组织培养实验室仪器及操作技术
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植物组织培养实验室的组成仪器设备及基本操作1. 引言植物组织培养实验室是进行植物细胞培养、植物组织培养和植物遗传转化等研究工作的重要场所。
该实验室的组成仪器设备和基本操作对于顺利进行植物组织培养实验至关重要。
本文将详细介绍一个典型的植物组织培养实验室的组成仪器设备及其基本操作。
2. 仪器设备2.1. 无菌操作台无菌操作台是植物组织培养实验室中最关键的设备之一,用于保持操作区域的无菌条件。
它通常由一个工作台和一个无菌工作区组成。
无菌操作台配备了紫外线灯和高效过滤器,可以杀灭空气中的微生物,并防止外界空气中的微生物进入无菌工作区。
2.2. 培养箱培养箱是用于培养和生长植物组织的设备。
它可以提供恒温、恒湿和光照条件,从而满足不同植物组织培养实验的要求。
培养箱通常配备了温度控制器和湿度控制器,可以精确地控制环境参数。
2.3. 培养基配制设备在植物组织培养实验中,需要制备不同种类的培养基用于培养和生长植物组织。
培养基配制设备包括天平、培养基配制器和pH计。
天平用于精确称量各种培养基成分的质量,培养基配制器用于自动配制培养基,pH计用于测量培养基的酸碱度。
2.4. 高压灭菌器高压灭菌器用于对实验室的培养器具、培养基和试剂进行高温高压的灭菌处理。
灭菌是植物组织培养实验的基本操作之一,可以有效杀灭培养器具和培养基中的微生物,保证实验的无菌性。
2.5. 显微镜显微镜是用于观察和分析植物组织培养过程中的细胞和组织结构的设备。
它可以放大样本,使研究人员能够观察细胞中的微小结构。
显微镜通常配备了不同倍数的物镜和目镜,以满足不同观察需求。
2.6. 高速离心机高速离心机用于分离植物组织培养中的混合物。
在植物组织培养实验中,常常需要将悬浮细胞和培养基分离以获得纯净的细胞。
高速离心机通过离心力将混合物中的悬浮细胞沉降到管底,从而实现分离的目的。
3. 基本操作3.1. 灭菌操作在进行植物组织培养实验之前,必须对实验室的培养器具、培养基和试剂进行灭菌处理,以确保实验的无菌性。
第一章组织培养实验室及操作技术第一节实验室设置及基本技术组织培养实验室必须满足三个基本的需要,即:实验准备,包括培养基配制、洗涤与灭菌等;无菌操作;控制培养。
一.实验室组成1、准备室准备室的功能就是进行一切与实验有关的准备工作。
要求宽敞明亮,通风条件好。
2、缓冲室缓冲室的功能主要是工作人员进行工作服装、口罩拖鞋等的更换,也是其他实验室电力控制器的安装场所,需安装紫外灯进行灭菌。
3、无菌操作室接种室的功能是进行无菌操作。
要求封闭性好,干燥清洁,能较长时间保持无菌。
房间一般不宜过大,其规模根据实验需要而定。
接种室除了出入口和通气口外,应行密闭。
4、培养室培养室的功能是对离体材料进行控制培养。
其首要要求是要能控制光照和温度,其次为防止微生物感染,培养室应保持干燥和清洁。
主要设备应有培养架子、灯光、通风设施、边台等。
另还应具有空调机、除湿机、温度湿度计、换气扇等。
5、驯化室通常在温室的基础上营建,要求清洁无菌,配有空调机、加湿器、恒温恒湿控制仪等。
6、温室内配置有温度控制装置、通风装置、光照调节装置、杀菌杀虫工具等。
7、细胞学实验室其功能是对培养材料进行细胞学鉴定和研究。
要求清洁、明亮、干燥,使各种光学仪器不受潮湿和灰尘污染。
8、生化分析室在以培养细胞产物为主要目的的实验室中,应建立相应的分析化验实验室,以便于对培养物的有效成分随时进行取样检查。
组织培养实验室布局的总体要求是:便于隔离、便于操作、便于灭菌、便于观察。
二.基本设备配制基本设备:冰箱、天平、酸度计、纯水器、电炉、培养基分装器、搅拌器。
灭菌设备:蒸汽压力灭菌锅、干热消毒柜、过滤灭菌装置、喷雾消毒器、紫外灯。
无菌操作设备:净化工作台、接种箱。
光温控制设备:时间程序控制器、空调及温度感应器。
细胞培养设备:培养设备根据需要而定,包括培养架、培养箱、摇床等。
细胞学鉴定设备:光学研究显微镜、实体显微镜、倒置显微镜。
三.培养器皿及实验用具玻璃器皿新型材料器皿金属材质用具四.洗涤技术玻璃器皿洗涤:新购置的玻璃器皿,常有游离碱性物质,使用前,先用1%稀盐酸浸泡过夜(12h),然后用洗衣粉洗涤,清水冲洗,晾干备用。
植物组织培养的基本设备和无菌操作培训植物组织培养是一种重要的生物技术,它可以用来繁殖纯种植物、快速繁殖难以繁育的植物、生产无性系等。
在进行植物组织培养实验时,需要一些基本的设备和无菌操作培训,以确保实验的准确性和成功率。
首先,进行植物组织培养实验需要准备一个无菌工作台。
无菌工作台是用于提供无菌工作环境的设备,它可以有效地防止外界微生物的污染。
在工作台上进行操作时,可以通过UV灯消毒空气和工作台表面,以确保实验材料的无菌状态。
其次,植物组织培养实验需要使用无菌培养箱。
无菌培养箱是专门用来培养植物组织的设备,它可以提供恒温、恒湿和无菌的环境,保证植物组织的生长和繁殖。
在培养箱中进行实验时,需要定期清洁、消毒和更换无菌培养基,以保证培养环境的无菌性。
此外,进行植物组织培养实验还需要使用一些基本的无菌操作器具,如无菌吸管、无菌移液器、无菌培养瓶等。
这些器具可以帮助实验人员在无菌条件下进行操作,避免外界微生物的污染。
对于实验人员来说,他们需要接受一定的无菌操作培训,以掌握正确的无菌操作技能。
在无菌操作过程中,实验人员需要穿戴无菌手套、口罩和无菌服装,严格按照无菌操作规程和流程进行操作,避免外界微生物的污染。
总的来说,植物组织培养的基本设备和无菌操作培训是非常重要的,它们可以帮助实验人员在无菌条件下进行植物组织培养实验,保证实验的准确性和成功率。
只有做好无菌操作,才能获得高质量的植物组织培养材料,为后续的应用研究和生产提供可靠的支持。
植物组织培养是一项重要的生物技术,在农业、园艺和植物育种等领域具有广泛的应用。
通过植物组织培养,可以获得大量无病害的植物材料,实现植物繁殖、植物株型改良、基因转化等目的。
然而,植物组织培养实验过程中,需要一定的无菌操作技能和必要的设备,才能保证培养物的无菌状态,从而确保实验的准确性和成功率。
在进行植物组织培养实验时,无菌工作台是必不可少的设备之一。
无菌工作台能够提供无菌环境,有效地阻止外界微生物的污染。
植物组织培养的设备与使用方法植物组织培养是在严格的无菌条件下培养植物材料。
要达到无菌操作和无菌培养,就需要认为创造无菌的环境,使用无菌的器具,同时还需要人工控制的温度、光照、湿度等培养条件。
无菌环境和无菌条件的创造需要一定的设备,实验设备因工作的目的、具体的任务和所具有的条件而异。
但大多数采用化学实验室、微生物实验室及医疗上的一些设备、器材和用具。
图1 组培室分区布局1.实验室基本组成a)无菌操作室在植物组织培养中,无菌操作室(clean chamber)是进行植物材料的分离及培养体转移的一个重要场所。
由于植物组织培养需长时间的无菌操作,所以无菌条件的好坏对组织培养成功与否起重要作用。
微生物的培养生长时间短,而植物组织培养短的一个月,长的达几年。
所以,防止细菌和霉菌混入是提高工作效率和影响生产成本的关键。
无菌操作室基本要求是:干净无菌、密闭、光线好。
一般安装滑动门,使空气不致流动,以防外界菌及尘埃的侵入;墙壁光滑平整,地面平坦无逢,便于清洁工作;室内安装紫外灯,以便灭菌,还要有照明装置及灯座,以备临时增加设备之用;室内有超净工作台、移动式载物台(医用平板推车)、广口瓶、试管、三角瓶、酒精灯、接种工具等。
面积根据工作性质可大可小,小的无菌操作室一般一间5~7㎡即可。
接种室内主要安放超净工作台,分单人使用和双人同时连续作业使用两种。
超净台中准备接种用的器具,如尖头小镊子、弯头小镊子、接种针、解剖刀、手术剪刀等,以及酒精灯、储存70%酒精浸泡的棉球的广口瓶等。
如果进行生长点或幼胚等细小结构的分离与接种,还应当在超净工作台内放置一台小型的双目解剖镜,以便观察、解剖和分离细小的外植体。
小型离心机主要用于分离和收集液体培养中的细胞、单花粉及原生质体等,也可用来筛选处于不同发育阶段的胚状体。
无菌室外最好设置预备室作为缓冲间,以防工作人员进出时带进杂菌。
控温光照培养箱可以安放在缓冲间内。
预备室与无菌室之间最好以玻璃相隔,便于观察和参观。
第一章组织培养实验室及操作技术第一节实验室设置及基本技术组织培养实验室必须满足三个基本的需要,即:实验准备,包括培养基配制、洗涤与灭菌等;无菌操作;控制培养。
一.实验室组成1、准备室准备室的功能就是进行一切与实验有关的准备工作。
要求宽敞明亮,通风条件好。
2、缓冲室缓冲室的功能主要是工作人员进行工作服装、口罩拖鞋等的更换,也是其他实验室电力控制器的安装场所,需安装紫外灯进行灭菌。
3、无菌操作室接种室的功能是进行无菌操作。
要求封闭性好,干燥清洁,能较长时间保持无菌。
房间一般不宜过大,其规模根据实验需要而定。
接种室除了出入口和通气口外,应行密闭。
4、培养室培养室的功能是对离体材料进行控制培养。
其首要要求是要能控制光照和温度,其次为防止微生物感染,培养室应保持干燥和清洁。
主要设备应有培养架子、灯光、通风设施、边台等。
另还应具有空调机、除湿机、温度湿度计、换气扇等。
5、驯化室通常在温室的基础上营建,要求清洁无菌,配有空调机、加湿器、恒温恒湿控制仪等。
6、温室内配置有温度控制装置、通风装置、光照调节装置、杀菌杀虫工具等。
7、细胞学实验室其功能是对培养材料进行细胞学鉴定和研究。
要求清洁、明亮、干燥,使各种光学仪器不受潮湿和灰尘污染。
8、生化分析室在以培养细胞产物为主要目的的实验室中,应建立相应的分析化验实验室,以便于对培养物的有效成分随时进行取样检查。
组织培养实验室布局的总体要求是:便于隔离、便于操作、便于灭菌、便于观察。
二.基本设备配制基本设备:冰箱、天平、酸度计、纯水器、电炉、培养基分装器、搅拌器。
灭菌设备:蒸汽压力灭菌锅、干热消毒柜、过滤灭菌装置、喷雾消毒器、紫外灯。
无菌操作设备:净化工作台、接种箱。
光温控制设备:时间程序控制器、空调及温度感应器。
细胞培养设备:培养设备根据需要而定,包括培养架、培养箱、摇床等。
细胞学鉴定设备:光学研究显微镜、实体显微镜、倒置显微镜。
三.培养器皿及实验用具玻璃器皿新型材料器皿金属材质用具四.洗涤技术玻璃器皿洗涤:新购置的玻璃器皿,常有游离碱性物质,使用前,先用1%稀盐酸浸泡过夜(12h),然后用洗衣粉洗涤,清水冲洗,晾干备用。
第1篇一、实验简介实验名称:月季组培实验实验目的:通过组培技术,了解月季组织培养的原理和方法,掌握无菌操作技术,提高植物繁殖效率,为月季的快速繁殖和遗传改良提供技术支持。
实验时间:2023年X月X日至X月X日实验地点:XX大学园艺实验室实验材料:月季植株(品种:XX)实验设备:超净工作台、无菌操作箱、高温高压灭菌器、移液枪、解剖刀、培养皿、试管、滤纸、镊子、剪刀、酒精灯、高压蒸汽灭菌锅等。
二、实验方法1. 外植体选取与消毒:- 选择生长健壮的月季植株,取其茎尖作为外植体。
- 使用无菌水清洗外植体,然后用75%酒精浸泡30秒,再用无菌水冲洗3次。
- 将外植体置于0.1%的氯化汞溶液中消毒5分钟,再用无菌水冲洗5次。
2. 诱导生根:- 将消毒后的外植体切成1-2厘米的小段,接种到含有不同激素比例的MS培养基中。
- 将接种后的培养皿放入培养箱中,培养温度为25℃,光照时间为12小时/天。
3. 生根培养:- 当外植体开始生根时,将培养基更换为含有较低激素浓度的MS培养基。
- 继续培养至生根率达到80%以上。
4. 炼苗与移栽:- 将生根的植株从培养皿中取出,置于温室中炼苗。
- 炼苗成功后,将植株移栽到花盆中,进行正常的养护管理。
三、实验结果与分析1. 外植体消毒效果:- 通过显微镜观察,发现消毒后的外植体表面无细菌污染,说明消毒效果良好。
2. 诱导生根效果:- 在不同激素比例的培养基中,生根效果最好的培养基为1/2MS+0.5mg/LNAA+0.5mg/L IBA。
- 在此培养基中,生根率达到90%,平均根长为3.5厘米。
3. 炼苗与移栽效果:- 炼苗过程中,植株生长良好,无病虫害发生。
- 移栽后的植株成活率达到了95%。
四、实验讨论1. 外植体选取:- 本实验选择茎尖作为外植体,主要是因为茎尖细胞分裂旺盛,易于诱导生根。
2. 消毒方法:- 消毒是组培实验的关键步骤,本实验采用氯化汞溶液消毒,效果良好。
3. 激素配比:- 激素配比对生根效果有显著影响,本实验通过优化激素配比,提高了生根率。