番茄黄化曲叶病毒的快速分子检测

番茄满棚“黄化”，“缺素”还是“病毒”，分子检测大揭秘！天气回暖，虽有清明前后几天的冷天气，已然拦不住春天的脚步，万物复苏，遍地花开。

近来有山东农户反映自己这边棚里一人多高的番茄满棚“黄化”，不同人员会诊，多数说明为缺素，自己拿捏不准，就是心里感觉不对劲。

我们前去观察采样，借助实验检测，确诊这满棚的番茄“黄化”，又是病毒病惹的祸，“是去是留”，我们的棚友心里终于有个着落！1、田间现状听说棚友番茄出现异样，我们应邀赶去现场会诊，首先映入眼帘的是满棚的“黄花”（图1）通过和棚友介绍和现场观察，我们了解到以下情况：图1 满棚“黄花”2、大家一起来会诊（1）定植时间：2017年11月份（2）田间管理：定植后，粉虱出现过一阵子（2017年11月份），但是随即就被按下去，我们去的时候（2018年3月底），跑遍全棚几乎看不到粉虱的影子。

（3）“不对劲的时候”：定植后1月左右，膝盖高的番茄，棚友感觉出不对劲，头部有些发黄，且部分叶脉发紫，不过鉴于当时气温低，疑为低温影响导致。

年关过后，天气回暖，虽有黄化现象，但是番茄不断长高，时至今日，有1米7左右的番茄棵子。

（4）会诊史：多处会诊，考虑到前期低温，品种适应性，诊为根系不好，缺素。

前期虽有怀疑病毒病，但是棚内的番茄仍不断生长，现如今已经一人多高，早期得了病毒病一般明显矮化，还能长一人多高？因此前期的诊断是排除病毒病危害引起。

3、室内检测，解疑答惑图2 1号番茄植株图3 2号番茄植株图4 3号番茄植株根据现场观察，番茄植株虽然不断长高，但是相比同时期番茄（2米多高）生长相对迟缓，依然显矮；叶片脉间黄化明显（图2、图3、图4），疑似番茄病毒病。

分别在棚内采集了3株表现不同症状的番茄植株，带回实验室内，利用分子生物学方法，分别进行DNA和RNA 提取和病毒检测，检测结果，三个病样均能通过TYLCV-1/2（番茄黄化曲叶病毒的引物）和ToCV-1/2（番茄褪绿病毒的引物）扩增出约与预测大小一致的条带，初步表明了这3个番茄均复合感染番茄褪绿病毒（Tomato chlorisis virus，T oCV）和番茄黄化曲叶病毒（Tomato yellow leaf curl virus，TYLCV）；以此类推，该棚的番茄多数均感染了病毒病。

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请号 201910116777.7(22)申请日 2019.02.15(71)申请人 安徽省农业科学院植物保护与农产品质量安全研究所地址 230000 安徽省合肥市农科南路40号(72)发明人 严丹侃　章东方　顾江涛　赵伟　戚仁德　李婷　(74)专利代理机构 绍兴市寅越专利代理事务所(普通合伙) 33285代理人 郭云梅(51)Int.Cl.C12Q 1/70(2006.01)C12Q 1/6844(2018.01)C12R 1/94(2006.01)(54)发明名称一种番茄黄化曲叶病毒的快速检测试剂盒及检测方法(57)摘要本发明公开了一种番茄黄化曲叶病毒的快速检测试剂盒，包括植物病毒DNA快速提取液和检测体系；所述植物病毒DNA快速提取液包括NaOH和Tris -HCl；所述检测体系包括LAMP反应体系和金属离子指示剂检测液；所述LAMP反应体系包括LAMP反应液和LAMP检测引物。

本发明提供的番茄黄化曲叶病毒的快速检测试剂盒，可快速检测到植物上的番茄黄化曲叶病毒，本发明提供的一种番茄黄化曲叶病毒的快速检测方法，可通过反应后溶液的颜色的变化快速诊断出疑似病株是否携带番茄黄化曲叶病毒。

权利要求书1页 说明书5页序列表1页 附图5页CN 109609700 A 2019.04.12C N 109609700A权　利　要　求　书1/1页CN 109609700 A1.一种番茄黄化曲叶病毒的快速检测试剂盒，其特征在于：包括植物病毒DNA快速提取液和检测体系；所述植物病毒DNA快速提取液包括NaOH和Tris-HCl；所述检测体系包括LAMP反应体系和金属离子指示剂检测液；所述LAMP反应体系包括LAMP反应液和LAMP检测引物；所述LAMP检测引物包括四种反应引物，所述四种反应引物依次为：正向外引物F3：5'-GGTAAAGTCTGGATGGATGA-3'；反向外引物B3：5'-TGTAGCATGAAATTTCCTCATC-3'；正向内引物FIP：5'-GCTGTTTCCATAAGGCCTTCTATCGCAGAATCACACTAATCAGGT-3'；反向内引物BIP：5'-CCAATGGATTTTGGACAGGTTTTTATCCCGCAAATCATTCTTCA-3'。

番茄黄化曲叶病毒番茄种质资源的鉴定与筛选摘要：番茄黄化曲叶病毒是番茄上的重要病害之一，严重影响番茄产量和品质，给番茄生产造成巨大的经济损失。

目前国内外对该病的防治主要依赖于化学药剂，但其有一定的抗药性、且会对环境造成污染，因此培育抗病品种是最有效的防治方法。

我国具有丰富的番茄种质资源，是开展番茄黄化曲叶病毒抗性研究的良好材料。

本研究对全国收集到的23份番茄材料进行了TYLCV检测，筛选出12份抗性较好的材料。

为培育抗病品种及防治番茄黄化曲叶病毒病提供了新的种质资源。

关键词：种质；黄化曲叶；病毒；鉴定；番茄；筛选；资源番茄黄化曲叶病毒病（TYLCV）是一种世界性分布的病毒病害，主要危害番茄，由番茄黄化曲叶病毒（TYLCV）引起，在我国北方番茄产区的发病率高达40%~80%。

TYLCV为双股DNA病毒，其基因组呈双链环状结构，该结构可使病毒粒子在植物体内移动。

当番茄感染TYLCV后，会造成番茄植株矮化、叶片变小、叶色黄绿、叶边锯齿状、果实畸形等症状，严重影响番茄的产量和品质。

目前对TYLCV的防治主要依靠化学药剂防治，但由于其有一定的抗药性，且会对环境造成污染，因此培育抗病品种是最有效的防治方法。

在我国番茄育种中，利用抗源培育抗病品种是最经济有效的方法。

国内外已有多个国家和地区对TYLCV进行了抗病毒研究，但在我国还没有相关研究报道。

本研究在前期工作基础上，对收集到的23份番茄材料进行了TYLCV检测及抗病性鉴定，筛选出12份具有较好抗病性的番茄材料，为进一步开展抗病育种工作提供了丰富的种质资源。

一、抗番茄黄化曲叶病毒的研究意义主要体现在以下几个方面：1.保障食品安全：番茄作为广泛使用的蔬菜之一，其安全问题直接关系到人们的饮食健康。

抗番茄黄化曲叶病毒的研究有助于培育出更健康的番茄品种，降低病毒对番茄生长的影响，从而保障食品的安全与质量。

2.提高农业效益：病毒病害对农业生产带来巨大损失。

抗番茄黄化曲叶病毒的研究有助于减少病毒对番茄产量的影响，提高农业经济效益，为农民带来更多收益。

番茄黄化曲叶病毒病的研究进展分析【摘要】番茄黄化曲叶病毒病（TYLCV）是目前园艺作物生产中的重要病害之一，本文旨在通过深入研究对其进行全面分析。

在研究目的与背景的基础上，通过对TYLCV的病原特性、传播途径、检测与诊断方法、防控策略以及抗病品种选育的进展进行详细探讨。

具体包括了TYLCV的病毒特性以及宿主范围、媒介昆虫的传播方式、病毒检测技术与诊断方法、目前针对TYLCV的防控策略，以及针对TYLCV的抗病品种选育研究成果。

总结了目前研究取得的成果，并展望了未来研究的方向。

这将为提高番茄黄化曲叶病毒病的防治水平以及抗病品种选育提供重要参考。

【关键词】关键词：番茄黄化曲叶病毒病、研究进展、病原特性、传播途径、检测与诊断、防控策略、抗病品种、研究成果、未来研究方向。

1. 引言1.1 研究目的番茄黄化曲叶病毒病是影响番茄产量和质量的重要病害之一，给番茄种植业造成了严重的经济损失。

为了更好地了解这种病毒病的传播规律和防控策略，本研究旨在深入探讨番茄黄化曲叶病毒病的病原特性、传播途径、检测诊断方法、防控策略以及抗病品种选育进展等方面。

通过对这些内容的系统研究和分析，旨在为番茄黄化曲叶病毒病的防治提供科学依据和技术支持，促进番茄产业的可持续发展，最终实现提高番茄产量和质量的目标。

通过本研究，我们希望能够为番茄生产中的番茄黄化曲叶病毒病问题提供解决方案，并为相关领域的研究工作提供新的思路和方法。

1.2 研究背景番茄黄化曲叶病毒病（Tomato yellow leaf curl virus disease, TYLCD）是由番茄黄化曲叶病毒（Tomato yellow leaf curl virus, TYLCV）引起的一种严重的病毒性病害，主要危害番茄作物。

该病于20世纪50年代在以色列首次报道，并在世界范围内快速蔓延，成为番茄产业的重要病害之一。

随着全球气候变暖和全球化贸易的发展，TYLCV的传播范围不断扩大，给番茄生产造成了严重的威胁。

番茄黄化曲叶病毒病的研究进展分析番茄黄化曲叶病毒病（Tomato Yellow Leaf Curl Virus Disease，缩写TYLCV）是一种由番茄黄化曲叶病毒（TYLCV）引起的严重病害。

该病毒主要感染茄科植物，如番茄、辣椒等，会导致植株黄化、卷曲、发育不良等严重症状，严重影响茄科作物的产量和品质。

本文将对目前关于TYLCV病毒的研究进展进行分析。

一、病毒鉴定与检测方法研究人员通过分子生物学手段对TYLCV病毒进行鉴定和检测。

其中最常用的方法是PCR扩增和序列分析。

研究人员通过设计引物和探针来扩增病毒的特定片段，并通过序列分析比对已知的TYLCV基因组序列，确定病毒的种属和亚种。

还有一些新的检测方法正在研究中，如聚合酶链反应-酶联免疫吸附试验（PCR-ELISA）和卷曲病毒病症集检测（ToCV SBT）。

二、病毒传播途径和宿主范围TYLCV病毒主要通过白薯蝽传播。

白薯蝽是TYLCV的主要媒介昆虫，其通过在植株间传播病毒。

种子传播和接种传播也是TYLCV的传播途径。

TYLCV病毒具有广泛的宿主范围，除了茄科植物外，还可以感染一些豆科和鸭跖草科植物。

三、病毒与寄主植物互作研究研究人员通过病毒、宿主和宿主免疫系统之间的互作研究，深入了解TYLCV的致病机制。

研究发现，TYLCV病毒可以通过抑制植物的防御响应和调节宿主基因表达来促进自身的繁殖。

研究还发现一些植物基因在病毒感染中起到重要的调控作用，如植物雄性不育基因B2（SlNOB1）和Rp1-DeltaK遗传变异体等。

四、抗性品种筛选和遗传改良通过筛选和培育抗TYLCV的品种，是防控TYLCV病毒病的重要手段。

研究人员通过种质资源的评估和遗传背景的分析，筛选出一些具有抗TYLCV性状的品种，并将其引入育种工作中。

研究人员还通过分子遗传学和基因组学的方法进行分子标记辅助选择和基因功能研究，为育种提供了更多的科学依据。

当前关于TYLCV病毒的研究主要集中在病毒鉴定与检测、病毒传播途径和宿主范围、病毒与寄主植物互作、抗性品种筛选和遗传改良以及病毒的生物学特性和传递机制等方面。

山东寿光地区番茄黄化曲叶病毒株系的分子鉴定纪文磊;李文丽;王富【摘要】本试验对山东寿光地区两份番茄病毒病样品进行分子鉴定,结果证明山东寿光地区番茄感染的病毒为番茄黄化曲叶病毒(TYLCV).对两病毒样品的DNA-A(该病毒总基因组)全长序列进行测定分析,发现两样品病毒DNA-A全长序列共有2 781个核苷酸,两序列同源性达99.9%以上,很可能为同一分离物.将此序列经nucleotide blast(核苷酸序列比对程序)比对后分析发现该序列与我国上海、安徽等地报道的番茄黄化曲叶病毒序列同源性在99.0%以上,且山东寿光地区番茄黄化曲叶病毒应为TYLCV-Israel株系的分离物.【期刊名称】《青岛农业大学学报（自然科学版）》【年(卷),期】2010(027)003【总页数】4页(P216-219)【关键词】寿光;番茄黄化曲叶病毒(TYLCV);DNA-A;分子鉴定【作者】纪文磊;李文丽;王富【作者单位】青岛农业大学园林园艺学院,山东,青岛266109;青岛农业大学园林园艺学院,山东,青岛266109;青岛农业大学园林园艺学院,山东,青岛266109【正文语种】中文【中图分类】S641.2病毒病一直是造成番茄大面积减产的主要病害之一。

番茄黄化曲叶病毒病(Tomato yellow leaf curl virus disease,TYLCVD)是一种对番茄产量影响非常严重的病害,该病最早于 1964年在以色列被发现,目前已在中东、东南亚、东亚、非洲等众多的国家和地区陆续发现[1,2]。

近年来在我国的浙江、上海、广东、广西、云南、重庆、江苏、山东等地相继发生[3,4],年发生面积超过 100万亩,给当地的番茄生产造成了巨大的损失。

山东一向是我国的蔬菜生产大省,自2007年发现该病毒病以来,目前已在全省大部分地区发生,并以接近江苏省的荷泽、枣庄地区发病最早也最为严重,在寿光、东营、临沂、淄博、济宁、济南和日照等地也有相当程度发生,并有逐年加重且蔓延全省的趋势,其主要危害为越夏番茄和秋延后栽培番茄,严重时可造成绝产。

福建省番茄黄化曲叶病毒的分子鉴定分析张前荣;朱海生;温庆放;李大忠;刘建汀;李永平;代春兰;薛珠政;康建坂;王彬【摘要】为了对福建省发生的番茄黄化曲叶病毒病的病原进行分子鉴定，并对其病原分子的变异和进化情况进行分析。

根据已知的番茄黄化曲叶病毒（TYLCV）基因组序列设计特异引物进行PCR 扩增，对获得的特异性片段回收、克隆并测序，结果表明，PCR 分子标记反应扩增到541 bp 的特异性条带，将该特异性产物经回收和纯化并进行克隆与测序，测序结果经 BLAST 比对后，表明该分离物的序列与国内外的病毒序列相似度为97％～99％。

试验结果表明福建省的5个地市的番茄均已被番茄黄化曲叶病毒病危害，应当加强防治。

%Molecular identification,variation,and phylogeneticity of the yellow leaf curl virus (TYLCV)on tomato plants in Fujian were investigated.For the study,specific primers were designed according to the known genome sequence of TYLCV for PCR detection.Then, the generated specific segments were collected, cloned and sequenced.A 541 bp fragment was obtained and its nucleotide sequence showed a high homogeneity,i.e.,97%-99%,with that of the tomato yellow curl leaf virus isolated from the domestic as well as international origins.It confirmed the presence of TYLCV infection on tomato plants in 5 cities in the province,and disease prevention and control measure should soon be implemented.【期刊名称】《福建农业学报》【年(卷),期】2016(031)006【总页数】5页(P611-615)【关键词】番茄;番茄黄化曲叶病毒;鉴定【作者】张前荣;朱海生;温庆放;李大忠;刘建汀;李永平;代春兰;薛珠政;康建坂;王彬【作者单位】福建省农业科学院作物研究所，福建福州 350013; 福建省农业科学院蔬菜研究中心，福建福州 350013; 福建省蔬菜工程技术研究中心，福建福州350013;福建省农业科学院作物研究所，福建福州 350013; 福建省农业科学院蔬菜研究中心，福建福州 350013; 福建省蔬菜工程技术研究中心，福建福州350013;福建省农业科学院作物研究所，福建福州 350013; 福建省农业科学院蔬菜研究中心，福建福州 350013; 福建省蔬菜工程技术研究中心，福建福州350013;福建省农业科学院作物研究所，福建福州 350013; 福建省农业科学院蔬菜研究中心，福建福州 350013; 福建省蔬菜工程技术研究中心，福建福州350013;福建省农业科学院作物研究所，福建福州 350013; 福建省农业科学院蔬菜研究中心，福建福州 350013; 福建省蔬菜工程技术研究中心，福建福州350013;福建省农业科学院作物研究所，福建福州 350013; 福建省农业科学院蔬菜研究中心，福建福州 350013; 福建省蔬菜工程技术研究中心，福建福州350013;福建省农业科学院作物研究所，福建福州 350013;福建省农业科学院作物研究所，福建福州 350013; 福建省农业科学院蔬菜研究中心，福建福州350013; 福建省蔬菜工程技术研究中心，福建福州 350013;福建省农业科学院作物研究所，福建福州 350013; 福建省农业科学院蔬菜研究中心，福建福州350013; 福建省蔬菜工程技术研究中心，福建福州 350013;福建省农业科学院作物研究所，福建福州 350013; 福建省农业科学院蔬菜研究中心，福建福州350013; 福建省蔬菜工程技术研究中心，福建福州 350013【正文语种】中文【中图分类】S436番茄黄化曲叶病毒病(tomato yellow leaf curl virus disease, TYLCD)，系由双生病毒科菜豆金色花叶病毒属的番茄黄化曲叶病毒引起的，依靠烟粉虱持续传播，因此该病毒又称为粉虱传双生病毒[1-3]。

侵染茄科蔬菜的三种病毒以及番茄黄化曲叶病毒伴随卫星的检测与分子鉴定植物病毒病是蔬菜种植业的重要限制因素,目前已经成为制约我国蔬菜产业可持续发展的重要因素。

番茄黄化曲叶病毒(Tomato yellow leaf curl virus, TYLC V),属于双生病毒科菜豆金黄花叶病毒属,引起番茄黄化曲叶病,是通过媒介昆虫-烟粉虱传播的蔬菜生产上的一种毁灭性病害。

蚕豆萎蔫病毒(Broad bean wilt virus, BB WV),为世界性流行的病毒,它的寄主范围极广,造成严重的危害,在各产区均有分布。

番茄褪绿病毒(Tomato chlorosis virus, ToCV)病是从国外传入我国的一种烟粉虱传播的新型病毒病,可以侵染多种植物。

本研究主要以TYLCV及其卫星、BBWV口ToCV为主要对象,以PCR技术为基础,对山东省、河南省、河北省和辽宁省蔬菜主产区展开系统调查,目的是摸清蚕豆萎蔫病毒与番茄褪绿病毒的发生分布情况和寄主范围,以及伴随番茄黄化曲叶病毒的卫星分子。

研究结果表明,在对山东省、河南省、河北省和辽宁省TYLCV 样品的检测过程中,同时利用双生病毒卫星DNA的通用引物beta01/beta02,对TYLCV阳性样品进行了DNAβ的检测,结果发现,山东昌邑县、河南焦作市感病样品可以扩增出约1.3Kb的特异性条带,经序列比对,发现与越南黄化曲叶病毒卫星分子(Tomato yellow leaf curl Vietnam betasatellite(TYLCVNB)一致性为88%,均为越南黄化曲叶病毒卫星DNAβ分子,表明山东省、河南省TYLCV分离物中含有这种新型的DNAβ分子,这是国内首次发现T YLCV病毒DNA-A与越南黄化曲叶病毒卫星DNAβ以病害复合体形式存在。

通过检测和序列分析,基本确定了TYLCV病毒伴随卫星分子的主流种类和其发生蔓延、分子变异及流行趋势等；基本摸清了BBWV病毒在山东省辣椒主产区的发生分布情况。

番茄黄化曲叶病毒的快速分子检测李常保;崔彦玲;张丽英;李传友【期刊名称】《遗传》【年(卷),期】2012(34)3【摘要】番茄黄化曲叶病毒是当前世界范围内危害番茄生产的毁灭性病害.文章针对番茄黄化曲叶病毒全基因组序列的特异区段自主设计了1 对特异性PCR 引物(上游引物TYLCV-F:5′-ACGCATGCCTCTAATCCAGTGTA-3′,下游引物TYLCV-R:5′-CCAATAAGGCGTAAGCGTGTAGAC-3′),依据PCR 扩增特异片段543 bp 的有无可以快速、准确、高效、特异地检测出是否感染了TYLCV 病毒,这项技术可以方便地应用到工厂化育苗的带毒性检测、蔬菜大规模生产中植株发病情况的快速检测以及抗病毒育种,从而为蔬菜安全可持续生产提供科技支撑.【总页数】5页(P366-370)【作者】李常保;崔彦玲;张丽英;李传友【作者单位】北京市农林科学院蔬菜研究中心,北京100097;北京市农林科学院蔬菜研究中心,北京100097;北京市农林科学院蔬菜研究中心,北京100097;中国科学院遗传与发育生物学研究所,北京100101【正文语种】中文【相关文献】1.沈阳市新民地区番茄黄化曲叶病毒分子检测 [J], 苗则彦;白元俊;李颖;赵杨2.中国台湾番茄曲叶病毒侵染引起广东番茄黄化曲叶病 [J], 何自福;虞皓;毛明杰;罗方芳;林奕韩;王穗涛3.山东烟草番茄黄化曲叶病毒的分子检测和序列分析 [J], 李刚;李现道;赵黎明;李景山;王云;竺晓平4.北京番茄黄化曲叶病毒病的发生及分子检测 [J], 李常保;柴敏;李季;郑建秋5.番茄褪绿病毒与番茄黄化曲叶病毒复合侵染对番茄褪绿病毒传播的影响 [J], 廖锦钰;黄莉萍;张战泓;张德咏;谭新球;刘勇;史晓斌因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。