4 流感病毒标本采集、运输、分离检测及注意事项

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流感病毒实验室检测流程
流感病毒实验室检测流程简述如下：
→样本采集：采集患者咽拭子、鼻咽拭子或呼吸道分泌物
→标本处理：使用病毒保存液，保持样本活性，低温运送
→实验室接收：记录信息，安全条件下接收样本
→核酸提取：从样本中提取RNA
→RT-PCR检测：逆转录聚合酶链反应，检测流感病毒核酸
→结果分析：观察PCR产物，判断阴阳性
→病毒分离培养：必要时，于生物安全柜中进行鸡胚或细胞培养→病毒鉴定：通过HA试验、基因测序等确定病毒类型和亚型→出具报告：记录检测结果，及时报告给临床医生
→生物安全：全程严格遵守生物安全操作规程。

1。

流感病毒核酸检测标本采集、送检、处理流程1. 引言流感病毒核酸检测是一种常用的检测方法，可以用于流感的早期诊断和监测。

本文档旨在提供流感病毒核酸检测标本采集、送检和处理的详细流程，以确保准确、及时和安全的检测结果。

2. 标本采集标本采集是流感病毒核酸检测的第一步，正确的采集方法对于后续检测结果至关重要。

以下是标本采集的步骤：1. 选择合适的采集时间：流感病毒在病程初期时最容易检测到，因此最好在症状开始后的48小时内采集标本。

2. 选择合适的采集方法：常见的标本采集方法包括咽拭子采集、鼻拭子采集和咳痰样本采集。

根据临床需要和采集者的经验选择合适的采集方法。

3. 采集过程：采集者应使用无菌手套，并根据操作要求进行准确的采集。

在采集过程中，要避免其他污染源的接触，确保标本的纯净度。

4. 标本保存和运输：采集后，标本应立即储存于适当的中，并在规定的时间内送往实验室进行处理。

3. 送检送检是将采集的标本送往实验室进行核酸检测的步骤。

以下是送检的流程：1. 填写申请单：在送检前，检测人员应填写标本的相关信息，如姓名、性别、年龄等，并注明流感病毒核酸检测的要求。

2. 标本包装：将已采集的标本放入密封袋中，确保袋子密封良好，避免标本在运输过程中的泄漏。

3. 运输方式：根据实验室的要求，选择适当的运输方式。

一般情况下，标本应使用专用的运送盒，采取冷链运输以确保标本的质量。

4. 相关文件：将申请单和相关的送检文件一同放入密封袋中，以便实验室对标本的追踪和管理。

4. 处理流程实验室收到标本后，需要进行一系列处理步骤以获得准确的核酸检测结果。

以下是处理流程的主要步骤：1. 样本接收：实验室收到标本后，应及时确认标本的完整性和相关信息的准确性，并记录相关数据。

2. 样本处理：对标本进行必要的预处理，如离心、去除细胞和红细胞沉淀等，以提取标本中的核酸。

3. 核酸提取：使用合适的提取试剂和方法，从标本中提取核酸。

在提取过程中，应采取相关措施以防止实验室内的交叉污染。

人禽流感标本的采集、运送、处理及保存操作规程一、目的规范人禽流感标本的采集、运送、处理及保存操作。

二、适用范围本操作规程适用于人禽流感标本的采集、运送、处理及保存。

三、简介人禽流感检测过程中，采集的标本包括鼻咽拭子、漱口液、血液等。

本实验室一般用鼻咽拭子或漱口液进行病毒分离与分子生物学检测，血清用于人禽流感抗体检测，采集血液部位一般位于前臂肘静脉。

四、器材1、用于血液收集的基本耗材包括：医用（5ml和10ml）一次性注射器、一次性乳胶手套、止血带、碘酒、无菌拭子、血清储藏管、标本标签、创可贴、可封口塑料袋、标本采集表格、带有冰袋的冰壶、棉拭子、污物桶、笔、试管架。

2、用于鼻咽拭子、漱口液等收集的基本耗材包括：一次性乳胶手套、防护服、十二层口罩（或N95口罩）、采样无菌棉签、采样液（螺口塑料管装）、可封口塑料袋、带有冰袋的冰壶、污物桶、样品登记表、笔、试管架。

附：血清保存管：2 ml螺口塑料管(外螺旋、带密封垫圈)，可耐深低温（液氮保存）；鼻咽拭子保存管：10 ml螺口塑料管(外螺旋、带密封垫圈)，可耐深低温（液氮保存）；尸检组织冻存管：50ml螺口塑料管(外螺旋、带密封垫圈)；记号笔：油性，防水。

五、人禽流感标本采集操作规程（一）标本采集要求1．采样人员须以无菌操作采集各类标本。

采集标本所使用的容器、采样液等均应无菌。

编制：福建省疾控中心病毒性疾病防治科审核：沈晓娜批准：严延生2. 每份标本必须标明标本编号、标本种类及采集日期。

采集单位应指定专人负责标本的登记、收集和管理，并认真填写“人禽流感标本采集登记表。

”3.所有标本的收集、运输和保藏都应装在有螺旋盖的塑料管中，以防止开、关标本管时产生气溶胶，并用两层清洁塑料袋包裹严实。

4.采集的标本应立即送当地疾病预防控制机构，同时附上标本送检单。

如不能立即送交，可置-20℃以下冰箱短暂保存（24小时之内）。

（二）标本采集种类与方法标本采集的时间、位置及质量对能否分离到病毒或提取到有活性的RNA至关重要，而标本保存与运输不当，也会影响病毒的分离。

附件5：流感监测实验技术操作规范一、流感监测临床标本的采集、运送、处理及流感病毒株的运输（一）、流感临床标本的采集病毒分离成功与否很大程度上取决于临床标本的质量，及其保存运输等环节。

多数标本取自患者上呼吸道鼻咽腔，其次为气管和支气管分泌物及尸检组织。

标本采集后应立即放入适当的采样液中低温保存。

采样液常用的采样液有以下五种：普通肉汤、pH7.4～7.6的Hank's、Eagle's、水解乳蛋白液或不加抗菌素的生理盐水（漱喉液）。

为防止采样液生长细菌和真菌，在采样液中需加入抗菌素，加入庆大霉素，其终浓度为0.1mg/ml,和抗真菌药物，其终浓度为2mg/ml。

加入抗菌素以后重新调节pH值为7.4，配制好以后，分装每个采样管4ml,-20℃冻存。

采样方法有以下几种：1)鼻拭子：将带有聚丙烯纤维头的拭子轻轻插入鼻道内鼻腭处，停留片刻后缓慢转动退出。

以另一拭子拭另侧鼻孔。

将拭子头浸入采样液中，尾部弃去。

2)咽拭子：用带有聚丙烯纤维头的拭子擦拭双侧咽扁桃体及咽后壁，同样将拭子头浸入采样液中，尾部弃去。

注：亦可将鼻、咽拭子收集于同一采样管中，以便提高分离率，减少工作量。

3)鼻咽抽取物：用与负压泵相连的收集器从鼻咽部抽取粘液。

先将收集器头部插入鼻腔，接通负压，旋转收集器头部并缓慢退出。

收集抽取的粘液，并用采样液5ml涮洗收集器3次。

4)漱口液：用10ml生理盐水漱喉。

漱时让患者头部微后仰，发“噢”声，让生理盐水在咽部转动。

然后，用平皿或烧杯收集洗液5)鼻洗液：患者取坐姿，头微后仰，用移液管将5ml生理盐水注入一侧鼻孔，嘱患者同时发K音以关闭咽腔。

然后让患者低头使生理盐水流出，用平皿或烧杯收集洗液。

重复此过程洗两侧鼻孔。

（二）、临床标本运送新鲜的临床采集标本应在4℃条件下24小时内运送至全国流感监测网络实验室。

未能24小时内送至实验室的，应置-70℃或以下保存。

标本送至实验室后，病毒分离标本应尽快进行接种分离，24小时内能进行接种的可置于4℃保存，如未能接种应置-70℃或以下保存。

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临床病毒学检测标本采集、保存、运输制度临床检测标本包括：体液、血液、分泌物、排泄物及组织等。

能否发现一未知病原，在很大程度上取决于是否能正确、及时收集标本。

标本采集、运输和保存的各环节都至关重要，对于检测结果的准确性及有效性影响极大。

在常规检测中这些样本可能产生病毒颗粒气溶胶而造成交叉感染，为了防止检验人员的交叉感染，医学实验室安全管理及标本的采集、运送、检测和处理的安全性是十分重要的环节。

一、标本的容器运输容器、消毒标本容器、运输媒体、特殊测试的采集和运输的整套工具要严格要求。

只有用合适的容器采集和运输的标本才能用于测试。

标本容器必须认真加固以防泄漏。

超过保质期的容器也不能用于采集和运输。

必须在洁净的环境中培养。

放在适当倾斜的琼脂或运输媒体上。

用旋紧的试管，不要侧旋。

病毒分离接种标本必须冷藏。

不能使用琼脂培养基和混合培养。

把倾斜管或病毒放在能密封的塑料袋中。

按要求来放置和运输以上物品。

根据原始容器的尺寸来选择传染性标本运输容器。

二、贴标签未经合适标明的传染性疾病标本不能用于检测。

标本必须写上病人的名字和一个惟一的识别号码。

如果使用独立的分类标签，标签要贴紧以防在运输过程中遗失。

在贴标签的过程中不能影响标本的染色。

每个切片都要贴上标签（仅在放切片的容器上贴标签是不行的），并且必须贴在接种标本切片的同一侧面。

三、检测申请单传染病标本必须具有一个测试申请单或电子申请单。

必须注明标本的来源。

对于标本的处理来说患者的资料，采集的时间和地点，临床病史，症状和诊断，抗生素的疗程，和任何可能的微生物记录。

如果一种微生物送去鉴定，可能含有的其他微生物也必须指出。

四、运输运输的时候单纯追求速度是不对的。

迅速处理使病原体的生活能力的损失降到最低，并保证菌丛有足够的数量用于精确鉴定。

五、检验报告一旦得到精确数据就可得到初步结果。

最终结果一般在培养完成的时候得到。

如果需要的话，只要一出现任何阳性，显著的染色或培养（如：血液，CSF，无菌的体液）就可把初步结果告知医生或实验室。

流感病毒核酸检测—标本运输
概述
本文档旨在介绍流感病毒核酸检测标本的正确运输方法。

标本运输的合理性和规范性对于确保检测结果的准确性至关重要。

标本选择
在进行流感病毒核酸检测标本运输前，应首先选择合适的标本类型。

一般而言，下呼吸道标本（如咽拭子、鼻拭子、痰液等）是流感病毒核酸检测的常用标本。

标本采集
标本采集过程中，务必注意以下要点：
- 使用无菌采集工具进行标本采集；
- 遵循相关标本采集操作规范，确保采集到足够的标本量；
- 避免标本污染，确保标本的纯净度。

标本包装
在标本运输过程中，正确的包装是保证标本完整性和安全性的关键。

- 使用合适的，如密封的塑料袋或标本收集管；
- 标记标本信息，包括患者姓名、采集日期和时间等；
- 在包装中添加吸收剂，以保持标本的湿润状态。

标本运输
标本运输的目的是确保标本在运输过程中的稳定性和安全性。

- 使用适当的运输，如特制冷藏盒或冰袋；
- 保持适当的温度，根据标本类型选择合适的运输温度，如冷藏运输或干冰运输；
- 注意防止标本的震动和碰撞，减少标本破损的风险。

运输信息记录
在标本运输过程中，记录运输信息是非常重要的。

- 记录标本的运输起始时间和截止时间；
- 记录标本的运输温度，确保温度要符合标本运输要求；
- 记录每个运输阶段的标本位置，以便跟踪运输进展。

结束语
流感病毒核酸检测标本的正确运输过程对于确保检测结果的准
确性至关重要。

请在进行标本运输时，遵循本文档所述的正确方法，确保标本完整性和安全性，并记录相关信息以便跟踪运输进展。

流感病毒的分离技术操作规范病毒分离培养是流感样病例病原学监测的基础，是流感病毒检测最常用和最可靠的方法之一。

目前多采用鸡胚和MDCK细胞进行流感病毒分离。

通过鸡胚分离的流感毒株与原始标本的抗原性和基因特性可能会有所不同，而通过MDCK细胞所分离的流感病毒与原始标本相似。

另外由于“O”相毒株的重现，MDCK细胞对“O”相毒株的敏感性远高于鸡胚，所以MDCK细胞已成为流感病毒分离不可缺少的一种宿主系统。

但是目前全球主要使用鸡胚进行流感疫苗生产，MDCK分离的病毒在很多国家尚未批准用于疫苗生产，因此鸡胚分离仍然发挥着举足轻重的作用。

具备流感病毒分离能力的流感监测网络实验室收到哨点医院的常规监测标本后，要求利用状态良好的MDCK 细胞和（或）鸡胚进行病毒分离。

若同时进行MDCK细胞和鸡胚分离，为减少工作量，可先用MDCK细胞对原始标本进行筛选，MDCK细胞病毒分离结果为阳性后，再将另外一份-70℃或以下温度保存的原始标本进行鸡胚双腔接种（羊膜腔和尿囊腔），进行病毒分离。

（一）实验室生物安全级别和生物安全规定1. 流感病毒分离实验室生物安全级别：季节性流感病毒和2009甲型H1N1流感病毒生物安全二级；高致病性禽流感病毒生物安全三级。

2. 流感病毒分离实验室生物安全规定应当遵守生物安全实验室的有关生物安全的规定。

（二）流感病毒的细胞分离标准操作规程（所列试剂生产厂家及货号仅供参考）1. 试验材料（1）刚75-90％成片的MDCK细胞，T-25细胞瓶（2）TPCK处理胰酶（牛胰腺来源Ⅷ型）（SIGMA T8802）（3）HEPES缓冲液,1M母液（4）D-MEM培养基（高糖，含有L-谷氨酰胺），Hank's 液（5）青、链霉素母液(10,000U/mL青霉素G，10,000µg/mL硫酸链霉素)（6）牛血清白蛋白组分Ⅴ，7.5%溶液（GIBCO Cat No 15260）（7）处理好的临床标本0.5mL（标本处理参见附件1第一部分）（8）无菌移液管：1mL和10mL2. 培养基和试剂的准备（建议：经常检查试剂的有效期）（1）500mLD-MEM液中加入：a) 青、链霉素母液5mL(终浓度达：100U/mL青霉素和100µg/mL链霉素)b) 牛血清白蛋白组分V12.5mL(终浓度:0.25％)c) H EPES缓冲液12.5mL(终浓度:25mM)d) 加入7.5%NaHCO310-15mL（终浓度：2-3%)（2）病毒生长液：再向上述培养液中每500mL加入0.5mL的TPCK-胰酶（母液浓度为2mg/mL）使TPCK-胰酶的浓度为2µg/mL。

流感病毒的分离培养与鉴定一．实验目的1.掌握临床呼吸道病毒感染标本的采集、处理及送检原则。

2.掌握病毒滴度测定—红细胞凝集试验原理。

3.熟悉流感病毒的分离培养---鸡胚尿囊腔接种技术。

4.熟悉鸡胚尿囊液收集方法；红细胞凝集试验操作方法、结果观察及病毒滴度判定。

二．实验原理1.病毒分离是流感诊断最常用和最可靠的方法之一,流感监测最主要的目的为:及时发现并抓住有意义的流感病毒新变种,尤其大流行株，用于诊断试剂的制备、疫苗的生产及疫情预报，因此,在流感诊断中任何方法都不能完全替代病毒分离这一方法，通常多用鸡胚来分离流感病毒。

2.3.血球凝集试验原理：某些病毒（如流感病毒、副流感病毒、腮腺炎病毒、脑炎病毒等）能选择性地凝集多种哺乳类动物和鸟类的红细胞,出现红细胞凝集现象，简称血凝现象。

这是由于流感病毒表面的血凝素是糖蛋白成分，红细胞表面有糖蛋白的受体,流感病毒血凝素结合在红细胞表面的糖蛋白受体上,从而发生红细胞凝集。

三．实验步骤1.标本采集→杀灭杂菌→接种→鉴定病毒类型2.培养：(1)取孵育10~12d鸡胚,在检卵灯下画出气室界线,于胚胎附近无大血管处画出标记作为注射入口。

(2)将卵置于卵架上,消毒标记处,用无菌剪刀尖在标记处打一小孔。

(3用灭菌注射器吸取流感病毒液0.2ml,由小孔刺入0.5cm后,进行注射。

(4)注射后,用无菌胶布封孔,置35度温箱孵育。

(5)每日在灯下检视鸡胚情况(若鸡胚在接种后24h内死亡为非特异性死亡,应弃之)。

3.鉴定：(1)取小试管9支（或采用塑料凹孔板）,于第一管加入生理盐水0.9毫升,其余各管均加入0.25毫升。

(2)于第一管注入羊水或尿囊液0.1毫升，充分混匀,吸出0.75毫升,于第二管注入0.25毫升,其余0.25毫升弃入消毒液中(切不可乱弃）。

从第2管起对倍稀释至第8管。

(3)各管加入0.5%鸡RBC 0. 25m1，摇匀后室温静置60分钟。

30分、45分、60分各观察结果一次,以阴性对照红细胞沉积结果为准。