保肾通络方对DN模型小鼠肾脏病理改变及足细胞损伤的影响研究
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通络方药对糖尿病肾病的保护作用与机制探讨刘岩;邹俊杰;李文桐;李翔;夏培金;孙亮亮;张春阳;刘志民【期刊名称】《第二军医大学学报》【年(卷),期】2007(28)3【摘要】目的:探讨通络方药对糖尿病大鼠肾脏损害的保护作用,及对肾皮质氧自由基代谢状态及抗氧化酶活性的影响。
方法:选择雄性SD大鼠予链脲佐菌素55mg/kg单次腹腔注射诱发糖尿病,3 d后血糖≥16.7 mmol/L者视为造模成功。
将糖尿病模型鼠随机分为模型组(DM)、通络方药处理组(TLR)、褪黑素处理组(MEL),正常鼠作为正常对照组(CN),每组7只。
TLR组每天灌服通络方药水溶液1g/kg,MEL组灌服褪黑素溶液5 mg/kg,其余两组均灌服等体积稀释液。
连续处理12周,麻醉下取肾脏组织进行电镜病理观察并用比色法测定肾皮质超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性及丙二醛(MDA)含量。
结果:与CN组相比,DM组大鼠24 h尿蛋白排泄量明显增加(P<0.01),经通络方药及褪黑素处理后,蛋白排泄量明显降低(P<0.01)。
电镜下可见DM组大鼠肾小球系膜细胞和内皮细胞增生肿胀,足突融合、消失,系膜基质增多,基底膜厚度不均匀增加,线粒体数目增多、肿胀,线粒体嵴减少、形态紊乱。
经Mel、通络方药处理后,上述改变有所好转。
与CN组比较,DM组大鼠肾皮质内MDA含量升高,GSH-Px、SOD水平下降(P<0.05),经通络方药与褪黑素处理后,MDA含量较DM组有所下降,其中MEL组MDA含量下降更明显,显著低于DM组(P<0.05),GSH-Px、SOD水平稍有升高,但较DM组差异无统计学意义(P>0.05)。
结论:通络方药可降低糖尿病大鼠肾脏蛋白排泄,改善肾小球基底膜结构,具有保护糖尿病肾病的作用;但其仅轻微降低肾脏MDA含量,抗氧化损伤作用不明确。
【总页数】5页(P281-285)【关键词】糖尿病肾病;通络方药;褪黑激素;氧化性应激【作者】刘岩;邹俊杰;李文桐;李翔;夏培金;孙亮亮;张春阳;刘志民【作者单位】第二军医大学长征医院内分泌科【正文语种】中文【中图分类】R587.24【相关文献】1.基于p38 MAPK通路探讨疏肝健脾方药含药血清对LPS刺激下大鼠Kupffer细胞炎症损伤保护作用的机制 [J], 韩莉;林春梅;金玲;王攀攀;李媛媛;杨钦河;张玉佩;梁荫基;李树成;龚享文;王观龙;张金文2.通络宁心汤防治吡柔比星致大鼠心脏毒性的保护作用及机制探讨 [J], 孔嘉欣;李涛;冯肖卿;苏旭春;程玲;邓粤敏3.通络生骨胶囊对软骨氧化损伤的保护作用及其机制探讨 [J], 林惠湦;李译;陈妮;魏军渔4.养阴活血方药对糖尿病大鼠肾脏的保护作用及机制探讨 [J], 梁金环;栗彦宁;齐锦生;李彬5.基于入脑成分的网络药理学方法探讨益气通络颗粒保护脑缺血再灌注损伤的作用机制 [J], 姜云耀;刘楠;刘建勋因版权原因,仅展示原文概要,查看原文内容请购买。
固本通络汤对糖尿病肾病模型大鼠FN、LN、C-Ⅳ表达的影响李凤婷;李梦;岳顺卿;耿建国【期刊名称】《山东中医药大学学报》【年(卷),期】2012(36)2【摘要】目的:探讨固本通络汤防治糖尿病肾病(DN)的作用机制。
方法:将SD雄性大鼠48只,随机分为正常组、模型组、氯沙坦组(西药组)、固本通络汤大、中、小治疗组(固大组、固中组、固小组),以单侧肾切除加注射链脲佐菌素建立糖尿病肾病模型,观察大鼠肾脏纤维连接蛋白(FN)、层粘连蛋白(LN)、Ⅳ型胶原蛋白(C-Ⅳ)的表达。
结果:与模型组比较,固大组、固中组FN表达降低(P<0.05),西药组、固本通络汤各组LN、C-Ⅳ表达降低(P<0.01,P<0.05);与西药组比较,固大组、固中组FN表达降低(P<0.05),C-Ⅳ表达降低(P<0.01);与固小组比较,固大组、固中组FN表达降低(P<0.05)。
结论:固本通络汤能降低DN大鼠肾组织细胞外基质成分FN、LN、C-Ⅳ的表达,并有一定的肾脏保护作用。
【总页数】2页(P142-143)【关键词】固本通络汤;糖尿病肾病;纤维连接蛋白;层粘连蛋白;Ⅳ型胶原蛋白;大鼠;实验研究【作者】李凤婷;李梦;岳顺卿;耿建国【作者单位】首都医科大学中医药学院;河南省平顶山市医学会【正文语种】中文【中图分类】R285.5【相关文献】1.肾糖颗粒对糖尿病肾病大鼠C-Ⅳ与FN表达的影响 [J], 熊荣兵;傅晓骏;何立群2.通络保肾复方对LPS刺激的肾小球系膜细胞表达TGF-β、FN、LN的影响 [J], 宇汝翠;张雁;李平;张梅;陆智慧;温跃才3.解毒通络保肾胶囊对糖尿病肾病大鼠肾组织中Col Ⅳ及FN表达的影响 [J], 王秀阁;赵金祥;朴春丽;陈曦;高林花4.固本通络汤对糖尿病肾病模型大鼠TGF-β1、MMP-9、TIMP-1表达的影响 [J], 李凤婷;李梦;王馨瑶;耿建国5.固本通络汤对糖尿病肾病大鼠肾小管问质p38MAPK表达的影响 [J], 李凤婷;李梦;耿建国因版权原因,仅展示原文概要,查看原文内容请购买。
益气养阴通络方对IgA肾病模型大鼠肾脏组织肿瘤坏死因子-α的影响强胜;杜珍芳;黄敏;马晓伟;周奕岑【期刊名称】《实用临床医药杂志》【年(卷),期】2017(021)017【摘要】目的探讨益气养阴通络方对IgA肾病模型大鼠血尿、蛋白尿及对其肾脏组织病理的影响.方法 60只雄性清洁级SD大鼠,随机分为空白组、模型组、黄葵组与中药(益气养阴通络方)高、中、低剂量组,于造模前及造模后第4、8、12、16周末对各组大鼠24 h尿蛋白定量、尿红细胞计数进行检测,同时给药后8周分别通过HE染色法、免疫组化法检测各组大鼠肾组织病理变化及TNF-α表达情况.结果与空白组比较,模型组、黄葵组、中药高、中、低剂量组大鼠给药8周后尿红细胞计数、24 h尿蛋白、TNF-α表达均不同程度增高(P<0.05);与模型组比较,黄葵组、中药高、中、低剂量组给药8周后尿红细胞计数、24h尿蛋白、TNF-α表达显著降低(P<0.05),且中药组给药8周上述指标均显著低于黄葵组(P<0.05).光镜显示空白组大鼠肾组织结构正常,模型组大鼠多数肾小球系膜细胞和基质出现中、重度增生,肾间质出现炎性细胞浸润伴灶状纤维化;各治疗组肾小球系膜细胞和系膜基质增生程度均有一定程度缓解.结论益气养阴通络方可减少IgA肾病模型大鼠血尿、蛋白尿,减轻肾脏组织病变,其作用机制可能与其降低尿红细胞数、24h尿蛋白,抑制肾脏TNF-α表达有关.【总页数】5页(P64-68)【作者】强胜;杜珍芳;黄敏;马晓伟;周奕岑【作者单位】江苏省张家港市中医医院,江苏张家港,215600;江苏省张家港市中医医院,江苏张家港,215600;江苏省张家港市中医医院,江苏张家港,215600;江苏省张家港市中医医院,江苏张家港,215600;江苏省张家港市中医医院,江苏张家港,215600【正文语种】中文【中图分类】R692【相关文献】1.益气养阴通络方对2型糖尿病大鼠骨骼肌、脂肪组织GLUT4蛋白表达的影响[J], 杨化冰;吴勇;徐丹林;邱幸凡2.糖尿病性脑病大鼠行为学与脑组织形态学的改变及益气养阴解毒通络方对其的影响 [J], 宋福印;王永炎;黄启福3.益气养阴解毒通络方对糖尿病大鼠血浆、脑组织神经肽Y和神经降压素的影响[J], 宋福印;王永炎;黄启福4.益气养阴活血通络方对糖尿病肾病大鼠肾组织ET-1表达的影响 [J], 罗静;王韶军;舒惠荃5.益气养阴通络方对糖尿病肾病模型大鼠肾脏组织TNF-α的影响 [J], 秦益敏;孙伟;杜珍芳;强胜;马晓伟因版权原因,仅展示原文概要,查看原文内容请购买。
益气固肾通络方治疗早期糖尿病肾脏病临床观察效果作者:***来源:《现代养生·上半月》2022年第08期【摘要】目的探讨益气固肾通络方对早期糖尿病肾脏病(DN)的成效。
方法选取2019年1月- 2020年2月到医院接受治疗的60例早期DN患者,通过入院就诊先后顺序法,依次将这些患者分成观察组与对照组,每组各30例。
对照组采用基础治疗+氯沙坦钾。
观察组采用基础治疗+益气固肾通络方。
对比分析两组患者的临床证候积分、临床效果及各临床指标表现,如尿素氮(BUN)、肌酐(SCR)、内生肌酐消除情况(CCR)、尿微量白蛋白排出情况(UAER)。
结果治疗前,两组患者的中医症后积分对比差异无统计学意义(P>0.05),同时两组各项临床指标对比差异也无统计学意义(P>0.05)。
经过治疗后,观察组中医证候积分明显低于对照组;观察组总有效率明显高于对照组;观察组的BUN、SCR、CCR及 UAER指标均优于对照组;上述指标组间比较差异均有统计学意义(P<0.05)。
结论益气固肾通络方进行干预治疗的效果好转程度较明显,以及扭转了UAER排除不完全的情况。
可成为干预治疗早期DN首选处方。
【关键词】糖尿病肾病;益气固肾;尿微量白蛋白中图分类号 R259 文献标识码 A 文章编号 1671-0223(2022)15--03糖尿病肾脏病(DN)目前中医没有统一的名称来概括,但大部分医学学者认为DN是一种由消渴病长期引发的肾脏并发症,可称为气阴性、脾肾衰弱、肾虚血阻和气瘀,肾功能毒损,脾肾虚亏。
近年来在中医治疗中,诊治DN药物分别使用益气滋阴、健脾、补肾、活血、通瘀阻的血液循环、肾排毒等[1]。
根据国内外文献和对大量DN患者的临床表现分析,认为血管系统疾病在早期普遍存在,且处于DN的不同阶段,具有不同的发病特点:发病伊始,病点发生在肝脏部位,表现为肾气两虚,脉络阻滞;疾病转移,阴阳损伤、脾肾供不应求;疾病晚期,肾功能衰竭,肾功能减退,毒素淤积在体内,五脏损伤。
益肾通络解毒汤对糖尿病肾病大鼠肾脏功能的阻碍【摘要】目的:观看益肾通络解毒汤对糖尿病肾病大鼠肾脏损害的爱惜作用。
方式:对12月龄糖尿病肾病大鼠的一样状态、常规生化指标进行检测。
结果:益肾通络解毒汤医治的中药实验组与苯那普利医治的阳性对照组的肾重/体重比值、Ccr显著低于DN模型组,且DN 模型组大鼠的血清BUN、CRE均明显高于正常组,益肾通络解毒汤医治的中药实验组和苯那普利医治的阳性对照组的血清BUN、CRE较DN模型组均明显降低。
结论:益肾通络解毒汤能够改善糖尿病肾病大鼠一样状态,具有必然的调剂糖脂代谢的作用;能够抑制糖尿病肾病大鼠初期肾脏肥大及高滤过,具有减少尿蛋白排出的作用;能够降低糖尿病大鼠升高的血清BUN、CRE、Ccr,具有必然的爱惜肾功能的作用。
【关键词】益肾通络解毒汤血糖血脂肾功能尿微量白蛋白与尿蛋白含量实验研究糖尿病肾病(DN)是糖尿病的常见严峻微血管并发症之一,已成为终末期肾功能衰竭(ESRF)的要紧缘故,故对DN的初期防治显得尤其重要。
实验作为本课题机理研究的基础,观看益肾通络解毒汤对糖尿病肾病大鼠肾脏损害的爱惜作用。
1 材料与方式药品与试剂链脲佐菌素(STZ)由Sigma公司生产;益肾通络解毒汤为长春中医药大学第一附属医院制剂室自制,由生地、人参、枸杞子、黄芪、土茯苓等8味药组成;尿微量白蛋白酶免疫试剂盒购自上海德波生物技术。
动物 Wistar大鼠,雄性,180-230g/只。
仪器全自动生化分析仪(日今日立,7150型),GAMMA C12γ放射免疫测定仪(天津DPC公司制造),DG3022A酶联免疫检测仪(国营华东电子管厂制造)。
动物模型及分组大鼠60只在适应性喂养7d后,禁食但不由水12h,按体重随机分为2组,即正常对照组10只(A组),DN模型制作组50只。
模型制作组单次腹腔注射STZ 52mg/kg(临用前用L枸橼酸缓冲液溶解,,正常对照组仅腹腔注射等体积上述缓冲液。
益肾通络方对膜性肾病大鼠肾组织中NF-κB、MMP-2表达的影响檀金川;田力铭;张姝媛;张林;袁国栋【期刊名称】《中国老年学杂志》【年(卷),期】2010(030)021【摘要】目的观察益肾通络方对膜性肾病(MN)大鼠肾组织中核因子(NF)-κB、基质金属蛋白酶(MMP)-2的影响.方法将SD大鼠随机分为正常组、模型组、贝那普利组、中药组,各组按相应剂量灌胃,于第9周末观察24 h尿蛋白定量、血清总蛋白(TP)、白蛋白(ALB);免疫荧光、电镜及免疫组化法检测各组大鼠NF-κB、MMP-2在肾组织的表达.结果与正常组比较,模型组大鼠出现大量蛋白尿,血清TP、ALB 均明显降低,血清TC、TG均明显升高, 肾脏病理出现损害,肾小球内NF-κB、MMP-2表达显著增强(P<0.05);与模型组相比较,各治疗组24 h尿蛋白定量,总胆固醇(TC)及甘油三酯(TG)均明显降低,血清TP、ALB均明显升高,肾脏病理损害较轻,肾小球内NF-κB、MMP-2表达减少(P<0.05).中药组与贝那普利组比较无明显差异(P>0.05).结论益肾通络方可显著降低MN大鼠尿蛋白、提高血浆蛋白,改善血脂代谢,能够抑制NF-κB、MMP-2在肾组织中的表达,减轻足细胞融合,促进受损的肾小球基底膜(GBM)修复,从而减轻肾脏损伤,延缓肾脏慢性病理进展.【总页数】3页(P3111-3113)【作者】檀金川;田力铭;张姝媛;张林;袁国栋【作者单位】河北医科大学中医院,河北,石家庄,050011;河北医科大学中医院,河北,石家庄,050011;河北医科大学第一医院;河北医科大学研究生院;河北医科大学研究生院【正文语种】中文【中图分类】R692【相关文献】1.益肾通络方对膜性肾病SD大鼠肾组织纤溶酶原激活物抑制因子-1及生化、病理指标的影响 [J], 王刚;袁国栋;檀金川2.益肾通络方对膜性肾病大鼠肾组织中乙酰肝素酶、转化生长因子β1表达的影响[J], 张倩;范华平;张秀侠;白中山;秦聪;杨晨;檀金川3.益肾通络方对膜性肾病大鼠肾组织Nephrin、Podocin mRNA表达的影响 [J], 靳晓华;任美芳;郭晓玲;康丽霞;司钰媚;杨凤文;袁国栋;崔领秀;檀金川4.保肾方Ⅱ号对糖尿病肾病大鼠肾组织中MMP-2和TIMP-2表达的影响 [J], 郑桂敏;张胜容5.通络益肾温阳方对糖尿病肾病大鼠肾组织α-SMA、TNF-α的影响 [J], 董正华;赵雪莲;赵延红;李小会;杨轶;曾福海因版权原因,仅展示原文概要,查看原文内容请购买。
清热益气通络方对DN大鼠肾小球病理及氧化应激的影响朱海慧;叶学锋;谢春光【期刊名称】《浙江中医药大学学报》【年(卷),期】2014(000)002【摘要】[目的]研究清热益气通络方治疗大鼠糖尿病肾病的作用机制。
[方法]采用单侧肾切除腹腔注射链脲佐菌素方法建立大鼠糖尿病肾病模型。
将成模大鼠分为模型组、中药组和厄贝沙坦组,连续治疗12W。
观察各组①肾组织超氧歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、丙二醛(MDA)含量;②肾小球横截面积(glomerular area, GA)、系膜区面积(mesangium area, MA)、MA/GA、肾小球基底膜厚度(glomerular basement membrane thickness, GBMT)、足突平均宽度(width of the podocyte foot processes, FPW)、足突融合率(foot process fusion rate, FPFR)。
[结果]与正常组比,模型组大鼠肾组织MDA增高,SOD、CAT、GSH-Px降低(P<0.01);GA、MA、FPW、FPFR及GBMT增高,MA/GA降低(P<0.01或P<0.05)。
清热益气通络方能降低糖尿病大鼠肾组织MDA 及GA、MA、FPW 、FPFR 、GBMT(P<0.01或P<0.05),升高SOD、CAT水平(P<0.01或P<0.05);其提高SOD、CAT,降低MDA及PFPR的作用优于厄贝沙坦(P<0.05)。
[结论]清热益气通络方对DN具有治疗和保护作用,其机制可能与提高肾组织抗氧化物质,减轻DN大鼠肾脏氧化应激损伤,从而改善DN 大鼠肾脏病理有一定关系。
%[Objective]To investigate the mechanism of Qingre Yiqi Tongluo(QRYQTL) fang in treating the diabetic nephropathy. [Methods]60 Sprague-Dawleg rats were divided into normal controlgroup(N), Diabetic nephropathy model group(M) (model rats were prepared by intraperitoneal injection with STZ after unilateral nephrectomy), then the model rats were assigned into model control group, QRYQTL fang treatment group(Q) and Irbesartan treatment group(I). After 12 weeks of the treatment, the contents of superoxide dismutase(SOD),catalase(CAT),glutathione peroxidase(GSH-Px) and malondialdehyde (MDA) in renal tissue were examined by enzyme linked immunoassay(ELISA); the glomerular area(GA), mesangiumarea(MA),MA/GA, mean width of the podocyte foot processes(FPW) ,foot process fusion rate(FPFR) and average thickness of glomerular basement membrane(GBMT) were measured. [Results]Compared with N group, the contents of MDA in kidney homogenate and the GA,MA, FPW,FPFR,GBMT were markedly increased (P<0.01or P<0.05),the contents of SOD,CAT, GSH-Px and MA/GA were significantly decreased( P<0.01or P<0.05). QRYQTL fang reduced the level of MDA and decreased the GA, FPW, FPFR and GBMT(P<0.01or P<0.05). Compared with I group ,the QRYQTL fang was superior to Irbesartan in reducing the MDA, FPFR as wel as increasing the SOD,CAT(P<0.05).[ Conclusions]QRYQTL fang has a protective effect on the experimental diabec-tic nephropathy rats. The mechanism may be related to inhibiting oxidative stress, improving the body ’s antioxidant ability and al eviating the glomerular morphologic injury.【总页数】5页(P196-200)【作者】朱海慧;叶学锋;谢春光【作者单位】成都中医药大学临床医学院成都 610072; 陕西中医学院;成都中医药大学附属医院;成都中医药大学附属医院【正文语种】中文【中图分类】R331【相关文献】1.清热益气通络方对DN 大鼠蛋白尿的作用机制研究 [J], 朱海慧;叶学锋;谢春光2.清热益气通络方治疗DN大鼠蛋白尿机理研究 [J], 朱海慧;叶学锋;谢春光3.益气和血通络方对大鼠实验性心肌缺血氧化应激反应的影响 [J], 钟慧群;赵芸芸;张文风4.清热益气通络方对DN大鼠肾小球P-cadherin、FSP1表达的影响 [J], 朱海慧;叶学锋;谢春光5.益气活血通络方对急性脑梗死大鼠炎症因子、氧化应激指标及神经细胞凋亡的影响 [J], 闰振文;郑眉光;李梅因版权原因,仅展示原文概要,查看原文内容请购买。
通络益肾方不同给药时期对DN大鼠足细胞损伤的影响李小会;雷根平;李京涛;王军;樊珊杉;谷浩荣【期刊名称】《中国中西医结合肾病杂志》【年(卷),期】2017(018)004【摘要】目的:观察通络益肾方对糖尿病肾病(DN)大鼠足细胞超微结构及骨架蛋白表达的影响.方法:60只SD大鼠随机抽取10只为假手术组,余大鼠采用右肾切除+腹腔注射链脲佐菌素制备DN模型.成模后的大鼠随机分为DN模型组(模型组),缬沙坦治疗组(西药组),通络益肾方早期给药组(中药早期组)、6周给药组(中期给药组)、8周给药组(晚期给药组).每组10只.西药组予缬沙坦7.2 mg/kg灌胃,中药组予通络益肾方水煎液13.6 g/kg灌胃.中药早期组在造模成功后即予中药灌胃,中药中期和晚期组分别在造模成功后第6周、第8周开始中药灌胃.假手术组及模型组予蒸馏水灌胃.每日1次,共6周.检测大鼠24h尿蛋白定量(24 h PRO)、尿白蛋白、肾功能;透射电镜观察足细胞超微结构,免疫组化法检测α-actintin-4、synaptopodin、F-actin表达,RT-PCR检测Nephrin、CD2AP、α-actinin-4、synaptopodin、F-actin mRNA的表达.结果:(1)与假手术组比较,模型组24 h PRO、尿白蛋白、血尿素氮、血肌酐均明显升高(P<0.01).与模型组比较,西药组、中药早期组、中药中期组上述指标均明显下降(P<0.01);与中药早期组比较,中药中期和晚期组各检测指标均不同程度升高(P<0.01,P<0.05);(2)足细胞超微结构的变化:模型组足细胞结构不清、数目减少、密度降低,骨架纤维排列紊乱;西药组及中药各治疗组足细胞病变减轻,足细胞较为完整,足突排列相对整齐,细胞骨架纤维排列相对整齐,足突融合减轻;中药早期组优于中药中期组和中药晚期组;(3)免疫组化结果显示:与假手术组比较,模型组α-actintin-4、synaptopodin、F-actin表达显著下降(P<0.01).与模型组比较,西药组、中药早期组、中期组上述指标均明显升高(P<0.01,P<0.05),中药晚期组差异无统计学意义(P>0.05);(4)与假手术组比较,模型组Nephrin、CD2AP、α-actinin-4、synaptopodin、F-actin mRNA表达均明显下降(P<0.01).与模型组比较,西药组及中药早期、中期组的各基因表达均显著升高(P<0.01,P<0.05),中药晚期组synaptopodin和F-actin表达差异无统计学意义(P>0.05).结论:通络益肾方可通过上调DN大鼠足细胞裂孔隔膜蛋白及骨架蛋白的表达而发挥其保护足细胞,抑制DN进展的作用,且给药时间越早,持续时间越长,效果愈显著.%Objective:To study the effect of Tongluoyishen Prescription on podocyte ultrastructure and related proteins expression by using Unilateral nephrectomy and intraperitoneal injection of Streptozotocin (STZ) diabetic nephropathy (DN) rats model.Methods:60 SD rats were randomly divided into sham-operation group (n =10),the other rats were treated with right nephrectomy and intraperitoneal injection of streptozotocin to prepare DN model.Successful model rats were randomly divided into DN group (model group),Valsartan treatment group (Western medicinegroup),Tongluoyishen early administration group (early group),6 weeks treatment group (medium-term group),8 weeks treatment group (late group).10 rats in each group.Rats in the Western medicine group were administered with valsartan by gastrogavage,while the traditional chinese medicine group were treated with Tongluoyishen Decoction by gastrogavage.The early group were given Tongluoyishen Decoction after the success of modeling,the medium-term and late groups were given decoction at the 6th week and the 8th week after the model establishment.Sham-operation group and model group were givendistilled water.Once a day,total of 6 weeks.24-hour urinary protein (24 h UPRO),urinary albumin,serum creatinine and blood urea nitrogen of each group were detected,the ultrastructure of glomerular podocytes was observed by transmission electron microscopy,the expressions of α-actinin-4,synaptopodin and F-actin were detected using immunohistochemistry.Nephrin,CD2 AP,α-actinin-4,synaptopodin and F-actin mRNA in podocytes were detected by RT-PCR.Results:(1) Compared with the sham-operation group,the 24 h UPRO,urinary albumin,blood urea nitrogen and serum creatinine in the model group were significantly increased (P < 0.01).Compared with the model group,the above-mentioned indexes of the western medicine group,the early group and the medium-term group were significantly decreased (P < 0.01).Comnpared with the early group,the detection indexes of medium-term group and late group were all increased (P < 0.01,P < 0.05).(2) Changement of podocyte ultrastructure:In the model group,the podocyte structure was unclear,the number reduced,the density decreased,and the arrangement of skeletal fibers was disorder.In the western medicine group and the Chinese medicine groups,the podocyte lesion were alleviated,the podocytes were relatively complete,the foot processes and the arrangement of the cytoskeletal fibers were neat,foot process fusion reduced.The early group is superior to the medium-term group and late group.(3) The results of immunohistochemistry showed:the expression of α-actinin-4,synaptopodin and F-actin in the model group decreased significantly (P < 0.01) compared with the sham-operated pared with the modelgroup,the expression of the above-mentioned indexes in the western group,the early Chinese medicine group and the medium-term Chinese medicine group were all significantly higher (P < 0.01,P < 0.05),and there were no significant difference in the late group (P > 0.05).(4)The expression of Nephrin,CD2 AP,α-actinin-4,synaptopodin and F-actin mRNA in the model group decreased significantly (P <0.01) compared with the sham-operated group (P <0.01).Compared with the model group,the genes expression of the western medicine group and the early group and medium-group were significantly increased (P < 0.01,P < 0.05),the synaptopodin and F-actin mRNA expression were no significant difference in the late group (P > 0.05).Conclusion:Tongluoyishen Prescription can protect podocytes and inhibit DN progression by up-regulating podocyte split diaphragm protein and skeleton protein expression,and the earlier administration,the longer duration,the more significant effect.【总页数】7页(P296-300,后插4-后插5)【作者】李小会;雷根平;李京涛;王军;樊珊杉;谷浩荣【作者单位】陕西中医药大学基础医学院咸阳712000;陕西中医药大学附属医院咸阳712000;陕西中医药大学附属医院咸阳712000;陕西中医药大学附属医院咸阳712000;陕西中医药大学附属医院咸阳712000;陕西中医药大学基础医学院咸阳712000【正文语种】中文【相关文献】1.祛风通络方对阿霉素肾病大鼠Pododcin mRNA表达及足细胞足突形态的影响[J], 孙万森;赵艳龙;任艳芸;马巧亚2.祛风通络方对阿霉素诱导的肾病大鼠足细胞Synaptopodin、α-Actinin-4蛋白的影响 [J], 王竹;孙万森;刘俊田;李睿萍;王晔3.化瘀通络中药全方及拆方对DN大鼠血液相关指标及肾脏足细胞ZO-1表达的干预作用 [J], 方敬;陈志强;王月华;郭倩;张江华4.祛风通络方对阿霉素肾病大鼠超微结构及足细胞相关蛋白CD2 AP和整合素α3β1表达的影响 [J], 全建峰;杨宁;孙万森;马巧亚5.保肾通络方对DN模型小鼠肾脏病理改变\r及足细胞损伤的影响研究 [J], 崔方强;赵文景;高彦彬;王悦芬;朱智耀;孟元;蔡朕;杨增坤因版权原因,仅展示原文概要,查看原文内容请购买。
益肾通络方对肾病综合征大鼠肾功能的保护作用【摘要】目的:观察益肾通络方对实验性肾病综合征大鼠肾功能的保护作用。
方法:采用尾静脉注射阳离子化牛血清白蛋白造模。
将40只雄性SD大鼠随机分为模型组、益肾通络方组、肾炎四味片组、正常对照组,每组10只。
造模后予以药物干预,共给药4 w。
采用化学比色法检测24 h尿蛋白,光镜下切取肾组织进行病理形态学观察。
结果:与模型组比较,肾炎四味片组和益肾通络方组大鼠24 h尿蛋白量明显降低(P<0.01);而2组之间比较,益肾通络方组大鼠24 h 尿蛋白量降低更显著(P<0.01)。
病理形态学观察:模型组肾小球呈局灶性节段性硬化,肾小管上皮细胞水肿,部分小管腔内可见蛋白管型,肾间质纤维化;肾炎四味片组以上改变较同期模型组轻,而益肾通络方组显著减轻。
结论:益肾通络方能降低大鼠尿蛋白,保护肾功能。
【关键词】肾病综合征益肾通络方尿蛋白大鼠Abstract Objective:To observe the protective effects of Yishen Tongluo decoction on renal function of rats with nephrotic syndrome. Methods:40 SD rats were randomly divided into normal group,model group,Shenyan Siwei pill treatment group,Yishen Tongluo decoction treatment group(n=10). Exceptfor normal group,the rats of other groups were injected cationic bovine serum albumin(C-BSA) through tail veins,then treatment drugs were given to corresponding rats for 4 weeks. 24 h proteinuria of rats were measured by chemical colorimetry,and kidney tissues of rats were observed by light microscopy. Results:Compared with the model group,the contents of 24 h proteinuria of Shenyan Siwei pill treatment group and Yishen Tongluo decoction treatment group were decreased obviously(P <0.01). Compared with Shenyan Siwei pill treatment group,the contents of 24 h proteinuria of Yishen Tongluo decoction treatment group were decreased obviously(P<0.01). In the pathological sections of model group,focal segmental glomerular sclerosis,dropsy in renal tubular epithelial cells,protein cast in some renal tubules and tubulointerstitial fibrosis could be seen. Compared with the model group,the pathology changes of Shenyan Siwei pill treatment group were decreased,and those of Yishen Tongluo decoction treatment group were decreased significantly. Conclusions:Yishen Tongluo decoction can decrease proteinuria of rats and protect renal function of rats with nephrotic syndrome.Key words nephrotic syndrome; Yishen Tongluo decoction;proteinuria; rat肾病综合征(nephrotic syndrome,NS)是多种病因引起肾小球基底膜通透性增高,使大量血浆蛋白由尿中丢失而导致的一种综合征,临床具有大量蛋白尿、低蛋白血症、高胆固醇血症、不同程度的水肿四大特点。
基于足细胞损伤的中药治疗糖尿病肾病分子机制研究进展宫彩霞; 王志强【期刊名称】《《中国中医药信息杂志》》【年(卷),期】2019(026)012【总页数】5页(P136-140)【关键词】中药; 糖尿病肾病; 足细胞; 凋亡; 氧化应激; 转分化; 信号通路【作者】宫彩霞; 王志强【作者单位】石家庄平安医院河北石家庄 050012; 中国人民解放军联勤保障部队第九八〇医院河北石家庄 050082【正文语种】中文【中图分类】R285.5糖尿病肾病(diabetic nephropathy,DN)是糖尿病最常见的严重微血管并发症之一,也是导致终末期肾病的主要原因[1]。
研究表明,足细胞损伤在DN的发生发展过程中起重要作用[2]。
近年来,中医药治疗DN尤其是中药有效成分在防治DN方面取得了良好疗效。
了解足细胞损伤的分子机制有助于探寻中药干预足细胞损伤的靶点,为中药防治DN提供新的思路和依据。
本文就近年来中药及其有效成分对DN足细胞损伤保护的分子机制做一综述。
足细胞与肾小球基底膜(GBM)的紧密结合是维持肾小球滤过屏障结构完整性并防止尿蛋白排泄的病理学基础。
研究显示,肾病患者尿沉渣中不但存在死亡足细胞,也存在正常足细胞[3]。
此外,正常人尿液中也可培养出足细胞,整联蛋白α3、β1参与足细胞的黏附功能,是足细胞与GBM紧密结合的关键受体[4],高糖可下调足细胞整联蛋白α3、β1表达,同时激活整联蛋白结合激酶(ILK)。
Jim等[5]研究认为,糖尿病患者的足细胞标志性蛋白如synaptopodin、podocin和nephrin表达显著降低,可引起足细胞细胞骨架异常、黏附功能损伤,进而导致足细胞与GBM分离。
Chen等[6]研究发现,黄芪甲苷可上调链脲佐菌素诱导DN大鼠足细胞整联蛋白α3、β1表达,抑制ILK表达,来保护足细胞。
Gui等[7]的在体和体外实验显示,三七皂苷能通过上调足细胞整联蛋白α3、β1表达来改善糖尿病足细胞黏附功能异常。
通络方防治大鼠肾小球硬化的作用机制吴喜利;孙万森;张王刚;王竹【期刊名称】《南方医科大学学报》【年(卷),期】2008(028)007【摘要】目的观察通络方对肾组织中Ⅳ型胶原(Col Ⅳ)、纤维连接蛋白(FN)、层粘连蛋白(LN)及转化生长因子β1(TGF-β1)表达的影响,探讨通络方防治大鼠肾小球硬化的作用机制.方法通过光镜观察治疗组肾脏病理学改变,同时应用免疫组化技术及网像采集分析系统测定各组大鼠肾脏组织中Ⅳ-C、FN、LN、TGF-β1表达情况.结果通络方可明显降低大鼠肾组织中Col Ⅳ、FN、LN、TGF-β1表达(P<0.05或P<0.01),减轻肾脏的病理损害(P<0.01).结论通络方可能是通过降低肾脏组织中Col Ⅳ、FN、LN及TGF-β1表达起到治疗作用的.【总页数】4页(P1198-1201)【作者】吴喜利;孙万森;张王刚;王竹【作者单位】西安交通大学医学院第二附属医院中西医结合科,陕西省中医重点专科肾病科,陕西,西安,710004;西安交通大学医学院第二附属医院中西医结合科,陕西省中医重点专科肾病科,陕西,西安,710004;西安交通大学医学院第二附属医院血液科,陕西,西安,710004;西安交通大学医学院第二附属医院中西医结合科,陕西省中医重点专科肾病科,陕西,西安,710004【正文语种】中文【中图分类】R285.5【相关文献】1.清热益气通络方对DN 大鼠蛋白尿的作用机制研究 [J], 朱海慧;叶学锋;谢春光2.益气活血通络方对博莱霉素致肺纤维化大鼠TGF-β1/Smads言号通路的作用机制研究 [J], 周薇;涂艳3.通络方防治肾小球硬化的药效学研究 [J], 吴喜利;孙万森;张王刚;乔成林;王娟;王竹4.通络糖泰方对GK大鼠糖尿病周围神经病变炎症反应的作用机制研究 [J], 景兴文;谢春光5.滋脾通络方对糖尿病肾病大鼠的疗效及作用机制 [J], 程亚伟; 邱晓堂; 丁一; 吴小翠; 张永杰因版权原因,仅展示原文概要,查看原文内容请购买。
-1414・中国老年学杂志2019年3月第39卷解毒通络保肾法对实验性DM大鼠肾足细胞凋亡相关因子Bax.Bcl-2、Caspase-3的影响何泽]成光宇2吕美香'丛婷婷'吴春炜"(长春中医药大学附属医院1内分泌代谢病科,吉林长春130021;2实验中心;长春中医药大学32014级中西医结合内科硕士研究生;42017级中医内科硕士研究生)〔摘要〕目的探讨解毒通络保肾法对实验性糖尿病(DM)大鼠肾足细胞保护作用机制。
方法60只Wistar大鼠,雌雄各半,给予高糖高脂饲料,适应性隈养1w,随机分为阴性对照组(A组,n=10),其余为造模组。
喂养4w后,造模组用链脓佐菌素50mg/kg腹腔注射造模;造模成功的大鼠随机分为模型组(B组,n=10)、中药组(C组,n=10)o C组给予解毒通络保肾散每次4ml,日灌胃1次;A、B组大鼠给予等体积蒸憎水。
灌胃8w后,观察各组大鼠空腹血糖(FPG)、血清肌酹(Scr)、尿素氮(BUN),尿微量白蛋白(mAlb)的变化情况,取肾脏,制备肾组织匀浆。
采用酶联免疫吸附试验检测大鼠肾脏足细胞凋亡相关因子Bax,Bcl-2及半胱氨酸天冬氨酸特异性蛋白酶(Caspase)^蛋白表达水平。
结果与A组相比,B、C组Bax、Caspase-3及Bax/Bcl-2表达均显著增加,Bcl-2表达显著降低(P<0.05,P<0.01);与B组相比,C组Bax、Caspase-3及Bax/Bcl-2表达均显著降低,Bcl-2表达显著上升(Pv0.01,P<0.05)。
结论解毒通络保肾法能够降低实验性DM大鼠空腹血糖,保护肾功能,减少尿蛋白的产生,其机制可能是下调Bax表达,上调Bcl-2表达,致Bax/Bcl-2比例下降,从而减少细胞凋亡执行蛋白酶Caspase-3的产生,起到抑制足细胞凋亡的作用,保护肾小球滤过屏障。
〔关键词〕糖尿病肾病;解毒通络保肾法;足细胞;Bax;Bcl-2;半胱氨酸天冬氨酸特异性蛋白酶-3〔中图分类号〕R285.5 〔文献标识码〕A〔文章编号〕10U5・9202(2019)06・14144)4;doi:10.3969/j.issrn1005-9202.2019.06.043足细胞为肾小球滤过屏障的重要组成部分,在维持肾小球滤过膜结构和功能上具有重要作用,在糖尿病(DM)及非DM肾小球疾病中,足细胞数量减少可直接引起蛋白尿及肾小球硬化,且足细胞数量的减少与肾小球硬化程度呈正相关⑴。
保肾通络方对KK-Ay小鼠及高糖培养下足细胞凋亡及p53通路的作用研究郭弋凡;张宁;刘羽飞;庞彦余;赵婧文;崔方强;刘梦超;王梦迪;赵文景【期刊名称】《中国中西医结合肾病杂志》【年(卷),期】2024(25)3【摘要】目的:探讨保肾通络方对KK-Ay小鼠及高糖培养下足细胞凋亡及p53通路的影响。
方法:将KK-Ay小鼠高脂饲料喂养建立糖尿病模型,造模成功后随机分为模型组(10只)与保肾通络方组(10只),另设10只C57BL/6J小鼠作为对照组;根据培养条件不同将体外小鼠肾小球足细胞(MPC5)分为正常对照组、高糖组、保肾通络方含药血清组。
测定小鼠24 h尿蛋白定量(24 h-UTP)水平并进行肾组织病理学检查,CCK-8法检测足细胞活力,Western blot检测足细胞凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax、cleaved-caspase3及p53、p-p53的表达,TUNEL染色观察各组足细胞凋亡情况。
结果:与对照组相比,模型组小鼠24 h-UTP显著升高(P<0.01),肾小球系膜细胞增生,细胞外基质增多,肾小球凋亡细胞比例及cleaved-caspase3蛋白表达增加(P<0.05),肾组织抗凋亡蛋白Bcl-2表达降低,促凋亡蛋白Bax表达增加,p53磷酸化水平增加(P<0.01);保肾通络方干预使KK-Ay小鼠24 h-UTP显著降低(P<0.01),肾脏病理改善,肾小球凋亡细胞比例及cleaved-caspase3蛋白表达减少(P<0.05),Bcl-2、Bax及p-p53表达恢复(P<0.05)。
体外研究显示,高糖组足细胞活力明显降低(P<0.01),足细胞凋亡比例及cleaved-caspase3蛋白表达增加(P<0.05);Bcl-2表达减少,Bax和p-p53表达增加(P<0.05);而保肾通络方含药血清能够恢复足细胞活力(P<0.01),抑制细胞凋亡发生并降低高糖诱导的足细胞p-p53的表达(P<0.05)。
通络方剂对糖尿病大鼠肾脏氧化应激的影响张春阳;邹俊杰;石勇铨;曲卫;孙亮亮;刘志民【期刊名称】《第二军医大学学报》【年(卷),期】2008(29)8【摘要】目的:研究两种剂型通络方剂(超微粉和微粉)对糖尿病SD大鼠肾脏氧化应激的影响。
方法:链脲佐菌素(60 mg/kg)腹腔注射诱导糖尿病大鼠。
1周后测血糖≥16.7 mmol/L为糖尿病,将大鼠随机分为糖尿病对照组(DMC,n=7)、通络方剂超微粉组(DM+UT,n=8)和通络方剂微粉组(DM+FT,n=8)3组,同时取8只大鼠作为正常对照组(NC)。
DM+UT组和DM+FT组按每天1 g/kg UT或FT灌胃,NC 和DMC组给予等量的生理盐水溶液。
干预4周后,测肾质量/体质量(KW/BW)和24 h尿蛋白(24 h UP),比色法检测肾皮质抗氧化酶和丙二醛(MDA),实时PCR法检测NADPH氧化酶亚基p47phox和p22phox mRNA表达的改变。
结果:与正常大鼠相比,糖尿病大鼠肾皮质MDA含量、24 h UP和KW/BW升高,总超氧化物歧化酶(TSOD)活性降低,谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性升高,均有统计学意义;正常大鼠与糖尿病大鼠间过氧化氢酶(CAT)活性差异无统计学意义。
与DMC组相比,两个通络方剂干预组糖尿病大鼠肾皮质MDA、24 h UP和KW/BW明显降低;TSOD和GSH-Px活性增强,差异均有统计学意义。
DMC组和两个通络方剂组间CAT活性差异无统计学意义。
其中DM+UT组对24 h UP、KW/BW、MDA、TSOD和GSH-Px的作用较DM+FT组更明显,差异有统计学意义。
与正常大鼠相比,糖尿病大鼠肾皮质NADPH氧化酶亚基p47phox mRNA表达增强,差异有统计学意义。
与DMC组相比,两个通络方剂干预组p47phox mRNA表达降低,差异有统计学意义,但两干预组间差异无统计学意义。
在各实验组间NADPH氧化酶亚基p22phox mRNA表达的差异无统计学意义。
糖尿病肾病(Diabetic Nephropathy,DN)是糖尿病最主要的微血管病变之一,已成为欧美发达国家终末期肾病的首要原因[1]。
据统计我国糖尿病患者中DN的发病率已占39.7%[2]。
尽管我们已经采取积极的早期临床干预,但是并没有有效地阻止DN的进展。
因此探讨DN的发病机制,探寻新的保肾通络方对DN模型小鼠肾脏病理改变及足细胞损伤的影响研究崔方强1赵文景1高彦彬2王悦芬1朱智耀2孟元1蔡朕1杨增坤3(1.首都医科大学附属北京中医医院,北京100010;2.首都医科大学中医药学院,北京100069;3.德州市平原县恩城镇卫生院,山东德州253103)摘要 目的:探讨保肾通络方对糖尿病肾病(DN)模型小鼠肾脏病理改变及足细胞损伤的影响。
方法:KK-Ay小鼠随机分为模型组、保肾通络方组、缬沙坦组,另外选取10只C57BL/6J小鼠作为正常对照组。
KK-Ay小鼠予高脂饲料喂养4周,造成糖尿病肾病(DN)小鼠模型,C57BL/6J小鼠予普通饲料喂养。
造模成功后,保肾通络方组按生药20g/kg每日灌胃,缬沙坦组按10mg/kg每日灌胃,正常对照组和模型组灌胃等量蒸馏水。
实验期间正常对照组普通饲料自由饮食,其他各组高脂饲料自由饮食,连续干预12周。
比较干预前和干预4、8、12周时各组小鼠24h尿蛋白定量,比较各组小鼠干预12周后血肌酐(Scr)、血尿素氮(BUN)水平以及肾脏足细胞裂孔隔膜蛋白(nephrin)、结蛋白(desmin)的蛋白和mRNA表达,观察各组小鼠肾组织苏木精-伊红(HE)、过碘酸雪夫(PAS)染色后病理形态。
结果:与正常对照组相比,模型组小鼠24h尿蛋白定量和Scr、BUN水平明显升高(P<0.05);与模型组相比,保肾通络方组与缬沙坦组小鼠上述指标明显降低(P<0.05)。
与正常对照组比较,模型组小鼠肾组织体积增大,系膜细胞增生,细胞外基质增多;与模型组比较,给药组小鼠肾组织体积减小,系膜细胞数目减少,细胞外基质增生减轻。
与正常对照组相比,模型组小鼠足细胞nephrin蛋白及mRNA表达水平下调(P<0.05),desmin蛋白及mRNA表达水平上调(P<0.05);与模型组相比,给药组小鼠足细胞nephrin蛋白及mRNA表达水平上调(P<0.05),desmin蛋白及mRNA表达水平下调(P<0.05)。
保肾通络方组与缬沙坦组上述指标比较差异均无统计学意义(P>0.05)。
结论:保肾通络方可以降低DN模型小鼠尿蛋白水平,改善肾功能,减轻肾脏病理改变,延缓DN进展,其分子机制可能与上调DN小鼠足细胞nephrin蛋白表达,下调desmin蛋白表达,减轻足细胞损伤有关。
关键词 保肾通络方;糖尿病肾病;肾;足细胞损伤;病理学;小鼠;实验研究;雄性中图分类号R289.5文献标志码A文章编号1672-397X(2019)08-0082-04基金项目 国家自然科学基金青年项目(81703989);北京市自然基金面上项目(7182069,7172096)[11] T IMMES T R,ROTHBAUM R,KIRTI,et al.Gastrin-releasing peptide-expressing nerves comprise subsets o f human cutaneous Aδ and C fibers that May s ense pruritus[J].J Invest Dermatol,2013,133(11):2645.[12] M AO Q,SHI L,WANG Z G,et al.Chemical profiles a nd pharmacological activities of Chang-Kang-Fang,a multi-herb Chinese medicinal formula,for treating i rritablebowel syndrome[J].J Ethnopharmacol,2017,201:123. [13] D E VADDER F,PLESSIER F,GAUTIER-STEIN A,et al.Vasoactive intestinal peptide is a local mediatorin a gut-brain neural axis activating intestinal g luconeogenesis[J].Neurogastroenterol Motil,2015,27(3):443.[14] Y ISSACHAR N,ZHOU Y,UNG L,et al.An intestinalorgan culture system uncovers a role for the nervous s ystem in microbe-immune crosstalk[J].Cell,2017,168(6):1135.第一作者:杨璐(1984—),女,医学硕士,主治中医师,研究方向为中医脾胃病。
通讯作者:刘万里,博士,主任中医师,博士研究生导师。
1480537828@修回日期:2019-03-29编辑:吴 宁doi:10.3969/j.issn.1672-397X.2019.08.028治疗靶点显得至关重要。
研究表明,足细胞损伤是导致DN患者蛋白尿产生及肾脏病理改变的重要病理机制[3-5]。
裂孔隔膜蛋白(nephrin)是足细胞的标志蛋白,对于维持足细胞正常的结构及功能起着至关重要的作用。
结蛋白(desmin)是足细胞损伤的标志蛋白,在足细胞损伤时其表达明显上调。
因此nephrin表达下调及desmin表达上调是足细胞损伤的一个重要标志[6-7]。
保肾通络方是由北京中医医院肾病科协定处方保肾方Ⅱ号加虫类药(蝉蜕、地龙、全蝎)组方而成,临床防治DN疗效确切[8],但其作用机制尚不明确。
本实验观察保肾通络方对KK-Ay小鼠足细胞nephrin及desmin表达的影响,进而探讨其改善DN肾功能、减轻肾脏病理损伤的分子机制。
1 实验材料1.1 实验动物 无特定病原体动物级(SPF)雄性KK-Ay小鼠及SPF雄性C57BL/6J小鼠,8周龄,体重(30±5)g,购自北京华阜康生物科技股份有限公司,实验动物许可证号:SCXK(京)2014-0004。
本实验方案已通过首都医科大学附属北京中医医院实验动物伦理委员会审核批准(实验动物福利伦理号:2018040202)。
1.2 药物与试剂 保肾通络方由生黄芪30g、党参15g、生地30g、女贞子20g、菟丝子20g、鬼箭羽15g、三棱10g、水蛭5g、蝉蜕9g、地龙6g、全蝎6g组成。
本实验应用的保肾通络方颗粒剂由首都医科大学附属北京中医医院药剂科制备,每1g颗粒剂含4.01g 生药,临床成人用量为每日1.91g(生药)/kg。
柠檬酸/柠檬酸钠缓冲液(北京鼎国昌盛生物技术有限公司,0.1mol/L,pH为4.4,批号32J00101),Nephrin抗体(abcam公司,ab183099),Desmin抗体(abcam公司,ab32362),尿蛋白定量检测试剂盒(南京建成,货号C035-2),肌酐测定试剂盒(ROCHE,瑞士,批号657881),尿素氮测定试剂盒(ROCHE,瑞士,批号658513),缬沙坦胶囊(北京诺华制药有限公司,批号X1440)。
1.3 主要仪器 酶标仪(北京市新风机电技术公司,ZS-3),离心机(Sigma,3K18),实时荧光定量PCR仪(PRISM 7700,ABI,美国),血糖仪及配套试纸(美国强生公司),全自动生化分析仪(上海科华生物工程股份有限公司),电泳仪(北京鼎国昌盛生物技术有限责任公司,DG-300C),迷你双垂直电泳槽(北京市六一仪器厂,DYCZ-24DN),迷你转印电泳槽(北京市六一仪器厂,DYCZ-40D)。
2 实验方法2.1 造模、分组与给药 8周龄雄性KK-Ay小鼠予高脂饲料(北京华阜康生物科技股份有限公司,许可证号:SCXK京2014-0008)喂养4周,另外选取10只C57BL/6J小鼠作为正常对照组(NC),予普通饲料(北京华阜康生物科技股份有限公司,许可证号:SCXK京2014-0008)喂养4周。
4周后检测KK-Ay 小鼠随机血糖,≥16.7mmol/L且24h尿蛋白升高为造模成功。
造模成功的KK-Ay小鼠采用数字表法随机分为模型组(DN)、保肾通络方组(BSF)、缬沙坦组(XST),每组10只。
保肾通络方组按生药20g/kg每日灌胃,缬沙坦组按10mg/kg每日灌胃,正常对照组和模型组灌胃等量蒸馏水,连续给药12周。
实验期间正常对照组普通饲料自由饮食,其他各组高脂饲料自由饮食,饲养温度22℃左右,湿度60%,光照黑暗时间为每日12h/12h。
2.2 指标检测2.2.1 24h尿蛋白定量 分别于干预前和干预4、8、12周代谢笼收集小鼠24h尿液,离心半径8cm,3000r/min离心10min后按Elisa试剂盒说明书用酶联免疫吸附法测定尿蛋白定量。
2.2.2 血肌酐(Scr)、尿素氮(BUN)水平 于干预12周末麻醉小鼠后心尖取血,静置20min左右,离心半径8cm,2000r/min离心20min,分离血清,检测血肌酐、尿素氮水平。
2.2.3 苏木精-伊红(HE)、过碘酸雪夫(PAS)染色观察肾组织病理 处死小鼠后摘取左侧肾脏,去除包膜,4%多聚甲醛固定,石蜡包埋切片,程序化脱蜡后,分别移入伊红及无色盐基性品红溶液中染色,流水冲洗切片10min,用苏木精染液复染细胞核5~10min,再用1%盐酸酒精分化,流水冲洗干净,程序化脱水透明,中性树脂封片,光学显微镜下观察肾组织的病理形态学改变。
2.2.4 蛋白质免疫印迹(WB)检测nephrin、desmin蛋白表达 处死小鼠后摘取右侧肾脏,去除包膜及周围结缔组织,用灭菌剪刀剪碎肾脏,加入已经配置好的裂解液,冰上裂解30min,离心后取上清,完成蛋白提取,BCA方法检测蛋白浓度,利用10%SDS-PAGE 凝胶进行蛋白电泳,每组取20µL样品依次加入指定的电泳槽中,并取3µL Marker加入上样槽中。
电泳结束后进行转膜,一抗1∶500稀释后4℃孵育过夜,二抗孵育2h,ECL试剂暗室内胶片曝光,扫描胶片,用图像分析软件分析目标条带。
2.2.5 实时荧光定量PCR(RT-PCR)检测nephrin、desmin mRNA表达 采用Trizol提取小鼠肾脏总RNA,向样本中加入5mL Trizol,室温放置5min,加入0.2mL氯仿,震荡混匀,保存5~10min,离心后取出最上层,依次加入预冷异丙醇、75%DEPC 乙醇,离心后去除乙醇,加入DEPC处理过的水溶解沉淀。