中国组织工程研究 第16卷 第14期 2012–04–01出版 Chinese Journal of Tissue Engineering Research April 1, 2012 Vol.16, No.14
P.O. Box 1200, Shenyang 110004
2550 Department of Cardiac Surgery, First Affiliated Hospital of Liaoning Medical University, Jinzhou 121001, Liaoning Province, China Li Xin, Department of Cardiac Surgery, First Affiliated Hospital of Liaoning Medical University, Jinzhou 121001, Liaoning Province, China cctv138416@ Corresponding author: Zhang Feng-xiang, M.D., Attending physician, Department of Cardiac Surgery, First Affiliated Hospital of Liaoning Medical University, Jinzhou 121001, Liaoning Province, China zhangfengxiang64@ Received: 2012-01-09 Accepted: 2012-02-20 辽宁医学院附属第一医院心外科，辽宁省锦州市 121001 李辛，女，1979年生，辽宁省锦州市人，汉族，2010年辽宁医学院毕业，主要从事干细胞的研究。 cctv138416@ 通讯作者：张凤香，博士，主治医师，辽宁医学院附属第一医院心外科，辽宁省锦州市 121001 zhangfengxiang 64@ 中图分类号:R394.2 文献标识码:A 文章编号:1673-8225 (2012)14-02550-05 收稿日期：2012-01-09 修回日期：2012-02-20 (20111012009/ WLM·S)
比较不同培养基培养脐带间充质干细胞
目前的培养体系和培养方法中通常采用的是含10%~20%胎牛血清的培养基，但含血清培养基使临床细胞治疗受到限制，存在不安全因素。通过对脐带间充质干细胞在IMDM、DMEM/F12（不含酚红）及无血清培养基StemProRMSC
SFM的培养扩增，比较三种培养体系的优略。建立从减血清到无血清的培养体系，减少血清对临床细胞治疗的干扰，提高临床细胞治疗的稳定性与安全性。
标签：有血清培养基;无血清培养基;脐带间充质干细胞随着对脐带间充质干细胞生物学特性及功能的深入研究，脐带间充质干细胞可在体外大量培养扩增，且生物性能稳定，多次传代扩增仍能保持旺盛的功能。同时脐带间充质干细胞还具有取材方便，无伦理学限制，免疫原性相对纯净的优势，可以为实验和临床提供足够的细胞来源。
1资料与方法
1.1一般资料经产妇知情同意，采集足月剖宫产健康胎儿脐带，无菌情况下放入含有抗生素的生理盐水中，4℃保存，6h内无菌處理。
1.2脐带的分离和原代培养植块法分离脐带：用止血钳及剪刀无菌取胎儿脐带4~5cm，D-hank’s液充分洗涤，去除脐静脉及动脉内的新鲜血液，分离并去除脐带外膜组织和血管组织，获得脐带wharton胶。将其剪碎至1mm3组织块，使用吸管将组织块逐一植入T75培养瓶底，密度20~25块/瓶为宜，组织小块在瓶底要分布均匀，倒置放入37℃，体积分数为5%CO2饱和湿度培养箱内。3~5h后待组织块粘附牢固正向放置到超净台内，加入适量含10%胎牛血清的DMEM/F12培养基，正向放入体积分数为5%CO2饱和湿度培养箱内。72h后换液，一般5~7d可有间充质干细胞爬出。
1.3脐带间充质干细胞在不同培养体系的体外扩增将原代细胞完全爬出后，在IMDM、DMEM/F12（不含酚红）、StemProR MSC SFM三种培养体系中传代培养，在生长过程中进行形态学观察。
1.4 流式细胞仪表型检测取生长状态良好的P4代细胞，消化并计数，以每管1×106个细胞，分别加入10μl单克隆抗体CD73、CD34、CD45、CD105、HLA-DR、HLA-ABC及阴性对照 lgG1-PE、阳性对照lgG1-FITC，室温避光孵育30min，PBS洗涤两次，室温300g，5min。PBS重悬后上流式细胞仪。
Surface markers expressed by hUCMSCs and MSCs：
Surface markers hUC BM
CD13 ++++ ++++
CD14 - -
CD29 ++++ ++++
CD31 - -
CD34 - -
CD38 - -
CD44 ++++ ++++
CD45 - -
CD73 ++++ ++++
CD90 ++++ ++++
CD105 ++++ ++++
CD106 + +++
CD146 ++++ +++
HLA-ABC +++ ++++
中国组织工程研究笫７７卷第４Ｄ期２０１３—１０—０１出版
Ｃｈｉｎｅｓｅ Ｊｏｕｍａｔ ｏｆＴｉｓｓｕｅＥｎｇ￣ｅｅｒｉｎｇＲｅｓｅａｒｃｈ Ｏｃｔｏｂｅｒ１ ２０１３ ＶｏＬ１７，Ｎｏ，４０ ＷＷＷ．ＣＲＴＥＲ．ｏｒｇ
ｄｏｉ：１０ ３９６９／ｊ．ｉｓｓｎ．２０９５—４３４４．２０１３．４Ｄ，００４ ：／／ｗｗｗ．ｃｒｔｅｒ．ｏｒｇ］ 李绪倩 崔晓兰，时瀚，柏佳，减雪，王意忠 脐带间充矮于细胞联合番茄红素的抗衰老作用 ．中国组织Ｉ程研究，２０１３ １７（４ｏ）：７０４０－７０４６
脐带间充质干细胞联合番茄红素的抗衰老作用水★
李倩倩 ，崔晓兰 ，时瀚 ，刘佳’，成雪’，王意忠 （ 北京大学航天临床医学院血液内分泌科，北京市１０００４９； 中国中医科学院
中药所药理室，北京市１ｏｏ７ｏｏ）
文章亮点：
１干细胞、番茄红素抗衰老己成为医学研究的热点前沿，实验在以往２种方法单独使用的基础上，用异
体来源脐带间充质干细胞移植到Ｄ一半乳糖诱导的衰老模型小鼠体内，同时给予番茄红素灌胃，通过检测相关
衰老指标，与单独干细胞、番茄红素治疗相比较，观察植入细胞在衰老小鼠体内的分布及安全性。旨在探讨
干细胞、番茄红素二者联合抗衰老的作用，为抗衰老研究提供一种新的模式一联合抗衰老。
２对于干细胞、番茄红素二者联合抗衰老的研究，国内外研究甚少，实验弥补了该空白，同时为脐带间
充质干细胞的深入研究及其应用奠定了基础。
３由于时间、资金问题，实验未对干细胞在体内的分化做进一步研究，课题组会在后续的实验中深入探
讨。 ・
关键词：
干细胞；脐带脐血干细胞；人脐带间充质于细胞；番茄红素；抗衰老；超氧化物歧化酶：丙二醛；羟脯氨酸；
其他基金；干细胞图片文章
主题词：
干细胞；脐带：抗衰老酶；超氧化物歧化酶；丙二醛
基金资助：
北京大学航天临床医学院科研基金项目（２０１１１Ｏ 李倚倩★，女，１９８６年生， 山东省济宁市人，汉族， 北京大学在读硕士，主要 从事干细胞治疗的基础研 究。 ．
