色谱基础知识

色谱基础知识•第一部分色谱基础知识1、色谱起源2、色谱定义色谱法：利用组分在两相间分配系数不同而进行分离的技术流动相：携带样品流过整个系统的流体固定相：静止不动的一相，色谱柱3、色谱分类1、高效液相色谱High Performance Liquid Chromatography (HPLC)2、气相色谱 Gas Chromatography (GC)3、薄层色谱 Thin-Layer Chromatography (TLC)4、毛细管电泳 Capillary Electrophoresis(CE)4、色谱优点1、同时分析2、分离性能好3、灵敏度高 (ppm-ppb)4、进样量小 (1-100uL)HPLC vs GC液相色谱：以液体作为流动相的色谱分离方法1、适用于高沸点、大分子、强极性和热稳定性差的化合物的分析2、流动相具有运载样品分子和选择性分离的双重作用气相色谱：以气体作为流动相的色谱分离方法1、适用于沸点较低、热稳定性好的中小分子化合物的分析2、流动相只起运载样品分子的能力5、HPLC分类1、正相模式 (NP-LC)2、反相模式 (RP-LC)3、反相离子对色谱 (IPC)4、离子交换色谱 (IEC)5、尺寸排阻色谱 (GPC / GFC)反相模式 (RP)填料：C18 (ODS)、C8 (octyl)、C4 (butyl)、苯基、TMS和氰基相互作用力：反相模式下流动相的选择：优化水相（缓冲液）和有机相的比例非常重要（甲醇，乙腈和THF 是常用的有机溶剂）在有缓冲液的情况下, 缓冲液的浓度和pH值非常重要增加流动相极性：固定相极性变化对分离的影响：固定相极性变化对分离的影响：离子对色谱离子对试剂·阴离子化合物：氢氧化四丁基铵、溴化四丁基铵·阳离子化合物：丁烷基磺酸钠(C4)、戊烷基磺酸钠(C5)、己烷基磺酸钠(C6）、庚烷基磺酸钠(C7)、辛烷基磺酸钠(C8)、癸烷基磺酸钠(C10)、十二烷基磺酸钠(SDS)离子对色谱影响因素·离子对试剂的类型·离子对试剂的浓度·流动相的pH正相色谱色谱柱：·硅胶柱:常用·氰基柱: 常用·氨基柱: 分析糖·二醇基柱: 分析蛋白质相互作用力氢键力·如果样品有–-COOH: 羧基–-NH2: 氨基–-OH: 羟基则氢键力强.·如果样品没有任何官能团，象碳水化合物·如果样品有大的基团, 由于空间障碍则氢键力弱.正相模式下流动相的选择：·主要试剂：烷烃(戊烷, 己烷, 庚烷, 辛烷)、芳香烃(苯, 甲苯, 二甲苯)、二氯甲烷–氯仿、四氯化碳·辅助试剂：甲基-t-丁基醚(MTBE)、乙醚、四氢呋喃(THF)、二氧杂环乙烷、嘧啶、乙酸乙酯、乙腈、丙酮、异丙醇、乙醇、甲醇为了调整保留时间，可以选择主要试剂然后再加入辅助试剂。

色谱分析仪基础知识培训色谱原理是色谱分析仪的核心概念之一、色谱技术是基于物质在固定相（色谱柱）和移动相（色谱流动相）之间的分配和吸附特性，利用物质在两个相之间的平衡分配来实现物质的定量和定性分析。

具体而言，样品溶液经过色谱柱，固定相对溶液中的不同组分表现出不同的吸附和分配作用，导致组分的分离。

之后，通过检测峰的面积和高度等信息，可以确定样品中不同组分的含量。

色谱柱是色谱分析仪中的另一个重要组成部分。

色谱柱是用于分离样品中不同组分的装置，其内部通常填充着固定相。

色谱柱的选择要根据具体的分析目的和样品特性来确定。

一般来说，色谱柱可以根据其填充材料的性质分为气相色谱柱和液相色谱柱。

气相色谱柱通常用于气相色谱分析，液相色谱柱用于液相色谱分析。

此外，在液相色谱柱中，还可以根据填充材料的不同来分为正相色谱柱和反相色谱柱。

色谱流动相是色谱分析仪中的另一个关键要素。

流动相是指在色谱柱中流动的溶液或气体，用于将样品分离和输送到检测器进行检测。

在气相色谱中，常用的流动相是惰性气体，如氢气或氮气。

在液相色谱中，流动相通常是溶解于溶剂中的液体，可以是纯溶剂或溶剂的混合物。

流动相的选择要根据样品的性质和分析要求来确定。

色谱峰的解析是色谱分析的一个重要环节。

色谱峰是指在色谱图上表示样品中不同组分的峰状谱带。

色谱峰的形状、峰面积和峰高度等参数可以提供样品组分的定性和定量信息。

峰的形状通常受到分析条件的影响，如流动相的成分和速度、固定相的性质等。

峰面积可以用来计算组分的相对含量，峰高度则可以用来估计物质的浓度。

总之，色谱分析仪基础知识包括色谱原理、色谱柱、色谱流动相以及色谱峰的解析等内容。

掌握这些知识可以帮助我们理解和运用色谱分析仪，进行样品的分离和定量分析。

色谱基础知识1.名词狭义：色谱—1903俄国科学家茨维特提出，色谱就是色带。

广义：色谱系统—采用固定相和流动相分离混合物的系统。

载气－气体流动相carrier gas担体－色谱柱中的固定相，可以是颗粒物质，毛细管的管壁也可以起到担体的作用。

支持固定液or分离作用。

DEGS，硅藻土、固定液－涂布在担体表面的高沸点有机物。

OV225并不是每个色谱柱都需要担体和（或）固定液。

柱容量：色谱柱能一次有效分离的物质最大量。

决定了进入色谱柱的样品量。

内因由物质的种类决定，外因主要由色谱柱横断面上分离作用组分的量决定。

脉冲式进样器：分流装置：保留时间：（Rt reserve time）物质在色谱柱中的停留时间。

影响因素：一是固定液或者担体与被分析的物质之间作用力；二是色谱条件，包括使用的温度、载气种类及流速、升温方式（程序升温或者恒温条件）；Porapak Q2m,N2,30ml/min,110℃,140℃。

2.色谱分类固定相：纸色谱，薄层色谱，柱色谱，流动相：液相色谱liquid chromatograph（离子色谱），气相色谱gas chromatograph，电色谱，磁色谱，超临界流体色谱气固色谱－气体流动相和固定相（担体）组成的色谱系统gas solid chromatograph，GSC，担体的极性决定色谱柱的极性。

吸附色谱气液色谱－气体流动相、（担体和）固定液组成的色谱系统gas liquid chromatograph，GLC，固定液的极性决定色谱柱的极性。

分配色谱超临界流体色谱－介于气相色谱和液相色谱之间的一种色谱。

电色谱－毛细管电泳，凝胶电泳磁色谱－有待开发3.几种色谱柱径流效应：分离度：两种物质被分离开的程度。

分子结构相似度（内因），色谱条件（外因）：柱种类，温度，气体，柱长毛细管色谱柱－内径很小的色谱柱（一般在0.20mm，0.25mm，0.32mm，0.52mm左右），对上样操作要求比较高；把固定液直接涂布在色谱柱的（内）管壁上，固定液（se30）厚度一般在微米（0.25µm）数量级。

1色谱基本参数§1 保留值(1) 保留时间tr保留时间t r 和死时间t 0示意图(2) 保留体积V R(ml) = t r(min) * F c(ml/min)V R= V m+KV sK--平衡分配系数, Vs--固定相体积, Vm=流动相所占体积溶质在固定相中的浓度(n s/Vs) n s VmK=----------------------------------= ----* ----溶质在流动相中的浓度(n m/Vm) n m Vsn s, n m 溶质在固定相和流动相中的量23(4) 容量因子(k’)固定相中容质的量(n s)k´=------------------------流动相中容质的量(n m)K = k´(Vm/ Vs)V R = Vm +KVs = Vm + k´(Vm/ Vs) Vs = Vm + k´Vm= Vm (1+ k´)tr = to (1+ k´) k´= t r / to -1k´与固定相,流动相性质及柱温有关;与流速,柱尺寸无关.(3) 调整保留时间t r ´= t r -t oV = V R -V m(5) 死体积(V m) 和死时间(t o)1) 采用比流动相溶剂少一个-CH2-基团的同系物（己烷—戊烷）2）甲醇/水------甲醇3）正相--------四氯乙烯，反相---苯甲酸或硝酸4）计算法空柱管体积（Vc) * 总孔隙度（εT)t o=流动相体积流速（F c)= π/4 *d²c*L * εT/F c4计算孔隙度§2 选择性指标(α´)和相对保留值(α)α´= t r(2)/ t r(1) =(1+ k´(2)/(1+ k´(1))α= t r '(2)/ tr' (1)= k´(2)/ k´(1)α´作为选择性指标比α直观与柱温固定相种类流动相组成有关5§3 -1 流动相线速（u)流动相线速u: 通常指平均线速度u = L / t。