血清总胆固醇测定标准操作规程
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血清总胆固醇测定标准操作规程
1. 检验原理：（氧化酶法）血清中总胆固醇（TC）包括游离胆固醇（FC）和胆固醇酯（CE）两部分。血清中胆固醇可被脂蛋白酯酶水解为游离胆固醇和游离脂肪酸（FFA），胆固醇在胆固醇氧化酶的氧化作用下生成胆甾烯酮和过氧化氢，过氧化氢在4-氨基安替比林和对羟基苯甲酸钠存在时，晶过氧化物酶（POD）催化，反应生成苯醌亚胺非那腙的红色醌类化合物，其颜色深浅与标本中TC含量成正比。
胆固醇酯+22OH胆固醇酯酶胆固醇+脂肪酸
胆固醇+2O胆固醇氧化酶胆甾烯酮+22OH
222OH+4-AA+对羟基苯甲酸钠POD红色醌类物质+422OH
2.试剂主要组成成分
产品组成 成分 浓度
R1 三羟基氨基甲烷 100mmol/L
TritionX-100 0.5%（V/V）
R2 胆固醇酯酶
0.4mmol/L
对羟基苯甲酸钠 50mmol/L
TritionX-100 0.5%（V/V）
4-氨基安替比啉 0.4mmol/L
叠氮钠 0.5%（W/W）
胆酸钠 5mmol/L
胆固醇氧化酶 400U/L
过氧化物酶 3000U/L
STD 胆固醇 5.17mmol/L
3.样本要求：新鲜无溶血血清。在22～25℃保存8小时，2～8℃保48小时，-20℃可保存1年。样本应避免反复冻融！
4.检验方法；仪器法（详见DF-603/DI-600标准操作规程）
5参考范围：
样本 参考范围（mmol/L）
血清 ＜5.2 6.检验结果的解释：
6.1样本含量超出线性范围时，建议用0.9%（W/V）的氯化钠溶液稀释样本。
6.2.单位换算：mg/dl=mmol/L×38.7
7.检验方法的局限性
7.1结果的准确性依赖于仪器的校正和测定温度、时间的控制。
7.2若试剂浑浊，或以水空白在500nm处吸光度大于0.080时不能使用。
8.试剂性能指标
8.1试剂外观：无色透明或淡黄色液体，无悬浮物及沉淀。
8.2装量：不低于标识值。
8.3空白吸光度：在500nm处，光径1cm时，空白吸光度A≤0.080
8.4线性区间：试剂的线性区间为[0.5-20.0]mmol/L，在此线性区间内：a）线性相关系数r应不小于0.9900；b)[2.0-20.0]mmol/L区间内，线性相对偏差不超过±10%。
8.5准确度：使用具有溯源性的标准品进行测定，实测值与标识值的相对偏差应在±10%内。
8.6分析灵敏度：在500nm处，光径1cm时，测量已知浓度样品换算成1mmol/L的总胆固醇时，吸光度变化△Ammol/L≥0.002
8.7批内精密度：CV≤4.0%
8.8批间差：R≤6.0%
8.9稳定性：（2-8）℃下，原包装存放的试剂有效期为12个月.取到期后1个月的试剂进行测试，应满足1-8.7的要求。
8.10校准品
8.10.1外观：无色透明液体。
8.10.2净含量：不少于标识值
8.10.3准确度：标准生化分析仪和试剂后，测定校准品，相对偏差应不大于±10%。
8.10.4均一性：瓶间均一性：CV≤5%
8.10.5稳定性：（2-8）℃下，原包装存放的试剂有效期为12个月.取到期后1个月的试剂进行测试，应满足8.10.1-8.10.4的要求。
9.临床意义： 胆固醇是C3位置结合有羟基的类固醇。很多组织均合成胆固醇，尤其是肝脏或小肠壁。体内约3/4的胆固醇均为合成的，只有1/4来源于饮食。胆固醇的监测用于评估罹患动脉硬化的风险以及对脂类/脂蛋白的代谢紊乱进行诊断和监测治疗。
