血清肌酸激酶同工酶测定标准操作规程

1 / 7下载文档可编辑 33、血清肌酸激酶同工酶测定标准操作规程

1 检验申请

单独检验项目申请：血清肌酸激酶同工酶测定(缩写CK-MB), 组合项目申请：血生化中心肌酶谱项目测定。临床医生根据需要提出检验申请。

2 标本采集与处理

2.1 标本采集

2.1.1 常规静脉采血约2 ml，不抗凝，置普通试管中。或采用含分离胶的真空采血管。检查体液乳酸脱氢酶的体液标本应用肝素抗凝。

2.1.2 检验申请单和血标本试管标上统一且唯一的标识符。

2.1.3 急诊标本采集后，在检验申请单上填写标本采集时间。

2.1.4 标本采集后与检验申请单一起及时运送至检验科。专人负责标本的接收并记录标本的状态，对不合格标本予以拒收。

2.1.5 下列标本为不合格标本

2.1.5.1 标本量不足：少于0.3ml的全血标本，或少于0.1ml的血清或血浆。

2.1.5.2 对反应吸光度有干扰的标本，包括严重溶血、严重浑浊的标本。

2.1.5.3 无法确认标本与申请单对应关系的。

2.1.5.4 其他如标识涂改、标本试管破裂等。

2.2 标本保存

2.2.1 接收标本后在30min内将标本离心分离出血清。

2.2.2 标本保存时间：室温（15～25℃）下可稳定4h，普通冰箱中（2～2 / 7下载文档可编辑 8℃）稳定8h。-20℃保存稳定30天。为避免标本中水分挥发使血清浓缩，对保存时间超过1天的标本均加塞密闭或覆盖湿巾。

2.2.3 已完成测试的标本保持完整的识别号，置4～8℃冰箱内保存7天。

2.3 标本采集的注意事项

2.3.1 采血前使受检者保持平静、松弛、避免剧烈活动，24h不饮酒和12h以上禁食空腹状态。

2.3.2 注意有无应用影响测试项目的药物。

2.3.3 可以使用肝素抗凝的血液标本。

3 方法原理

试剂中抑制CK同工酶CK-M的抗体，完全抑制CK-M的活性而不影响另一种CK同工酶CK-B的活性。CK-B在两个工具酶的参与下，通过下面三个反应式所表示的反应，最后使NADP转化成在340nm波长处有光吸收的NADPH，在340nm波长处连续监测NADPH吸光度的增加速率，推算出CK-B的活性。所得结果乘以2即得CK-MB的活性。

ATPADPCK肌酸磷酸肌酸

ADP6ATPHK磷酸葡萄糖葡萄糖

NADPH6NADP6PDH6G磷酸葡萄糖酸磷酸葡萄糖

4 试剂及其他用品

4.1 试剂盒名称：利德曼肌酸激酶同功酶（CK-MB）试剂盒，北京利德曼生化技术有限公司出品。

4.2 试剂盒保存：未开瓶的试剂储存在2-8℃可稳定至有效期。试剂开瓶后，在仪器冰箱试剂仓中可保存28天。开盖后避免污染。当试剂变混浊，或者未开盖的液体有沉淀，或起始吸光率>0.8时，表明3 / 7下载文档可编辑 试剂已变质，不能继续使用。

4.3 试剂盒准备：液态双试剂型，即开即用，无特殊准备

4.4 试剂盒主要成分：

组 成 R1:R2=4:1

混合后溶液的浓度

咪唑缓冲液: 100mmol/L

PH=6.7

醋酸镁 10mmoll/L

N-乙烯半胱氨酸（NAC） 20mmol/L

EDTA 2mmol/L

NADP 2mmol/L

葡萄糖-6-磷酸脱氢酶（G-6-PDH） >1500U/L

己糖激酶（HK） >2500U/L

抑制CK-MM的人抗体 >2000U/L

葡萄糖 20mmol/L

肌酸磷酸 30mmol/L

二腺苷-5-磷酸 10umol/L

AMP 5mmol/L

ADP 2mmol/L

5 校准品与校准模式

校准品：不使用校准品，以NADPH的双波长（340/380nm）摩尔吸光4 / 7下载文档可编辑 系数计算CK-MB活性

6 质控品与室内质控规则

6.1 质控品采用由Beckman-Coulter公司提供的两个不同水平未定值质控血清。

6.2 质控液重建方法：液态质控血清，即开即用，无需特殊准备。

6.3 质控品测定：在每一批标本中测定两个水平质控血清各一次。

6.4 质控规则：采用Westgard多规则质控规则，由计算机程序进行检索与判断

7 适用仪器

适用AEROSET和C16000全自动生化分析仪器全自动生化分析仪器。

8 标本检测步骤

装载试剂 → 进行校准 → 进行质控 → 输入标本检测项目 → 加载标本 → 标本测定 →结果复核 → 报告。

9 主要分析参数

参见说明书。

10 结果计算

计算公式：CK-MB(U/L) ＝ 210minmin3)380340(lVVAKAsTnm

公式中ΔA/min即单位时间中吸光度降低的值，VT为总反应体积ml（试剂总量＋标本量），Vs为标本体积ml，l为比色皿光径cm，ε为NADPH的340/380nm测定的毫摩尔消光系数。K值即因子。

仪器根据此公式自动给出每个标本测定结果。

11 检验结果的报告及范围

11.1 结果的报告 5 / 7下载文档可编辑 11.1.1 结果经审核后，确认准确无误后发出报告。

11.1.2 报告单上标明结果的计量单位、参考区间、报告日期、时间、操作者和审核者签名，并有与申请单相同的医学信息。

11.1.3 如收到标本的质量可能对测定结果有影响的也在报告单上指出。

11.2 报告范围：血清与试剂用量之比为1:25时，测定上限为1000U/L，超过此范围的结果报告时必须附有证明该结果准确可靠的文字说明，例如：系根据标本稀释后重复测定的结果。

12 操作性能

12.1 精密度：批内CV<0.55%，批间CV<4.51%。

12.2 线性范围：0-1000U/L(ORDAC为115-286U/L)。

12.3 方法的有限性及干扰因素：内源性干扰物溶血为1000mg/ml、脂血2000mg/ml、黄疸30mg/ml、抗坏血酸300mg/ml对测试结果无明显影响

12.4 灵敏度：肌酸激酶同功酶浓度为500U/L时，吸光度变化率ΔA340nm/min为0.054～0.066。

13 参考范围及医学决定水平

参考范围：0-20 U/L

14 临床意义

14.1 CK-MB是诊断急性心肌梗死（AMI）重要的酶学指标，血清CK-MB水平升高曾是AMI的实验诊断“金标准”指标，但现在已被心肌肌钙蛋白取代。另外，临床上认为CK-MB的质量测定值也比酶活性更具诊断意义。

14.2 在急性心肌梗塞胸痛发作4～6h，病人血清CK-MB先于总CK活性6 / 7下载文档可编辑 开始升高， 24h达高峰，至48h基本回复至基线水平。CK-MB持续不降，或下降后又再度上升，提示有心肌梗塞扩展或有新的梗塞病灶。

14.3 如果胸痛患者在48h内无CK-MB升高，或CK-MB小于CK总活性的2%，即可排除急性心肌梗塞的诊断。临床上常以CK-MB超过CK总活性的3%（离子交换柱层析法）或10%（免疫抑制法）作为急性心肌梗塞的诊断依据。

14.4 用CK-MB诊断急性心肌梗塞时必须注意无论是CK-MB的绝对活性或占总活性百分率的界限值，均不适用于14岁以下的儿童，因为婴幼儿和儿童的CK-MB均高于成人。

14.5 各种类型的心脏手术后可引起血清CK-MB活性增强，在并发术间或术后心肌梗塞时升高更为显著。

14.6 进行性肌营养不良病人血清CK-MB水平也常升高。

15 结果审核以及分析与相关项目的联系

15.1 由资深专业人员负责检验结果的审核。

15.2 认真审核每一个测定结果，审核者对发出报告结果的准确性和可靠性负责，并在报告单的审核者处签名。

15.3 相关项目：审核与心肌酶谱其他酶的关系。如出现与临床不符甚至相悖的情况，应分析与查找原因。

16 无威胁生命的“紧急值”及报告规定

17 有关引用程序与文件

17.1 Abbott自动生化分析仪仪器标准操作规程。

17.2 生化检验室内质控标准操作程序。

17.3 检验结果审核程序。

17.4 标本送检和接收程序。 7 / 7下载文档可编辑 18 参考文献

18.1 陆永绥，张伟民主编. 临床检验管理与技术规程. 杭州:浙江大学出版社, 2004.

18.2 北京利德曼生化股份有限公司肌酸激酶同工酶测定(CK-MB)测定试剂盒说明书。

（学习的目的是增长知识，提高能力，相信一分耕耘一分收获，努力就一定可以获得应有的回报）