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配置PDA或DAD检测器液相色谱峰纯度检测及其应用(一)原创2016-12-17Bruce Lee药渡1PDA或者DAD检测器作为液相色谱的一种通用型检测器，能够在全波长下同时采集并记录存储数据。
经数据处理系统对数据进行处理的时候，可对不同波长下的色谱图分别处理，并分别保存相应通道的积分结果。
在方法开发的过程中，我们可以利用PDA或DAD同时监视多个波长下的色谱图的特点，运用方法开发策略，使得我们关注的目标峰在任意波长下，均不被其他的相关杂质所干扰；而且在开发的过程中，我们也可以直接提取样品的光谱图，然后根据样品的光谱图的特点，以及方法的目的，选择相应的波长作为检测波长。
此外，PDA或DAD检测器的全波长同时采集数据的特点，也赋予了其光谱比对的功能。
不同的化合物具有不同的紫外吸收光谱形状以及不同的吸光特性，因此，二极管阵列检测器可以通过比对色谱峰的整个峰宽范围内的每一时刻记录的吸收光谱形状以及吸光特性，从而实现对色谱峰纯度的检测，如下图1所示。
Fig.1Spectrum comparison between different time point在上图1中，我们明显地可以看出，16.500min到17.200min内的各时间点的吸收光谱形状以及吸光特点存在较大差异，说明该时间段内的流出物不是单一的，也即意味着色谱图上的该色谱峰不纯，有其他的杂质共洗脱。
PDA或DAD配合数据处理系统，给出的色谱峰的纯度结果，理论上讲，只是参考值。
如对于对映异构体来说，同一对对映异构体之间互为手性杂质，但他们却具有完全一致的光谱形状以及吸光特点，而且在非手性分离条件下，出峰的位置完全一致，此时检测器的色谱峰纯度检测功能不能够检测到该手性杂质。
甚至在手性环境下，对映异构体之间已经实现了部分分离的时候，理论上讲，色谱峰纯度检测功能依然无法将其分别判定为杂质。
再如，分离度完全为0的两个色谱峰进行色谱峰纯度检测的时候，由于两个色谱峰完全重叠，任意一个时刻的光谱图均是两个洗脱组分的吸收光谱图叠加之后的结果，在这种情况下，色谱峰纯度检测功能也无法判断出该色谱峰是不纯的。
DAD检测法的原理和应用1. 简介DAD（Diode Array Detector，二极管阵列检测器）是一种常用于色谱和液相色谱分析中的检测器。
它使用一个由很多个二极管组成的阵列，来检测样品在不同波长下的吸收能力，从而得到样品的吸收谱。
DAD检测法具有高灵敏度、高选择性和宽波长范围等优点，广泛应用于化学、环境、制药等领域。
2. 原理DAD检测法的基本原理是通过样品溶液对不同波长的光进行吸收，并测量吸收光的强度。
下面是DAD检测法的基本原理：2.1 光源DAD检测法通常使用紫外-可见光源，如汞灯或者氘灯，以产生从紫外到可见光范围的连续光谱。
2.2 光路光源发出的光经过一个分光装置，如光栅或者棱镜，被分解成不同波长的光线。
然后，经过样品池内的样品溶液，样品溶液对不同波长的光吸收不同。
2.3 阵列探测器DAD检测法中使用的探测器是由一排二极管组成的阵列。
每个二极管都能测量一段波长范围内的光强度。
探测器将被样品溶液吸收的光信号转化为电信号。
2.4 数据处理通过不同二极管获得的电信号经过放大和转换后，转化为数字信号并被记录下来。
然后，可以通过计算机软件对数据进行处理和分析，得到样品在各个波长下的吸收谱。
3. 应用领域DAD检测法在许多领域中都有广泛的应用，主要体现在以下几个方面：3.1 色谱分析DAD检测法在气相色谱和液相色谱分析中被广泛使用。
色谱技术结合DAD检测法可以实现物质的分离和定量分析。
例如，可以用DAD检测法追踪某种特定溶质在样品中的存在量，以及其在不同波长下的吸收谱。
3.2 生物医药DAD检测法在生物医药领域被广泛运用。
它可以用于药物的纯化、定性和定量分析。
此外，DAD检测法还可以用于分析血液、体液中的成分，以及蛋白质、核酸等生物大分子的测定。
3.3 环境分析DAD检测法也适用于环境污染分析。
它可以检测环境中微量有机物的存在与浓度，并通过分析吸收谱来鉴定污染物种类。
这对于环境监测和环境保护具有重要意义。
应用DAD检测器判别液相色谱峰纯度作者：岳志萍王洪珊来源：《China＇s foreign Trade》2010年第22期摘要本文对应用DAD检测器判别液相色谱峰纯度进行了探讨。
关键词检测器判别液纯度高效液相色谱法定量的前提是色谱峰由单一组分构成，因此色谱峰的纯度即一个色谱究竟是有一种组分构成，还是包含两种以上的成分，这就是我们大家所要关心的问题。
二极管检测器(DAD简称)的开发，是过去20年内高效液相色谱峰的定性功能DAD检测器可以得到各个波长的吸光度值即可以得到样品在各时刻的吸收光谱图。
使用这些方法判别峰纯度时都要求待测组分色谱峰中洗脱杂质的紫外光谱，明显不同于主组分的紫外光谱。
光谱间的差异越大对于其洗脱杂质的检测就越低，然而有机物的紫外光谱一般均显示曲线变化不明显的宽带。
缺乏能够说明细微差别的精神结构，尤其是对于那些生色团相同而结构上的差异部分，由于生色团不同的化合物间的结构差异不能够予以足够的描述实际上许多情况下，例如同分异构体的杂质和主组分的降解或代谢产物与主组分结构上是非常相似的。
这是利用组分的紫外光谱信息判别色谱峰纯度时就会遇到不能检测到分析物的共洗脱杂质的情况，甚至有时候会给出完全错误的峰纯度结果从而给下一步的定性定量分析很大误差。
使用DAD可以获得三维谱图，进而得到等吸收图提取所要检测波长下的色谱图。
本文通过选择头孢拉定作为分析对象对DAD用于判别液相色谱峰纯度时的局限性研究。
1试验部分仪器和试剂AgilenFechnologiesl200SeriesDAD检测器、甲醇(色谱纯)其它试剂均为分析纯。
头孢拉定、头孢氨苄对照品由中国药品生物制品检定所提供。
色谱柱：EXSILCl8柱5μm150*406mid，流动相：水、甲醇、3.86％醋酸钠溶液、4％醋酸溶液(1654：400：30：6)流速为0.7ml／min-0.9ml／min进样量10μl柱温为室温。
对照品溶液制备：①取头孢拉定对照品约35mg精密称定置50ml量瓶中加流动相溶解并稀释至刻度摇匀。
WATERS液相，可调UV (TUV) 检测器为双波长紫外/可见光(UV/Vis)检测器。
光电二极管阵列检测器，简称PDA( Photo-Diode Array)，是80年代发展起来的一种新型紫外检测器，其工作原理如下:光源经一系列光学反射镜进人流动池，从流动池出来的光再经分光系统、狭缝照射到一组光电二极管上，数据收集系统实时记录下组分的光谱吸收，得到三维的立体谱图。
安捷伦也有紫外可调.和DAD两种.waters称为PDA.其他厂家一般称为DAD.DAD相对于普通紫外检测器的优点,在于可以通过光电二极管得到三维的谱图.可以用来鉴别峰形内是否包含其他杂质峰,准确定性的作用.但对于单一物质的灵敏度而言,可调的紫外检测器的灵敏度要高于DAD.DAD检测器也要比可调的紫外检测器贵出很多.一般是其2倍的价格紫外光度检测器是液相色谱法广泛使用的检测器，它可分为固定波长和可变波长两类。
短时间中断液流快速扫描（停泵扫描），以得到紫外吸收光谱，为定性提供信息，或据此选择最佳检测波长。
光电二极管阵列检测器是紫外-可见光度检测器的一个重要进程。
由于扫描速度快远远超过色谱流出峰的速度，因此无需停泵扫描而观察色谱柱流出物的各个瞬间的动态光谱吸收谱。
经计算机处理后可得到三维色谱-光谱图。
光电二极管阵列检测器，简称PDA( Photo-Diode Array)检测器或DAD(Diode Array Detector)检测器，是80年代发展起来的一种新型紫外检测器，其工作原理如下:光源经一系列光学反射镜进人流动池，从流动池出来的光再经分光系统、狭缝照射到一组光电二极管上，数据收集系统实时记录下组分的光谱吸收，得到三维的立体谱图。
用一组光电二极管同时检测透过样品的所有波长紫外光，而不是某一个或几个波长，和普通的紫外-可见分光检测器不同的是进人流动池的光不再是单色光。
它具有以下优点:(1)可得任意波长的色谱图，极为方便;(2)可得任意时间的光谱图，相当于与紫外联用;(3)色谱峰纯度鉴定、光谱图检索等功能，可提供组分的定性信息。
二极管阵列检测器对色谱峰纯度的分析刘飞;刘宁;程光【摘要】二极管阵列检测器（DAD）是药物分析实验室常用的高效液相色谱检测器。
该型监测器除了具备紫外可见光检测器所有的功能之外，还可以在线获取色谱峰的紫外可见光吸收谱图，并据此提供峰纯度分析功能。
本文从评估峰纯度的原理入手，结合安捷伦色谱工作站和实际色谱实验，详细说明峰纯度分析的2种方法和显示形式，讨论应用峰纯度分析注意事项。
%Diode array detector (DAD) is a common part of high performance liquid chromatography in the pharmaceutical analysis labs. In addition to being a fully functional ultraviolet-visible (UV-Vis) detec-tor ,DAD is also capable of recording the UV-Vis spectrum simultaneously analyzing peak purity. In this paper ,we detailedly elucidated two methods and display modes of peak purity analysis based on the evalua-tion of the principle of peak purity analysis. Besides ,the precautions of applying peak purity analysis were discussed combining with practical experiences of using Agilent HPLC workstation.【期刊名称】《分析仪器》【年(卷),期】2013(000)006【总页数】4页(P141-144)【关键词】二极管阵列检测器;峰纯度【作者】刘飞;刘宁;程光【作者单位】南京大学生命分析化学国家重点实验室，南京 210093;南京绿叶思科药业有限公司研发部，南京 210061;南京绿叶思科药业有限公司研发部，南京210061【正文语种】中文在药物分析方法开发初步完成后，需要对分析方法进行验证，验证的内容包括定量限、精密度和专属性等内容。
“峰纯度”测试是将某个峰中的光谱与其峰顶点光谱进行比较，以确定该峰是否包含光谱不同的组份。
在“峰纯度”测试中，Empower 软件可执行以下功能：执行基线修正。
使用峰顶点光谱作为参比光谱。
（峰顶点光谱是峰中有最大光谱吸光率的光谱。
为参比光谱与其它峰光谱之间的每个光谱比较计算“光谱对照角”（纯度角）和“阈值角度”（纯度阈值）。
根据为每个比较计算的所有“纯度角”和“纯度阈值”的加权平均值得出峰纯度结果。
“峰纯度”测试检查某个峰是否是光谱性的（而不是化学的）纯净，也就是说，它是表示单个化合物，还是表示多个化合物。
化学纯度必需使用多重分析过程来确定和确认。
可将 Empower PDA 软件作为一种检查峰一致性的方法。
在“峰纯度”测试中，Empower 软件可执行以下功能：1. 通过测量向量方向（“纯度”图上的“纯度角”）的差异，将峰内每个数据点处的光谱与峰顶点光谱进行对照。
2. “噪音角”使用噪音间隔算出。
它是所有被监控波长处的噪音与信号之比的正弦值。
3. 计算从单个光谱比较（步骤 1）获得的“纯度角”的加权均方根 (RMS)，可获得“纯度角”。
加权“纯度角”的目的是增大具有较好信噪比的光谱的作用。
4. 组合整个峰上的单个“噪音角”，可得到“噪音角”。
5. 将“噪音角”与“溶剂角”相加得到“阈值角度”。
当“阈值判据”参数设为“自动阈值”（即缺省值）时，将为每个峰自动计算“溶剂角”。
Empower PDA 软件仅计算积分峰的“峰纯度”。
积分参数定义基线修正的开始和结束光谱。
用户也可以在自己的处理方法中限制“峰纯度”测试所使用的活动峰区域。
再问一下，PDA检测峰纯度时，阈值设置成990？999？PDA除了检测峰纯度、便于得到紫外吸收光谱图，还有什么功能吗？得到的3D文件有什么用？阈值设成990的，是安捷伦的DAD。
一般设成990。
PDA还可以做普通的紫外检测器。
得到的3D除了提取色谱图与光谱图，判断纯度，进行光谱匹配之外，好像就没有什么用处了。
液相色谱仪各种检测器的应用范围HPLC中常用的检测器分有如下几种,紫外吸收检测器（UVD）、二极管阵列检测器（PDAD）、荧光检测器（FLD）、示差折光检测器（RID)、蒸发光散射检测器（ELSD）、质谱检测器（MSD)等.下面就分别介绍简单介绍一下。
光学类检测器1、紫外吸收检测器(UVD）是目前HPLC中应用最广泛的检测器.它的主要特点是灵敏度高，线性范围宽,对流速和温度变化不敏感，可用于梯度洗脱.它要求被检测样品组分有紫外吸收，属于选择性检测器。
2、二极管阵列检测器（PDAD）是20世纪80年代才出现的一种光学多通道检测器，它可以看作是UVD的一个分支。
在对每个洗脱组分进行光谱扫描，经计算机处理后，得到光谱和色谱结合的三维图谱。
其中吸收光谱用于定性（确证是否是单一纯物质）,色谱用于定量,常用于复杂样品（如生物样品、中草药）的定性定量分析。
3、荧光检测器（FLD）同样属于选择性检测器，其灵敏度在目前常用的HPLC检测器中是最高的,应用也较多，仅次于UVD。
它适用于能激发荧光的化合物.很多与生命科学有关的物质，如氨基酸、胺类、维生素、甾族化合物及某些代谢药物都可以用荧光法检测.荧光检测器在生物样品痕量分析中很有用,尤其在用荧光衍生后，可以检测很微量的氨基酸和肽.通用型检测器1、示差折光检测器(RID）是一种通用型检测器，只要被测组分与洗脱液的折光指数有差别就可使用。
生命科学中常遇到各类糖类化合物，没有紫外吸收，一般常用示差折光检测器.它的通用性比UVD广,但灵敏度要低，对温度变化敏感，并与梯度洗脱不相容，因而限制了它的使用。
2、蒸发光散射检测器（ELSD）也是一种通用型的检测器,可检测挥发性低于流动相的任何样品,而不需要样品含有发色基团。
ELSD的响应值与样品的质量成正比，因而能用于测定样品的纯度或者检测未知物.ELSD灵敏度比RID高，对温度变化不敏感，基线稳定，可用于梯度洗脱。
现在ELSD已被广泛应用于碳水化合物、类脂、脂肪酸和氨基酸、药物以及聚合物等的检测.3、质谱检测器（MSD)是另一种通用型检测器,在灵敏度、选择性、通用性及化合物的分子量和结构信息的提供等方面都有突出的优点.但它的昂贵操作费用和复杂性限制了它的推广应用。
岛津DAD高效液相色谱操作规程1、用途：进行样品纯度和杂质的分析，可以满足全波长采集数据并进行最佳吸收波长的选择。
2、系统组成：本系统由2个LC-20A Tvp溶剂输送泵, 7725i手动进样阀，SPD-M20A紫外-可见检测器、岛津原装色谱数据工作站和电脑等组成，柱温箱、不间断电源等辅助设备。
3、准备3.1 准备所需的流动相，用合适的0.45μm滤膜过滤（水相用水膜，有机相用有机膜），超声脱气20min。
3.2根据待检样品的需要更换合适的色谱柱（注意方向，顺序是从进样器流经色谱柱进入检测器方向，色谱柱箭头方向为流速方向）。
3.3倒掉废液瓶中的废液。
3.4检查仪器各部件的电源线、数据线和输液管道是否连接正常。
4、操作规程4.1启动仪器：4.1.1首先打开柱温箱并设置柱温箱温度为40℃按柱温箱控制界面上的ready键启动柱温箱。
4.1.2 依次开启电脑、按power键开启检测器和泵控开关。
4.1.3 将泵A、泵B吸滤器相应的放入到准备好的流动相中。
4.1.4 逆时针转动泵的排液阀180°，打开排液阀4.1.5 按泵的[purge]键，pump指示灯亮，泵大约以9.9ml/min的流速冲洗，冲洗3-5分钟后，按[purge]键停止；4.1.6将排液阀顺时针旋转到底，关闭排液阀4.1.7五分钟后打开电脑桌面上的LCsolution工作站，进行仪器与电脑的连接。
本机没有密码，可直接进入系统。
4.1.8进入主界面后点击通道1进行连接。
4.2参数设置：4.2.1建立新的分析方法（详情见岛津原装色谱工作站操作规程）。
若为已有方法的分析项目，直接调用即可（详情见岛津原装色谱工作站操作规程）。
本机所有操作均在工作站上进行，在操作界面上均为无效操作。
工作站右上角工具栏上有一排图标，在上面控制泵开关和灯开关。
4.2.2点击工作站中的灯开关和泵开关进行仪器的稳定。
4.3仪器稳定的判断4.3.1仪器柱压波动在0.2MPa为色谱柱稳定状态。
配置PDA或DAD检测器液相色谱峰纯度检测及其应用(二) 2016-12-29作者：Bruce Lee来源：药渡头条
本文接上篇：配置PDA或DAD检测器液相色谱峰纯度检测及其应用(一)
1、概述
利用PDA或者DAD检测器的全波长数据采集存储能力，通过光谱的比对可以实现对色谱峰纯度的检测，以此达到判断是否有其他相关杂质共洗脱现象。
前文介绍了通过比较光谱数据组向量之间夹角与噪音的cosine或者sine值的大小关系，进而实现色谱峰纯度的检测，其中就包括有Shimadzu LCsolution以及Waters Empower两类CDS，分别如下图1-1与1-2。
Fig.1-1Peak purity determination by cosine with Shimadzu LCsolution
Fig.1-2Peak purity determination by sine with Waters Empower
PDA或者DAD检测器实现色谱峰纯度检测的根本基础在于，对采集到的任一时刻的吸收光谱与参比吸收光谱进行对比。
除了数据组向量的方式之外也有其他的实现方式，如相关系数法。
对于一个色谱峰而言，其任一时刻的吸收度均是样品浓度的线性函数，假设取色谱峰上的任意2个时间点的光谱，其中一条光谱在光谱范围内的吸光度作为纵坐标，另外一条光谱在光谱范围内的吸光度作为横坐标，分别进行线性回归分析。
如果该色谱峰是纯的，在XOY坐标平面内的线性回归曲线的相关系数就会比较大，线性关系较好，反之，在XOY坐标平面内的线性回归曲线的相关系数就会比较小，如下图2所示。
Fig.2Peak purity determination by relevant coefficient
在线性回归的时候，其相关系数r的计算可按照下图3中公式进行，而图2中的Similarity 则是相关系数r的平方乘以1000而来，最大为1000，最小为0，值越大色谱峰纯度也就越高，计算如下图4所示。
Fig.3Formula for calculation of relevant coefficient
Fig.4Formula for calculation of Similarity with Agilent ChemStation
按照该种方法对色谱峰纯度进行检测的就包括Agilent的ChemStation系统，其中Agilent 会给出两种显示模式，如下图5所示。
其中图5A为均一化视图窗口，图5B为相似度窗口。
Fig.5Peak purity determination by Similarity with Agilent ChemStation
无论是相关系数法或者数据组向量比较纯度角法对色谱峰的纯度进行检测的时候，其结果一般均是参考意义的，色谱峰纯度检测通过并不是色谱峰无共洗脱相关物质的充分必要条件。
而且，一些PDA或者DAD检测器的采集参数或者数据处理参数的设置以及样品浓度的大小也会影响色谱峰纯度检测的结果，如检测器的光谱带宽设置，狭缝宽度的设置，光谱采集范围的设置，参比吸收光谱的选择，噪音的选择，样品的浓度等。
2、色谱峰纯度检测结果的影响因素
任何影响色谱峰的吸收光谱的吸收度以及吸收光谱形状的参数设置，均会对色谱峰纯度检测结果产生或大或小的影响。
首先，PDA或者DAD检测器的光谱带宽的设置大小主要影响光谱的分辨率(resolution)，而对吸收度的影响与具体的化合物有关，一般带宽越宽，在一定范围内其吸收度越低。
光谱带宽设置的越宽，其光谱的分辨率越小，设置的越窄，光谱的分辨率也就越高，如下图6所示。
Fig.6Influence of bandwidth on the peak height and spectrum
光谱的分辨率越高，越能够真实的反映分析物的实际紫外吸收状况，对于色谱峰纯度检测越有益；当光谱带宽设置过大的时候，一些特征吸收位置可能会被平均掉，进而使得与相关杂质的吸收光谱之间的区分度降低，可能会得到与实际情况相反的纯度检测结果。
此外，需要注意的是，当光谱的带宽增加的时候，基线噪音减小；带宽减小，在增大分析物的吸收光谱的分辨率的同时，基线噪音也会变大。
因此在保证吸收光谱具有足够的分辨率的情况下，并不需要一味地减小光谱带宽。
PDA或DAD检测器的狭缝宽度的大小，主要影响经光栅分光的光的强度。
狭缝的宽度越大，能量越大；宽度越小，能量越弱。
最明显的影响是对基线噪音的影响，一般地，狭缝宽度越大，基线噪音越小，如下图7所示。
Fig.7Influence of slit width on the baseline noise and the spectrum
从上图7还可以看出，狭缝宽度的大小也会影响到分析物的紫外吸收光谱的形状以及吸收强度，因此也会对色谱峰纯度检测的结果造成一定程度上的影响。
采样光谱范围的大小，直接影响到用于对比的光谱数据组的维数或相关系数法中回归的点数，直接对色谱峰纯度检测的结果造成影响。
如下图8所示，二者区别最大的区域在245nm 以下区域。
当分别取200到310nm以及250到310nm作为光谱采样波长区间的时候，两种设置下的色谱峰纯度检测结果，将产生很大的差异。
Fig.8The importance of the selectivity for different range of spectrum on peak purity determination
在实际情况下，采样光谱范围需要既能尽可能的覆盖所有特征吸收区间，又要尽可能的避开流动相以及添加剂的截止波长。
参比吸收光谱一般取吸收最大时刻的光谱，但也可自由设定，如下图9所示。
不同的参比吸收光谱下，得到的色谱峰纯度检测结果可能不同，但也不排除出现相同的情况，如相关杂质与主峰完全共洗脱(分离度为0，如在ODS色谱柱上分离对映异构体)。
Fig.9Influence of different reference spectrum on the peak purity determination with Agilent
ChemStation
用于计算纯度检测的阈值一般由色谱工作站自动计算，但也可人为指定。
自动计算的阈值与所选取的噪音有关系，选择不同时间段的噪音，可能会得出相反的色谱峰纯度检测结果，如下图10-1与图10-2所示。
Fig.10-1An example of chromatogram with different noise interval for peak purity test
Fig.10-2Influence of different noise interval on peak purity determination
从上图可以看出，在对色谱峰的纯度进行检测的时候，选取合适的基线噪音对得出合适的结果具有重要作用。
在实际应用时，如果待检测色谱峰附近噪音比较稳定的时候，最好选择该位置，特别是对于梯度洗脱；对于等度洗脱的情况，选择无洗脱组分流出的一段时间内的噪音即可。
色谱峰积分方式也会对色谱峰的纯度检测结果产生影响，如下图11中，当选择如左图形式的积分的时候，色谱峰纯度检测通过，而采用右图的积分方式，则不能通过色谱峰纯度检测。
在该例中，拖尾部分明显是另一个色谱峰，因此最合适的方式是分别进行积分，并对感兴趣的色谱峰进行纯度检测。
Fig.11Influence of integration events on peak purity determination
在进行色谱峰纯度检测的时候，需要保证在整个采集光谱范围内的任意波长下，分析物的浓度均是不超载的。
如下图12-1所示，当分析物的浓度超载之后，光谱形状发生明显的变异，在低浓度下，两条光谱完全一致。
其对应的色谱峰纯度检测图如下图12-2所示。
Fi g.12-1Influence of sample concentration on spectrum
Fig.12-2Influence of sample concentration on peak purity determination 如图12-2所示，在低样品浓度下，通过了色谱峰纯度测试，在超载浓度下，不能够通过色谱峰纯度测试，且纯度曲线呈现双底W形状。
因此，保持合适的样品浓度，使得在整个光谱范围内的任意波长下均不超载，是进行有效色谱峰纯度检测的一个前提条件。
一般地，在对色谱峰纯度检测的时候，控制最大吸收波长下的峰高<1000mAU(700-800mAU比较合适)。
应用上，一般多见于分析开发的后期，比如最终的纯度测试分析方法，相关物质研究分析方法以及stability indicating测试分析方法。
3、结论
以PDA或DAD检测器对色谱峰纯度检测的时候，既可使用纯度角的方式也可使用相关系数的检测方式。
但无论使用何种形式，任何会影响紫外吸收光谱的吸光度以及形状的因素均会对色谱峰纯度测试结果产生一定程度的影响，如检测器的光谱带宽设置，狭缝宽度设置，光谱采集范围的设置，参比吸收光谱的选择，噪音的选择，色谱峰积分形式以及样品的浓度等。
