酚氯仿法提取DNA主要步骤和原理

提取dna的方法及原理提取DNA的方法及原理DNA提取是生物学和遗传学研究中的一项基础操作，它是获取DNA样本的过程。

DNA提取的方法有很多种，下面将介绍几种常用的DNA提取方法及其原理。

1. 高盐法高盐法是一种简单且常用的DNA提取方法。

其原理是利用高盐溶液中DNA与其他细胞组分（如蛋白质）之间的亲和性差异。

在高盐环境下，DNA更容易溶解而不与蛋白质结合，从而实现DNA的提取。

具体步骤包括细胞破碎、加入高盐溶液、离心分离DNA和去除蛋白质等。

2. 酚/氯仿法酚/氯仿法是一种经典的DNA提取方法。

其原理是利用酚和氯仿两种溶剂的密度差异，将DNA从细胞中分离出来。

具体步骤包括细胞破碎、加入酚/氯仿混合液、离心分离DNA和去除蛋白质等。

3. 硅胶柱法硅胶柱法是一种高纯度DNA提取方法。

其原理是利用硅胶柱上的硅胶颗粒与DNA之间的亲和性差异。

DNA样本在经过一系列处理后，通过硅胶柱，DNA能够与硅胶颗粒结合，而杂质则被洗脱。

最后，通过洗脱DNA，即可获得高纯度的DNA。

硅胶柱法的优点是提取纯度高、操作简单，适用于分子生物学研究和临床诊断。

4. 磁珠法磁珠法是一种高效、快速的DNA提取方法。

其原理是利用带有亲和基团的磁珠与DNA之间的亲和性，实现DNA的选择性吸附和洗脱。

具体步骤包括磁珠悬浮液制备、样本加入、磁珠与DNA结合、磁珠分离、洗脱DNA等。

除了上述常用的DNA提取方法外，还有其他一些特殊的DNA提取方法，如酶解法、离心法、凝胶切割法等。

这些方法在不同的实验和应用中具有各自的特点和优势。

总结起来，DNA提取的方法多种多样，选择适合的方法取决于实验目的、样本类型和实验条件等。

无论采用哪种方法，都需要严格控制实验操作，以确保提取到高质量的DNA样本。

DNA提取的成功与否直接影响到后续的实验结果，因此在进行DNA提取时，需要注意样本的保存、细胞破碎的方式、溶解液的选择等因素，以获得可靠且高纯度的DNA。

DNA提取和纯化技术标准操作规程组织样品先保存在1.5ml或者2ml的离心管中，用酒精固定低温保存。

DNA提取方法：1、酚-氯仿法：1.1适用范围酚-氯仿法提取DNA原理为在有EDTA及SDS等去污剂存在下用蛋白酶K消化细胞，通过酚－氯仿混合物萃取DNA溶液中的蛋白质类有机物质，而保留DNA于水相溶液中的提取方法。

缓冲液及试剂1) 蛋白酶K2) 细胞裂解液：母液：10%SDS（m/v），0.1M Tris·HCl(PH8.0),0.5M EDTA(PH8.0)；裂解液终浓度：200ml裂解液：10%SDS 10ml0.1M Tris·HC 2ml0.5M EDTA 40mlddH2O 149ml3) 饱和酚；4) 100%氯仿；5) 100%异戊醇；6) 100%乙醇、70%乙醇；7) TE（PH8.0）：10mmol·ml-1 Tris·HCl(PH8.0)，0.1 mol·ml-1 EDTA(PH8.0)1.2组织样品DNA提取步骤：1.2.1取绿豆体积一半大小的组织，在1.5ml离心管中加300µl的双蒸灭菌水，待取下的组织乙醇挥发完之后，用剪刀剪碎组织，使组织细胞悬浮于双蒸水中1.2.2加7000µl的双蒸水冲洗剪碎的组织1.2.312000rpm离心5min，使组织与水分离，弃上清，再13000rpm离心2min，可用移液枪吸出残余的双蒸水。

1.2.4加DNA提取液，即裂解液，加600µl 55℃预热的裂解液，使细胞破碎，再加入5µl的蛋白酶K，结合组蛋白。

1.2.5混匀后，在55℃水浴2h30min，水浴前半小时，每隔5min轻轻摇匀一次。

1.2.6从水浴中取出离心管，冷却至室温，加入600µl酚氯仿（苯酚∶氯仿∶异戊醇=25∶24∶1），轻轻混匀，静置10min，12000rpm离心10min。

酚氯仿法提取DNA原理及方法酚氯仿法是一种常用的DNA提取方法，其原理是利用酚氯仿溶液对细胞和细胞碎片进行破碎，然后通过离心分离DNA。

以下是详细的步骤：1.细胞裂解：将待提取DNA的样本（细胞、组织等）加入含有酚氯仿的裂解缓冲液中，将溶液均匀混合。

酚氯仿是一种有机溶剂，能够破坏细胞膜和核膜，使细胞释放出DNA。

2.蛋白质沉淀：加入混合溶液中的蛋白质会和酚氯仿相互分离，形成一个物理屏障。

离心沉淀后，由于DNA密度比蛋白质低，DNA会上浮到上层，而蛋白质则沉淀在下层。

3.DNA沉淀：将上层液体转移到新的离心管中，加入同等体积的冷乙醇或异丙醇，然后轻轻振荡以促使DNA沉淀。

酒精能够与DNA相互作用，使DNA分子变得更加疏水，从而沉淀下来。

4.清洗：离心沉淀后，将上清液倒掉，加入70%乙醇洗涤沉淀。

乙醇通过去除残留的酚氯仿和其他杂质，使沉淀的DNA纯化。

5. 溶解：将洗涤后的DNA沉淀干燥或用适量的缓冲液溶解，最常用的是TE缓冲液（含有10 mM Tris-HCl和1 mM EDTA），以便后续的DNA浓度测定和实验操作。

总结来说，酚氯仿法利用酚氯仿溶液破坏细胞膜和核膜，将DNA从细胞中释放出来。

离心分离蛋白质和DNA，然后通过酒精沉淀和乙醇洗涤纯化提取的DNA。

这种方法简单快速，并且能够获得较纯的DNA样品。

不过，酚氯仿法在提取DNA时会同时提取到RNA和蛋白质，因此在一些需要高纯度DNA的实验中可能不适用。

在使用酚氯仿法提取DNA时，还需要注意避免DNA的降解，避免污染和交叉污染，以及正确保存提取的DNA样品。

酚氯仿抽提dna原理
酚氯仿（Phenol-Chloroform）抽提DNA是一种常用的DNA 提取方法。

其原理是基于酚在酸性条件下具有与DNA高度亲和性的特点，可以将DNA从细胞溶液中抽提出来。

具体的步骤如下：
1. 细胞溶解：首先将待提取DNA的细胞样品加入适量的细胞裂解缓冲液中，通过机械或化学方法使细胞壁破裂，释放出细胞内的DNA。

2. 酚抽提：加入相同体积的酚溶液，并进行充分混合。

酚能与DNA形成复合物，并与其他细胞组分（如蛋白质和脂质）发生分层，形成一个DNA上层和一个下层。

3. 脱水：将抽提产物转移至新管中，加入酒精或异丙醇，通过离心将DNA沉淀下来。

脱水过程可以去除溶液中的多余酚，提高DNA沉淀的纯度。

4. 酯化：将DNA沉淀物溶解在适量的TE缓冲液（含有EDTA和Tris）中，经过一定的时间酯化，使DNA变得更为稳定。

5. 沉淀：通过低温离心将DNA沉淀下来，去除上清液。

6. 洗涤：用70%的乙醇洗涤并去除残余的盐、酚和脏物质。

洗涤过程中，可以多次进行离心和上清液倒掉操作。

7. 干燥：最后，将DNA输送液置于干燥器中或者自然风干，以去除溶剂中的残留物质，得到纯度较高的DNA。

通过酚氯仿抽提DNA的方法，可以从复杂的细胞中提取出高质量、高纯度的DNA，以供后续分子生物学研究使用。

基因组DNA的提取方法—酚-氯仿抽提法1. 将95% 酒精浸泡过的标本取出，用吸水纸吸去标本表面的乙醇，用1×TE Buffer浸泡两次，每次20min。

2. 解剖取个体胸部肌肉组织约0.02g，将组织转入1.5mL离心管加入1mL液氮使其迅速冻结, 用玻璃棒迅速有力地将团状组织研磨成细粉末。

3. 加入500uL消化液（消化液成分为NaCl 0.1mol/L, Tris-HCl 0.3mol/L, EDTA 0.01mol/L, SDS 1%, Proteimase K 200ug/mL），于56℃恒稳水浴中消化8-10小时, 每隔两小时摇晃一次。

4. 消化结束后，加入等体积的饱和酚（pH7.6），用封口胶封好，置于混匀器上约12小时，离心10分钟（10000r/m）。

5. 取上清液于另一新的EP管中，加入等体积的酚：氯仿：异戊醇（25：24：1），缓慢抽提20分钟，离心10分钟（10000r/m）。

6. 取上清液于另一新的EP管中，加入等体积的氯仿：异戊醇（24：1），缓慢抽提20分钟，离心10分钟（10000r/m）。

7. 取上清液于另一新的EP管中，加入2倍体积的预冷的无水乙醇，-20℃放置2小时。

8. 离心后，DNA沉积于管底，用70%的预冷的乙醇洗涤2次，37℃烘干。

烘干的DNA溶于TE中，4℃保存。

9. 于基因组DNA中加入终浓度为50ug/mL的RNase（每次使用前90℃灭活10min），于37℃消化1.0-1.5hr。

10. 用0.8%的琼脂糖凝胶检测，取3μL DNA样品及2μL Load-buffer (含溴酚蓝和缓冲液)，加入点样孔。

实验所用Marker是 DNA（EcoR/HindIII），100V电压电泳90分钟。

凝胶成象分析仪进行检测。

11. 用紫外可见分光光度计测定DNA的OD值，判定DNA纯度和浓度。

酚氯仿法提‎取DNA主‎要步骤：1.将动物组织‎放在1.5ml的离‎心管中，分别用75‎%、50%酒精和纯水‎梯度脱酒精‎。

每个梯度脱‎水时间为5‎-10min‎2.将组织放入‎研钵中，加入适量D‎N A裂解液‎（300μl‎），研磨后再加‎入300μ‎l DNA裂‎解液冲洗研‎磨棒。

3.将研磨好的‎组织液用移‎液枪加到1‎.5ml离心‎管，在管中加1‎0μl蛋白‎酶K，用封口带将‎离心管封口‎，放入摇床（56℃,5h）。

4.加入等体积‎的Tris‎饱和酚（500μl‎），摇匀（10min‎）。

5.离心：12000‎R，7min，4℃。

离心后分成‎上中下三层‎，上层为DN‎A，中层为蛋白‎质，下层为有机‎质。

6.吸取上层液‎体加入新的‎离心管。

7.配制Tri‎s饱和酚：氯仿：异戊醇=25:24:1。

8.在含有上清‎液的离心管‎中加入Tr‎i s饱和酚‎、氯仿和异戊‎醇混合液4‎50μl，摇匀10m‎i n。

9.离心：12000‎R，7min，4℃。

10.吸取上清液‎加到新的离‎心管，加入等体积‎的氯仿和异‎戊醇混合液‎400μl‎（氯仿：异戊醇=24:1）。

11.离心：12000‎R，7min，4℃。

12.吸取上清液‎加入新的离‎心管，加入2.5倍经过-20℃冷冻的10‎0%的酒精。

-20℃过夜。

13.将样品取出‎，12000‎R，7min，4℃离心。

14.弃上清，留白色沉淀‎（DNA），加400μ‎l的75%的经过-20℃冷冻的酒精‎，反复吹打溶‎解。

15.重复第14‎步骤2次（用75%酒精洗三次‎）。

16.提取DNA‎完成。

溴氯仿法提‎取DNA的‎原理：用酚抽提细‎胞DNA时‎，有什么作用‎？使蛋白质变‎性，同时抑制了‎D Nase‎的降解作用‎。

用苯酚处理‎匀浆液时，由于蛋白与‎D NA联结键已断‎，蛋白分子表‎面又含有很‎多极性基团‎与苯酚相似‎相溶。

蛋白分子溶‎于酚相，而DNA 溶‎于水相。

dna纯化方法
DNA纯化方法
DNA纯化是分子生物学中的一个重要步骤，它是从混合物中分离出DNA分子的过程。

DNA纯化方法有很多种，其中常用的方法包括酚/氯仿法、离心柱法、磁珠法等。

酚/氯仿法是最常用的DNA纯化方法之一。

它的原理是利用酚和氯仿的密度差异，将DNA分子从其他杂质中分离出来。

具体操作步骤如下：首先将细胞裂解，使DNA分子释放到溶液中；然后加入等体积的酚/氯仿混合液，混合均匀后离心分层；最后将上层的DNA溶液取出，加入等体积的异丙醇，沉淀DNA分子。

离心柱法是一种快速、简便的DNA纯化方法。

它利用离心柱的特殊结构，将DNA分子从其他杂质中分离出来。

具体操作步骤如下：首先将细胞裂解，使DNA分子释放到溶液中；然后将DNA溶液加入离心柱中，离心分离DNA分子和其他杂质；最后将离心柱中的DNA分子洗涤、洗脱，得到纯净的DNA分子。

磁珠法是一种高效、自动化的DNA纯化方法。

它利用磁珠表面的亲和分子与DNA分子的特异性结合，将DNA分子从其他杂质中分离出来。

具体操作步骤如下：首先将细胞裂解，使DNA分子释放到溶液中；然后加入磁珠，使其与DNA分子结合；最后利用磁力将磁珠与DNA分子分离，得到纯净的DNA分子。

DNA纯化方法有很多种，每种方法都有其优缺点。

在选择纯化方法时，需要根据实验的具体要求和样品的特点进行选择。

DNA和RNA提取方法及原理DNA提取方法：1.酚/氯仿方法：这是最早应用的DNA提取方法之一，适用于绝大多数生物样本。

原理是利用酚酸抽提DNA，酚酸能溶解细胞膜和蛋白质，而DNA在酚相沉淀。

然后用氯仿提取，分离DNA与酚相中的蛋白质和RNA。

最后通过乙醇沉淀纯化DNA。

这种方法可以得到高质量的DNA，但操作过程相对繁琐。

2.硅胶基质法：硅胶基质可吸附DNA，该方法使用硅胶膜或硅胶粉末来固定DNA，通过洗涤去除杂质，最后用洗脱液从硅胶上洗脱DNA。

这种方法具有简便和高纯度的优点，适用于大规模提取DNA。

3.盐酸法：盐酸法以酸性条件下使DNA变为不溶性沉淀物的原理，通过加入盐酸将DNA沉淀下来，然后经过洗涤和乙醇沉淀纯化。

这种方法适用于提取纯度要求不高的DNA。

RNA提取方法：1.酚酸提取法：这是最常用的RNA提取方法之一、原理类似于DNA的酚/氯仿法，通过酚酸将核酸与蛋白质和其他杂质分离。

然后通过氯仿脱脂，去除酚相中的蛋白质，并且获得RNA水相。

最后通过乙醇沉淀纯化RNA。

这种方法适用于大多数样品，得到的RNA纯度较高。

2.硅胶基质法：与DNA提取类似，它也适用于RNA的提取。

通过硅胶膜或硅胶粉末结合RNA并洗脱，用洗脱液分离RNA与杂质。

这种方法适用于大规模提取RNA。

3.氯仿法：这是一种较为简便的RNA提取方法，它通过氯仿脱脂去除脂质和其他杂质，并且能够同时去除DNA。

最后用乙醇沉淀纯化RNA。

这种方法适用于需要较快速提取RNA的情况。

DNA和RNA提取的基本原理都是通过分离和纯化DNA或RNA与其他杂质的物质。

酚酸提取法和硅胶基质法同属于酚酸法，都是通过酚酸和氯仿来分离DNA或RNA与蛋白质和其他杂质。

其中酚酸能溶解细胞膜和蛋白质，并且DNA或RNA在酚相中沉淀，而蛋白质和RNA在氯仿相中溶解。

然后通过洗脱和纯化步骤，从酚酸相中提取DNA或RNA。

盐酸法与酚酸法不同，它是通过酸性条件下使DNA变为不溶性沉淀物来分离DNA与其他杂质。

dna提取方法DNA提取方法。

DNA提取是分子生物学实验中的一项重要步骤，它是从生物样本中分离出DNA分子的过程。

DNA提取的目的是为了获得足够纯度和浓度的DNA样本，以便进行后续的实验操作，比如PCR扩增、测序等。

在实际操作中，DNA提取的方法有很多种，下面将介绍几种常用的DNA提取方法。

1. 酚/氯仿提取法。

酚/氯仿提取法是最早的DNA提取方法之一，它利用酚和氯仿两种有机溶剂的密度差异来分离DNA。

首先，将生物样本经过细胞裂解，然后加入酚/氯仿混合溶液，混合均匀后离心，DNA会在上清液中，而蛋白质和其他杂质则会沉淀在底部。

接着将上清液转移到新的离心管中，加入等体积的异丙醇，再次离心，DNA会沉淀在离心管底部。

最后将上清液倒掉，用70%乙醇洗涤DNA沉淀，最后溶解于适量的缓冲液中。

酚/氯仿提取法简单易行，适用于各种类型的生物样本。

2. 离心柱法。

离心柱法是一种基于硅胶膜或硅胶颗粒的DNA提取方法，它利用DNA与硅胶的亲和性来实现DNA的分离纯化。

首先，将样本加入裂解缓冲液，然后加入蛋白酶和蛋白酶K进行细胞裂解。

接着将裂解液加入离心柱中，经过离心后，DNA会在离心柱上残留，而其他杂质则会通过离心柱底部的滤膜排除。

然后用洗涤缓冲液洗涤离心柱，最后用去离子水或低盐缓冲液洗脱DNA。

离心柱法操作简便，能够快速、高效地获得纯度较高的DNA样本。

3. 硝酸盐法。

硝酸盐法是一种利用硝酸盐沉淀DNA的提取方法。

首先，将生物样本进行细胞裂解，然后加入等体积的乙醇和适量的硝酸盐溶液，混合后DNA会沉淀出来。

接着用乙醇洗涤DNA沉淀，最后溶解于适量的缓冲液中。

硝酸盐法操作简单，适用于大规模DNA提取。

4. 磁珠法。

磁珠法是一种利用磁珠颗粒与DNA的亲和性来实现DNA的分离纯化的方法。

首先，将生物样本进行细胞裂解，然后加入磁珠颗粒，DNA会在磁场的作用下与磁珠结合，然后用磁场将DNA与磁珠分离出来。

接着用洗涤缓冲液洗涤磁珠，最后用去离子水或低盐缓冲液洗脱DNA。

苯酚-氯仿法小提DNA试剂配制：1：细胞裂解液：0.32 M 的蔗糖；5 mM 的MgCl22：DNA稀释缓冲液：0.375 M的NaCl；12 mM的Tris-HCl [PH 7.5]3：10%的SDS [PH 7.2]4：5 M的NaCl5：苯酚-氯仿混合液V/V = 1:16：无水乙醇和70%的乙醇DNA 抽提：1、收集白细胞:500 μl新鲜/冻存全血(EDTA-2Na抗凝),加入1 ml的细胞裂解液充分混匀后孵育10分钟，,13000 rpm离心15 sec/3min；2、洗涤白细胞:离心后弃去上清液,加入1ml双蒸水重悬沉淀,将沉淀充分吹打使起完全溶解后, 13000 rpm离心1 /5min；3、稀释DNA，去除蛋白:弃离心后上清液，加入80 μl DNA 稀释缓冲液,重悬沉淀，完全溶解后，加入10 μl 10% SDS 和5 M NaCl 100μl，用手摇匀,再加双蒸水240 μl稀释DNA；4、加入300 μl苯酚-氯仿-异戊醇溶液(V/V=25:24:1,PH=7.5).盖紧试管,彻底混合均匀后, 13000 rpm离心12 min;5、取上清相转至另一1.5 ml EP管中，加入上清液体积比的1.5-2倍体积的预冷无水乙醇。

反复颠倒数次后,可见有絮状DNA沉淀析出；6、13000 rpm离心5 min,去上清水相。

加入和无水乙醇等量的70%预冷乙醇洗去DNA中的盐后,离心5 min。

用100 μl ddH2O或50 μl TE保存DNA备用。

为什么用酚与氯仿抽提DNA时，还要加少量的异戊酵？在抽提DNA时，为了混合均匀，必须剧烈振荡容器数次，这时在混合液内易产生气泡，气泡会阻止相互间的充分作用。

加入异戊醇能降低分子表面张力，所以能减少抽提过程中的泡沫产生。

一般采用氯仿与异戊酵为24：1之比。

也可采用酚、氯仿与异戊醇之比为25：24:1（不必先配制，可在临用前把一份酚加一份24：1的氯仿与异戊醇即成），同时异戊醇有助于分相，使离心后的上层水相，中层变性蛋白相以及下层有机溶剂相维持稳定。

SDS-酚氯仿法1.实验方法步骤：1）试剂的配制（1）SDS提取液的配置，PH=8.0 (常温保存)：（Tris-Hcl 100ml；Nacl 100ml；EDTA100ml；SDS 1g）（2）氯代异戊醇（氯仿：异戊醇=24：1）（3）蛋白酶K（-20℃冰箱保存）（4）Tris-平衡酚（-20℃冰箱保存）2）DNA的提取：（1）先将标本的足取下，放在1.5ml的离心管中，放在-80℃的冰箱中冷冻3-5分钟，以便使标本更易研磨；（2）用研磨棒将足在离心管中充分研磨，加入SDS提取液400µl，再用研磨棒充分研磨；（3）加入蛋白酶K 5µl，56℃水浴加热3-3.5个小时，再加入等体积的酚（即是400µl）；（4）放入12000转/分离心机离心10分钟，取上清液，加入与上清液等体积的氯代异戊醇（氯仿：异戊醇=24：1）；（5）再取上清液（如果上清液较浑浊，可以再放入12000转/分离心机，离心10分钟）；（6）加入上清液2倍体积的100%的乙醇，放入-20℃的冰箱中1小时以上，使DNA充分沉淀；（7）放入12000转/分离心机离心10分钟，去除液体后加入300µl 70%的酒精，再放入12000转/分离心机离心10分钟（8）去除酒精，使其自然风干，加入40µl的灭菌蒸馏水，放在-20℃的冰箱中保存备用。

3）PCR扩增（1）PCR反映液的试剂成分和比例：（2）以上试剂的加样顺序是：灭菌蒸馏水--10×PCR Buffer---- Mgcl2— DNTP Mixture (各2.5mM)—模板DNA---引物1---引物2---- Takapa酶。

加好样以后先用震动棒震动，使其均匀混合，然后放在4000转/分的离心机中离心1分钟，放入PCR仪中扩增（大约2-2.5个小时）。

4）凝胶电泳检测DNA（1）配胶称取0.25g的琼脂糖和量取25ml的TE，将两者放入三角瓶中充分摇匀，放在微波炉中加热30秒，取出震荡后再次放入微波炉中加热15秒后，取出使其温度降到60℃左右，加入EB少量摇匀后倒入胶槽中，插上梳子使其凝固备用。

试验原理：苯酚/氯仿提取DNA是利用酚是蛋白质的变性剂，反复抽提，使蛋白质变性，SDS(十二烷基磺酸钠)将细胞膜裂解，在蛋白酶K、EDTA的存在下消化蛋白质或多肽或小肽分子，核蛋白变性降解，使DNA从核蛋白中游离出来。

DNA易溶于水，不溶于有机溶剂。

蛋白质分子表面带有亲水基团，也容易进行水合作用，并在表面形成一层水化层，使蛋白质分子能顺利地进入到水溶液中形成稳定的胶体溶液。

当有机溶液存在时，蛋白质的这种胶体稳定性遭到破坏，变性沉淀。

离心后有机溶剂在试管底层(有机相)，DNA存在于上层水相中，蛋白质则沉淀于两相之间。

酚-氯仿抽提的作用是除去未消化的蛋白质。

氯仿的作用是有助于水相与有机相分离和除去DNA溶液中的酚。

抽提后的DNA溶液用2倍体积的无水乙醇在1/103mol/LNaCl存在下沉淀DNA，回收DNA用70%乙醇洗去DNA沉淀中的盐，真空干燥，用TE缓冲液溶解DNA备用。

试验步骤：1、将1mlEDTA抗凝贮冻血液于室温解冻后移入5ml离心管中，加入1ml磷酸缓冲盐溶液（PBS），混匀，3500rpm离心15min,倾去含裂解红细胞的上清。

重复一次。

用0.7mlDNA 提取液混悬白细胞沉淀，37℃水浴温育1h。

2、将上述DNA提取液混悬白细胞，37℃水浴温育1h后，加入1mg/ml蛋白酶K0.2ml,至终浓度为100-200ug/ml,上下转动混匀，液体变粘稠。

50℃水浴保温3h，裂解细胞，消化蛋白。

保温过程中，应不时上下转动几次，混匀反应液。

3、反应液冷却至室温后，加入等体积的饱和酚溶液，温和地上下转动离心管5-10min，直至水相与酚相混匀成乳状液。

5000rpm离心15min，用大口吸管小心吸取上层粘稠水相，移至另一离心管中。

重复酚抽提一次。

加等体积的氯仿﹕异戊醇（24﹕1），上下转动混匀，5000rpm离心15min，用大口吸管小心吸取上层粘稠水相，移至另一离心管中。

重复一次。

4、加入1/5体积的3mol/LNaAc及2倍体积的预冷的无水乙醇，室温下慢慢摇动离心管，即有乳白色云絮状DNA出现。

提取dna的方法及步骤提取DNA的方法及步骤DNA（脱氧核糖核酸）是构成生物遗传信息的基本单位，因此，准确提取DNA样本是进行遗传研究、基因工程和犯罪侦查等领域的重要步骤。

以下将介绍几种常见的DNA提取方法及其步骤。

方法一：酚氯仿法酚氯仿法是一种常用的DNA提取方法，其步骤如下：1. 收集样本：可以是人体组织、血液、细胞培养物等。

确保样本新鲜，并避免受到污染。

2. 细胞破碎：将样本加入含有细胞破碎缓冲液的离心管中，通过离心将细胞沉淀。

3. 酚氯仿提取：将沉淀加入酚氯仿混合液中，轻轻混匀，并离心以分离DNA。

4. 沉淀DNA：将上清液转移到新的离心管中，加入冷乙醇沉淀DNA。

5. 洗涤：用70%乙醇洗涤沉淀的DNA，以去除杂质。

6. 干燥：将洗涤后的DNA在室温下晾干或用低温真空干燥器加速干燥。

方法二：盐析法盐析法是一种简单易行的DNA提取方法，其步骤如下：1. 细胞破碎：将样本加入含有细胞破碎缓冲液的离心管中，通过离心将细胞沉淀。

2. 盐析提取：加入高盐缓冲液使DNA与其他核酸和蛋白质分离。

3. 沉淀DNA：将上清液转移到新的离心管中，加入冷乙醇沉淀DNA。

4. 洗涤：用70%乙醇洗涤沉淀的DNA，以去除杂质。

5. 干燥：将洗涤后的DNA在室温下晾干或用低温真空干燥器加速干燥。

方法三：硅胶柱法硅胶柱法是一种高纯度DNA提取方法，其步骤如下：1. 细胞破碎：将样本加入含有细胞破碎缓冲液的离心管中，通过离心将细胞沉淀。

2. 硅胶柱处理：将细胞沉淀加入硅胶柱中，经过洗涤和离心，将DNA吸附在硅胶柱上。

3. 洗涤：用洗涤缓冲液洗涤硅胶柱，以去除杂质。

4. DNA洗脱：加入低盐缓冲液，使DNA从硅胶柱上洗脱出来。

5. 洗涤：用70%乙醇洗涤洗脱后的DNA，以去除杂质。

6. 干燥：将洗涤后的DNA在室温下晾干或用低温真空干燥器加速干燥。

方法四：酶解法酶解法是一种特异性较高的DNA提取方法，其步骤如下：1. 细胞破碎：将样本加入含有细胞破碎缓冲液的离心管中，通过离心将细胞沉淀。

酚氯仿抽提dna原理
酚氯仿抽提DNA原理是一种常用的DNA提取方法，通过该
方法可以从复杂的生物样品中高效地提取纯度较高的DNA样本。

其原理主要包括以下几个步骤：
1. 细胞破碎：首先将待提取的生物样品经过离心等操作，去除无关细胞和组织，然后使用细胞裂解缓冲液将目标细胞破碎，使细胞内部的DNA释放出来。

2. 蛋白酶处理：在细胞裂解的过程中，蛋白酶会释放出来，为了去除其对DNA的影响，可以加入蛋白酶抑制剂来保护DNA。

此步骤的目的是降解蛋白质，同时保持DNA的完整性。

3. 混合酚氯仿：将细胞裂解液与等体积的氯仿混合，产生两相体系。

氯仿主要用来分离DNA和其他细胞成分，如脂质、蛋
白质等。

在混合过程中，DNA溶于水相，而其他成分溶于有
机相。

这样，通过离心使两相分离。

DNA会聚集在水相中。

4. DNA沉淀：将水相转移到新的离心管中，加入冷酒精或异
丙醇，使DNA沉淀出来。

酒精或异丙醇中的离子会中和
DNA上的电荷，从而使DNA不溶于水，形成可见的白色沉淀。

5. 洗涤与溶解：将DNA沉淀用无菌蒸馏水洗涤去除酒精或异
丙醇的残余，并用TE缓冲液溶解DNA，使其得以储存和进
一步应用。

通过酚氯仿抽提DNA，可以将DNA从细胞中高效地提取出
来，纯度较高，适用于许多分子生物学实验和技术的应用，如PCR、酶切、测序等。

定位克隆实验室2010-12-27 胡文波修订酚氯仿提基因组-大量高纯度DNA的制备原理：酚、氯仿是蛋白质变性剂，能有效去除核蛋白，使核酸从核蛋白中分离出来。

氯仿还能加速有机相与液相的分层，少许异戊醇能稳定界面，减少蛋白质变性过程中产生气泡。

操作步骤：1.将材料放入预冷的研钵中，加入液氮后迅速研磨成粉末状（刚加入液氮时不停上下锤击材料，液氮快挥发完时用研棒旋转搅拌挤压材料使之破碎）。

2.研磨完毕后，加入800ul抽提缓冲液，轻轻摇匀，形成匀浆状。

3.将匀浆液转移至1个2ml离心管中，加入Proteinase K至终浓度为100ug/ml（800ul加4ul蛋白酶K（20ug/ul））,55℃水浴保温过夜。

4.加入等体积平衡酚，室温温和振荡，摇匀，10-15min。

5.离心：12000rpm 4℃ 10min，将粘稠的水相移至洁净的离心管中。

6.再用酚:氯仿（v:v =1:1），氯仿各抽提1次（离心：12000rpm 4℃ 10min）。

7.将上层水相移至洁净的离心管中，加入2倍体积无水乙醇，转动离心管使溶液充分混合，DNA立即形成沉淀。

8.离心：7500g 4℃ 10min，使DNA沉于管底，将离心管倒置于滤纸上，晾干（或用玻璃棒/消毒牙签将DNA沉淀从乙醇沉淀中移出）。

9.用70%乙醇洗涤DNA沉淀2次（离心：7500g 4℃ 10min）。

10.加入200ul TE(pH8.0)使DNA完全溶解。

11.加入RNase至终浓度为50ug/ml，37℃保温1h。

12.紫外分光光度计检测DNA的浓度和纯度。

13.调节DNA终浓度为1000ng/ul。

14.将DNA做梯度稀释：1×102 ，1×101 ，1×100 ，1×10-1 ，1×10-2ng/ul，稀释体积为100ul。

15.取2ul DNA与2ul 2×上样缓冲液混匀，点样到琼脂糖凝胶（w/v = 2%）中，以2.5-5v/cm电泳。

DNA的提取是分子生物学实验技术中的最重要、最基本的操作。

本实验通过植物样品在液氮下研磨以粉碎组织，通过裂解液裂解细胞，有机溶剂反复抽提，使DNA进入水相与蛋白质成分分开，在RNase作用下，降解RNA以纯化DNA。

二、材料以方法1、材料：培养菌体2、仪器设备：超净工作台，培养箱，摇床，恒温水浴锅，高速冷冻离心机，台式离心机，移液枪一套，低温冰箱，冷冻真空干燥机，电泳仪，水平电泳槽，紫外观测仪3、试剂：细胞裂解液100 mM Tris-HCl 5 mM EDTA 500 mM NaCl 1.25% SDS(PH 7.5) 饱和酚氯仿/异戊醇酚/氯仿/异戊醇无水乙醇70％乙醇异丙醇 3 M NaAc(pH5.2) RNase 50×TE缓冲液电泳载样缓冲液三、操作步骤（1）培养菌体（2）加入10 ml裂解液，1/10体积酚，于65℃下20－30 min，然后加入等体积的氯仿，轻摇（3）12000－15000rpm离心15 min（4）取上淸液，加入等体积氯仿，轻摇，12000－15000rpm离心15 min（5）取上淸液，加入0.6倍体积冷异丙醇（-20℃）或2倍体积冷无水乙醇（-20℃）（6）加入1/10体积的3 M NaAc(pH5.2)，置于室温下10 min（7）12000－15000rpm离心10 min（8）倒弃液体留下沉淀，用70％乙醇洗涤沉淀（9）加入2倍体积无水乙醇（10）12000－15000rpm离心10 min（11）倒弃液体留下沉淀，真空干燥（12）复溶于2 ml TE（13）加入RNase，65℃或37℃处理10－30 min（14）加等体积酚，酚/氯仿，氯仿各一次，12000－15000rpm离心10 min（15）取上淸液，加入0.6倍体积冷异丙醇（-20℃）或2倍体积冷无水乙醇（-20℃）（16）加入1/10体积的3 M NaAc(PH5.2)，置于室温下10 min（17）12000－15000rpm离心10 min（18）倒弃液体留下沉淀，用70％乙醇洗涤沉淀（19）真空干燥沉淀（20）复溶于0.5－1.0 ml的TE或水中，分装成小体积，4℃或-20℃保存。

酚氯仿法提取DNA的原理酚氯仿法是一种用于提取DNA的常见方法，它基于DNA与酚氯仿在两相溶液中由于密度差异而发生分离的原理。

下面将详细介绍酚氯仿法提取DNA的原理及步骤。

DNA是一个带有负电荷的双链分子，其溶解度与其环境的离子力有关。

酚氯仿可以形成无水酚、蛋白质和DNA、RNA在其中既不溶于水又不溶于酚氯仿的界面。

当DNA溶液与酚氯仿混合时，DNA会从水相转移到有机相（酚氯仿相）中，实现分离。

1.细胞裂解：将待提取DNA的细胞加入缓冲液中，并通过机械、热力或化学方法使细胞裂解，释放DNA。

2.去除蛋白质：加入蛋白酶K等蛋白酶使蛋白质降解，形成胶冻样物质。

3.DNA溶解：加入盐酸溶解胶冻样物质，使DNA溶于溶液中。

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5.沉淀DNA：加入冰冷的异丙醇或乙醇，在DNA溶液中形成DNA沉淀。

6.制备DNA：将DNA沉淀转移到新的管中，并用乙醇洗涤去除杂质。

7.定量和存储：使用分光光度计测量DNA的浓度，然后将其保存在适当的条件下，以便后续实验中使用。

1.方法成本较低，步骤简单易行。

2.可以提取高纯度的DNA。

3.可以在较短时间内提取大量DNA。

1.操作要注意安全，避免酚氯仿的接触和吸入。

2.使用无菌技术和无菌材料，以避免外源性DNA的污染。

3.避免DNA溶液的过热和过长的暴露于空气中，以避免降解DNA。

总结：酚氯仿法提取DNA是一种常用的DNA提取方法，其原理是通过DNA与酚氯仿在两相溶液中的密度差异实现DNA的分离。

该方法简单易行，可以提取高纯度的DNA，适用于很多生物学实验和研究领域。

在进行实验时，需注意操作安全和避免DNA污染，以保证提取到高质量的DNA。