血清总胆固醇测定操作规程

血清总胆固醇CHO测定

1 检验目的

指导本室工作人员规范操作本检测项目，确保检测结果的准确。

2 实验原理

胆固醇酯+H2O——→游离胆固醇+脂肪酸

CO

游离胆固醇+O2——→胆甾烯酮+ H2O2

POD

2H2O2+4-AAP+4-氯酚————→醌亚胺化合物

在一定波长处比色，吸光率（△A）与T-CH浓度成正比。

3 标本：

3.1 病人准备：应禁食12小时抽血，24h内不饮酒。体检对象在抽血前24h内不作剧烈运动。

3.2 类型：血清。 3.3 标本存放 留取标本后请尽快分离血清。在冰箱保存的条件下（2～8℃）稳定3天， -20℃保存至少可以稳定3个月。

3.4 标本运输 室温条件下运输。

3.5 标本拒收标准 细菌污染的不能做测定。

4 实验材料

4.1 试剂:宁波美康生物科技股份有限公司CHO测定试剂盒（浙械注准 20142400134）

4.1.1 试剂组成

R1试剂：三羟甲基氨基甲烷缓冲液 pH7.0

0.05mol/L

胆固醇脂酶（CE）

800U/L

胆固醇氧化酶（CO）

400U/L

胆酸钠

3.5mmol/L R2试剂：4-氨基安替比林（4-APP）

1mmol/L

辣根过氧化物酶（POD）

1000U/L

4-氯酚

2.5mmol/L

4.1.2 试剂准备 试剂为即用式。

4.1.3 试剂稳定性与贮存：试剂保存于2～8℃，若无污染，可稳定至失效期。试剂不可冰冻。

xx人民医院检验科

检测项目技术操作标准程序规范文件

血清胆固醇(CHO)

测定

文件编号:xxxxx

页 码:第1页 共5页

1 目的

为操作者提供标准操作规程

2 适用范围

只适用于此项目的操作

3 定义

无

4 测定原理和临床意义

4.1 测定原理 胆固醇经酶水解和氧化被测定。在酚和过氧化物酶存在情况下，过氧化氢和4-氨基安替比林形成有颜色的醌类物质。

4.2 临床意义

长期的高胆固醇、高饱和脂肪和高热量饮食，遗传因素、缺少运动、脑力劳动、精神紧张等可使胆固醇升高；遗传因素、甲亢、营养不良、慢性消耗性疾病等可使胆固醇降低。

5 实验室条件

5.1实验室：北京豪迈生物工程有限公司生化实验室

5.2温湿度：温度：15-32℃，湿度：20-85%

6 标本要求

6.1标本种类

6.1.1检体种类：血清

6.1.2检体量： 最适量3ml 最小量2 ml

6.1.3分析量： 最适量500μl 最小量300μl

6.1.4容器 ：普通隔离胶管（黄色）

6.1.5采集条件：检查对象生活饮食处于正常状态，避免剧烈运动，避免精神紧张，一般采用空腹（至少禁食8小时，但不长于16小时），也可根据大夫的要求在饭后的不同时间段采血（一定要注明时间）。

6.2使用条件

6.2.1保存条件：血清：20 - 25 ℃可稳定2天，4 - 8 ℃可稳定7天，- 20 ℃可稳定3个月。

试剂：自生产日期起，2-8℃避光保存，可稳定至瓶标日期(18个月)；

15-25℃中可稳定2周。

6.2.2特殊容器：无

6.2.3预防措施：因为检体有感染的危险性，使用时必须戴手套，防止检体飞散污染环境和器具，应尽快处理。

6.3拒收标准：采血量不足、严重溶血、严重乳糜血等。

7 试剂

7、1购入试剂：

试剂名称 品牌 等级 保存条件 有效期限 产品批号

第 1 页 共 3 页 血清总胆固醇TC测定操作规程.docx

血清总胆固醇（TC）测定操作规程

1. 目的

本操作规程旨在规范血清总胆固醇（TC）的测定过程，确保检测结果的准确性和重复性。

2. 原理

血清总胆固醇（TC）测定通常采用酶法，通过胆固醇酯酶将胆固醇酯水解为游离胆固醇，然后利用胆固醇氧化酶将游离胆固醇氧化为胆甾酮和H2O2，最后利用过氧化物酶将H2O2分解为2H2O和O2，同时产生颜色变化。颜色的深浅与血清中胆固醇含量成正比，可通过比色法测定。

3. 试剂和材料

酶试剂盒（含胆固醇酯酶、胆固醇氧化酶、过氧化物酶等）

校准品和质控品

血清样本

蒸馏水

移液枪及吸头

比色杯

恒温水浴箱

自动生化分析仪或分光光度计

4. 操作步骤 第 2 页 共 3 页 4.1 准备工作

确保所有试剂和样本均已在室温下平衡至25°C。

校准生化分析仪或分光光度计至适当的波长（通常为500-550nm）。

4.2 试剂准备

根据试剂盒说明书，将酶试剂混合均匀，并预热至25°C。

4.3 样本处理

取适量的血清样本，避免溶血和脂血样本。

如有必要，对样本进行离心，去除沉淀物。

4.4 加样

使用移液枪准确取样，将血清样本加入比色杯中。

按照试剂盒说明书，加入等量的酶试剂至每个比色杯中。

4.5 反应

将比色杯放入恒温水浴箱中，保持37°C反应一定时间（通常为5-10分钟）。

4.6 比色测定

将反应后的比色杯放入自动生化分析仪或分光光度计中。

读取吸光度值，并根据标准曲线计算血清总胆固醇浓度。

5. 质量控制

每次测定前，使用校准品进行仪器校准。

定期使用质控品进行质量控制，确保结果的准确性和稳定性。

6. 结果记录与报告 第 3 页 共 3 页 记录所有测定结果，包括吸光度值、胆固醇浓度等。

根据医院或实验室的标准操作程序，编写并发布检测报告。

7. 安全注意事项

操作时应穿戴适当的个人防护装备，如手套和实验服。

实验六 血清总胆固醇的测定（邻苯二甲醛法）

实验六 血清总胆固醇的测定（邻苯二甲醛法）

一、实验目的

掌握邻苯二甲醛法测定血清总胆固醇的原理和方法

二、实验原理

胆固醇是环戊烷多氢菲的衍生物，它不仅参与血浆蛋白的组成，而且也是细胞的必要结构成分，还可以转化成胆汁酸盐、肾上腺皮质激素和维生素D等。胆固醇在体内以游离胆固醇及胆固醇酯两种形式存在，统称总胆固醇。总胆固醇的测定有化学比色法和酶学方法两类。本实验采用前一种方法。

胆固醇及其酯在硫酸作用下与邻苯二甲醛产生紫红色物质，此物质在550nm波长处有最大吸收，可用比色法作总胆固醇的定量测定。胆固醇含量在400mg/100ml内，与OD值呈良好线性关系。

本法不必离心，颜色产物也比较稳定，胆红素及一般溶血对结果影响不大，严重溶血者才使结果偏高。本法在20～37℃条件下显色，显色后5分钟开始至半小时以上颜色基本稳定。温度过低，显色剂强度减弱；加混合酸后振摇过激能使产热过高，也可使显色减弱。

三、实验仪器（器材）

722可见分光光度计、试管、移液枪等。

四、实验试剂和材料

试剂：

①邻苯二甲醛试剂：称取邻苯二甲醛50mg，以无水乙醇溶至50ml冷藏，有效期为一个半月。②醋酸（90％）：取冰醋酸90ml加入10ml蒸馏水中。

③混合酸：90％醋酸100ml与浓硫酸100ml混合。

④标准胆固醇贮液（1mg/ml）：准确称取胆固醇100mg，以冰乙酸溶至100ml。

⑤标准胆固醇应用液（0.1mg/ml）：将上述贮存液以冰乙酸稀释10倍: 即取10ml用冰乙酸稀释至100ml。

材料：动物血清

五、实验步骤

1、制作标准曲线 取5支试管编号后，按下表顺序加入试剂，加毕，温和混匀，20～37℃下静置10分钟，于550nm下比色测定，以总胆固醇量（mg%）为横坐标，OD值为纵坐标做出标准曲线。

管号 1 2 3 4 5

标准胆固醇应用液(ml) 0 0.10 0.20 0.30 0.40