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呼吸道标本细菌学检验标准操作程序1.检验目的规范呼吸道标本细菌学检验操作规程，确保检验结果准确可靠。
2.适用范围呼吸道标本培养和涂片检查。
3.标本采集与运送3.1 采集时间以晨痰为好。
3.2 采集方法3.2.1 自然咳痰法用清水反复漱口后从气管深部咳出痰，吐入无菌容器内。
3.2.2 气管镜下采集法在病灶附近用导管吸或用支气管刷直接取得标本。
3.2.3 气管穿刺法在环甲膜下穿刺抽取痰液，收集标本，适用于厌氧菌培养。
3.2.4 呼吸机采集法使用呼吸机的病人，可利用呼吸机吸取深部痰入专用采集器内送检。
3.2.5 为了明确扁桃体炎、会厌炎、鼻咽部化脓性感染的病原体，可以采集拭子送检。
首先拭子用无菌生理盐水沾湿，然后用力在感染部位擦拭，采集标本与无菌管送检。
3.3 标本运送3.3.1 采集标本后立即送到实验室，放置时间不应超过2h。
3.3.2 延迟送检或待处理标本应置于4℃冰箱保存（疑为肺炎双球菌、流感嗜血杆菌等苛氧菌感染除外），以免杂菌生长，但必须在24h内处理。
3.3.3 对可疑烈性呼吸道传染病的患者检验标本，在采集、运送及保存过程中必须注意生物安全防护。
4.检验步骤4.1接种：用无菌拭子蘸取脓性部分，接种于血平板和巧克力平板第一区，再用一次性接种环分区划线接种。
4.2 涂片在接种的同时进行涂片。
用铅笔在磨砂部位编号，每片只涂一份标本。
4.3 培养：血平板、巧克力平板置35℃二氧化碳培养箱培养18-48h。
4.4 涂片染色镜检：涂片革兰染色，自然干燥后镜检。
先用低倍镜浏览整片，计数平均每个低倍视野WBC、上皮细胞的数量。
标本合格与否参考表1，合格标本再用油镜观察，主要观察片中主要细菌类型、WBC内吞噬什么细菌等，以作为看板时决定什么细菌要做的依据。
表1 痰液标本分级4.5 培养结果观察4.5.1 口咽部正常寄生的需氧菌主要是腐生的奈瑟菌、草绿色链球菌，4.5.2 有明确意义的病原菌： A群溶血性链球菌(咽炎)、流感嗜血杆菌（b型5y以下儿童急性会厌炎、急性支气管炎）、肺炎链球菌（急性支气管炎常继发于病毒感染、大叶性肺炎）、百日咳鲍特菌（咳嗽、支气管扩张）、金黄色葡萄球菌（肺炎）、军团菌（肺炎）、白喉棒状杆菌。
呼吸道感染实验室诊断流程下载温馨提示:该文档是我店铺精心编制而成，希望大家下载以后，能够帮助大家解决实际的问题。
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呼吸道标本的采集与送检要求1.采集标本的选择：常用的呼吸道标本有咽拭子、喉拭子、鼻拭子、支气管肺泡灌洗液、痰液等。
对于喷嚏液或唾液等非特异性标本的采集，不推荐用于病原体的检测。
2.采集时间：最佳的标本采集时间是在症状出现后24小时内采集，对于特定病原体如流感病毒等，应在症状出现48小时内采集。
3.采集方法：采用无菌的采集器具，如棉签、拭子等。
采集咽拭子时，应当将拭子的头部置于扁桃体和咽后壁的分泌物位置，不应担心引起患者咳嗽反射。
鼻拭子的采集方法是将拭子插入鼻腔内，盘旋擦拭鼻腔黏膜。
4.采集指导：采集者应经过专业培训并熟悉标本采集的技术要领。
采集过程中需要保持呼吸道的湿润，确保采集到的标本质量。
5.标本保存与运输：采集得到的标本应立即置于透明的标本袋中，封口完好。
若运输时间不长，可将标本放入4℃冰箱保存，不得冷冻。
如果运输时间较长，应采用冷冻方式运输（-20℃）。
运输过程中应尽量避免震动或损坏。
6.标本的处理：采集得到标本后，应尽快送往实验室进行处理。
痰液在送往实验室前应保持在4℃存放。
对于支气管肺泡灌洗液等标本，需要在接收实验室前制备样本。
7.实验室检测：送往实验室后，应当及时进行病原体的检测。
常用的检测方法包括细菌培养、病毒核酸检测（如PCR）、真菌培养等。
根据病情需要，还可以进行药敏试验、抗体检测等。
8.结果解读与报告：实验室所得结果需要专业人员进行解读，并及时生成报告。
报告应如实反映标本的检测结果，并提供相应的临床意义和建议。
在进行呼吸道标本的采集与送检时，需要确保采集者具备必要的知识与技能，并严格按照采集与送检要求进行操作，以保证最终的结果准确可靠，为诊治提供有力的支持。
下呼吸道感染微生物检验的标本留取和运送的要求发布时间：2021-03-22T02:36:38.082Z 来源：《健康世界》2020年16期作者：李晓英[导读] 下呼吸道感染是目前危害大众健康的严重疾病之一，据调查，该病的致死率位列全球疾病死因的第四位，全球每年因下呼吸道感染而死亡的人数占全球总死亡人数的4.83%左右，对于这种危害性极高的疾病，我们需要及时发现、及时治疗，才能够保证患者的生命安全。
李晓英成都锦江大观医院四川成都 610000下呼吸道感染是目前危害大众健康的严重疾病之一，据调查，该病的致死率位列全球疾病死因的第四位，全球每年因下呼吸道感染而死亡的人数占全球总死亡人数的4.83%左右，对于这种危害性极高的疾病，我们需要及时发现、及时治疗，才能够保证患者的生命安全。
而感染性疾病的诊断金标准为病原学诊断，只有了解药敏结果和病原学结果才能够合理选择抗菌药物，正确用药，以此来避免细菌耐药现象的发生，但是病原学诊断结果正确与否，取决于标本的管理，故临床医护人员应该知晓下呼吸道感染微生物检验标本在留取和运送方面的要求，为接下来的微生物检验和临床诊断奠定可靠的基础。
一、下呼吸道感染微生物检验标本类型下呼吸道感染微生物检验标本主要有两种，其一是纤维支气管镜采集的标本，经过纤维支气管镜获取到的支气管肺泡灌洗液和保护性毛刷更适合做细菌定量培养，当潜在的致病菌菌落数高于阈值时，诊断下呼吸道感染的特异度即可达到82%至91%。
纤维支气管镜获取到支气管灌洗液只用于诊断由严格致病菌引起的肺炎，如结核分支杆菌、军团菌，内源性真菌引起的感染，对其他病原菌的检查效果比较差。
其二就是痰标本，分自然咳痰和诱导痰，自然咳痰适合定性培养，且必须结合痰涂片判断标本的质量，提高感染病原菌诊断的特异性和敏感性。
诱导痰不能通过细菌的浓度判断是否有意义，只适用于检测结合分支杆菌以及卡式肺孢子菌，对其他病原菌的检查效果比较差。
相对来讲，纤维支气管镜的诊断价值远高于痰标本。
临床痰培养及下呼吸道标本采集指征、采集方法、注意事项和标本运送指南采集指征有下列体征采集体征：①咳嗽、咳痰，痰液可为脓性、血性、铁锈色或红棕色胶胨阳痰。
②咯血包括泡沫血痰、鲜血和痰中带血等。
③呼吸困难，呼吸急促或哮喘，常伴有胸痛。
④发热伴白细a胞增高尤其是中性粒细胞或CRP、PCT明显增高。
⑤胸部影像学检查提示有感染可能。
采集方法1、自然咳痰法。
以晨痰为佳，咳痰前先用冷开水、纯净水反复漱口三次，然后用力咳出呼吸道深部的痰，痰液直接吐入痰杯中，1h 内送检，尽可能在用抗菌药物之前采集标本。
标本量应＞1ml。
痰量少或无痰者可采用雾化吸入加温至45℃的10%Nacl水溶液，对难于自然咳痰患者可用无菌吸痰管抽取气管深部分泌物。
2、对昏迷、重症、难治或伴免疫抑制或疑是厌氧菌引起的可采用纤维支气管镜采集法、防污染毛刷采集法、支气管肺泡灌洗法、环甲膜穿刺经气管吸引法、经胸壁针穿刺吸引法采集标本，注意采集标本时尽可能避免咽喉部正常菌群污染。
3、小儿取痰法：用弯压舌板向后压舌，将棉拭子伸入咽部，小儿经压舌刺激咳嗽时，可喷出肺部或气管分泌物粘在拭子上。
幼儿还可用手指轻叩胸骨柄上方，以诱发咳痰。
注意事项痰标本不能及时送检者，可暂存4℃冰箱。
室温下延搁数小时定植于口咽部的非致病菌呈过度生长而肺炎链球菌、葡萄球菌和流感嗜血杆菌检出率则明显下降。
标本运送不能及时送检的标本，室温保持＜2h,4℃冰箱保存＜12h。
一般每天只需做一次。
痰及下呼吸道标本失效无意义：1、咽拭子、咳痰、吸出分泌物做厌氧菌培养无意义。
2、申请填写完整无误，标本标识必须唯一。
3、标本容器必须符合规定。
4、痰标本呈水样或唾液样，不能有明显食物残渣、灰尘纸屑。
呼吸道标本采集
【一】评估和观察要点
1.评估患者年龄、病情、治疗、排痰情况及配合程度。
2.评估患者口腔黏膜有无异常。
3.观察痰液的颜色、性质、量、分层、气味、黏稠度和有无肉眼可见的异常物质等。
【二】操作要点
1.自行咳痰采集法晨痰为佳，用冷开水漱口，深吸气后用力咳出呼吸道深部痰液，标本量不少于1ml，痰量少或无痰患者可采用10%盐水加至45度左右雾化吸入后，将痰液咳出。
2.难于自然咳痰、不合作或人工辅助呼吸患者的痰液采集法患者取适当卧位，先叩击患者背部，然后将集痰器与吸引器连接，抽吸痰液2~5ml于集痰器内。
3.气管镜采集法协助医生在气管镜引导下，直接采集标本。
4.咽拭子采集法患者用清水漱口，取出无菌拭子蘸取少量无菌生理盐水；用压舌板轻压舌部，迅速擦拭患者口腔两侧腭弓及咽、扁桃体的分泌物，避免咽拭子触及其他部位；迅速把咽拭子插入无菌试管内塞紧。
5.24h痰标本采集法在广口集痰瓶内加少量清水。
患者起床后进食前漱口后第一口痰开始留取，至次日晨进食前漱口后最后一口痰结束，全部痰液留入集瓶内，记录痰标本总量、外观和性状。
【三】指导要点
1.告知患者正确留取标本对检验结果的重要性
2.告知患者痰标本留取的方法及注意事项
3.告知患者避免将唾液、漱口水鼻涕等混入痰中。
【四】注意事项
1.除24h痰标本外，痰液收集时间宜选择在清晨。
2.查痰培养及肿瘤细胞的标本应立即送检。
3.避免在进食后2h内留取咽拭子标本，以防呕吐，棉签不要触及其他部位以免影响检验
结果。
市第一人民医院细菌室下呼吸道标本的细菌学检验1. 下呼吸道标本培养常见病原菌
金黄色葡萄球菌
脑膜炎奈瑟氏菌
化脓性链球菌
流感嗜血杆菌
肺炎链球菌
肠杆菌科细菌
结核分支杆菌
非发酵菌
白喉棒状杆菌
嗜肺军团菌
假丝酵母菌
2.标本收集：
2.1下呼吸道标本采集的基本要求是采集深部的痰液，具体方法有以下几种：1.自然咯痰法 2.气管镜采集法
3.小儿取痰法
4.气管穿刺法
5.胃内采痰法。
2.2标本采集的注意事项
2.2.1标本采集以晨痰为佳，咳前应充分嗽口，减少口腔正常菌群的污染。
2.2.2标本采集后应及时送检，以防某些细菌在外环境中死亡。
做结核分枝杆菌或真菌培养的痰液如不能及时送检，应放入4℃冰箱，以免杂菌生长。
3.检验步骤：
3.1一般细菌涂片检查挑取痰液的脓性或带血部分放在两张玻片中，置室温自然干燥，经火焰固定后，做革兰氏染色，另一张根据检验需要做抗酸染色或其他染色。
如标本中每个低倍视野内鳞状上皮细胞多于25
个，脓细胞又少于10个，并找不到病变部分，表示标本来自唾液，标本不合格，不必进一步检查，要求重新送检。
3.2分离培养一般细菌培养分别接种于血平板、麦康凯、巧克力平板，巧克力应置于CO2环境中35℃培养18～24小时。
4.报告结果：检出细菌，应报告菌名和药敏结果。
下呼吸道感染细菌学检验操作规范下呼吸道感染细菌学检验操作规范1. 检验前准备检验前要检查所需器材是否齐备，且有使用期限、试剂是否过期。
根据标本性质准备适当的试验室和器材，如培养基、消毒剂、培养皿、显微镜、荧光显微镜等。
2. 标本的采集下呼吸道感染标本需由医生经过特殊训练后采集。
标本采集应在患者用药前进行，避免影响细菌培养。
应采集晨起的第一口咳痰标本，或在空腹情况下采集医生所要求的标本。
标本采集应该避免因细菌其他来源被污染。
3. 标本的存储和运输标本应在采集后尽快送至检验室。
标本在送到检验室的途中应密封，并且避免被震动或过热过冷。
气管切开标本应立即进行培养，对于咳痰标本应在收到后的半小时内进行处理。
4. 标本的处理将留有量行的痰液用橡皮塞挤入干净的西门子杯内，有时也可采用锡制雾化器或喷雾器快速将痰液或分泌物喷在玻片上。
用火焰或消毒器对冷凝吸入性肺炎标本进行消毒，尽可能在细菌沉淀区进行采样。
迅速挤压蓝色鼻咽拭子并置入培养皿内。
标本处理时要注意避免散播细菌。
5. 涂片染色将涂片涂上标本，然后进行染色。
无需特殊之处，可以参照常规的涂片染色法。
6. 培养用普通、选择性和不同的富集培养基进行培养。
常用的培养条件和相关的检测菌株如下：a. 长链球菌–用5%的羊血琼脂培养，将其置于CO2孵育箱中。
b. 肺炎球菌，草绿色链球菌，葡萄球菌–用血精灵琼脂培养。
c. 肺炎链球菌–用富集培养基，如VP培养基、耐苯唑芥庚烷琼脂（PBG琼脂）等。
为了纯化不同类型的肺炎链球菌，还可以选择使用灭菌的吞噬细胞进行富集，例如照片长杆菌（F. tularensis.）。
d. 泡沫状微生物和厌氧菌–分别用PPLO或厌氧和普通琼脂培养。
7. 鉴定和鉴别根据培养结果和临床表现，可对菌株进行初步鉴定和分类。
在进行鉴定过程中，应遵循规范化的步骤，选择正确的API、鉴定手段等，并在鉴定手册中查找相关鉴定概念、流程、依据以及最近的病原学方面的知识，避免误判或漏判。
呼吸道标本的培养与鉴定
人体的上呼吸道有常居的细菌群，下呼吸道是无菌的。
上呼吸道常居菌主要有：草绿色链球菌、α、β链球菌、微球菌、表皮葡萄球菌、拟杆菌、梭杆菌、口腔厌氧球菌、奈瑟菌（致病菌除外）等。
1. 下呼吸道感染的病原菌种类因感染部位而有所差异。
（1）.咽炎最常见的病原菌是A群链球菌；
（2）.喉炎的病原菌以流感嗜血杆菌为主；
（3）.中耳炎常见病原菌为肺炎链球菌、流感嗜血杆菌、卡他莫拉菌及口腔厌氧菌；
（4）.社区获得性下呼吸道感染的常见病原菌包括肺炎链球菌、流感嗜血杆菌、肺炎克雷伯菌、肺炎衣原体、肺炎支原体、卡他莫拉菌、化脓性链球菌、结核分枝杆菌、嗜肺军团菌、诺卡菌等，金黄色葡萄球菌可引起社区获得性、进行性、坏死性肺部病变;
(5)长期使用广谱抗菌药物及激素、粒细胞减少的患者容易受到侵袭性真菌的感染。
2.检验方法与程序
通常用鼻咽拭子采集标本。
痰和支气管灌洗液用无菌痰杯留取。
应由临床医生指导留取。
痰标本及上呼吸道拭子标本应在2小时内送到实验室。
3.涂片检查
直接涂片、革兰染色、镜检。
痰液标本每低倍视野上皮细胞应
小于10个，白细胞应大于25个。
还可以初步判定是否有病原菌存在及病原菌的种类。
比如，念珠菌可直接在高倍镜下检查孢子及菌丝。
4.细菌培养通常采用分区划线接种的方法进行标本的初次接种。
①血平板适用于分离各类细菌，特别是β溶血性链球菌
②巧克力平板于5%co2环境下分离嗜血杆菌、脑膜炎奈瑟菌或淋病奈瑟菌
③中国蓝/麦康凯平板用于分离革兰氏阴性杆菌
④沙氏平板用于分离念珠菌及其他酵母菌或真菌
⑤厌氧血平板放厌氧环境，分离厌氧菌
⑥罗-琴培养基或米氏7H10培养基，用于结核分枝杆菌的培养。
35℃培养18-24小时，观察细菌菌落形态及特点，呼吸道标本中的常居菌群不用鉴定，培养后生长于平板第二区或第三区的中等或大量细菌，或仅在第一区生长的纯种细菌，都是需要鉴定的细菌。
若无致病菌或呼吸道正常菌群生长，可能提示正常菌受抗菌药物的抑制。
标本运送和处理的延迟会使培养结果为假阴性。
对痰液中检出的呼吸道常居菌虽不做鉴定，但在报告时给予说明，当其为生长优势菌时（均占90%以上）可做鉴定和报告。
经过鉴定确认为呼吸道重要病原菌时，应作出培养阳性的结果报告。
