用同一病毒的不同型的毒株或不同型标准血清，即可测知相应血清或病毒的型，所以，中和试验不但可以定属而且可以定型。
2.测定血清抗体效价：中和抗体出现于病毒感染的较早期，在体内的维持时间较长。动物体内中和抗体水平的高低，可显示动物抵抗病毒的能力。
3.分析病毒的抗原性。
毒素和抗毒素亦可进行中和试验，其方法与病毒中和试验基本相同。
用组织细胞进行中和试验，有常量法和微量法两种，因微量法简便，结果易于判定，适于作大批量试验，所以近来得到了广泛的应用。
(一) 定血清－稀释病毒法(病毒中和试验)
1.病毒毒价的测定 毒价单位：衡量病毒毒价(毒力)的单位过去多用最小致死量(MLD)，即经规定的途径，以不同的剂量接种试验动物，在一定时间内能致全组试验动物死亡的最小剂量。但由于剂量的递增与死亡率递增不呈线性关系，在越接近100％死亡时，对剂量的递增越不敏感。而一般在死亡率越接近50％时，对剂量的变化越敏感，故现多改用半数致死量(LD50)作为毒价测定单位，即经规定的途径，以不同的剂量接种试验动物，在一定时间内能致半数试验动物死亡的剂量。用鸡胚测定时，毒价单位为鸡胚半数致死量(ELD50)或鸡胚半数感染量 (EID50)。用细胞培养测定时，用组织细胞半数感染量(TCID50)。在测定疫苗的免疫性能时，则用半数免疫量(IMD50)或半数保护量(PD50)。
普鲁卡因半数致死量(LD50)的测定
【实验目的】
了解药物LD50测定的意义、方法、计算过程。
【实验原理】
量-效关系：量反应：血压、心率、血糖等；质反应：有或无、阴性或阳性、死亡或存活等。
药物的剂量与死亡率之间呈常态分布曲线，与累积死亡率之间呈长尾“S”形曲线；
药物的对数剂量与累积死亡率之间呈对称“S”形曲线。此量效曲线两端平坦，反应灵敏度差，中间段陡，反应灵敏。而以50%处最敏感，剂量稍有变化，死亡率就有明显变化。
故常以引起半数动物死亡(LD50)或半数动物产生阳性效应 (ED50)的剂量作为衡量药物毒性或效应大小的最常用、最恰当的指标。
LD50是指使—群动物中半数死亡的剂量，是衡量药物毒性大小的指标，是评价药物毒性的重要参数。
可了解药物单次给药或短时间内多次给药后动物所产生的毒性反应及其严重程度，为临床安全用药及监测提供一定的参考。由于生物间存在个体差异性，因此LD50常需要一批相当数量的实验动物才能测得。最大耐受量
LD50的测定方法很多，较为常用的有寇氏法、简化概率单位法、序贯法、孙瑞元点斜法和Bliss-Finney法。由于寇氏法常用，并有计算简便，结果较准确等特点，故本实验主要介绍寇氏法。
【实验对象】
小白鼠，体重18～22g，♀♂各半。实验前禁食12h，不禁水。
【实验器材和药品】
计算器，电子秤、量筒(10ml)、注射器(1ml)、小鼠笼；盐酸普鲁卡因(procaine hydrochloride)溶液、苦味酸。
【实验条件】
1． 剂量必须按等比级数（剂量对数按等差级数）分组。
2． 各组动物数应相等。
3． 反应大致呈正态分布。最小剂量组的死亡率（Pn）应为0，最大剂量组的死亡率（Pm）应为100%。如果Pn＜20%或Pm＞80%需要用校正公式计算。
【实验步骤和观察项目】
(一)预备实验
1．探索剂量范围 根据经验或文献找出动物100％及0％死亡的剂量，即上下限剂量(Dm、Dn)。对于无毒性参考资料的药物，一般先配制最大浓度药剂，然后按等比关系(如2：1)稀释成多个剂量。方法是，每组取4～10只小白鼠，按估计剂量给药，如果全死则降低剂量，如果全活则增加剂量，进而确定出Dm，Dn。
普鲁卡因半数致死量(LD50)的测定和计算
目的 通过实验了解测定药物LD50的方法、步骤和计算过程。
材料 小鼠（体重17~25克，雌雄均可，应注明性别）；鼠笼，天平，1ml注射器；2%盐酸普鲁卡因溶液，苦味酸溶液。
方法和步骤
1．探索剂量范围：取小鼠8~10只，以2只为一组，分成4~5组，选择剂量间距较大的一系列剂量，分别给各组腹腔注射盐酸普鲁卡因溶液，观察出现的症状并记录死亡数，找出引起0%及100%死亡率剂量的所在范围（致死量约在105~150mg/kg范围内）。本步骤可由实验室预先进行。
2．正式试验：在预试验所获得的0%和100%致死量的范围内，选用几个剂量（一般用5个剂量，按等比级数增减，相邻剂量之间比例为1:0.7或1:0.8），各剂量组动物数为10只，分别用苦味酸标记。动物的体重和性别要分层随机分配，完成动物分组和剂量计算后按组腹腔注射给药。最好先从中剂量组开始，以便能从最初几组动物接受药物后的反应来判断两端的剂量是否合适，否则可随时进行调整，尽可能使动物的死亡率在50%上下，死亡率为0%或100%时，不能用于计算。
实验以全班为一个单位，可以一个组观察一个剂量组(10只小鼠)，或每组各作每一剂量组的2只小鼠。务求用药量准确，注射方法规范，以减少操作误差，避免非药物所致的死亡，得到较理想的结果。
3．观察试验结果：给药后即观察小鼠活动改变情况和死亡数，存活者一般都在15~20分钟内恢复常态，故观察30分钟内的死亡率。
4．计算LD50及其95%可信限：
LD50计算方法有多种，这里介绍最常用的加权直线回归法(Bliss法)。此法虽计算步骤稍繁，但结果较精确，实际应用时可借助于计算机。
首先，用较大的剂量间距确定致死剂量的范围，进而在此范围内设定若干剂量组，剂量按等比方式设计，相邻两个剂量间距比例在0.65~0.85之间，给药后观察7~14天内动物一般情况和死亡数，根据死亡率计算LD50。请注意：若死亡率为100%和0%的数据，其机率单位为+∞和-∞，数据可列于表格中，但不能用于计算。现用下述例子具体说明计算方法。
常见的药物半数致死量(LD50)的测定
1. 阿司匹林
阿司匹林作为一种常见的解热镇痛药，其LD50值为每千克体重250500毫克。在大鼠体内进行的实验表明，口服阿司匹林的LD50值约为每千克体重200400毫克。
2. 青霉素
青霉素是一种广泛应用的抗生素，但其对某些动物（如小鼠、大鼠）的LD50值较高，约为每千克体重500010000单位。需要注意的是，青霉素的毒性因物种而异，对人类的毒性较低。
3. 地高辛
地高辛是一种用于治疗心脏病的药物，其LD50值为每千克体重13毫克。在犬体内的实验显示，地高辛的LD50值约为每千克体重0.52毫克。
4. 吗啡
吗啡是一种强效镇痛药，其LD50值为每千克体重300500毫克。在大鼠体内进行的实验表明，口服吗啡的LD50值约为每千克体重400600毫克。
5. 苯巴比妥
苯巴比妥是一种镇静催眠药，其LD50值为每千克体重200500毫克。在小鼠体内进行的实验显示，苯巴比妥的LD50值约为每千克体重300400毫克。
需要注意的是，LD50值并非绝对固定，它受实验条件、给药途径、动物种类等多种因素影响。因此，在评估药物安全性时，应以实际实验结果为准，并结合其他毒性指标进行综合分析。同时，我们还需关注药物在人体内的实际毒性，以确保用药安全。
当然，让我们继续探讨药物半数致死量(LD50)的测定，并补充一些额外的信息。
6. 氯霉素
氯霉素是一种广谱抗生素，其对小鼠的LD50值为每千克体重250300毫克。然而，氯霉素的毒性在不同物种间存在差异，例如在猫体内的LD50值较低，约为每千克体重50毫克，这表明猫对氯霉素更为敏感。
7. 哌甲酯（利他林）
哌甲酯是一种用于治疗注意力缺陷多动障碍（ADHD）的药物，其LD50值为每千克体重190毫克（大鼠口服）。需要注意的是，哌甲酯的毒性作用可能与其药理作用相似，因此在用药时需严格控制剂量。
8. 硫酸亚铁
硫酸亚铁是一种常用的补铁药物，其对大鼠的LD50值为每千克体重250300毫克。硫酸亚铁的毒性主要与其在体内的铁含量有关，过量摄入可能导致铁中毒。
