抗生素效价
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抗生素效价的测定方法
抗生素效价的测定方法1. 磁敏感性法：该方法是将细菌和抗生素共同培养在琼脂平板上，然后在琼脂平板的一侧放置磁性探针，通过磁力对菌落的影响，测定抗生素效价。
这种方法操作简单，结果可重复性好。
2. 微量滴定法：该方法是将不同浓度的抗生素加入含有微生物的培养基中，控制每次加量相同，直至培养基中出现明显的抑菌圈，然后根据最小抑菌浓度来测定抗生素的效价。
这种方法对药物浓度的变化比较敏感，但误差较大。
3. 黏度测定法：该方法是根据细菌代谢后产生的黏性物质的变化，来测定抗生素的效价。
该方法操作简单，但对试验条件较为严格。
4. 限制性酶切割法：该方法是将抗生素和细菌混合后，通过限制性酶将其切割成小片段，进而测定抗生素的效价。
这种方法需使用限制性酶切割试剂和设备，相对较为复杂。
5. 形态学观察法：该方法是观察抗生素对细菌的形态和结构的影响，来判断抗生素的效价。
这种方法适用于细菌的菌落比较大的情况，但操作比较繁琐。
6. 代谢产物测定法：该方法是根据细菌代谢产物的变化，来测定抗生素的效价。
这种方法操作比较简单，但对试验条件较为严格。
7. 荧光标记法：该方法是将抗生素用荧光标记，然后与细菌共同培养，通过荧光强度的变化，来测定抗生素的效价。
这种方法对试验条件要求比较高，但结果可靠性较高。
8. 酶联免疫吸附测定法：该方法是将抗生素用于特定的抗体结合，然后通过检测抗体与细菌结合的情况，来测定抗生素的效价。
这种方法的优点是灵敏度高，同时避免了细菌对抗生素的耐药性。
9. 质谱法：该方法是使用质谱仪分析样品中的分子质量的变化，来测定抗生素的效价。
这种方法可分析多种抗生素，但设备价格昂贵。
10. 核磁共振法：该方法是使用核磁共振仪测定样品中的氢、碳、氮等原子的共振频率和空间结构，来测定抗生素的效价。
这种方法对试验条件的要求非常高，且设备也价格昂贵。
测定抗生素效价的方法有很多种，每种方法都有其特点和适用范围。
在实际应用中，应根据具体情况选择合适的方法，以确保测定结果的准确性和可靠性。
抗生素的效价测定方法
抗生素的效价测定方法一、引言抗生素是指能够抑制或杀灭某些细菌的化学物质，被广泛应用于临床医学和兽医学中。
为了保证抗生素的质量和安全性，需要对其效价进行测定。
本文将详细介绍抗生素效价测定的方法。
二、理论基础1. 抗生素效价抗生素效价是指单位体积或单位重量的抗生素所能杀灭或抑制的菌落数量。
通常使用最小抑菌浓度（MIC）或最小杀菌浓度（MBC）来表示。
2. 测定原理抗生素效价测定是通过比较不同浓度的抗生素与一定数量的细菌接触后，确定其最小有效浓度来评估其功效。
通常使用微量稀释法、滤纸片扩散法、管式稀释法等方法进行测定。
三、实验步骤1. 实验前准备（1）准备所需试剂和设备：包括培养基、试管、移液管、显微镜等。
（2）选择适当的细菌株：选取适合该种类药物敏感性测试的细菌株，如大肠杆菌、金黄色葡萄球菌等。
（3）制备细菌悬液：将选定的细菌株接种于含有适当营养成分的培养基中，培养至对数生长期，然后用生理盐水将其稀释到一定浓度。
2. 测定方法（1）微量稀释法① 准备不同浓度的抗生素溶液：将抗生素溶解于含有适当营养成分的培养基中，制成不同浓度的药物溶液。
② 在试管中加入细菌悬液和药物溶液：取一系列标准试管，分别加入相同数量的细菌悬液和不同浓度的药物溶液，混匀后孵育。
③ 观察并记录结果：观察每个试管内是否有细菌生长，记录最低有效（2）滤纸片扩散法① 准备不同浓度的抗生素滤纸片：将抗生素溶解于无菌蒸馏水中，然后在无菌平板上放置一张过滤纸片，在过滤纸片上滴入不同浓度的药物溶液。
② 在平板上接种细菌悬液：在已经凝固的无菌平板上均匀涂布一层细菌悬液。
③ 孵育并观察结果：将含有药物滤纸片的平板孵育，观察抑菌圈的大小，记录最小有效浓度。
（3）管式稀释法① 准备不同浓度的抗生素溶液：将抗生素溶解于含有适当营养成分的培养基中，制成不同浓度的药物溶液。
② 在试管中加入细菌悬液和药物溶液：取一系列标准试管，分别加入相同数量的细菌悬液和不同浓度的药物溶液，混匀后孵育。
抗生素效价单位表示方法
抗生素效价单位表示方法
抗生素效价单位是指抗生素在抗菌活性方面的表示方法。
抗生素效价单位一般以等比数量
物质测定结果表示，其单位为“单位”或“单位/分子量”。
抗生素效价单位一般在同一族抗生素中间的比较上才有意义。
例如，抗结核药物在单位/
分子量中的抗性，使得结核菌对不同的抗结核药物敏感程度的比较简单、准确。
抗生素效价单位有多种，包括拮抗效价、最小抑菌浓度和最小灭菌浓度等。
拮抗效价是指抗生素需要多大浓度才能抑制抗生素生效的一个效价，其值比较低代表抗生
素抗菌能力不强，反之则抗菌效力强。
最小抑菌浓度是指抗生素对微生物完全抑制生长或活跃性所需要的浓度，即最小的杀菌量，表明抗生素的杀灭性水平。
最小灭菌浓度是指抗生素需要多大浓度才能抑制化合物中所有致病因子的一个效价，它比
最小抑菌浓度更高，表明抗生素的完全灭菌能力。
抗生素效价单位是医药行业的重要指标，不同的抗生素的效价单位大小不同，可以代表抗
生素的抗菌功效。
它为药物开发和临床评价提供了重要依据，也为抗菌用药方案指导提供
重要参考。
抗生素的效价名词解释
抗生素的效价名词解释
抗生素是一类可以抑制或者杀死细菌的药物，是医生治疗感染性疾病的重要工具。
在医学上，有一些用来描述抗生素效力的名词，如最小抑制浓度（MIC）、最小杀菌浓度（MBC）、最小细菌静止浓度（MBSC）等，这些名词对于理解抗生素的效力至关重要。
最小抑制浓度（MIC）是指在标准条件下，抗生素对特定细菌的最低有效浓度。
通常情况下，MIC越低，抗生素的效力越强。
而最小杀菌浓度（MBC）则是指抗生素能够杀死细菌的最低浓度，MBC一般高于MIC。
最小细菌静止浓度（MBSC）是指抑制细菌生长的最低有效浓度，MBSC一般介于MIC和MBC之间。
这些名词的理解对于正确使用抗生素非常重要。
如果一个抗生素的MIC值很高，那么这种药物对于治疗相应的细菌感染可能就不太有效。
另外，对于一些细菌来说，抗生素的MBC可能会很高，这就意味着即使给予足够的抗生素，也不能完全将其杀灭。
而MBSC则是指在细菌暂时无法生长的浓度，这对于控制感染也非常重要。
在临床实践中，医生会根据细菌的敏感性测试结果来确定最适合的抗生素治疗方案。
通过测定MIC、MBC和MBSC值，可以更好地了解抗生素的效力，从而更加科学地选择治疗方案。
此外，对于抗生素的正确使用也是非常重要的，不合理使用抗生素容易导致细菌耐药性的形成，从而使得抗生素失去治疗效力。
总之，抗生素的效价名词是对抗生素效力的重要描述，对于临床医生选择合适的治疗方案至关重要。
同时，正确使用抗生素也是保护抗生素疗效的重要措施。
希望大家能够正确理解抗生素的效价名词，以及科学合理地使用抗生素，从而更好地保护我们的健康。
抗生素效价测定实验报告
抗生素效价测定实验报告抗生素效价测定实验报告引言：抗生素是一类能够抑制或杀灭细菌生长的药物，广泛应用于医疗领域。
然而，由于抗生素的滥用和不当使用，导致了细菌的耐药性问题日益严重。
为了更好地控制抗生素的使用和开发新的抗生素药物，了解抗生素的效价是非常重要的。
本实验旨在通过测定抗生素的效价，为抗生素研发和临床应用提供参考。
材料与方法：1. 实验菌株：选择一种常见的细菌菌株，如大肠杆菌。
2. 抗生素：选择一种常见的抗生素，如青霉素。
3. 培养基：选择适合实验菌株生长的培养基。
4. 细菌培养器：提供适合细菌生长的环境条件。
5. 稀释液：用于制备不同浓度的抗生素溶液。
6. 培养皿：用于培养细菌和抗生素溶液的混合物。
7. 灭菌器：用于灭菌培养皿和其他实验用具。
8. 显微镜：用于观察细菌生长情况。
实验步骤：1. 准备工作：将培养皿和其他实验用具放入灭菌器中进行灭菌处理，以防止实验中的污染。
2. 制备抗生素溶液：根据实验要求，将抗生素溶解在稀释液中，制备不同浓度的抗生素溶液。
3. 制备菌液：将实验菌株接种到含有适合其生长的培养基中，培养至合适的生长期。
4. 稀释菌液：将培养好的菌液按照一定比例稀释，以获得一定浓度的菌液。
5. 实验操作：在灭菌的培养皿中加入一定量的抗生素溶液和稀释后的菌液，使其均匀混合。
6. 培养细菌：将培养皿放入细菌培养器中，提供适合细菌生长的条件，培养一定时间。
7. 观察结果：使用显微镜观察培养皿中细菌的生长情况，记录下不同抗生素浓度下的细菌生长情况。
结果与讨论：根据实验结果，我们可以得到不同抗生素浓度下的细菌生长情况。
通常情况下，抗生素浓度越高，细菌的生长受到的抑制作用也越强。
通过对比不同浓度下的细菌生长情况，我们可以确定抗生素的效价。
效价越高的抗生素，其抑菌作用越强，对细菌的杀灭效果也越好。
实验中还可以进行一些控制实验，以确保结果的准确性。
例如，可以设置对照组，即不加入抗生素的培养皿，以观察细菌的正常生长情况。
抗生素效价测定
项目２青霉素效价测定一、知识连接(一)抗生素效价表示方法效价就是评价抗生素效能得标准,也就是衡量抗生素活性成分含量得尺度。
效价一般指得就是生物活性得大小或者高低,生物活性得大小与高低就是与效价成正比得。
实际应用中,合理使用抗生素得剂量十分重要。
抗生素应用时剂量小,因此除重量外,常用特定得效价单位(unit)表示,效价单位也称抗菌活性单位。
最初,由于抗生素无法制得纯品,用其生物活性得大小来表示其剂量、一个青霉素得效价单位(Ｕ):能在5０mL肉汤培养基中完全抑制金黄色葡萄球菌标准菌株得发育得最小青霉素剂量。
一个链霉素效价单位(U):能在1mＬ肉汤培养基中完全抑制大肠杆菌(ATCC9６3７)发育得最小剂量。
重量单位(μg):以抗生素得有效成分(生理活性成分)得重量作为抗生素得基准单位(大多数使用)。
(二)抗生素效价测定抗生素微生物检定法可分为稀释法、比浊法与琼脂扩散法(管碟法与打孔法)。
各国药典通常采用后两种方法测定抗生素得效价。
管碟法就是利用抗生素在琼脂培养基得扩散渗透作用,在含有高度敏感性试验菌得琼脂平板上放置小钢管(内径6、0±0。
l mm,外径8、0±０。
l mm,高1０±０.lmm),管内放入标准品与检品得溶液,经16～1８小时恒温培养,当抗生素在菌层培养基中扩散时,会形成抗生素浓度由高到低得自然梯度,即扩散中心浓度高而边缘浓度低。
因此,当抗生素浓度达到或高于MIC(最低抑制浓度)时,试验菌就被抑制而不能繁殖,从而呈现透明得无菌生长得区域,常呈圆形,称为抑菌圈。
抑菌圈得大小代表药剂抗菌力得高低。
在一定得药剂浓度范围内,药剂得浓度越高则抑菌圈得直径越大。
目前最常用得就是游标卡尺与直尺直接测量抑菌圈直径、根据扩散定律得推导,抗生素总量得对数值与抑菌圈直径得平方成线性关系,即通过检测抗生素对微生物得抑制作用,比较标准品与供试品产生抑菌圈得大小,计算出供试品得效价。
管碟法得基本操作与设计适用于各种抗生素,试验结果较稳定;样品用量少,灵敏度高;适合于大批样品得测定。
19.抗生素效价
定
是微生物等在生命活动过程中产生
义
的、在极微浓度下选择性地抑制或
杀死其它微生物的化学物质。
抗
β-内酰胺类 青霉素、头孢菌素等
生 素
大环内酯类 红霉素、螺旋霉素等
种
四环类 金霉素、土霉素、四环素等
类
氨基糖苷类 链霉素、卡那霉素、庆大霉素等。
抗菌
抗菌谱 范围
窄谱抗菌药 仅对单一菌种有效
广谱抗菌药
不仅对G+、G- 细菌，且对衣原 体、支原体、立克次体等也有
大肠杆菌
4.抗生素的测定
（1）滴定法
------指示剂变色来指示反应终点
如青霉素
在碱性条件下加入过量的I2， 反应生成青霉噻唑酸碘，用 Na2S2O3滴定多余的碘，可 计算出青霉素的单位。
（2）比色法
产物经一定化学反应产生颜色，且颜色深浅与产物浓 度成正比。
测定原理：
在碱性条件下链霉素分子中 的胍基能和试剂起颜色反应, 且所形成的颜色强度和链霉 素的浓度成正比 。
倒平板
涂布
管碟法
抑菌圈
思考题：
l1.抗生素？ l2.抗菌谱？ l3.一个青霉素效价单位？ l4.一个链霉素效价单位？
抗生素效价表示方法重量折算单位以最低抑菌浓度为一个单位如青霉素06微克1u类似重量单位药检所制定抗生素单位制霉菌素1mg3700u多粘菌素b1mg10000u一般情况下抗生素被制成纯净的化学物质时就可用重量来表示单位3抗生素效价单位一个青霉素效价单位在50ml肉汤培养基中完全抑制金黄色葡萄球菌标准菌株发育的最小青霉素剂量
药检所制定抗生素单位 制霉菌素 1mg=3700u 多粘菌素B 1mg=10000u
3、ห้องสมุดไป่ตู้生素效价单位
抗生素的效价单位定义和剂量的表示方式
抗生素的效价单位定义和剂量的表示方式抗生素的剂量用效价单位来表示，简称单位，以u代表，分为发酵液的u/ml和纯品结晶粉的u/mg两种表示方法。
抗生素的效价单位是以其抗菌活性来表示的，一个青霉素效价单位表示能完全抑制50毫升肉汤培养基中生长的金黄色葡萄球菌的最小剂量。
1毫克青霉素G钠盐的纯品能完全抑制83350毫升肉汤中的葡萄球菌，因此，青霉素成品的毫克单位是1667.一个链霉素效价单位为能完全抑制1毫升肉汤培养基中生长的大肠杆菌的最小剂量，1毫克链霉素碱能完全抑制1000毫升肉汤培养基中的大肠杆菌，因此，链霉素碱成品的毫克单位是1000.同理，土霉素、红霉素、卡那霉素、万古霉素、新霉素等抗生素的游离碱均以1毫克作1000单位计。
氯霉素、四环素及金霉素的盐酸盐也以1毫克作1000单位计。
各种抗生素盐类的效价应根据其分子量换算。
在实际应用上，药用抗生素的最低毫克单位是根据医疗上的要求与生产技术的水平由药典来规定的。
抗生素效价测定方法
抗生素效价测定方法抗生素效价测定方法引言：抗生素是一类用于抑制或杀灭细菌生长的药物。
它们的广泛应用已经在医学领域产生了积极的影响，但随之而来的是细菌对抗生素产生的抗药性问题。
为了准确评估抗生素的效力以及制定合适的治疗方案，科学家们研发了多种抗生素效价测定方法。
本文将深入探讨这些方法的原理、应用和局限性。
正文：一、生物学测定法生物学测定法是一种常见的抗生素效价测定方法，它基于抗生素对细菌的抑制或杀菌作用。
主要包括最小抑菌浓度（MIC）测定和最小杀菌浓度（MBC）测定。
1. 最小抑菌浓度（MIC）测定：MIC测定是通过在含有细菌的培养基上逐渐加入不同浓度的抗生素，观察最低的有效浓度，以抑制细菌的生长或形成可见的生长抑制区域。
这个测定方法通常可以定量地测量出抗生素的最低有效浓度。
2. 最小杀菌浓度（MBC）测定：MBC测定是在MIC测定的基础上，进一步通过将培养基转移到不含有抗生素的培养基中培养，观察最低有效浓度，以杀灭细菌生长。
这个测定方法可以提供更准确的抗生素效价评估，因为它考虑了抗生素的细菌杀菌作用。
二、色谱分析法色谱分析法是一种基于抗生素化学性质的效价测定方法。
它通过使用色谱柱将样品中的抗生素分离出来，并测量其峰面积或峰高，以定量分析其浓度。
1. 高效液相色谱法（HPLC）：HPLC是一种常用的色谱分析技术，可以有效地分离、定量和鉴定抗生素。
它利用高压泵将样品溶液推入色谱柱，通过样品在固定相和流动相之间的分配系数差异来实现分离。
定量的抗生素效价可以通过峰面积或峰高与标准曲线的关系来计算。
2. 气相色谱法（GC）：GC是一种适用于易挥发性物质的色谱分析方法，在某些情况下可以用于抗生素浓度测定。
样品经过气相柱，抗生素蒸发后进入气相检测器进行分析和定量。
三、生物化学测定法生物化学测定法是一种基于抗生素与生物体或其代谢产物之间的相互作用来评估抗生素效力的方法。
常见的生物化学测定法包括酶抑制测定法和細胞毒性試驗。
杯碟法测定抗生素效价的原理
杯碟法测定抗生素效价的原理抗生素是可以破坏或阻止细菌生长的药物，常用于治疗细菌感染。
测定抗生素的效价是指确定一定量的抗生素可以有效抑制细菌生长的最小浓度。
常见的测定方法有杯碟法、肉汤稀释法、滴定法、渐进浓度法等。
杯碟法是测定抗生素效价最为常用的方法。
杯碟法是通过在含有细菌的培养基上放置不同浓度的抗生素溶液，观察不同浓度抗生素在培养基中形成的抑菌区域的大小，来确定细菌抑制最小浓度的方法。
具体操作步骤如下：1. 准备培养基：为了使实验结果更准确，通常采用标准化的稀释培养基，如Mueller Hinton培养基或Tryptic Soy培养基等。
2. 制备细菌悬液：从纯培养物中挑取1-2个菌落，在含有培养基的试管中，通过匀浆、加水稀释等方式制备出一定浓度的细菌悬液。
3. 处理杯和碟：将无菌培养基倒入消毒好的培养皿中，在其表面均匀涂布细菌悬液，再通过光学密度法或草屑法将不同浓度的抗生素液均匀滴入培养皿中的小圆片（碟）或凹坑（杯），形成抗生素浓度逐渐递减的浓度梯度。
注意，应尽量减少气泡形成，以免干扰细菌生长和抑制效果的判定。
为了控制实验条件的统一，通常使用标准的尺寸和厚度的杯或碟。
4. 培养：将已处理好抗生素和细菌悬液的培养皿放入恒温箱中，以维持适宜的温度、通气和湿度条件。
通常培养时间为18-24小时，但根据不同的细菌种类和抗生素特性会有所不同。
需要注意的是，杯碟法虽然是一种简单可行的方法，但对实验条件的控制要求较高，需要熟练的技术和严格的操作流程，否则会影响到实验结果的准确性。
在实际使用中，还应该根据不同细菌种类和抗生素类型选择不同的培养基、抗生素和其浓度等参数，以达到更好的效果。
杯碟法由于操作简单、容易控制，因此在临床医学领域得到了广泛应用。
其主要作用是为临床医生提供了确定正确用药方案的重要依据，可以根据不同细菌种类及其药敏性，选择最合适的抗生素类别，并测定其最低抑菌浓度，为临床治疗提供有效参考依据。
杯碟法也可应用于食品、环境监测等领域。
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用管碟法（2.2）法，测定链霉素活菌剂的效价，估计效价为1 000 000 u/g，供试品最终浓度为1.4u/ml 及0.7u/ml。
链霉素的效价测定抗生素微生物检定法本法系在适宜条件下，根据量反应平行线原理设计，通过检测抗生素对微生物的抑制作用，计算抗生素活性（效性）的方法。
抗生素微生物检定包括两种方法，即管碟法和浊度法。
测定结果经计算所得的效价，如低于估计效价的90%或高于估计效价的110%时，应调整其估计效价，重新试验。
除另有规定外，本法的可信限率不得大于5%。
第一法管碟法本法系利用抗生素在琼脂培养基内的扩散作用，比较标准品与供试品两者对接种的试验菌产生抑菌圈的大小，以测定供试品效价的一种方法。
菌悬液的制备枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）悬液取枯草芽孢杆菌［CMCC（B）63501］的营养琼脂斜面培养物，接种于盛有营养琼脂培养基的培养瓶中，在35～37℃培养7日，用革兰氏染色法涂片镜检，应有芽孢85％以上。
用灭菌水将芽孢洗下，在65℃加热30分钟，备用。
短小芽孢杆菌(Bacillus pumilus)悬液取短小芽孢杆菌［CMCC(B)63202］的营养琼脂斜面培养物，照上述方法制备。
金黄色葡萄球菌（Staphylococcus aureus）悬液取金黄色葡萄球菌［CMCC（B）26003］的营养琼脂斜面培养物,接种于营养琼脂斜面上，在35～37℃培养20～22小时。
临用时，用灭菌水或0.9％灭菌氯化钠溶液将菌苔洗下，备用。
藤黄微球菌（Micrococcus luteus）悬液取藤黄微球菌［CMCC（B）28001］的营养琼脂斜面培养物，接种于盛有营养琼脂培养基的培养瓶中，在26～27℃培养24小时，或采用适当方法制备的菌斜面,用培养基Ⅲ或0.9％灭菌氯化钠溶液将菌苔洗下，备用。
大肠杆菌（Escherichia coli）悬液取大肠杆菌［CMCC（B）44103］的营养琼脂斜面培养物，接种于营养琼脂斜面上，在35～37℃培养20～22小时。
临用时，用灭菌水将菌苔洗下，备用。
啤酒酵母菌（Saccharomyces cerevisiae）悬液取啤酒酵母菌（ATCC 9763）的Ｖ号培养基琼脂斜面培养物，接种于Ⅳ号培养基琼脂斜面上。
在32～35℃培养24小时，用灭菌水将菌苔洗下置含有灭菌玻璃珠的试管中，振摇均匀，备用。
肺炎克雷伯氏菌（Klebosiella Pneumoniae）悬液取肺炎克雷伯氏菌[CMCC（B）46117]的营养琼脂斜面培养物，接种于营养琼脂斜面上，在35～37℃培养20～22小时。
临用时，用灭菌水将菌苔洗下，备用。
支气管炎博德特菌（Bordetella Bronchiseptica）悬液取支气管炎博德特菌［CMCC（B）58 403］的营养琼脂斜面培养物，接种于营养琼脂斜面上，在32~35℃培养24小时。
临用时，用灭菌水将菌苔洗下，备用。
标准品溶液的制备标准品的使用和保存，应照标准品说明书的规定。
临用时照表1的规定进行稀释。
标准品的品种、分子式及理论计算值见表2。
供试品溶液的制备精密称（或量）取供试品适量，用各品种项下规定的溶剂溶解后，再按估计效价或标示量照表1的规定稀释至与标准品相当的浓度。
双碟的制备取直径约90mm、高16～17mm的平底双碟，分别注入加热融化的培养基（照表1）20ml，使在碟底内均匀摊布，放置水平台上使凝固，作为底层。
另取培养基适量加热融化后，放冷至48～50℃（芽孢可至60℃），加入规定的试验菌悬液适量（能得清晰的抑菌圈为度。
二剂量法标准品溶液的高浓度所致的抑菌圈直径在18～22mm，三剂量法标准品溶液的中心浓度所致的抑菌圈直径在15～18mm），摇匀,在每1双碟中分别加入5ml，使在底层上均匀摊布，作为菌层。
放置水平台上冷却后，在每1双碟中以等距离均匀安置不锈钢小管（内径6.0mm±0.1mm，高10.0mm±0.1mm，外径7.8mm±0.1mm）4个（二剂量法）或6个（三剂量法），用陶瓦圆盖覆盖备用。
检定法二剂量法取照上述方法制备的双碟不得少于4个,在每1双碟中对角的2个不锈钢小管中分别滴装高浓度及低浓度的标准品溶液,其余2个小管中分别滴装相应的高低两种浓度的供试品溶液；高、低浓度的剂距为2:1或4:1。
在规定条件下培养后，测量各个抑菌圈的直径（或面积），照生物检定统计法（附录ⅩⅣ）中的（2.2 ）法进行可靠性测验及效价计算。
三剂量法取照上述方法制备的双碟不得少于6个,在每1双碟中间隔的3个不锈钢小管中分别滴装高浓度(S<[3]>)、中浓度(S<[2]>)及低浓度(S<[1]>)的标准品溶液，其余3个小管分别滴装相应的高、中、低三种浓度的供试品溶液；三种浓度的剂距为1∶0.8。
在规定条件下培养后，测量各个抑菌圈的直径(或面积)，照生物检定统计法(附录ⅩⅣ)中的(3.3)法进行可靠性测验及效价计算。
第二法浊度法本法系利用抗生素在液体培养基中对试验菌生长的抑制作用，通过测定培养后细菌浊度值的大小，比较标准品与供试品对试验菌生长抑制的程度，以测定供试品效价的一种方法。
菌悬液制备金黄色葡萄球菌（Staphylococcus aureus)悬液取金黄色葡萄球菌［CMCC（B）26 003］的营养琼脂斜面培养物，接种于营养琼脂斜面上，在35~37℃培养20~22小时。
临用时，用灭菌水或0.9%灭菌氯化钠溶液将菌苔洗下，备用。
大肠杆菌（Escherichia coli）悬液取大肠杆菌［CMCC（B）44 103］的营养琼脂斜面培养物，接种于营养琼脂斜面上，在35~37℃培养20~22小时。
临用时，用灭菌水将菌苔洗下，备用。
白色念株菌（Candida albicans)悬液取白念株菌［CMCC（F）98 001］的改良马丁琼脂斜面的新鲜培养物，接种于10mlIX号培养基中，置35~37℃培养8小时，再用IX号培养基稀释至适宜浓度，备用。
标准品溶液的制备标准品的使用和保存，应照标准品说明书的规定。
临用时照表3的规定进行稀释。
标准品的品种、分子式及理论计算值见表2。
供试品溶液的制备精密称（或量）取供试品适量，用各品种项下规定的溶剂溶解后，再按估计效价或标示量照表3的规定稀释至标准品相当的程度。
含试验菌液体培养基的制备临用前，取规定的试验菌悬液适量（35~37℃培养3~4小时后测定的吸光值在0.3~0.7之间，且剂距为2的相邻剂量间的吸光度差值不小于0.1），加入到各规定的液体培养基中，混合，使在试验条件下能得到满意的剂量-反应关系和适宜的测定浊度。
已接种试验菌的液体培养基应立即使用。
①两性霉素B双碟的制备，用菌层15ml代替两层。
②乙酰螺旋霉素。
抗Ⅱ检定培养基，调节pH值使灭菌后为8.0～8.2。
③含3％氯化钠。
④加0.3%葡萄糖。
表2 抗生素标准品品种与理论值────────────────────────────────────────────────标准品品种标准品分子式或品名理论计算值u/mg 链霉素(C21H39N7O12)2·3H2SO4 798 .3卡那霉素C18H36N4O11·H2SO4 831.6阿米卡星 C 22H43N5O13糖霉素C17H34N4O10·nH2SO4(n<2)新霉素硫酸新霉素庆大霉素硫酸庆大霉素磺苄西林C16H16N2Na2O7S2 904.0四环素C22H24N2O8·HCl 1000土霉素C22H24N2O9·2H2O 927西索米星（C19H37N5O7）2 *5H2SO4 646.3磷霉素C3H5CaO4P*H2O 711.5乙酰螺旋霉素乙酰螺旋霉素克拉霉素C38H69N03 1000大观霉素C14H24N2O7*2HCL*5H2O 670.9小诺霉素0H41N507*5/2H2SO4 654.3多黏菌素B 多黏菌素B金霉素C22H23ClN2O8·HCl 1000红霉素C37H67NO13 1000氯霉素C11H12Cl2N2O5 1000杆菌肽杆肽菌黏菌素硫酸黏菌素去甲万古霉素C65H73Cl2N9O24·HCl 975.23卷曲霉素硫酸卷曲霉素两性霉素B C47H73NO17 1000奈替米星（C21H41N5O7）2*5H2SO4 660.1阿奇霉素C38H72N2012 1000妥布霉素C18H37N509 1000罗红霉素C41H76N2015 1000吉他霉素吉他霉素麦白霉素麦白霉素龙霉素C23H45014*nH2SO4────────────────────────────────────────────────────────表3 抗生素微生物检定浊度法试验设计表标准曲线法除另有规定外，取适宜的大小厚度均匀的已灭菌试管，在各品种项下规定的剂量反应线性范围内，以线性浓度范围的中间值作为中间浓度，标准品溶液选择5个剂量，剂量间的比例应适宜（通常为1：1.25或更小），供试品根据估计效价或标示量溶液选择中间剂量，每一剂量不少于3个试管。
在各试验管内精密加入各浓度的标准品或供试品溶液各1.0 ml，立即混匀，按随机区组分配将各管在规定条件下培养至适宜测量的浊度值（通常为4小时），在线测定或取出立即加入甲醛溶液（1→3）0.5ml 以终止微生物生长，在530nm或580nm波长处测定各管的吸光度。
同时另取2支试管各加入药品稀释剂1.0ml ，再分别加入含试验菌的液体培养基9.0ml ，其中一支试管与上述各管同法操作作为细菌生长情况的阳性对照，另一支试管立即加入甲醛溶液0.5ml，混匀，作为吸光度测定的空白液。
照标准曲线法进行可靠性测验和效价计算。
抗生素微生物检定法标准曲线法的计算及统计学检验1.标准曲线的计算标准品的各浓度1g值及相对应的吸光度列成表4。
表4 抗生素标准品浓度1g值与吸光度表──────────────────────────────────────────组数抗生素浓度1g值吸光度──────────────────────────────────────────y1 1 x1y2 2 x 2y3 3 x3y4 4 x4┄┄·┄n Xn Yn ────────────────────────────────────────平均值xˉyˉ─────────────────────────────────────────按公式（1）和（2）分别计算标准曲线的直线回归系数（即斜率）b和截距a，从而得到相应标准曲线的直线回归方程（3）。
回归系数：∑(Xi-Xˉ）（Yi-Yˉ）∑XiYi-Xˉ∑Yib= ─────────────= ─────────（1）∑(Xi-Xˉ）(Xi-Xˉ）∑XiXi -Xˉ∑Xi(2) 截距：a=Yˉ- bXˉ(3) 直线回归方程：Y=bX+a2.回归系数的显著性测验判断回归得到的方程是否成立，即X、Y是否存在着回归关系，可采用t检验。