蜜环菌母种培养基筛选试验

天麻蜜环菌、萌发菌母种生产技术人工栽培天麻，在有性繁殖过程中，需要萌发菌和蜜环菌两种共生菌。

笔者在生产实践中，摸索出两种共生菌都能生长的培养基及生产技术。

具体做法如下。

1培养基配制1.1液体培养基马铃薯（挖去芽眼、去皮、切片）100g，硬杂木屑、麦麸、玉米面各50g，自来水或天然水1300mL，在双重锅内煮沸30分钟后用双层纱布过滤。

取滤液补水至1000mL，加葡萄糖20g、磷酸二氢钾2g、硫酸镁1g、蛋白胨0.5%、10mLVB1。

全部溶解摇均后，分装于500mL的三角瓶或罐头瓶内，每瓶装150mL左右，也可装于试管内，装入量为试管容积的1/4。

三角瓶和试管用棉花塞口，罐头瓶用2层牛皮纸或4层报纸上盖一层塑料布封口后，用皮筋扎口。

特点：技术含量高，繁殖快，长好即可应用，但不能长期保存。

1.2固体斜面培养基是食用菌生产中常用的培养基，按照“1.1”的操作程序制取滤液，在滤液中加入琼脂18g，加热溶化并补水至1000mL，趁热加入葡萄糖20g、磷酸二氢钾2g、硫酸镁1g、蛋白胨5g、10mgVB1，全部溶解摇均，分装于试管内，装量为试管容量的1/4，然后用棉花塞口。

1.3木屑培养基硬杂木屑50%、玉米芯（粉碎成小颗粒状）25%、麦麸15%、玉米面10%，外加葡萄糖0.5%、蔗糖0.5%、石膏1%、石灰0.5%、磷酸二氢钾0.2%、硫酸镁0.1%、2%VB1。

将原料和石膏、石灰等干料拌均，再将上述可溶解的所有辅料溶于水中并拌入原料中，使之含水量为70%，充分拌均后装入试管，并适当压实。

装入量为试管容积的1/2，然后用棉花塞口。

特点：耐贮藏，便于邮寄。

2灭菌用手提式高压灭菌锅，也可用民用高压锅代替。

2.1液体和斜面固体培养基灭菌时，蒸汽压力为1.4kg/平方厘米时稳定保持30分钟，待锅内温度降到50～70℃时出锅。

液体培养基出锅后直接放入接种箱中，待温度降到25℃以下时接种；斜面固体培养基需趁液体状态时倾斜成斜面（斜面长度约占试管长的3/5），待培养基自然凝固后移入接种箱。

蜜环菌的提纯复壮与诱变育种孙继民;魏宝阳;孙佳为;高国赋【期刊名称】《湖南农业科学》【年(卷),期】2008(000)004【摘要】对蜜环菌进行分离纯化后筛选出性状最好的母种3号菌,利用0.5%的羟胺溶液对3号菌株的菌索处理2 min,诱变产生了生长速度快的突变菌株,该菌株比母种提前2 d萌发且菌索更加粗壮、密集.同时,研究了蜜环菌菌索在不同培养基上的生长特性.结果表明:在25%、pH值5.5～6.0和暗培养的条件下,蜜环菌菌索在5号培养基上的生长速度最快,分枝多,密度大.通过一系列化学试剂对蜜环菌的作用.发现0.5%的羟胺溶液作用2 min后能够选育出生长速度快的优质蜜环菌,且遗传稳定.【总页数】3页(P26-28)【作者】孙继民;魏宝阳;孙佳为;高国赋【作者单位】湖南农业科学院土壤肥料研究所,湖南,长沙,410128;湖南农业大学生物科技学院,湖南,长沙,410128;湖南农业大学资源环境学院,湖南,长沙,410128;湖南农业大学生物科技学院,湖南,长沙,410128【正文语种】中文【中图分类】Q949.32【相关文献】1.同宗配合蜜环菌与欧美异宗配合蜜环菌狭义种的分子系统学关系 [J], 秦国夫;J.HANTULA2.天麻共生蜜环菌菌包及替代菌材原料的筛选优化 [J], 刘冰;王后平;李海东;张汉波;曹安江;杨明挚3.蜜环菌的培养--Ⅱ菌枝、菌材、子实体的培养 [J], 李喜范;李军;战庆福;于永平;徐凤娟;吴炳礼4.秦巴山区蜜环菌新菌株"陕蜜2009"选育研究 [J], 赵赟鑫;谢海彬;叶彦慧;马昕;吴永波;解修超;邓百万5.蜜环菌菌丝体化学成分的研究——Ⅵ.蜜环菌癸素(armillaripin)的分离与结构 [J], 杨峻山;苏亚伦;王玉兰;冯孝章;于德泉;梁晓天;贺存恒;郑启泰;杨晶晶;杨晶因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

优质蜜环菌菌株的初步筛选柳玲玲;毛堂芬;朱国胜;刘作易【摘要】The biological features of growth rate,rhizomorphbranch,rhizomorph diameter,tenacity and mycelium fragrance of 20A.metlea strains to screen high quality A.metlea strains for production application of Polyporus umbellatus .The results showed that AM-06,AM-08,AM-12 and AM-13 strains all performance good growth characters of abundant white mycelia with fast germination and growth,more rhizomorph branches,tender tip,thick rhizomorph with good tenacity and rich mycelium fragrance.%为了筛选出优质的蜜环菌菌株供猪苓的生产应用，比较了20株蜜环菌菌株的生长速度、菌索分枝、菌索直径、韧性以及菌丝的蕈香味等生物学特性。

结果表明：菌株 AM-06、AM-08、AM-12和 AM-13均表现出优良的生长性状，表现在有大量的白色菌丝，萌发和生长较快，菌索分枝较多，尖端幼嫩，菌索粗壮，韧性极好，菌索长满平皿后有浓郁的蕈香味。

【期刊名称】《贵州农业科学》【年(卷),期】2015(000)001【总页数】3页(P87-89)【关键词】蜜环菌;优质菌株;筛选【作者】柳玲玲;毛堂芬;朱国胜;刘作易【作者单位】贵州省土壤肥料研究所，贵州贵阳 550006; 贵州省农业生物技术重点实验室，贵州贵阳 550001;贵州省生物技术研究所，贵州贵阳 550006;贵州省农业生物技术重点实验室，贵州贵阳 550001; 贵州省农作物品种资源研究所，贵州贵阳 550006;贵州省农业生物技术重点实验室，贵州贵阳 550001【正文语种】中文【中图分类】Q949.329+.81蜜环菌[Armillaria metlea (Vah1.Fr.)]属担子菌纲、伞菌目、白蘑科，是一类经济价值较高的大型真菌。

蜜环菌原种培养基组分筛选贵州农业科学2005,33(4):54～55GuizhouAgriculturalSciences[文章编号]1001—3601(2005)04—0161—0054—02蜜环菌原种培养基组分筛选黄燕芬,唐丽,范成五(贵州省农业科学院土壤肥料研究所,贵阳550006)[摘要]市售蜜环菌种经活化和优化培养后作为母种,进行原种培养基组分筛选试验,再将所选培养基培养的原料进行生产种培养效果比较试验.结果表明:5O阔叶木屑+2O米糠+1O%麦麸+10玉米砂+2KHPO一+0.7MgSOt+0.03VBt+7白糖+2马铃薯煮水原种培养基培养的菌种用于培养生产种,与PDA培养基培养的菌种直接用于培养生产种相比,培养时间缩短10d,降低生产成本约5O,且菌种各项生育指标均优.[关键词]蜜环茵原种;培养基;筛选[中国分类号]$567.239[文献标识码]A SelectionofMediumComponentsforOriginalSpawnofAmillurisemelleuHUANGY an—fen,TANGLi,FANCheng—WU(SoilandFertilizerInstitute,GuizhouAcademyofAgriculturalSciences,Guiyang550006. China)Abstract:ThecommercialAmillarisemelleawhichhasbeenactivatedandoptimizedtObeast ockforthestudyonmediumcomponentsoforigionalspawn,thenacomparingexperimentontheeffectsofdifferentmedi umcomponentsforculturingspawnof AmillarisemelleawerecarriedOUtTheresultsshowed:thequalityofthespawnwhichcultur edbyusingthepre—culturespawnwas betterthanthatofusingthespawncuhtire;thetimewasshorten10daysandthecostwasreduced50%.Keywords:pre—culturespawnofAmillarisemellea;medium;selection 蜜环菌(Amillarisemellea)是一种药,食兼用的真菌.它与着名中药材天麻为寄生关系,天麻靠蜜环菌供给营养物质生长,蜜环菌靠分解,吸收枯木和农作物养分生长发育.蜜环菌生长的好坏直接影响天麻栽[收稿日期]2005—04—15[作者简介]黄燕芬(1967),女,助理研究员,从事植物组织培养工作. 对体系增敏效果最好,无CTMAB存在下￡一1.3×10L?mol?cm.在CTMAB存在下￡一5.3×10L?mol.?cm.2.4表面活性剂用量的选择实验发现2Og/ICTMAB溶液用量在1～3mI内吸光度最大且稳定,本实验选用2mI.2.5增敏体系的稳定性体系在室温下放置5min后吸光度达到稳定,实验选用8min后测定,显色完全后体系吸光度至少可稳定5h.2.6试剂加入顺序的影响试验发现试剂加入顺序的改变对吸光度A值有一定的影响,最终与本法中试剂加入顺序为最佳.2.7工作曲线在选定试验条件下,铁含量在0～20~g/25mI符合比耳定律,线性回归方程A一0.01325+0.03236C(~g/25mI),,一一0.9995,从回归方程计算出摩尔吸光系数￡一5.3×10I?tool?CITI.2.8共存离子的影响对于10~g/mIFe",相对误差为±5,以下离子不干扰测定的允许量(以倍数计):K,Na,C1,N0,S0;,NH(20);Ca抖,Mg,Zn(0.5),M'.,Cu抖,A1",Pb",Ni抖,Hg(0.05),体系的选择性较好.培的品质和产量.蜜环菌的培养一般是用马铃薯培养基固体种接种制成生产种.这种方式培养蜜环菌生产种,培养时间较长,菌丝体发育质量不好,且母种耗费量较大,成本较高.本试验旨在前人研究基础上通过2.9样品分析及结果称取烟叶样品1.000g于聚四氟乙烯硝化瓶中,加入10硝酸5mI和过氧化氢20mI,于微波消化炉中消化10rain后,取出蒸发至近干,用0.1tool/I盐酸溶解残渣,定容到100mI.取适当试液于比色管中,按实验方法显色测定,并另取1份加入5gFe"做标准回收实验,结果见表1.表1样品分析及结果3结论本实验研究了在表面活性剂存在下磺基水杨酸与铁的显色反应,发现以CTMAB为增敏剂的情况下能提高显色反应的灵敏度,并结合微波消化样品的方法,建立了一种快速测定烟草样品中铁含量的方法.[参考文献][1]李忠,王保兴.芸香苷吸光光度法测定烟草中铁[J].理化检验,2002,38(5):247.[2]金闻博,戴亚.烟草化学[M].北京:清华大学出版社,1993, 41.(责任编辑:高红卫)第4期黄燕芬等蜜环菌原种培养基组分筛选?55?筛选蜜环菌原种培养基配方,培养原种,再将此原种用于培养生产种,以缩短生产种培养时间,提高产量和品质,降低成本,促进蜜环菌生产从而促进天麻生产.1材料与方法1.1供试材料供试菌种:市售蜜环菌试管种.母种培养基(PDA培养基):马铃薯煮水,葡萄糖,琼脂.原种培养基:阔叶木屑,米糠,麦麸,玉米砂,KHPO,MgSO,VB,白糖,马铃薯煮水.生产种培养基:阔叶树嫩枝条,阔叶木屑,麦麸,马铃薯煮水.1.2试验方法1.2.1原种培养基的制备将50阔叶木屑,20米糠,10麦麸,10玉米砂混匀作为基础软料a,另将60的阔叶木屑,30的麦麸混匀作为基础软料b.取a,b各720g分成a两份,b两份,每份分别以1:3比例加入2马铃薯煮水,79/6白糖.混匀后,取1份a 作处理1,取1份b作处理3.余下的a,b各1份分别加入8gKH2PO,2.5gMgSO,106mgVB.混匀后作处理2和4.各处理培养料均装入250mL罐头瓶中, 每处理装12瓶,高温,高压灭菌,置于暗处冷却备用.1.2.2生产种培养基的制备阔叶树嫩枝条70,截成2CI'D_小段,在清水中浸泡8～10h,与阔叶木屑2O,麦麸1O%混合,加入2马铃薯煮水拌湿,装入500mL菌种瓶,常压下灭菌10～14h,冷却备用.2结果与分析2.1蜜环菌在不同培养基中的生长情况接种到4个处理上的蜜环菌种培养3d时,处理1,2,4各瓶中均可见少量的白色菌丝体,菌索顶端分叉,处理3无反应.培养10d时,处理1瓶内菌丝增多,菌索增长;处理2瓶内菌丝增加较多,菌索分枝粗壮,长;处理3中有4瓶见少量菌丝,其它瓶仍无反应;处理4污染较严重,菌丝生长缓慢.培养15d时,处理1未污染的瓶内培养料上全部布满稀疏菌丝体,菌索细弱分枝少;处理2白色菌丝体布满瓶内,菌索粗壮,分枝较多;处理3,4变化不大(表1).表1不同培养基对蜜环菌生长的影响!!坚墼垄宣11512次强四周及底部见少F{色菌丝体污染4瓶21512强2瓶见少量莆趁体.8瓶菌蝗体长满瓶污染2瓶31512很弱4瓶瓶底少量菌丝体.7瓶无反应污染1瓶4l5l2弱2瓶无反应,4瓶有少菌丝体污染6瓶4个处理的培养基软料均为农副产品及其下脚料,成分为天然有机物.处理1,2软料较3,4中多了米糠和玉米砂,养分增多,且玉米砂硬度较其它材料大,分解也相对较慢,增加了培养基的通气性,而蜜环菌属好气真菌,在透气良好的环境下才能旺盛生长,因而其生长在处理1,2中比在3,4中好.处理2中加入了无机盐及VB成分,因而生长好于处理1.总的来说,处理2的营养最丰富,全面,通气性最好,菌种生长最好;培养基中无机盐成分对菌种生长的作用不如天然有机物.2.2不同培养基的菌种培养生产种对菌索生长情况及生产成本的影响蜜环菌的生长主要是靠分解吸收木材中的糖,有机酸,醇类物质.母种(PDA培养基)直接进入生产种(枝段培养基)培养,培养基物颗粒粗大不利于菌种分解吸收养分,菌种生长适应性差.同样的母种,经自制木屑培养基培养后(称原种),再进人生产种培养,其菌索从生长时间到生长势头,强壮程度,蕈香味等各项指标都超过直接将母种接入枝段培养基培养的生产种(表2).经过木屑培养基培养,还可降低生产成本:1瓶母种可转接培养10瓶生产种或木屑种,而1瓶木屑种可转接培养10瓶生产种.由母种直接转接培养生产种与由母种经自制木屑培养基培养原种再转接培养生产种相比,后者母种用量缩小10倍,培养时间缩短10d,而自制木屑培养基成本只是母种培养基成本的1/2.表2不同处理的菌种在枝段培养基上的生长情况*M:母种直接接人枝段培养基;N:母种经木屑培养基培养后接人枝段培养基. 3小结3.1筛选出的原种培养基配方,主要成分为农副产品下脚料,价廉,取用方便,培养效果好,较为实用.3.2实验表明,在蜜环菌种的培养中,母种经木屑培养基培养为原种,再用原种培养生产种,可缩短培养时间10d,降低生产成本50,且菌种各项生育指标均优.[参考文献][1]汪昭月.食用菌制种技术[M].北京:金盾出版社,2000,52—57.[2]黄年来.中国食用菌百科[M].北京:农业出版社,1993,128.[3]李喜范,李军,等.食用菌EJ].2002(3),35—36.(责任编辑:黄贵平)。

文献著录格式％唐兴国（王伯诚（赖小芳.天麻共生蜜环菌液体种培养基的优化[J].浙江农业科学（2〇1、5% (4):635>37.D O I：10. 16178/j.issn. 0528-9017.20170428天麻共生蜜环菌液体种培养基的优化和^糸冰蚪考2〇17年第58卷第4期唐兴国，王伯诚，赖小芳(台州市农业科学研究院，浙江临海317000)摘要：在传统蜜环菌母种培养基（加富PDA)基础上，通过正交试验获得一种蜜环菌液体种改良培养基配方（栎树枝 100g.L g1,毛竹根50g.L g1,蔗糖20g.L g1,马铃薯200 g.L g1,KH2P〇4 3g.L g1,MgSO*.g •L-1,VB! 10 5g •L-1,p H自然）。

在此培养基上培养的蜜环菌菌球个体更大，菌丝体活力更强，培养14 W后蜜环菌菌丝体产量可达0. 803 2 g • 100 m L-1，为原配方的2. 98倍。

关键词：蜜环菌；天麻；摇瓶培养；培养基中图分类号：<646. 2 文献标志码：A文章编号#0528-9017(2017)04-0635-03蜜环菌（3),是一■种药食兼用菌[1]，与药用植物天麻（S"*〇4,("$)和真菌猪等（相伴生[2]，蜜环菌是天麻无性繁殖阶段的唯一营养源[1]。

在生产上，天麻种植用蜜环菌菌种分为母种（一级）&原种(二级）和栽培种（三级）。

从野生环境中分离纯化得到的母种经扩大培养成为生长旺盛的原种，原种接种于固体培养基形成用于生产的栽培种。

菌种质量的好坏直接影响生产中菌材菌索的数量及健壮程度，而后者则决定了天麻的质量和产量[3]。

目前生产上常用固体加富PD A培养基培养母种，其缺点是菌丝易于老化、菌索细弱长势较差[4]。

原种则多采用固体木屑培养基或液体加富PDA培养基[1(3]，固体木屑培养基培育的原种质量较好，但是培养基配制繁琐，培养周期偏长[5>];液体加富P D A培养基上培养的蜜环菌长势一般，难以满足生产用种需要。

蜜环菌折叠 编辑本段 形态特征蜜环菌 蜜环菌根据其不同的⽣长发育阶段可分为⼦实体和菌丝体两⼤部分。

即发育成熟的蜜环菌蘑菇，是它的繁殖器官。

蜜环菌的⼦实体⾼约5-15厘⽶。

菌盖⾁质，扁半球形，逐渐平展，后下凹，直径约7-9厘⽶，表⾯蜜黄⾊与栗褐⾊，多布以⽑状⼩鳞⽚，菌⾁⽩⾊。

菌柄细长圆柱形，浅褐⾊，稍部近⽩⾊，直径约0.5-2.2厘⽶，纤维质松软，后中空，基部常膨⼤。

菌柄上部接近菌褶处有-较厚的菌环，膜质，松软，有时为双环，⽩⾊有暗⾊斑点。

由于菌盖表⾯呈蜜黄⾊，菌柄上部有环，所以叫"蜜环菌"。

菌褶与菌柄相连，呈贴⽣⾄延⽣，由近⽩⾊逐渐变为污⽩褐⾊，⽼时有锈⾊斑。

孢⼦印⽆⾊或微具黄⾊，光滑，椭圆形或近卵圆形。

[2]菌丝体是蜜环菌的营养器官，为极纤细的丝状体，⾁眼难辨其形状。

在着⽣蜜环菌菌索的树⽪下，能见由⼤量菌丝组成的菌丝块或菌丝束，呈粉⽩⾊或乳⽩⾊。

菌索是菌丝在不良的环境条件下或⽣长后期发⽣的适应性变态，即菌丝体交织⾁结组成绳索状的组织。

菌索外层由菌丝分化形成较为紧密的外表⽪组织，有⼀个尖端，⾊深，⾓质化，是⼀种休眠体。

菌索在⽣长时可以发⽣波长约530微⽶的蓝绿荧光。

菌索主要起运输营养、⽔分和氧⽓的作⽤，同时不断进⾏增殖、延伸和寻找新的营养源。

[2]折叠 编辑本段 主要变种学名命名者年代var.viridiflavaBarla 1887var.minorBarla 1887var.bulbosaBarla 1887var.camerunensis Henn.1895var.exannulataPeck 1893var.flavaPeck 1897var.glabraGillet 1874var.javanicaricina(Bolton) Barla 1887var.maximaBarla 1887var.obscuraGillet 1874var.radicataPeck 1891var.sulphurea(Weinm.)Fr.1879var.tabescens(Scop.)Rea&Ramsb.1917var.versicolor(With.)W.G.Sm.1908subsp.nipponica J.Y.Cha & Igarashi 1995f.rosea Calonge & M.Seq.2003展开[1]折叠 编辑本段 ⽣态环境蜜环菌属⼴布于北美北部和欧洲，主要见于硬⽊森林或针叶树混合林中。

蜜环菌栽培种培养基筛选及胞外酶活性测定杨梅;桂阳;黄万兵;杨静;朱国胜;刘朝贵【摘要】为筛选出最适蜜环菌栽培生产种的培养基，通过生产种培养基组分筛选试验，测量第20天和第40天时菌丝或菌索的生长速度及其胞外酶活性并进行比较。

结果表明：在配方1（70％阔叶木屑，0％棉籽壳，17％麦麸，10％玉米面，1％蔗糖，0．3％磷酸二氢钾，0．2％硫酸镁，0．5％石灰，1％石膏，m水分∶m配料＝1∶1．3）中生长速度最大且最先长满管，且菌丝洁白，与其余不同培养料配方之间生长速度差异显著，而且栽培种培养基含木屑越多，菌株活力越好，越不易形成老化的红褐色菌索；在不同培养料和不同生长阶段其木聚糖酶活性大于CMC 酶和漆酶，漆酶活性最小，为十位级，其他2个酶为百位级；不同培养基中蜜环菌菌丝分泌的胞外酶活性具有显著性差异，但同种酶在不同培养料中酶活性的变化趋势一致。

说明，配方1 可作为蜜环菌适宜的栽培种培养基；不同培养料对胞外酶活性变化趋势影响小，但对其活性影响较大。

%In order to select the most suitable culture medium of A.mellea,the production of medium component was screened by measuring the A.hypha or bacteria growth speed and the extracellular enzyme activity,the authors compared between 20 and 40 days of hypha or rhizomorph of growth speed and extracellular enzyme activity.Results:Growth rate of the hyphae was the biggest and was the first full of tube and white in the formula(broadleaf sawdust70% ,cotton seed shell 0,wheat bran 17%,corn flour 10%,sugar1%,potassium dihydrogen phosphate 0.3%,magnesium sulfate 0.2%,lime 0.5%,gypsum 1%,mwater∶mmaterial=1∶1.3).The growth rate has obvious difference in different nutrient formula,and in culture medium,the morewood hyphae vitality the better,the more difficult to form a red brown rhizomorph;in different culture medium and different growth stages of the activity of xylanase and laccase enzyme is greater than CMC and laccase,the laccase activity is minimum for ten level,others for hundreds of level.Extracellular enzyme activity of A.mellea mycelia secretion of different medium has obvious difference,but the change trend in different culture medium in the same enzyme activity is consistent. Suggests that this formula can be used as armillaria suitable culture medium;different culture material has little effect on the enzyme activity changes in trend,but great influence on the activity of the extracellular enzyme.【期刊名称】《贵州农业科学》【年(卷),期】2015(000)004【总页数】5页(P20-24)【关键词】蜜环菌;培养料;胞外酶;生长速度【作者】杨梅;桂阳;黄万兵;杨静;朱国胜;刘朝贵【作者单位】西南大学园艺园林学院，重庆 400715; 贵州省现代中药材研究所，贵州贵阳 550006;贵州省现代中药材研究所，贵州贵阳 550006;西南大学园艺园林学院，重庆 400715; 贵州省现代中药材研究所，贵州贵阳 550006;西南大学园艺园林学院，重庆 400715; 贵州省现代中药材研究所，贵州贵阳 550006;贵州省现代中药材研究所，贵州贵阳 550006;西南大学园艺园林学院，重庆 400715【正文语种】中文【中图分类】Q939.11蜜环菌[Armillaria(vaiil:Fr.)Kunllner]又名榛蘑，系伞菌目膨瑚菌科蜜环菌属的一种兼性寄生性真菌，广泛分布于世界各地林区[1]。