食品微生物检验无菌取样技术

微生物无菌取样方法概述：微生物无菌取样是一种重要的实验操作，用于采集样品中的微生物，并保持其在取样和处理过程中的无菌状态。

本文将介绍几种常用的微生物无菌取样方法，以帮助实验人员正确进行无菌操作。

无菌取样方法：1. 火焰消毒法火焰消毒法是最常见的无菌取样方法之一。

首先，将待取样的工具（如镊子、培养皿等）放置在火焰中，直至工具表面完全变红；然后，将待取样的区域靠近工具焰口，让火焰的热量将其消毒。

在取样前后，务必将工具放回火焰中进行再次消毒，以确保无菌状态的维持。

2. 酒精消毒法酒精消毒法适用于对火焰敏感的材料。

首先，将待取样的工具浸泡在酒精中片刻，使其充分浸润；然后，将工具从酒精中取出，迅速挥发酒精。

在取样前，务必等待工具表面干燥，避免酒精残留对微生物生长的影响。

3. 紫外线消毒法紫外线消毒法利用紫外线的辐射杀灭微生物。

首先，将待取样的工具放置在已配备紫外线灯管的消毒设备中；然后，将设备关闭，开启紫外线灯管。

在一定时间内，让紫外线对工具表面进行照射，以杀灭潜在的微生物。

取样前后，务必使用前述火焰或酒精方法进行消毒。

4. 过滤法过滤法适用于液态样品的无菌取样。

首先，选用0.2微米的微孔过滤膜，将其装配在过滤器上；然后，将待取样的液态样品通过过滤器，使样品中的微生物被截留在过滤膜上。

取样后，将过滤膜移至培养基上，使截留的微生物在培养基上生长，并进行后续分析。

注意事项：1. 取样器具及培养皿等实验工具需提前进行高温高压灭菌，以确保其无菌状态。

2. 取样时要防止被周围空气中的微生物污染，避免把手触碰到取样区域。

3. 在无菌取样过程中，务必避免交叉污染，每次取样前后都要对工具进行消毒。

4. 注意避免取样过程中发生气溶胶扩散，防止微生物通过空气传播。

5. 紫外线辐射对人体有一定危害性，使用紫外线消毒法时要注意安全。

结语：微生物无菌取样是实验操作中的重要步骤，为了得到准确和可靠的实验结果，实验人员需要选择适合的无菌取样方法，并严格遵守操作规程。

微生物检验样品的采集步骤样品的采集是微生物检验的重要组成部分，用于检验的样品数量和状况具有重要意义。

这对取样人员和制样人员提出了很高的专业要求，既要保证样品的代表性和一致性，又要保证整个微生物检验过程在无菌操作的条件下进行。

微生物检验样品的采集大致分为取样、包装密封、标识、样品的运输、接收、保存几个环节。

一、样品的取样取样是指在一定质量或数量的产品中，取一个或多个代表性样品，用于感官、微生物和理化检验的全过程。

首先在取样之前应确认货、证是否相符。

其次取样工具要达到无菌的要求，对取样具和一些试剂材料应提前准备、灭菌。

如果使用不合适的采集工具，可能会破坏样品的完整性，甚至使样品采集毫无意义。

应根据不同的样品特征和取样环境，对取样物品和试剂进行事先准备和灭菌等操作。

另外要保证样品能够代表整批产品，其检测结果应具有统计学有效性，样品到达实验室时的状况应能反映出取样时产品的真实情况。

取样时应根据不同的产品类型、产品状态等选择不同的取样方法和标准。

①包装食品：对于直接食用的小包装食品，尽可能取原包装，直到检验前不要开封，以防污染。

对于桶装或大容器包装的液体食品，取样前应摇动或用灭菌棒搅拌液体，尽量使其达到均质；取样时应先将取样用具浸入液体内略加漂洗，然后再取所需量的样品，装入灭菌容器的量不应超过其容量的3/4，以便于检验前将样品摇匀；取完样品后，应用消毒的温度计插入液体内测量食品的温度，并作记录。

尽可能不用水银温度计测量，以防温度计破碎后水银污染食品；如为非冷藏易腐食品，应迅速将所取样品冷却至0～4℃。

对于大块的桶装或大容器包装的冷冻食品，应从几个不同部位用灭菌工具取样，使样品具有充分的代表性；在将样品送达实验室前，要始终保持样品处于冷冻状态样品一旦融化，不可使其再冻，保持冷却即可。

②生产过程中的取样：划分检验批次，应注意同批产品质量的均一性；如用固定在贮液桶或流水作业线上的取样龙头取样时，应事先将龙头消毒；当用自动取样器取不需要冷却的粉状或固体食品时，必须履行相应的管理办法，保证产品的代表性不被人为地破坏。

成品及原辅料的微生物检验方法一.样品的采集和处理：1.采样方法1.1采样必须在无菌操作下进行1.2根据样品种类：袋装、瓶装和罐装食品，应采取完整的未开封的样品；如果样品很大，则需用无菌取样器取样；固体粉末样品，应边取边混合；液体样品通过振摇混匀；冷冻食品应保持在冷冻状态，非冷冻食品需在0-5℃中保存。

2.样品的处理：塑料或纸盒装样品，用75％酒精棉球消毒盒盖或袋口。

二.菌落总数的测定1.检验目的和范围：对无菌操作条件下获得的样品原液配制的样品稀释液进行细菌总数测定。

本方法规定的培养条件下所得结果，只包括一群在营养琼脂上生长发育的嗜中温性需氧的菌落总数。

2.操作程序：2.1培养基制备：1）检查预先经过灭菌处理的营养琼脂培养基是否处于正常、可用状态。

2）将灭菌培养基用电炉加热2分钟，或用水浴融化后，在40-45℃水浴中保温待用。

2.2以无菌操作将检样10mL(或g)入于含有90mL灭菌生理盐水的灭菌三角瓶中，经充分振摇后做成1：10的稀释液2.3用1mL灭菌吸管吸取1：10稀释液1mL，没管壁徐徐注入含有9mL灭菌生理盐水的试管内，振摇试管，混合均匀，做成1：100的稀释液2.4另取1mL灭菌吸管，按上条操作顺序，做10倍递增稀释液，如此每递增稀释一次，即换用1支1mL灭菌吸管2.5选择2-3个适宜的稀释度，分别在做10倍递增稀释的同时，即以吸取该稀释度的吸管移1mL稀释液于灭菌平皿内，每个稀释度做两个平皿。

2.6稀释液移入平皿后，应及时将凉至46℃营养琼脂培养基注入平皿约15mL，并转动平皿使混合均匀，同时将营养琼脂培养基注入加有1mL稀释液的灭菌平皿内作空白对照2.7待琼脂凝固后，翻转平板，置36±1℃温箱内培养48±2h2.8菌落计数的报告2.8.1平板菌落数的选择：1）选取菌落数在30-300之间的平板作为菌落总数测定标准。

2）一个稀释度使用两个平板，应采用两个平板平均数，其中一个平板有较大片状菌落生长时，则不宜采用，而应以无片状菌落生长的平板作为该稀释度的菌落数。

微生物样品的取样方法及取样要求样品取样的要求1）在取样之前应确认货、证是否相符。

2）取样过程中应避免与水等环境的不良因素影响，防止样品被污染。

3）取样用具（如注射器、采血管、试管、探子、铲子、匙、取样器、剪子、样品袋等）必须是经过灭菌的。

4）对采集的样品一般要求随机取样。

若怀疑最有可能受病原体污染或者带有病原体的样品，可以进行选择取样。

5）根据样品种类（如盒装、袋装、瓶装和罐装），应取完整密封的样品。

如果样品很大，则需用无菌取样器取样；若样品是粉末，应边取边混合；若样品是液体的，通过振摇即可混匀；若样品是冷冻的，应保持冷冻状态（可放在冰内、冰箱的冷盒内或低温冰箱内保存），而非冷冻动物产品须保持在0℃~5℃中保存。

6）取样前或取样后应在盛装样品的容器或样品袋上立即贴上标签，每件样品必须标记清除（包括品名、来源、数量、取样地点、取样人及取样日期）。

7）获取有关取样产品的信息：如样品名称、批量大小、包装类型、包装容器体积、生产线、产品编号或控制号、批量号、标签内容、包装破损状况、产品存放地点或建筑物的基本情况等。

8）当客户对所规定的取样程序有偏离、添加或删节的要求时，应详细记录这些要求和相关的取样资料，并记入包含检测结果的所有文件中，同时告知相关人员。

9）当取样作为检测一部分时，实验室应有程序记录与取样有关的资料和操作。

这些纪录应包括所用的取样程序、取样人的识别、环境条件（如果相关）、必要时有抽样地点的图示或其他等效方法，如果合适，还应包括取样程序所依据的统计方法。

食品微生物学的取样点食品微生物的取样计划中常包括以下取样点：原料、生产线（半成品、环境）、成品、库存样品、零售商店、或批发市场、进口或出口口岸。

原料的取样包括食品生产所用的原始材料、添加剂、辅助材料及生产用水等。

生产线样品是指食品生产过程中不同加工环节所取的样品，包括半成品、加工台面、与被加工食品接触的仪器面以及操作器具等。

对生产线样品的采集能够确定细菌污染的来源，可用于食品加工企业对产品加工过程卫生状况的了解和控制，同时能够用于特定产品生产环节关键控制点的确定和HACCP的验证工作。

食品微生物学检验样品采集、运输与保存标准1. 引言食品微生物学检验是保障食品安全的重要手段之一，而样品的采集、运输与保存是确保检验结果真实准确的关键环节。

本文将从采集、运输和保存三个方面，探讨食品微生物学检验样品的标准要求，以便我们更深入地理解这一重要主题。

2. 样品采集标准在进行食品微生物学检验时，样品的采集要符合一定的标准，保证样品的代表性和真实性。

要选取新鲜、无污染的样品，并且在采集过程中避免手部接触，以免污染样品。

对于液体食品，应该遵循国家相关标准进行取样，避免用不干净的容器盛装。

需要根据不同食品的特性，选择合适的采样方法，比如表面抽样、深层抽样等等。

3. 样品运输标准样品在运输过程中，要避免样品发生变质或受到外界污染。

在运输过程中，应该选择合适的包装材料，保证样品的密封性和稳定性。

另外，要避免温度过高或过低对样品造成影响，保证在适宜的温度条件下进行运输。

还需注意避免样品之间的相互交叉污染，保持样品的独立性。

4. 样品保存标准为了保证样品检验的真实性和准确性，样品在保存过程中也需要符合一定的标准。

在保存过程中，样品应该避免受到阳光直射，防止温度过高或过低造成样品变质。

另外，还需要避免样品与空气接触，保持样品的新鲜性和原始状态。

需要注意不同食品样品的保存期限，保证在规定的有效期内进行检验。

5. 个人观点和理解食品微生物学检验样品的采集、运输和保存标准对保障食品安全和保证检验结果的真实性至关重要。

在实际操作过程中，我们需要严格遵守相关标准要求，确保每一个环节都能做到位。

只有这样，我们才能更好地保障食品安全，有效预防食品安全问题的发生。

6. 总结与回顾通过本文的探讨，我们对食品微生物学检验样品采集、运输与保存的标准要求有了更深入的了解。

在未来的工作中，我们需要严格遵守相关标准要求，加强对食品微生物学检验工作的监督与管理，不断提升我国食品安全检验水平，为食品安全保驾护航。

总字数：3387希望这篇文章对你有所帮助，如果有任何问题，欢迎随时与我联系。

无菌检测抽样方案1. 引言无菌检测是医疗、生物制药、食品工业等行业中非常重要的检验项目之一。

无菌检测的目的是判断样品中是否存在微生物污染，保证产品的安全性和质量稳定性。

为了进行有效的无菌检测，需要制定合理的抽样方案来获取代表性样品。

本文将介绍一种基于无菌检测标准的抽样方案。

2. 抽样标准和要求在制定抽样方案之前，我们需要了解无菌检测的相关标准和要求。

无菌检测通常遵循以下标准：•ISO 11737-2：生物制品的无菌检验 - 微生物总数。

•USP <71>：注射用水、注射用溶液、眼用制剂等的微生物检验的质量控制方法。

•EP 2.6.1：无菌制剂微生物检验。

根据上述标准，无菌检测的抽样方案应满足以下要求：•单个样品应足够大，以便筛选潜在微生物污染。

•抽样方法应具备代表性，能够反映样品中微生物的真实情况。

•抽样过程要避免外界环境对样品的污染，确保无菌检测的准确性。

3. 抽样方案基于上述抽样标准和要求，我们提出以下无菌检测抽样方案：3.1 抽样器具准备•无菌手套：检测人员戴上无菌手套，避免手部细菌的污染。

•无菌取样器：使用无菌取样器，避免器具对样品的污染。

•无菌培养基：准备与要检测微生物类别相适应的无菌培养基。

3.2 抽样方法1.样品表面抽样：使用无菌取样器在样品表面轻轻刮取，保持取样器与表面的接触角度不大于45度。

2.悬浮液抽样：在取样器中加入一定体积的无菌缓冲液，通过旋转或震荡等方法将样品中的微生物悬浮于溶液中。

3.批量抽样：对样品进行亚批次的划分，从每个亚批次中分别取样，确保整个样品范围的覆盖性。

3.3 抽样区域选择•检测接触面：选择样品中可能与外界环境接触的区域进行抽样，例如样品表面、容器内壁、密封处等。

•重点区域：对于复杂结构的样品，需要根据经验和实际情况选择可能存在微生物聚集的重点区域进行抽样。

4. 抽样过程控制在抽样过程中，需要控制以下关键因素：1.工作区域的清洁：确保抽样环境的无菌状态，定期对工作区域进行消毒和清洁。

质量控制关于食品无菌采样的要求及操作规范探讨章雨喆1，梁 奇1，刘家麒2*（1.上海市食品研究所，上海 200235；2.上海市酒类食品质量检验中心有限公司，上海 200081）摘 要：在进行无菌取样时需规范操作，避免由于人为操作不当直接引起产品的污染，然后将其放入消毒的容器中用合适的温度进行保存，保证实验数据的准确性和抽样的有效性。

散装食品中涉及微生物检验项目的都需无菌采样。

本文将对食品无菌采样的要求、操作规范及样品储存条件等展开阐述，旨在说明其重要性，同时给相关人员提供参考。

关键词：无菌采样；要求；重要性；参考无菌采样主要是为了对后续食品中微生物的检测。

食物可能会因为温度等多种原因而发生质变，导致自身微生物超标，食用后会对身体造成伤害。

食品微生物的检测是食品安全监管中重要的环节之一，要保证微生物检测的准确性和公正性，在食品采样时要做到无菌操作，防止样品被二次污染[1]。

无菌采样对于采样的要求较高，需加强无菌操作的意识保证采样过程中真正做到“无菌”。

1 无菌采样的定义及要求1.1 无菌采样的定义食品无菌采样是在取样过程中做好相应的规范操作，保证样品不受操作过程不规范等其他因素的影响。

餐饮环节散装食品涉及微生物检测指标时，一定要进行无菌采样[2]。

1.2 无菌采样的要求食品无菌采样多用于餐饮环节的散装食品，其要求简单概括如下。

①穿白大褂，戴口罩帽子。

②采样者需在操作前佩戴一次性专用无菌防护手套，在正常穿戴时不能直接接触污染无菌手套和随意触碰样品表面。

③首次取样前，要先用75%的专用酒精对一次性无菌消毒手套外部材料进行消毒和待无菌手套的表面经过短暂干燥后，方可开始取样，不可手部刚喷完酒精就马上点燃酒精灯，防止酒精未挥发遇火燃烧。

建议先点燃酒精灯，然后在手部喷洒酒精。

④撕开无菌袋的封口处，捏住两侧小心打开无菌袋口。

⑤采集无菌样品，现场的灭菌工作人员配备了灭菌工具，用现场的灭菌设备进行无菌采样,若没有设备，用自备的无菌取样工具进行无菌取样。

食品生产环境的微生物监控——表面取样技术根据2018年更新的ISO 18593:2018最新标准，食品生产环境的微生物监控——表面取样技术总结如下一、表面取样的意义评估食品厂环境的污染状况，需确定微生物的存在状况及数量（用具表面、操作台表面和设备）。

评估微生物污染状况是为了必要时采取矫正措施。

二、取样材料：接触皿（contact plate）、拭子、海绵、布（四种）三、所用培养基和试剂1、稀释液：无菌缓冲蛋白胨水，蛋白胨盐（见ISO 6887-1），蛋白胨溶液（1g/L）或1/4强度的林格氏溶液（见ISO 6887-5），必要时加中和剂。

如运输时间较久，应使用运输用稀释液。

注：林格氏液(Ringer's Solution)也称复方氯化钠,是因为林格除了含有氯化钠成分,还含钠离子、钾离子、钙离子、镁离子、氯离子及乳酸根离子。

林格氏液比生理盐水成分完全，可代替生理盐水用。

2、接触皿内的培养基1）应有培养基的验证。

2）培养基在接触皿内应形成凸面弯月面（convex meniscus）3）当采样前预期会有残留消毒剂时，在稀释液或培养基中应加入适量中和剂，以防止消毒剂对微生物生长的抑制作用。

四、设备和消耗品接触皿：塑料平皿（也可以使用其他柔软或坚硬的容器，只要保证能与样品表面接触）无菌拭子：拭子头为棉或合成材料（如藻酸盐或人造丝（rayon）），放在试管或密封袋内，材料应不含抑制性物质无菌布：不含抑制性物质无菌海绵：不含抑制性物质，含不含把手均可容器：如瓶子，管，烧瓶，应适于消毒和储存培养基冰盒：用于样品在运输时保持低温混匀器：用于培养管中的液体混匀，如混匀振荡器五、取样地点在表面看上去干净的地方也能发现微生物，但微生物更多地是被发现存在于潮湿和有土壤的地方，在那里细菌能够生长并维持存在。

含纤维的、多孔的、难以清洗的设备上的裂空或裂缝（难以够到），生锈和中空的材料，是潜在的微生物定居区，应进行采样。

微生物检测技术的操作流程与注意事项微生物检测技术是指通过检测样品中的微生物数量和类型来评估其卫生质量的方法。

微生物检测广泛应用于食品、药品、饮用水、环境等领域，对于确保公共卫生和防止疾病传播具有重要意义。

然而，由于微生物的微小和快速繁殖特性，微生物检测技术的操作流程和注意事项非常重要。

以下是微生物检测技术的详细操作流程与注意事项。

操作流程：1. 样品采集与处理：a. 根据需要选择合适的采样方法，例如从食品表面刮取样品、从空气中吸取微生物、从液体中取样等。

确保采样器具干净且无微生物污染。

b. 将采样器具中的样品转移到适当的容器中，避免样品交叉污染。

确保容器表面无微生物污染。

c. 样品处理前，根据需要进行稀释。

确保样品浓度适宜，能够在检测中获得准确的结果。

2. 样品预处理：a. 对于含有大量杂质或抑制物质的样品，需要进行预处理来去除干扰。

预处理的方法包括过滤、离心、稀释等。

b. 样品预处理的目的是提高微生物的检出限和降低干扰物的影响。

确保预处理方法不会影响微生物的存活和增殖。

3. 微生物检测方法选择：a. 根据具体需求选择合适的检测方法。

常用的微生物检测方法包括传统培养法、分子生物学方法、免疫学方法等。

不同的方法有不同的灵敏度、特异性和操作复杂度，请根据具体情况选择最适合的方法。

b. 针对不同的微生物，可以选择相应的培养基、控制参数和检测条件来增强方法的准确性和可靠性。

4. 实验操作：a. 根据选择的检测方法，准备必要的实验试剂和仪器设备。

确保设备和试剂的清洁和消毒，并按照操作说明进行使用。

b. 操作过程中严格遵守无菌操作，避免交叉污染。

使用无菌培养器皿、移液器和培养基等。

c. 严格控制实验条件，如温度、湿度和pH值等，以保证微生物在培养过程中的正常生长和增殖。

5. 结果解读与报告：a. 根据检测结果判断微生物是否超过卫生标准，并分析可能的原因。

注意结果的可靠性和误差的范围。

b. 对于阳性样品，根据需要进行进一步检测或确认，以确保结果的准确性和可靠性。

抽样操作是整个实验室检测流程的第一步，也是首先应当保证的重要环节。

经常会有这样的情况：样品检测结果出现异常，我们排查了检测流程的方方面面都没有出现偏差，结果是样品在抽样时已经被污染。

这样的情况事实上并不鲜见，如何杜绝呢？还得从规范抽样操作开始。

由于不同类型的样品应采取不同的抽样操作，为了使抽样更加科学，下面针对不同样品的抽样操作进行分类阐述。

液体样品：一般情况下，液体样品比较容易获得代表性样品。

液态食品一般盛放在大罐中，取样时可连续或间歇搅拌。

对于较小的容器，可在取样前将液体上下颠倒，使其完全混匀。

取得的样品应放在已灭菌的容器中送往实验室，实验室在取样检测之前应当把液体再彻底混匀一次。

固体样品：根据所取样品材料的不同，所使用的的工具也不同。

固态样品常用的取样工具有解剖刀、勺子、软木钻、锯、钳子等，使用前均须灭菌。

例如面粉或奶粉等已经混匀的食品，其成分质量均匀稳定，可以抽取少量样品检测。

但散装样品就必须从多个点取样，且每个点都要单独处理，在检测前要彻底混匀。

肉类、鱼类或类似食品既要在表皮取样，又要在深层取样，深层取样时要小心不要被表面污染。

有些食品，如新鲜肉类或熟肉可用灭菌的解剖刀和钳子取样；冷冻食品在不解冻的状态下用锯、木钻或电钻，一般斜角钻入来获得深层样品；粉末状样品取样时，可用灭菌的取样器斜角插入箱底，样品填满取样器后提出箱外，再用灭菌勺从取样器的上、中、下部位采样。

水样：取水样时，最好选用带有防尘磨口瓶塞的广口瓶。

对于氯气处理过的水，取样后在100mL 水样中加入0.1mL的2%的硫代硫酸钠溶液。

取样时应特别注意防止样品的污染，样品应完全地充满取样瓶。

如果样品时从水龙头上取得，龙头嘴的里外都应擦干净。

打开水龙头让水流几分钟，关上水龙头并用酒精灯灼烧，再次打开水龙头让水流1-2min后再接样并装满取样瓶。

这样的取样方法能确保供供水系统的细菌学分析的质量，但如果检测的目的是用于追踪微生物的污染源建议还应在水龙头灭菌前取样会在龙头的里外用棉拭子涂抹取样，以检测水龙头自身污染的可能性。