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在进行免疫细胞培养之前，要做好充分的准备。
思考题绪论1. 免疫应答主要分为哪几个阶段？2.中枢免疫器官对免疫细胞的发育起什么作用？3.外周免疫器官主要由哪些组织与器官组成？在免疫应答中发挥什么作用？淋巴细胞、B淋巴细胞与NK细胞的主要功能分别是什么？5.补体系统的主要激活途径有何不同6.免疫辅助细胞在特异性免疫应答中发挥什么作用？7.7.临床免疫学主要的研究方向是什么？8.8.免疫学检验可分为几个部分？9.9.临床免疫学及免疫检验在移植免疫、肿瘤免疫中的意义。
10.10.现代免疫学技术包括了哪些方法？第二章抗原抗体反应1．什么是抗原抗体反应？抗原抗体反应的原理是什么？2．抗原抗体的结合力有哪些？3．抗原抗体反应有哪些特点？4．如何理解抗原抗体反应的特异性和交叉反应？5．什么是抗原抗体反应的可逆性？有何应用？6．如何理解抗原抗体反应的亲和力和亲合力？7．抗原抗体反应体系中为何要确定抗原、抗体的最适比例？8．抗原抗体反应有哪些影响因素？9．基于抗原抗体反应的免疫学检测技术有哪些？10．什么是标记免疫技术？标记免疫技术有哪些类型？第三章免疫原和抗血清的制备1．什么是免疫原？2．如何制备可溶性抗原？3．常用的细胞破碎方法有哪些？4．连接半抗原的载体有哪些？制备半抗原性免疫原的方法有哪些？5．纯化抗原的鉴定包括有哪些内容？6．什么是免疫佐剂？免疫佐剂有哪些种类？免疫佐剂的作用机制有哪些？7．什么是抗血清？什么是多克隆抗体？8．如何制备抗血清？9．动物采血有哪些方法？10．抗血清的鉴定包括哪些内容？第四章单克隆抗体与基因工程抗体的制备1．杂交瘤技术是如何问世的？其基本原理是什么？2．什么是单克隆抗体？其特性和局限性如何？与多克隆抗体有何异同？3．杂交瘤细胞的克隆方法有哪些？4．细胞株冻融的原则是什么？5．大量制备单克隆抗体的方法有哪些，各有哪些优缺点？6．单克隆抗体的性质鉴定的方法有哪些？7．叙述单克隆抗体的制备流程和应用。
8．叙述基因工程抗体的概念和优点。
[单选]检测NK细胞不能采用的实验方法是（）A.酶联免疫斑点实验B.酶释法C.放射性核素法D.荧光分析法E.电泳分析[单选]Ts细胞的特性不包括（）A.具有免疫调节功能的细胞B.作用方式为非特异性C.受MHC分子的限制D.抑制自身反应性T细胞克隆E.抑制机体对非己抗原的免疫应答[单选]T细胞阳性选择的主要目的是（）A.选择出对自身抗原不发生免疫应答的细胞克隆超级通 云控 微信云控 / 好用的云控 云控官网B.选择掉对自身抗原发生免疫应答的细胞克隆C.实现自身免疫耐受D.实现对自身MHC分子的限制性E.实现TCR功能性成熟[单选]可判断出淋巴细胞对有关刺激的反应性与功能状态的试验是（）A.噬菌体裂解实验B.溶血试验C.空斑形成试验D.T淋巴细胞转化试验E.T细胞表面标志检测[单选]T、B细胞表面共有的标志是（）A.CD3B.PWM－RC.绵羊红细胞受体D.补体受体E.CD80分子[单选]溶血空斑形成试验中，每一个空斑表示（）A.一种抗体B.一种抗体形成细胞C.一种细胞D.一个细胞E.一个抗体形成细胞[单选]胸腺细胞发生阴性选择时发生在（）A.双阳性期B.双阴性期C.单阳性期D.前T细胞期超级通 云控 微信云控 / 好用的云控 云控官网E.祖T细胞期[单选]以下受体中，哪一项是B细胞所特有的（）A.Fc受体B.补体受体C.SmIgD.EB病毒受体E.小鼠红细胞受体[单选]分离纯化淋巴细胞亚群的基本原理是（）A.相应细胞体积不同特点B.相应细胞具有不同的表面标志C.形态不同特点D.相应细胞贴壁生长特点E.相应细胞具有吞噬性的特点[单选]楼梯结构的一些细部构造在平面图中无法表示出来，需要绘制相同，应用的比例尺为()。
A、1:1000B、1:200C、1:00D、1:20[单选]屋顶平面图是屋顶的水平投影，可见轮廓线的投影均用()表示。
A、虚线B、中实线C、细实线D、粗实线[单选]某三层办公楼勒脚以上外围结构水平投影面积为500m2，首层车库层高为2.2m，二、三层层高均为3.2m。
免疫细胞的分离和保存技术用体外方法对机体各种具有免疫反应的细胞分别作鉴定、计数和功能测定，是观察机体免疫状态的一种重要手段。
为此，须将各种参与免疫反应的细胞从血液或脏器中分离出来。
参与免疫反应的细胞主要包括淋巴细胞、巨噬细胞、中性粒细胞等。
由于检测的目的和方法有同，分离细胞的需求和技术也异。
有的仅需分离白细胞，有的则需分离单个核细胞（mononuclearcell），其中含淋巴细胞和单核细胞（monocyte），有的则需分离T细胞和B细胞以及其亚群。
分离细胞选用的方法应力求简便可行，并能获得高纯度、高获得率、高活力的细胞。
现用分离细胞群的原则，一是根据各类细胞的大小、沉降率、粘附和吞噬能力加以组分，另一则按照各类细胞的表面标志，包括细胞表面的抗原和受体加以选择性分离。
一、白细胞的分离（一）血液中红细胞与白细胞比例约600～1000:1，两者的比重不同其沉降速度亦异，通常用两种方法加以分离。
本法是利用血细胞自然沉降率的分离法，采集血液后应及时抗凝，通常选用肝素抗凝法。
肝素能阻止凝血酶原转化为凝血酶，从而抑制纤维蛋白原形成纤维蛋白而防止血液凝固。
操作原则是将含抗凝血的试管直立静置室温30～60min 后，血液分成明显三层，上层为淡黄色血浆，底层为红细胞，紧贴红细胞层上面的灰白层为白细胞，轻轻吸取即得富含白细胞的细胞群，离心洗涤后加入少量蒸馏水或含氯化铵的Gey溶液，经短时间的低渗处理，使红细胞裂解，经过反复洗涤可得纯度较高的白细胞悬液。
（二）聚合物加速沉淀法本法是利用高分子量的聚合物如明胶、右旋糖酐、聚乙烯吡喀烷酮（polyvinylpyrolidone，PVP）等使红细胞凝集成串，加速红细胞沉降，使之与白细胞分离。
本法的细胞获得率比自然沉降法高。
二、外周血单个核细胞的分离外周血中单个核细胞包括淋巴细胞和单核细胞，其体积、形态和密度与其他细胞不同，红细胞和多核白细胞密度较大，为1.090左右，而淋巴细胞和单核细胞密度为1.075～1.090，血小板为1.030～1.035。
免疫学的实验原理应用实例引言免疫学是研究生物体对抗疾病的免疫反应机制的学科，实验在免疫学研究中起着至关重要的作用。
本文将介绍免疫学实验的一些常用原理和应用实例，并通过列点的方式逐一说明。
免疫沉淀实验•原理：免疫沉淀是一种基于抗原和抗体相互作用的实验技术。
通过加入抗原抗体复合物稳定剂，使复合物沉淀下来，从而分离和检测目标蛋白。
•应用实例：1.研究特定蛋白质的相互作用：通过免疫沉淀实验，可以分析特定蛋白质与其他蛋白质的相互作用，探索相关蛋白质的功能和调控机制。
2.检测蛋白质的表达水平：免疫沉淀实验可以用于检测蛋白质的表达水平。
通过与特定抗体结合，可以选择性地沉淀出目标蛋白质，进一步分析其表达量和功能。
免疫组化实验•原理：免疫组化实验是一种检测细胞或组织中蛋白质的方法。
通过将特异性抗体与待检测物结合，然后使用染色剂或荧光标记来可视化目标蛋白质的位置和分布。
•应用实例：1.定位蛋白质在细胞内的位置：免疫组化实验可以用于确定特定蛋白质在细胞内的位置。
通过标记特异性抗体，可以观察蛋白质在细胞核、细胞质或细胞膜中的分布情况。
2.检测肿瘤标志物：免疫组化实验在癌症诊断中有广泛应用。
通过检测肿瘤标志物的表达水平，可以帮助鉴定肿瘤类型、确定治疗方案和预测患者预后。
免疫印迹实验•原理：免疫印迹实验也被称为Western blotting。
该实验通过将蛋白质样品分离、转移到膜上，并使用特异性抗体来检测目标蛋白质的存在和表达水平。
•应用实例：1.分析蛋白质的表达变化：免疫印迹实验可以用于检测蛋白质的表达水平变化。
比如，在研究癌症时，可以分析癌细胞中关键蛋白质的表达水平，以了解其与癌症发展的关系。
2.验证蛋白质的特异性：免疫印迹实验可以帮助验证特异性抗体的选择。
通过与正常组织和疾病组织进行比较，可以确定特异性抗体的准确性。
非放射性免疫测定实验•原理：非放射性免疫测定是一种使用非放射性标记来检测免疫反应的方法。
通常采用酶标记的抗体或荧光标记的抗体来检测目标分子的存在。
临床免疫学检验技术考试题库及答案1. 免疫监视功能低下时易发生（）。
A．自身免疫病B．超敏反应C．肿瘤D．免疫缺陷病E．移植排斥反应答案C解析免疫系统的功能之一是对自身偶尔产生的有癌变倾向的细胞进行清除，此即免疫监视功能，免疫监视功能低下时易发生肿瘤。
2. 免疫自稳功能异常可发生（）。
A．病毒持续感染B．肿瘤C．超敏反应D．自身免疫病E．免疫缺陷病答案D解析免疫系统的功能之一是对自身衰老的组织细胞进行清除，此即免疫自稳功能，免疫自稳功能异常可发生自身免疫病。
3. 既具有抗原加工提呈作用又具有杀菌作用的细胞是（）。
A．树突状细胞B．巨噬细胞C．中性粒细胞D． B细胞E． T细胞答案B解析树突状细胞、巨噬细胞和B细胞都有抗原加工提呈作用，但只有巨噬细胞兼有吞噬杀菌作用。
4. 免疫应答过程不包括（）。
A． T细胞在胸腺内分化成熟B． B细胞对抗原的特异性识别C．巨噬细胞对抗原的处理和提呈D． T细胞和B细胞的活化、增殖和分化E．效应细胞和效应分子的产生和作用答案A解析免疫应答过程指免疫系统针对抗原的反应过程，不包括免疫细胞的发育过程。
5. 关于外周免疫器官的叙述，不正确的是（）。
A．包括淋巴结、脾和黏膜相关淋巴组织B．发生发育的时间晚于中枢免疫器官C．是免疫应答发生的场所D．是免疫细胞发生和成熟的场所E．是所有淋巴细胞定居的场所答案D解析免疫细胞发生和成熟的场所在中枢免疫器官，故D项不正确。
5. 在正常血清中，含量最高的补体成分是（）。
A． C1B． C3C． C4D． C5E． C4Bp答案B解析在正常血清中含量最高的补体成分是C3。
7. 细胞因子不包括（）。
A．单核因子B．淋巴因子C．生长因子D．抗体E．集落刺激因子答案D解析细胞因子是生物活性的小分子多肽，抗体不是。
8. 体内抗病毒、抗毒素、抗细菌最重要的抗体为（）。
A． IgMB． IgAC． IgGD． IgEE． IgD答案C解析IgG是体内抗感染的最主要的抗体。
一、名词解释第1章概论1.免疫学：2.免疫分子：3.补体：4.临床免疫学：第2章抗原抗体反应5.抗原抗体反应：6.抗原抗体反应特异性7.可逆性8.比例性9.抗原抗体反应的等价带zoneofequivalence10.最适比optimalratio11.带现象zonephenomenon第3章免疫原和抗血清的制备12.免疫原immunogen13.半抗原14.免疫佐剂15.多克隆抗体polyclonal antibody, pcAb第5章凝集反应16.凝集反应17.直接凝集反应18.间接凝集反应19.明胶凝集试验第6章沉淀反应20.沉淀反应21.絮状沉淀试验22.免疫浊度测定23.凝胶内沉淀试验24.单项扩散试验25.双向扩散试验26.免疫电泳技术27.对流免疫电泳28.火箭免疫电泳29.免疫电泳30.免疫固定电泳第19章补体检测及应用31.补体32.免疫溶血法33.补体结合试验第22章感染性疾病与感染免疫检测34.感染第23章超敏反应性疾病及其免疫检测35.超敏反应36.Ⅰ型超敏反应37.Ⅱ型超敏反应38.Ⅲ型超敏反应39.Ⅳ型超敏反应第24章自身免疫性疾病及其免疫检测40.自身耐受41.自身免疫42.自身免疫病43.自身抗体44.抗核抗体第25章免疫增殖性疾病及其免疫检测45.免疫增殖性疾病46.免疫球蛋白增殖病47.本周蛋白48.血清区带电泳49.免疫电泳50.免疫固定电泳第26章免疫缺陷性疾病及其免疫检验51.免疫缺陷病52.获得性免疫缺陷综合征第27章肿瘤免疫与免疫学检验53.肿瘤免疫学54.肿瘤抗原55.肿瘤标志物第28章移植免疫及其免疫检测56.移植57.主要组织相容性复合体58.移植排斥反应59.移植物抗宿主反应GVHR60.血清学分型法二、填空题;第1章概论1.推动现代生命科学前进的三架战车：分子生物学、免疫学、细胞生物学;2.免疫学的发展历史可分为三个时期：经验时期、免疫学科形成时期、现代免疫学时期;3.为保持机体内环境稳定,免疫系统的三大生理功能分别是：免疫防御、免疫自稳、免疫监视;4.免疫应答的过程主要分为：识别阶段、活化阶段、效应阶段5.免疫系统的组成包括三部分,分别是：免疫器官、免疫细胞、免疫分子;6.补体的三条激活途径分别是：经典途径、甘露糖结合凝集素途径、旁路途径;第2章抗原抗体反应7.在抗原抗体反应中,主要的结合力有：静电引力、范德华力、氢键、疏水作用力;8.在抗原抗体反应中,主要的特点有：特异性、可逆性、比例性、阶段性;第3章免疫原和抗血清的制备9.组织细胞或培养细胞可溶性抗原的制备过程中,常用的方法有：反复冻融法、超声破碎法、自溶法、酶处理法、表面活性剂处理法任写出二种均可得分;10.在免疫原和抗血清的制备过程中,可溶性抗原的纯化方法：超速离心法、选择性沉淀法、凝胶过滤法、离子交换层析法、亲和层析法等任写出二种均可得分;11.在免疫原和抗血清的制备过程中,纯化抗原的鉴定的内容主要有：蛋白含量测定、分子量测定、纯度鉴定、免疫活性鉴定;12.在免疫原和抗血清的制备过程中,抗血清的鉴定内容有：抗体特异性的鉴定、抗体效价的鉴定、抗体纯度的鉴定、抗体亲合力的鉴定;第5章凝集反应13.在凝集反应中,间接凝集反应的类型主要有：正向间接凝集反应、反向间接凝集反应、间接凝集抑制反应、协同凝集反应;14.抗球蛋白试验,又称Coombs试验,是检测抗红细胞不完全抗体的一种方法;第6章沉淀反应15.免疫电泳技术类型主要包括：对流免疫电泳、火箭免疫电泳、免疫电泳、免疫固定电泳;第14章免疫细胞的分离及其表面标志检测技术16.在外周血单个核细胞分离实验中,对分离介质的基本要求有：对细胞无毒、基本等渗、不溶于血浆或分离物质、有一定密度;17.在淋巴细胞分离过程中,其中的单核细胞去除方法有：贴壁黏附法、吸附柱过滤法、磁铁吸引法、Percoll分层液法; 第15章免疫细胞功能检测技术18.在免疫细胞功能检测技术方面,针对T细胞功能检测方法有：T细胞增殖试验、 T细胞分泌功能测定、T细胞介导的细胞毒试验、体内试验;第19章补体检测及应用第22章感染性疾病与感染免疫检测19.目前公认的肝炎病毒至少有5种：甲型肝炎病毒HAV、乙型肝炎病毒HBV、丙型肝炎病毒HCV、丁型肝炎病毒HDV、戊型肝炎病毒HEV;20.在乙肝病毒检测的过程中,主要检测的五项指标有：HBsAg、抗HBs、抗HBc、HBeAg、抗HBe;21.在先天性感染中,临床上将以上4种病原菌称为“TORCH”,为产前检查的重点项目,分别是：弓形体、巨细胞病毒、风疹病毒、单纯疱疹病毒;第23章超敏反应性疾病及其免疫检测22.根据免疫反应的速度和组织损伤的机制不同,将超敏反应分为四种类型,分别是：第 I 型速发型超敏反应、第II 型细胞毒或溶细胞型超敏反应、第III型免疫复合物型超敏反应、第IV 型延缓型或迟发型超敏反应;第24章自身免疫性疾病及其免疫检测23.在抗核抗体ANA检测方法中,常见的ANA荧光图形有：周边型核膜性、均质性、斑点性、核仁型、着丝点型;第25章免疫增殖性疾病及其免疫检测24.在免疫增殖性疾病中,常见的单克隆免疫球蛋白病有：多发性骨髓瘤、原发性巨球蛋白血症、重链病、轻链病、良性单克隆免疫球蛋白病;25.在免疫增殖性疾病中,免疫球蛋白异常增生常用的免疫检测方法有：血清区带电泳、免疫电泳、免疫固定电泳、血清免疫球蛋白定量、本周蛋白的检测;第26章免疫缺陷性疾病及其免疫检验26.在免疫缺陷性疾病中,常见的免疫缺陷病一般特征包括：反复感染、恶性肿瘤、伴发自身免疫病、遗传倾向、多系统病变;27.在免疫缺陷性疾病中,原发性免疫缺陷性疾病主要有：原发性B细胞缺陷病、原发性T细胞缺陷病、原发性联合免疫缺陷病、原发性吞噬细胞缺陷病、原发性补体系统缺陷病;28.在免疫缺陷性疾病中,继发性免疫缺陷性疾病主要有：继发性T细胞功能缺陷、继发性低丙球蛋白血症、继发性吞噬细胞功能缺陷、继发性补体缺陷;第27章肿瘤免疫与免疫学检验29.在常见肿瘤标志物中,胚胎抗原类肿瘤标志物主要有：甲胎蛋白、癌胚抗原;30.在常见肿瘤标志物中,酶类肿瘤标志物主要有：前列腺特异性抗原PSA 、神经元特异性烯醇化酶NSE、α-L-岩藻糖苷酶测定AFU;31.在常见肿瘤标志物中,激素类肿瘤标志物主要有：人绒毛膜促性腺激素 hCG、降钙素calcitonin, CT;32.在常见肿瘤标志物中,蛋白质类肿瘤标志物主要有：β2-微球蛋白β2M 、铁蛋白;第28章移植免疫及其免疫检测33.在移植免疫实验中,排斥反应类型主要包括四种,分别是：超急性排斥反应、急性排斥反应、慢性排斥反应、移植物抗宿主反应GVHR;34.常见的组织或器官移植有：肾脏移植、肝脏移植、心脏移植与心肺联合移植、骨髓与其他来源的干细胞移植;三、单项选择题1.免疫应答是一个复杂的连续过程,依次分为哪几个阶段AA. 识别阶段、活化阶段、效应阶段B. 效应阶段、识别阶段、活化阶段C. 活化阶段、效应阶段、识别阶段D. 活化阶段、识别阶段、效应阶段2.抗原抗体反应形成明显沉淀物的最佳条件为CA. 抗体略多于抗原B. 抗原略多于抗体C. 抗原抗体比例合适D. 抗体显着多于抗原3.用已知抗原或抗体检测相应的抗体或抗原,是根据抗原抗体反应的AA. 特异性B. 比例性C. 可逆性D. 阶段性4.弗氏不完全佐剂的组成包括 BA. 液状石蜡、羊毛脂、卡介苗B. 液状石蜡、羊毛脂C. 液状石蜡、卡介苗D. 羊毛脂、卡介苗5.沉淀反应中的钩状效应是因为BA. 抗体过量B. 抗原过量C. pH浓度过高D. pH浓度过低6.细胞活力测定常用的简便方法是BA. 伊红染色B. 台盼蓝染色C. HE染色D. 美蓝染色7.正常人外周血T淋巴细胞转化率为CA. <40%B. 40%～50%C. 60%～80%D. 80%8.在CH50试验中,溶血程度和补体含量之间的关系为 BA. 直线B. S形曲线C. 抛物线D. 正态分布曲线9.正常血清中,补体含量最高的是CA. C1B. C2C. C3D. C410.发生III型超敏反应性疾病的始动环节是 BA. 大分子免疫复合物沉积在毛细血管基底膜B. 中等大小分子免疫复合物沉积在毛细血管基底膜C. 小分子免疫复合物沉积在毛细血管基底膜D. 补体激活11.用免疫荧光法检测ANA有多种核型,不正确的是DA. 周边型B. 均质型C. 斑点型或颗粒型D. 原生质型12.血清中检测到M蛋白不提示下列疾病DA. 多发性骨髓瘤B. 巨球蛋白血症C. 重链病或轻链病D. 肾病13.本-周蛋白的本质是BA. 尿中微球蛋白B. 尿中游离的免疫球蛋白轻链C. 尿中游离的白蛋白D. 尿中游离的管型物14.多发性骨髓瘤属于哪种细胞异常CA. T细胞B. B细胞C. 浆细胞D. 单核细胞15.血清中免疫球蛋白含量缺乏,一般应考虑何种病 CA. 轻链病B. 重链病C. 免疫缺陷病D. 免疫增殖病16.切除胸腺的新生动物的淋巴结中缺乏何种细胞 BA. B淋巴细胞B. T淋巴细胞C. 粒细胞D. 巨噬细胞17.沉淀反应中抗体过量的现象称为AA. 前带B. 后带C. 等价带D. 带现象18.弗氏完全佐剂的组成包括AA. 液状石蜡、羊毛脂、卡介苗B. 液状石蜡、羊毛脂C. 液状石蜡、卡介苗D. 羊毛脂、卡介苗19.直接Coombs试验检测的抗体是AA. 结合在红细胞表面的IgGB. 游离的IgGC. 结合在红细胞表面的IgMD. 游离的IgM20.单项扩散试验出现双环的沉淀线是因为DA. 两种抗原B. 两种抗体C. 抗体为多克隆抗体D. 抗原为性质相同的两个组分扩散率不同21.Ficoll液单次密度梯度离心后外周血细胞分布由上至下依次为CA. 单个核细胞、血小板和血浆、粒细胞、红细胞B. 血小板和血浆、粒细胞、单个核细胞、红细胞C. 血小板和血浆、单个核细胞、粒细胞、红细胞D. 血小板和血浆、单个核细胞、红细胞、粒细胞22.淋巴细胞转化为淋巴母细胞后,其形态学特征为BA. 细胞大小由大变小B. 出现核仁1～4个C. 胞浆内空泡逐渐消失D. 细胞伪足消失23.溶血空斑试验用于检测下列何种细胞的功能BA. T细胞B. B细胞C. NK细胞D. 吞噬细胞24.Boyden小室常用于测定 BA. 白细胞吞噬功能B. 中性粒细胞趋化功能C. 白细胞杀伤功能D. 淋巴细胞抑制功能25.在溶血反应中检测试剂中,加入少量钙、镁离子的目的是CA. 使反应液保持等渗B. 抑制补体的活性C. 有助于补体激活D. 维持反应液的pH值26.乙型肝炎感染后最早出现的病毒标志物是AA. HBsAgB. HBeAgC. HBcAgD. 抗-HBs27.新生儿溶血症发生的条件是CA. 母亲Rh+、胎儿Rh+B. 母亲Rh+、胎儿Rh-C. 母亲Rh-、胎儿Rh+D. 母亲Rh-、胎儿Rh-28.造成系统性红斑狼疮病人免疫损伤的主要机制是 CA. I超敏反应B. II超敏反应C. III超敏反应D. IV超敏反应29.人类MHC位于第几对染色体上 CA. 第12对染色体短臂B. 第12对染色体长臂C. 第6对染色体短臂D. 第6对染色体长臂30.HLA交叉配型的目的是 BA. 检测供者血清有无抗受者HLA抗体B. 检测受者血清有无抗供者HLA抗体C. 检测供者淋巴细胞表面的HLA抗原D. 检测受者淋巴细胞表面的HLA抗原四、简答题第1章概论1.T淋巴细胞、B淋巴细胞和NK细胞的主要功能分别是什么2.在临床免疫学与免疫检验中,现代免疫学检验技术包括哪些方法第2章抗原抗体反应3.抗原抗体反应有哪些影响因素4.什么是标记免疫技术标记免疫技术按检测现象可分为哪些类型第3章免疫原和抗血清的制备5.常用的细胞破碎方法有哪些6.连接半抗原的载体有哪些制备半抗原性免疫原的方法有哪些7.免疫佐剂有哪些种类其作用机制是什么8.动物采血有哪些方法9.抗血清的鉴定包括哪些内容第5章凝集反应10.什么叫直接凝集反应什么叫间接凝集反应它们之间有何不同11.叙述抗球蛋白试验的类型、特点以及临床应用第6章沉淀反应12.单向扩散试验的概念和应用13.平板法双向免疫扩散试验的概念和应用14.免疫固定电泳的概念及临床应用15.抗原性质分析出现哪三种结果现象结果解释第14章免疫细胞的分离及其表面标志检测技术16.外周血单个核细胞分离,其分离介质的基本要求是什么17.外周血单个核细胞悬液富含淋巴细胞,但又混杂有单核细胞、红细胞和血小板,请问去除单核细胞的方法有哪些第15章免疫细胞功能检测技术18.T细胞功能检测内容有哪些19.B细胞功能检测内容有哪些20.NK细胞活性测定方法有哪些21.在检测T细胞的功能时,可选择T细胞增殖试验,请回答其基本原理第19章补体检测及应用22.在补体总活性测定中,一般采用CH50测定法,请说明其基本原理;23.在单个补体成分的测定中,一般采用免疫溶血法,请简述其概念及原理;24.请简述补体结合试验的概念、实验原理及结果解释第22章感染性疾病与感染免疫检测25.请列出目前公认的肝炎病毒种类26.乙型肝炎的诊断标志物主要检测指标有哪些27.在临床中,乙肝病毒检测常见的指标俗称：两对半有哪些28.什么叫先天性感染常见的病原菌“TORCH”只要只的是哪些病毒第23章超敏反应性疾病及其免疫检测29.试比较Ⅰ～Ⅳ型超敏反应特点30.使用青霉素可能引起哪些类型超敏反应简述其发病机制; 答：青霉素临床应用时有可能引起的超敏反应类型有：I、II、III、IV型;1I 型超敏反应：指青霉素过敏性休克,其发病机制是青霉素本身并无免疫原性,其降解产物为半抗原,与体内蛋白质结合而产生免疫原性,刺激机体产生特异性IgE,使机体处于致敏状态;当机体再次使用青霉素时,可发生过敏性休克;2II 型超敏反应：指青霉素过敏性血细胞减少症,其发病机制是青霉素降解产物能与血细胞膜蛋白或血浆蛋白结合获得免疫原性,从而刺激机体产生抗体;这种抗体与和药物结合的红细胞、粒细胞和血小板作用,引起药物性溶血性贫血、粒细胞减少症和血小板减少性紫癜;3III型超敏反应：指使用大剂量青霉素等药物可引起类似血清病样的反应,其发病机制是因为患者体内已产生特异性抗体,而大剂量药物尚未完全排除,两者结合形成中等大小免疫复合物所致;4IV型超敏反应：指青霉素引起的接触性皮炎,其发病机制是青霉素小分子半抗原与体内蛋白质结合成完全抗原,使T细胞致敏;当机体再次接触青霉素时,可发生接触性皮炎;31.血清病与血清过敏性休克分属哪型超敏反应比较发病机制;第24章自身免疫性疾病及其免疫检测32.自身免疫病都具有哪些共同特性33.什么叫自身抗体,其主要特点有哪些第25章免疫增殖性疾病及其免疫检测34.在免疫增殖性疾病中,常见的单克隆免疫球蛋白病有哪些35.在免疫增殖性疾病中,免疫球蛋白异常增生常用的免疫检测方法有哪些第26章免疫缺陷性疾病及其免疫检验36.请列出免疫缺陷病的一般特征37.原发性免疫缺陷性疾病有哪些38.继发性免疫缺陷病有哪些39.什么叫获得性免疫缺陷综合征其临床特点及典型特征是什么第27章肿瘤免疫与免疫学检验40.什么叫肿瘤抗原,其产生的可能机制有哪些41.什么叫肿瘤标志物,理想的肿瘤标志物具有哪些特性第28章移植免疫及其免疫检测42.什么叫移植排斥反应,根据排斥反应发生的时间、免疫损伤机制和组织病理改变,如何进行分类43.常见的组织或器官移植有哪些44.排斥反应的免疫监测包括哪些方面。
细胞生物学中的细胞表面标记和检测技术细胞表面标记和检测技术在细胞生物学研究中起到了重要的作用。
通过对细胞表面标记的引入或检测，我们可以了解细胞表面的组成、结构和功能，进而深入研究细胞的生理和病理过程。
本文将从细胞表面标记的概念、常用的细胞表面标记技术和细胞表面检测技术三个方面展开探讨，带领读者一窥细胞生物学领域中的前沿技术。
一、细胞表面标记的概念细胞表面标记是指通过特定的荧光探针、抗体或其他化合物，将目标蛋白、细胞器或其他分子与荧光分子或颜色物质结合，从而在细胞表面或内部形成特定的可视化标记。
这种标记使得研究人员可以直观地观察细胞和分子的空间分布以及相互作用关系，为细胞生物学的研究提供了便利。
二、常用的细胞表面标记技术1. 免疫染色技术免疫染色技术是利用抗体与目标蛋白或分子结合的特异性，在细胞表面形成可视化标记。
这种技术主要包括直接免疫荧光染色和间接免疫荧光染色两种方法。
直接免疫荧光染色直接将荧光探针与特异性抗体结合，间接免疫荧光染色通过首先结合一种主抗体，然后与特异性抗体结合形成荧光标记。
这些技术广泛应用于细胞免疫学研究和细胞分析。
2. 荧光探针技术荧光探针技术是利用荧光成像技术直接将特定的荧光分子引入细胞内部或细胞表面，并通过荧光显微镜观察标记物的分布和行为。
主要的荧光探针包括荧光染料、荧光蛋白和量子点。
它们可以标记蛋白、核酸、糖类等细胞内各种分子，通过对不同荧光探针组合和观察条件的选用，可以实现对复杂细胞系统的精确标记。
三、细胞表面检测技术1. 流式细胞术流式细胞术是一种基于细胞表面标记的高通量细胞分析技术。
它通过将细胞悬浮于生理盐液中，利用流式细胞术仪器对细胞进行检测。
细胞在仪器中以单个细胞的形式通过激光束，然后通过细胞表面标记物的荧光信号识别细胞类型、数量和功能状态。
这种技术广泛应用于细胞免疫学、肿瘤学以及干细胞研究等领域。
2. 切片免疫荧光技术切片免疫荧光技术是在组织切片上进行的细胞表面标记和检测技术。
第十四章免疫细胞的分离及表面标志检测技术第十五章免疫细胞功能检测技术Separation and Assays for Immunocyte第一部分目的要求和教学内容一、目的要求掌握：Ficoll—hypaque分层液分离PBMC的原理、方法，淋巴细胞亚群分离的原理、方法及应用，T细胞增殖试验的方法，B细胞的数量及功能的检测，NK细胞的活性、中性粒细胞、巨噬细胞功能的检测方法；熟悉：T细胞功能的体内试验、T细胞介导的细胞毒检测的方法；了解：淋巴细胞的纯化与亚群分离的方法、吞噬细胞的分离方法、溶血空斑试验。
二、教学内容1．免疫细胞的分离与纯化：细胞的分离，外周血单个核细胞的分离，淋巴细胞的纯化与亚群分离，吞噬细胞的分离。
2．淋巴细胞的数量检测：T细胞数量检测，B细胞数量检测。
3．淋巴细胞的功能检测：T细胞功能检测，B细胞功能检测，NK细胞活性测定。
4．吞噬细胞功能检测：中性粒细胞功能检测，巨噬细胞功能检测。
第二部分测试题一、选择题(一)单项选择题(A型题)1．外周血中的单个核细胞主要是指A．淋巴细胞B．嗜酸粒细胞C．单核细胞一淋巴细胞D．单核细胞E．中性粒细胞2．分离人外周血淋巴细胞分层液的最佳密度为A． 1.030B． 1.035C． 1.092D． 1.020E． 1.0773．用FicolI—hypaque分层液分离PBMC,分离的PBMC层位于试管的A．血浆层之上B．血浆层之中C．血浆层与分层液之间D．分层液之中E．试管底部4．用玻璃纤维或葡聚糖凝胶Sephadex-G10柱分离细胞时，从柱上洗脱下的细胞主要是A．粒细胞B．淋巴细胞C．单核细胞D．T细胞E．B细胞5．能与SRBC占合形成E花环的细胞主要是A．T细胞B．B细胞C．单核细胞D．粒细胞E．血小板6．用小鼠抗人CD3单克隆抗体检测T细胞，其结果代表的是A．T 细胞总数B．Th 胞数C．Ts细胞数D．CD4＋细胞数E．CD8＋胞数7．用尼龙棉柱分离细胞时，不易黏附尼龙棉纤维而被洗脱的细胞是A．粒细胞B．B 细胞C．单核细胞D．T 细胞E．血小板8．表示淋巴细胞的活力常用A．活淋巴细胞占总淋巴细胞的百分比B．活细胞浓度C．淋巴细胞浓度D．活细胞和总细胞的比值E．T细胞和B细胞的比例9．用腹腔渗出法可从动物的腹腔渗出液中分离出A．血小板B．B细胞C．单核细胞D．T细胞E．巨噬细胞10．活细胞经台盼蓝染色后呈A．蓝色B．棕色C．红色D．不着色E．天青色11．荧光标记法计数外周血B淋巴细胞，检测的特有的表面标志是A．CDl9B．CD20C．补体受体D．SmIgE．FcR12．NK细胞特有的表面抗原是A．CD2B．CDl6C．无特异的表面抗原D．CD23E．CD5613．仅能使T细胞发生淋巴母细胞转化的因子是A．PHAB．PWMC．．LPSD．ConAE．EBV14．能使B细胞和T细胞发生淋巴母细胞转化的因子是A．PHAB．PWMC．．LPSD．SPAE．EBV15．检查体液免疫功能最常用的方法是A．血清免疫球蛋白定量测定B．溶血空斑试验C．B淋巴细胞计数D．淋巴母细胞转化试验E．SmlgG测定16．溶血空斑试验用于检测下列何种细胞的功能A．T细胞B．B细胞C．中性粒细胞D．吞噬细胞E．NK细胞17．测定T淋巴细胞功能的体内试验是A．锡克试验B．狄克试验C．结核菌素试验D．天然血型抗体滴度E．血清：IgG测定18．正常人外周血T淋巴细胞转化率为A． <40％B．40％～50％C．60％～80％D．80％E． >90％19．常用检测细胞毒效应的方法是A．3H-TdR掺人法B．125I释放法C．51Cr释放法D．形态学检测法E．CD8检测法20．包被有抗Ig抗体的亲和板，其吸附的是A．T细胞B．B细胞C．NK细胞D．NKT‘细胞E．吞噬细胞21．Ficoll—hypaque液分离淋巴细胞是一种A．不连续密度梯度离心法B．连续密度梯度离心法C．亲和层析法D．离子交换层析法E．自然沉降法22．Ficoll—hypaque淋巴细胞分离液的主要成分是A．聚蔗糖B．泛影葡胺C．聚乙二醇D．聚蔗糖+泛影葡胺E．聚蔗糖+聚乙二醇23．Percoll分离液的主要成分是A．聚蔗糖B．泛影葡胺C．聚乙二醇D．聚乙烯吡咯烷酮E．经聚乙烯吡咯烷酮处理的硅胶颗粒24．检测中性粒细胞杀菌功能的方法是A．NBT还原试验B．白细胞计数C．溶血空斑试验D．淋巴母细胞转化试验E．补体介导的细胞毒试验25．MTT比色法检测IL-2活性，下列哪项是错误的A．需要IL一2依赖细胞株B．增殖细胞具有吸收MTT的能力C．颜色的深浅代表细胞代谢活性的强弱D．可反映B细胞的功能E．可反映T细胞的功能(二)多项选择题(x型题)1．淋巴细胞分离液要求符合的条件有A．对细胞无毒B．高渗C．不溶于血液D．无色E．有合适的比重2．与T细胞计数有关的表面抗原是A．CD2B．CD3C．CD4D．CD8E．CDl93．与B细胞计数有关的表面标志是A．SmIgB．CDl9C．CD20D．CD21E．CD24．符合淋巴母细胞转化的形态学特征有A．细胞体积变小B．核仁明显、核染质疏松C．可见有丝分裂D．胞浆极少，呈天青色E．胞内可见空泡5．用酶联免疫斑点试验检测B细胞功能的优点有A．稳定、特异 B．可检测抗体分泌细胞C．可检测抗体的分泌量 D．可同时进行B细胞计数 E．可同时检测不同抗原诱导的不同抗体的分泌6．细胞免疫功能测定包括以下哪些A．T细胞计数B．B细胞计数C．T细胞功能测定D．Tc细胞效应测定E．细胞因子测定7．检测淋巴细胞亚群常用的方法有A．免疫荧光法B．流式细胞仪测定C．酶免疫组化法D．放射免疫法E．免疫金染色法8．细胞免疫功能体内试验方法有A．细胞毒试验B．混合淋巴细胞反应C．皮肤试验D．淋巴细胞增殖试验E．接触性过敏试验9．T细胞增殖试验常用的检测方法有 A．流式细胞仪法B．形态学方法C．51Cr释放法D．MTT检测法E．3H一FdR掺人法10．检测吞噬细胞功能的方法有A．吞噬试验B．杀菌试验C．NBT还原试验D．化学发光测定法E．趋化功能测定法11．淋巴细胞亚群的分离方法有A．E花环分离法B．尼龙棉柱分离法c．亲和板结合分离法D．免疫磁珠分离法E．超速离心分离法12．T细胞数量检测包括A.T细胞增殖试验B．间接荧光免疫法C．酶免疫组织化学法D．微量细胞毒试验E．花环技术13．检测T细胞数量的花环试验有A．酵母菌花环试验B．补体C3b花环试验C．E花环试验D．葡萄球菌花环法E．抗体致敏细胞花环法14．B细胞表面具有、A．mIgB．CD抗原C．Fc受体D．补体受体E．EB病毒受体15．B细胞数量检测的方法包括A．mIg的检测法B．CD抗原检测法C．Fc受体检测法D．补体受体检测法E．小鼠红细胞受体检测法16．B淋巴细胞功能的测定方法有A．B细胞增殖试验B．溶血空斑试验C．酶联免疫斑点法D．体内测定法E．形态学检查法17．中性粒细胞吞噬和杀菌功能的测定方法A．形态学检查法B．显微镜检查法C．溶菌法D．NBT还原试验E．化学发光测定法18．巨噬细胞功能的检测方法包括A．炭粒廓清试验B．吞噬功能检测C．巨噬细胞溶酶体酶测定D．细胞毒作用测定E．巨噬细胞促凝血活性测定(三)配伍题问题1-3A．红细胞层B．粒细胞层C．单个核细胞层D．血浆与血小板层E．淋巴细胞分离液层1.采用淋巴细胞分离液分离外周血单个核细胞，最上层是2.采用淋巴细胞分离液分离外周血单个核细胞，最下层是3.采用淋巴细胞分离液分离外周血单个核细胞，第二层是问题4-6A．淋巴细胞转化试验B．溶血空斑试验C．炭粒廓清试验D．琼脂糖凝胶平板法E．化学发光测定法4．巨噬细胞吞噬功能的检测：5．中性粒细胞趋化功能的检测：6．中性粒细胞吞噬和杀菌功能的检测：二、填空题1．PBMC包括（）和（）。
2．在反相溶血空斑试验中，每一个空斑代表一个（）。
3．B细胞表面特异的标志是（）。
4．常用的测定淋巴细胞活力的方法是（）。
5．淋巴细胞转化情况的判定方法有（）、（）和（）。
6．淋巴细胞转化试验应用的同位素是（），细胞毒试验应用的同位素是（）7．分离外周血白细胞常用的方法是（）和（）。
8．去除白细胞悬液中残留红细胞的常用方法有（）和（）。
9．去除单个核细胞悬液中单核细胞的常用方法有（）和（）。
10．检测T细胞数量的花环技术包括（）（）和（）；检测B细胞数量的花环技术主要有（）和（）。
11.淋巴细胞和单核细胞的密度为（）。
12．外周血经Ficoll分离液离心后从上到下分为（）（）及（）层。
三名词解释1．外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cell，PBMC)2．E花环试验(erythrocyte rosette test)3．淋巴母细胞转化试验(1ymphoblast transformation assay)4．溶血空斑试验hemolytic plaque assay)5．四唑氮蓝还原试验(nitroblue tetrazolium recovery assay，NBT还原试验)四、简答题1．简述T淋巴细胞转化的试验原理和镜下淋巴细胞转化形态学特征。
2．叙述T细胞介导的细胞毒试验的原理、意义和方法分类3．测定吞噬细胞功能有哪些常用方法?五．论述题简述Fic011一hypaque分离液分离PBMC的原理、步骤和注意事项。
第三部分参考答案与题解一、选择题(一)单项选择题(A型题)1．C 2．E 3．C 4．B 5．A 6．A 7．D 8．A 9．E 10·D11．D 12．C 13．A 14．B 15．A 16．B 17．C 18．C 19．C 20·B21．A 22．D 23．E 24．A 25．D(二)多项选择题(X型题)1．ACDE 2．ABCD 3．ABCD 4．BCE 5．ABCDE 6．ACDE 7．ABCE 8．CE 9．BDE 10．ABCDE 11．ABCD 12．BCDE13．CDE 14．ABCDE 15．ABCDE 16．ABCD 17．BCDE 18．ABCDE(三)配伍题1.D2.A3.C4.C5.D6.E二、填空题1．淋巴细胞单核细胞2．分泌Ig的细胞3．SmIg4．台盼蓝染色法5．形态学方法。
H—TdR掺入法MTI"检测法6．3 H，51Cr7．自然沉降法聚合物加速沉降法8．无菌蒸馏水低渗裂解法0．83％氯化铵处理法9．黏附去除法，羰基铁粉吞噬去除法10．E花环试验葡萄球菌花环法抗体致敏红细胞花环法EA花环试验EAC花环试验11.淋巴细胞和单核细胞的密度为 1.077+0.001。
12．外周血经Ficoll分离液离心后从上到下分为_血清_，_PBMC及_粒细胞、红细胞_层。
