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高效液相色谱测定葡萄糖酸钙片含量和溶出度的方法研究邓映明;张雁;曾玉梅;刘志辉
【期刊名称】《医药前沿》
【年(卷),期】2022(12)27
【摘要】目的:建立高效液相色谱测定葡萄糖酸钙片的含量和溶出度的方法。
方法:采用色谱柱为安捷伦ZORBAXSBAq(250 mm×4.6 mm,5μm),流动相为0.05 mol·L^(-1)磷酸二氢钾溶液,磷酸调节pH至2.8,流速0.5 mL·min^(-1),检测波长210nm,柱温30℃,进样量10μL。
采用浆法测定葡萄糖酸钙的溶出度,结果:葡萄糖酸钙在0.1103~2.207 mg·mL^(-1)范围内线性关系良好(r=0.9996),平均回收率为100.54%(RSD=0.74%,n=9),检测限为3.8 ng。
样品在45 min的累积溶出量均大于90%。
结论:本方法操作简单、准确性与专属性好,可用于测定葡萄糖酸钙片的含量和溶出度。
【总页数】4页(P6-8)
【作者】邓映明;张雁;曾玉梅;刘志辉
【作者单位】梅州市食品药品监督检验所化学室
【正文语种】中文
【中图分类】R917
【相关文献】
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B片中5种组分的溶出度4.基于特征肽的超高效液相色谱-串联质谱法测定复方胃蛋白酶颗粒的溶出度
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实验室溶出度测定法规程实验室溶出度测定法规程目的建立溶出度测定法标准操作规程。
适用范围溶出度测定。
责任质检员实施本操作规程检验室主任负责监督本规程正确执行。
程序 1.简述 1.1溶出度中国药典2000年版二部附录X C是指药物从片剂或胶囊剂等口服固体制剂在规定溶剂中溶出的速度和程度。
它是评价药物口服固体制剂质量的一个指标是一种模拟口服固体制剂在胃肠道中崩解和溶出的体外简易试验方法。
1.2溶出度测定法是将某种固体制剂的一定量分别置于溶出度仪的转篮或烧杯中在37.0?0.5?恒温下在规定的转速、溶剂中依法操作在规定的时间内测定其溶出的量。
1.3本方法适用于片剂、胶囊剂及颗粒剂的测定。
1.4中国药典2000年版收载三种测定方法第一法转篮法第二法桨法及第三法小杯法。
1.5凡检查溶出度的制剂不再进行崩解时限的检查。
2.仪器与用具 2.1溶出度仪 2.1.1仪器的组成溶出度仪主要由电动机、恒温水浴、篮体、篮轴、搅拌桨、圆底烧杯及杯盖组成详见中国药典2000年版二部附录X C。
2.1.2仪器的装置与使用按仪器使用说明书及中国药典的规定进行安装与使用。
2.1.3仪器的校正为使同一药物的溶出度测定得到良好的再现性应对新安装的溶出度仪采用溶出度校正片进行校正对已使用过的仪器也应定期或在出现异常情况时进行校正。
2.1.3.1溶出度校正片分崩解型和非崩解型两种崩解型为泼尼松片非崩解型为水杨酸片。
目前国内仅有非崩解型校正片。
2.1.3.2校正前应先调式所用仪器。
2.1.3.3溶剂磷酸盐缓冲液PH7.4。
配制方法见中国药典2000年版二部附录XV D要求PH值为7.40?0.05临用前脱气。
2.1.3.4对照品溶液的制备取溶出度乳体中研细精密称取适量约相当于水杨酸10mg置校正用水杨酸片1片精密称定置100ml量瓶中加乙醇1ml摇匀加溶剂适量经超声处理30分钟使水杨酸溶解加溶剂到刻度摇匀经滤纸不宜使用滤膜滤过取续滤液为对照品溶液。
原子吸收光谱法的应用用于样品中所含的金属元素或某些非金属元素的含量测定和限度检查。
测定前必需采纳适当办法将供试品破坏，并在原子化器中将待测元素转化为基态原子。
一、应用范围火焰原子化法(FAAS)适用于测定易原子化的元素，是原子汲取光谱法应用最为普遍的一种，对大多数元素有较高的敏捷度和检测限，且重临性好，易于操作。
石墨炉原子化法也称无火焰原子汲取，简称CFAAS。
火焰原子化虽好，但缺点在于仅有10％的试液被原子化，而90％的试液由废液管排出，这样低的原子化效率成为提高敏捷度的主要障碍；而石墨炉原子扮装置可提高原子化效率，使敏捷度提高10～200倍。
石墨炉原子化法一种是利用热解作用使金属氧化物解离，它适用于有色金属、碱土金属；另一种是利用较强的碳还原气氛使一些金属氧化物被还原成自由原子，它主要针对于易氧化、难解离的碱金属及一些过渡元素。
另外，石墨炉原子化又有平台原子化和探针原子化两种进样技术，用样量都在几到几十微升，尤其是对某些元素测定的敏捷度和检测限有极为显著的充实。
氢化物原子化法对某些易形成氢化物的元素，如Sb、As、Bi、Ge、Se、Pb、Te、Hg和Sn等，用火焰原子化法测定时敏捷度很低，若采纳在酸性介质中用硼氢化钠处理得到氢化物，可将检测限降低至ng/ml级的浓度。
冷蒸气发生原子化器由汞蒸气发生器和原子汲取池组成，特地用于汞的测定，常称为测汞仪。
其他原子化法包括金属器皿原子化法，针对挥发性元素，操作便利，易于把握，但抗干扰能力差，测定误差较大，耗气量较大；粉末燃烧法，测定Hg、Bi等元素时其敏捷度高于一般火焰法；溅射原子化法，适用于易生成难溶性化合物的元素和发射性元素；电极放电原子化法，适用于难熔氧化物金属A1、Ti、Mo、W的测定；等离子体原子化法(ICP)，适用于难熔金属Al、Y、Ti、V、Nb、Re等；激光原子化法，适用于任何形式的固体材料，比如测定石墨中的Ca、Ag、Cu、Li等；闪光原子化法，是一种用高温炉和高频感应加热炉的办法。
溶出度与释放度方法应用指导原则溶出度与释放度方法应用指导原则用于检查药物片剂、胶囊剂或颗粒剂等口服固体制剂在规定条件下溶出的速率和程度。
它是评价药物固体制剂质量的一个指标，是一种模拟口服固体制剂在胃肠道中崩解和溶出的体外简易试验方法。
对于难溶性药物而言，其制剂崩解时限合格并不一定能保证药物完全地溶解出来，也就不能保证具有可靠的疗效，因此崩解时限检查并不能完全正确地反映主药的溶出速率和溶出程度以及肌体的吸收情况。
除主药本身的溶解性能外，制剂处方和生产工艺也影响主药的体外溶出及其生物利用度。
因此，在药物制剂研制阶段，就应进行生物利用度和溶出曲线或释放曲线的相关性研究，仿制药应与原研药在相同的多种溶出条件下进行溶出曲线或释放曲线对比试验，两者应基本一致。
制剂溶出曲线的累积溶出量一般应大于标示量的90%。
1. 在水中微溶至不溶的难溶性药物制剂应进行溶出度检查。
2. 因处方与生产工艺造成临床疗效不稳定的制剂、治疗量与中毒量相接近或不宜释放过快的口服固体制剂（包括易溶性药物），应控制多点溶出量（第一点不应溶出过多，以控制其突释）。
3. 溶出方法的选择；主要有第一法（转篮法）、第二法（桨法）和第三法（小杯法）。
小杯法主要用于在转篮法和桨法条件下，溶出液的浓度过稀，即使采用较灵敏的方法（如UV法使用长光路吸收池等）仍难以进行定量测定的品种。
转篮法和桨法的选择，一般可参照下列原则：（1）对于非崩解型药物，用转篮法较好。
（2）?对于崩解型药物，在进行转篮法的整个过程中，确保转篮网孔的通透性尤为重要，对于处方中辅料或主药影响转篮通透性的固体制剂，一般采用桨法。
同理，制剂中若含有一定的胶性物质，一般不宜用转篮法。
（3）?制剂中含有难以溶解，扩散的成分，选桨法比转篮法好。
（4）对于漂浮于液面的制剂，如果辅料不堵塞网孔，应选用转篮法。
否则，选用桨法并将供试品放入沉降篮中，并在正文中加以规定。
但采用小杯法时不能使用沉降篮。
溶出度测定实验报告(共4篇)溶出度实验数据处理溶出度实验数据处理1.绘制标准曲线2.根据回归方程，计算样品的浓度和溶出百分率3.求溶出累积百分数根据单指数函数公式处理Y=Y∞（1-ekt）式中Y为t时间累积释放百分率，Y∞为相当长时间药物累积释放度（通常为100%），上式整理后得:Log(Y∞-Y)=LogY∞-kt/2.303 即Log（Y∞-Y）对t呈直线关系。
试片药物释放常数k为.......；50s释放百分率为.....代入公式计算得50s累积释放百分率为83.28%.篇二：实验十溶出度检查实验十溶出度检查一、实验目的1、掌握用转篮法测定片剂溶出度的操作步骤、结果计算和判断标准2、熟悉溶出度测定仪的使用方法3、巩固紫外-可见分光光度计的正确使用二、实验原理溶出度系指药物从片剂、胶囊剂或颗粒剂或固体制剂在规定条件下溶出的速度和程度。
凡检查溶出度的制剂，不再进行崩解时限的检查。
A?溶出度（%）?1?D?1000100?100% 1%E1?Scm按中国药典的规定，判断是否合格。
规定限度（Q）为标示量的75%。
三．实验仪器和试剂：1.仪器：溶出度仪、紫外-可见分光光度计、超声仪、注射器、微孔滤膜、吸量管、烧杯、2.试药：吡哌酸片（规格0.25g）四、实验内容：1. 溶出度仪调试：对溶出度仪器装置进行调试，使桨叶底部距离溶出杯的内底部15mm±2mm。
2. 溶出度测定：取供试品6片，分别投入6个转篮内，奖转篮降入容器内，开始计时。
经30分钟时，取溶液滤过，精密量取续滤液2ml，加0.04%氢氧化钠溶液稀释成100ml，摇匀；照紫外分光光度法在273nm 的波长处测定吸光度，计算含量与溶出度。
按吡哌酸的吸收系数(E 1％1cm）为1339计算每片的溶出度。
五、结果和分析1. 结果2. 结果判断符合下列条件之一者判为合格。
（1）6片中，每片的溶出量按标示量计算，均不低于规定限度（Q）。
（2）6片中，如有1~2片低于Q，但不低于Q -10%，且其平均溶出量不低于Q；（3）6片中，有1~2片低于Q，其中仅有1片低于Q -10%，但不低于Q -20%，且其平均溶出量不低于Q时，应取6片复试；初、复试的12片中，有1~3片低于Q，其中仅有1片低于Q -10%，但不低于Q -20%，且其平均溶出量不低于Q。
实验三十四葡萄糖酸钙片溶出度的测定一、实验目标1．明确药物体外溶出、释放试验的意义，完成溶出度的测定；2．学会溶出、释放试验的数据处理方法，熟悉溶出仪的使用。
二、实验药品与器材药品葡萄糖酸钙片、15%氢氧化钠、蒸馏水、0.01mol/L EDTA-2Na 、紫脲酸铵指示剂等；器材分析天平、溶出仪、微型电子计算机、架盘天平、乳钵、移液管、滴定管、烧杯、滤纸、玻璃棒、容量瓶、量杯、量筒、铁架台等。
三、实验内容1．葡萄糖酸钙片的含量测定取本品10片，精密称定，研细，精密称定适量(约2片重)，加水50ml 微热溶解，放冷至室温，移至100ml 量瓶中，用水稀释至刻度，摇匀用干燥滤纸过滤，弃去初滤液，精密量取滤液25ml ，加水75ml 稀释，精密量取20ml ，加15%氢氧化钠3ml ，取指示剂少许，用0.01mol/L EDTA-2Na 滴定至溶液自红色转变为紫色（1ml0.01mol/L EDTA-2Na 相当于葡萄糖酸钙4.484mg ）。
计算本品百分含量。
2．样品的测定取本品6片，分别精密称定片重，按《中国药典》转篮法操作。
量取蒸馏水800ml ，加热至37℃±0.5℃，篮转速为50r.pm 。
投入一精密称定的药片，并记时，按5min 、10min 、15min 、20min 、30min 、45min 、60min 定时取样，每次取溶液25ml ，同时补入等量的37℃释放介质，过滤，精密量取滤液20ml ，照上述1法测定，（自加“15%氢氧化钠……”起）。
3．数据处理记录测定数据，填入下表1。
表1.葡萄糖酸钙片溶出度的测定片重mg 每片百分含量最大溶出药量M ∞mgM ∞=每片片重×百分含量F(t)=(M t /M ∞)×100%分别绘制F(t))－t 曲线图、ln(1-F (t ))－t 曲线图、ln(ln(1/(1-F (t ))))－ln(t-t0)曲线图。
实验室溶出度测定法规程目的：建立溶出度测定法标准操作规程。
适用范围：溶出度测定。
责任：质检员实施本操作规程，检验室主任负责监督本规程正确执行。
程序：1.简述1.1溶出度（中国药典2000年版二部附录X C）是指药物从片剂或胶囊剂等口服固体制剂在规定溶剂中溶出的速度和程度。
它是评价药物口服固体制剂质量的一个指标，是一种模拟口服固体制剂在胃肠道中崩解和溶出的体外简易试验方法。
1.2溶出度测定法是将某种固体制剂的一定量分别置于溶出度仪的转篮（或烧杯）中，在37.0±0.5℃恒温下，在规定的转速、溶剂中依法操作，在规定的时间内测定其溶出的量。
1.3本方法适用于片剂、胶囊剂及颗粒剂的测定。
1.4中国药典2000年版收载三种测定方法，第一法转篮法第二法桨法及第三法小杯法。
1.5凡检查溶出度的制剂，不再进行崩解时限的检查。
2.仪器与用具2.1溶出度仪2.1.1仪器的组成溶出度仪主要由电动机、恒温水浴、篮体、篮轴、搅拌桨、圆底烧杯及杯盖组成，详见中国药典2000年版二部附录X C。
2.1.2仪器的装置与使用按仪器使用说明书及中国药典的规定进行安装与使用。
2.1.3仪器的校正为使同一药物的溶出度测定得到良好的再现性，应对新安装的溶出度仪采用溶出度校正片进行校正，对已使用过的仪器也应定期（或在出现异常情况时）进行校正。
2.1.3.1溶出度校正片分崩解型和非崩解型两种，崩解型为泼尼松片，非崩解型为水杨酸片。
目前国内仅有非崩解型校正片。
2.1.3.2校正前，应先调式所用仪器。
2.1.3.3溶剂：磷酸盐缓冲液（PH7.4）。
配制方法见中国药典2000年版二部附录XV D，要求PH值为7.40±0.05，临用前脱气。
2.1.3.4对照品溶液的制备取溶出度校正用水杨酸片1片，精密称定，置乳体中，研细，精密称取适量（约相当于水杨酸10mg），置100ml量瓶中，加乙醇1ml，摇匀，加溶剂适量，经超声处理30分钟，使水杨酸溶解，加溶剂到刻度，摇匀，经滤纸（不宜使用滤膜）滤过，取续滤液为对照品溶液。
葡萄糖酸钙含量的测定葡萄糖酸钙含量的测定实验目的：1.强化滴定法的操作2.强化分析天平，容量瓶移液管，吸量管，滴定管，锥形瓶，溶液配制及转移容量仪器的洗涤干燥，滴定分析操作实验原理：)/(1000)()()(22L mmol V EDTA V EDTA C ca C ??=+水样1，EDTA 是常用的螯合滴定剂，可滴定多种金属离子，与金属离子按1:1的比例结合2.在待测液中加入钙红指示剂（蓝色）它与钙离子配位呈红色3.滴定时，EDTA 先与游离钙离子配位，然后夺取已和指示剂配位的钙离子，从而使指示剂被释放出来，达终点时，溶液由红色变为蓝色，此时可根据EDTA 标准溶液消耗量计算出钙离子的含量仪器与试剂:仪器：分析天平，100ml 容量瓶，5ml 吸量管滴定管，锥形瓶，烧杯，滴定台，药勺,洗耳球，玻璃棒，胶头滴管试剂:待测葡萄糖酸钙粉末，钙红指示剂，蒸馏水，0.05 mol/L 的EDTA 标准溶液实验步骤:1，用分析天平称量3g葡萄糖酸钙粉末2.将葡萄糖酸钙粉末溶于10ml50～60℃的蒸馏水中3. 将葡萄糖酸钙溶液转移到100ml容量瓶中，用胶头滴管加入蒸馏水至刻度线4.从容量瓶中取出部分溶液到烧杯中，用吸量管吸取20.00ml溶液到锥形瓶中，0.05mol/L的EDTA标准溶液加入到滴定管中，记下初始读数，6.开始滴定，当溶液由红色变成蓝色时停止滴定，记下此时读数，7.再重复滴定两次数据记录与结果分析日期：温度：结实验编号 1 2 3 葡萄糖酸钙溶液V(EDTA)/mlV初(EDTA)/mlV(EDTA)/mlV平均(EFTA)/ml相对平均偏差 /％葡萄糖酸钙含量/％讨论。
实验三十四葡萄糖酸钙片溶出度的测定
一、实验目标
1．明确药物体外溶出、释放试验的意义，完成溶出度的测定；
2．学会溶出、释放试验的数据处理方法，熟悉溶出仪的使用。
二、实验药品与器材
药品葡萄糖酸钙片、15%氢氧化钠、蒸馏水、0.01mol/L EDTA-2Na 、紫脲酸铵指示剂等；器材分析天平、溶出仪、微型电子计算机、架盘天平、乳钵、移液管、滴定管、烧杯、滤纸、玻璃棒、容量瓶、量杯、量筒、铁架台等。
三、实验内容
1．葡萄糖酸钙片的含量测定取本品10片，精密称定，研细，精密称定适量(约2片重)，加水50ml 微热溶解，放冷至室温，移至100ml 量瓶中，用水稀释至刻度，摇匀用干燥滤纸过滤，弃去初滤液，精密量取滤液25ml ，加水75ml 稀释，精密量取20ml ，加15%氢氧化钠3ml ，取指示剂少许，用0.01mol/L EDTA-2Na 滴定至溶液自红色转变为紫色（1ml0.01mol/L EDTA-2Na 相当于葡萄糖酸钙4.484mg ）。
计算本品百分含量。
2．样品的测定取本品6片，分别精密称定片重，按《中国药典》转篮法操作。
量取蒸馏水800ml ，加热至37℃±0.5℃，篮转速为50r.pm 。
投入一精密称定的药片，并记时，按5min 、10min 、15min 、20min 、30min 、45min 、60min 定时取样，每次取溶液25ml ，同时补入等量的37℃释放介质，过滤，精密量取滤液20ml ，照上述1法测定，（自加“15%氢氧化钠……”起）。
3．数据处理记录测定数据，填入下表1。
表1.葡萄糖酸钙片溶出度的测定片重mg 每片百分含量最大溶出药量M ∞mg
M ∞=每片片重×百分含量
F(t)=(M t /M ∞)×100%
分别绘制F(t))－t 曲线图、ln(1-F (t ))－t 曲线图、ln(ln(1/(1-F (t ))))－ln(t-t0)曲线图。
四、实验指导
溶出度、释放度的测定方法有：转篮法、浆叶法、小杯法等，测定时按药典规定操作，要注意测定的温度、释放介质、转速、取样位置等因素。
溶出、释放试验数据的手工处理较时间t (min)
5101520304560EDTA-2Na 体积V (ml)
溶出药量X (mg)
累积溶出药量M t (mg)
累积溶出百分率F(t)
本品45min 标示溶出百分率
（药典规定本品45min 限量为标示量的75%）
一级速率模型
ln(1－F (t ))
ln(1－F (t ))—t 回归
溶出速率常数K
斜率b 1截距a 1r Weibull 分布模型
时滞t0
ln(t －t0)
ln(ln(1/(1－F (t ))))
ln(ln(1/(1－F (t ))))—ln(t-t0)回归
模型参数斜率b 2截距a 2r
αβT 0.50T d
为繁琐，如使用有关软件，则十分方便，如PKBP-N1。
这里介绍MS Excel计算单指数模型、Weibull分布模型的溶出、释放速率参数方法。
(参见《中国医院药学杂志》1999，4)
1.数据计算启动Excel，输入表1中数据，建立工作表。
计算X(mg)、M t(mg)、F(t)等值。
依单指数模型和Weibull模型处理，累积溶出百分率采用小数(Excel可格式为百分数)，计算1-F(t)、ln(1－F(t))和ln(ln(1/(1－F(t))))—ln(t－t0))等项的值，自然对数函数为LN()，时滞t0的单元格值预置为零，公式中注意t0值单元格的绝对引用。
如F(t)超过100%，则将1-F(t)取绝对值，绝对值函数为ABS()。
如F(t)为1则不参与计算。
2.绘制曲线图使用“图表向导”工具或“插入”菜单中的“图表”命令，分别绘制F(t)－t曲线图、ln(1－F(t))－t曲线图(线性1)和lnln(1/(1－F(t)))－ln(t－t0)曲线图(线性2)，图表类型选择“X—Y散点图”。
3.参数的计算分别用斜率函数SLOPE(known_y's,known_x's)(下同)、截距函数INTERCEPT()和相关系数函数CORREL()计算两个线性的斜率、截距和相关系数r。
亦可用回归参数函数LINEST()计算。
(1)单指数模型线性1直线方程y1=a1+b1x1斜率b1的绝对值，即为单指数模型的溶出速率常数K。
(2)Weibull模型从线性2直线方程y2=a2+b2x2的斜率b2、截距a2，计算形状参数α、尺度参数β，
α=b2β=EXP(-a2/b2)
式中EXP()为自然指数函数。
位置参数时滞t0的计算，方法一：试取t0值即在时滞值单元格中试着改变数值，根据Excel动态显示的回归参数如相关系数，确定最佳线性(使r最接近于1)，得t0值；方法二：打开“视图”菜单“工具栏”中的“窗体”工具，创建t0微调调节按钮，步长可为0.01，链接到时滞值单元格，调节该按钮同上法判断，得t0值。
相应的计算和图表Excel予以自动更新，无需重复操作。
参数T0.50、T d：根据WEIBULL函数，编制公式，计算T0.50、T d等参数。
T0.50=EXP((LN(LN(2))－a2)/b2)+t0
T d=EXP((LN(LN(1/0.368))－a2)/b2)+t0
利用Excel提供的WEIBULL()函数可方便地计算F(t)的理论值，公式为“=WEIBULL(t-t0,α,β,TRUE)”。
五、思考题
1．测定固体制剂的溶出度有何意义？举例说明。
2．简述固体制剂溶出、释放试验的方法及模型处理。
3.某药物的溶出释放试验结果如下表(F(t)为累积溶出百分率)，试分别用零级释药模型、一级释药模型、Higuchi方程和WEIBULL模型进行拟合处理，计算有关参数(速度常数，T0.50、T d等)。
时间(h)123467*********
F(t)0.300.460.580.730.830.880.920.960.99 1.00 1.00。
