生化试剂sop
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丙氨酸氨基转移酶测定试剂(ALT)
(酶法)
1. 检测原理
本试剂采用国际临床化学联合会(IFCC)推荐方法:
丙氨酸+α-酮戊二酸−
−→
−ALT丙酮酸+L-谷氨酸
丙酮酸+NADH+H+−
−→
−LDH L-乳酸+NAD++H2O
NADH氧化成NAD+引起340nm处吸光度的下降,下降速率与样品中ALT活性成正比。2.标本采集与处理
2.1 受检者的准备:
病人空腹12h,不饮酒24h后采集血样。体检对象抽血前应有两周的的正常状况记录。注意有无应用影响测试项目的药物。此外,对于体检者,采血的季节都应做相关记录,因为样本中各项目的含量有季节性变动,为了前后比较应在每年同一季节检验。应嘱体检对象在抽血前24小时内不做剧烈运动。
2.2 静脉采血:
除非是卧床的病人,一般在采血时取坐位。体位影响水分在血管内外的分布,会影响测试项目的浓度。在采血前至少应静坐5分钟,一般从肘静脉取血,使用止血带的时间不超过1分钟,穿刺成功后立即松开止血带。
2.3 抗凝剂:
血浆使用肝素或EDTA(1mg/mL)作为抗凝剂
2.4 标本的处理和储存:
1血标本室温放置30min~45min后离心分离血清,置洁净试管加盖低温保存。
2标本在2-8℃可稳定3天,避免溶血。
3.试剂
3.1 试剂及配套品:
3.1.1试剂:本科使用重庆中元生物技术有限公司ALT试剂盒,为液体双试剂,各组分如下:
试剂R1:
Tris缓冲液NADH 100mmol/L 0.3mmol/L
试剂R2:
Tris缓冲液100mmol/L
α-酮戊二酸85mmol/L
L-丙氨酸 800mmol/L
LDH ≥8.5kU/L
不同批号试剂盒中各组份不能互换。
3.1.2配套品:无配套品。
3.2 试剂的稳定性:
1.原包装试剂储存在2-8℃至标签所示失效日期。试剂的有效期为12个月。
2.试剂开瓶后,在仪器中至少可保存30天
4:校准
4.1校准血清:朗道复合校准品
4.2校准方式:使用去离子水与校准血清两点定标。。
4.3校准间隔:建议每日进行空白定标,校准周期为15天
5.质控
5.1质控品:使用朗道复合质控。
5.2 质控品的稳定性:
1.原包装储存在-20℃至标签所示失效日期。质控品的有效期为24个月。
2.复溶后的质控品在25℃可以稳定8小时,2~8℃可稳定1星期,-20℃至少可稳定1个月(只可冻融1次)。
5.3 操作注意事项:
质控品复溶时,注意先将其置于室温(18~20℃)避光平衡1小时后,加入去离子水进行复溶操作,为避免内容物的损失,注意将小瓶轻轻旋转,并将小瓶倒置以确保所有冻干品完全溶解。注意复溶30min后使用。
5.4质控规则:WESTGARD多规则质控,L-J质控图。
6.仪器
东芝TBA-120FR型全自动生化分析仪
7.操作程序
样品为血清或肝素/EDTA抗凝血浆,本法速率法。参数见后附,附录A。
试剂参数设置、定标操作以及样本检测常规操作,见仪器操作规程。
8.计算
(1)、使用校准品定标
样品ΔA/min
ALT(U/L) = --------------------------×校准品浓度
校准品ΔA/min
(2)、使用理论F值计算
ALT(U/L)=△A/min× F理论F值=3510
9.操作性能
9.1 精密度:
批内CV<5%,批间CV< 10%。
9.2 准确度:
测量结果在朗道复合质控血清靶值±2SD范围内。不同方法学试剂的质控结果之间会存在差异,使用时请确保质控选择与试剂的方法学保持一致。
9.3 分析灵敏度:
在检测范围内,试剂分析灵敏度应≥0.080mA·L/U。
9.4 分析测量范围:
检测范围:5~1000U/L,相关系数r应≥0.990。
9.5 可报告范围:
当测定结果在分析测量范围以外时,稀释标本进行复查。要求稀释倍数≤8,以生理盐水进行稀释。报告结果为:稀释后的结果*稀释度。可报告范围:5~8000 U/L
9.6 分析特异性(抗干扰):
样本中胆红素≤300μmol/L、乳糜≤0.30%时,对检测结果的干扰小于10%
10.方法学比对
请参见《试剂方法学比对》
11.参考区间
男性: 9-40U/L 女性: 7-40U/L
12.临床意义
ALT是一种参与人体蛋白质新陈代谢的酶,有加快蛋白质和氨基酸在体内转化的作用,它广泛存在于人体各种组织、器官、肌肉、骨骼中,以肝细胞细胞浆中最多。当人体内各组织器官损伤或病变时,ALT释放到血液中,使血液中ALT含量增加。只要有少量的肝细胞损伤,就可以使ALT增高,因此,ALT被世界卫生组织(WHO)推荐为肝功能损伤最敏感的检测指标之一。心肌梗塞、病毒性肝炎、肝坏死、肝硬化等均会引起血液中ALT活力的升高。13.注意事项
1.本品仅用于体外诊断。如与人体接触,应用大量水冲洗。
2.不同批次的试剂请勿混用。
3.试剂如需废弃,请用大量水稀释后再处理。
14.参考文献
1. 叶应妩等,全国临床检验操作规程(第3版). 东南大学出版社.2006:406~410.
2.Prati D, Taioli E, Zanella A, et al. Updated definitions of healthy ranges for serum alanine aminotransferase levels[J]. Annals of Internal Medicine, 2002, 137(1):1-10.
天门冬氨酸氨基转移酶测定试剂(AST)
(酶法)
1. 检测原理
本试剂采用国际临床化学联合会(IFCC)推荐的方法:
天冬氨酸+α-酮戊二酸−
−AST草酰乙酸+L-谷氨酸
−→
草酰乙酸+NADH+H+−
−MDH L-乳酸+NAD++H2O
−→
NADH氧化成NAD+引起340nm处吸光度的下降,下降速率与样品中AST活性成正比. 2.标本采集与处理
2.1 受检者的准备:
病人空腹12h,不饮酒24h后采集血样。体检对象抽血前应有两周的的正常状况记录。注意有无应用影响测试项目的药物。此外,对于体检者,采血的季节都应做相关记录,因为样本中各项目的含量有季节性变动,为了前后比较应在每年同一季节检验。应嘱体检对象在抽血前24小时内不做剧烈运动。