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诊断急性呼吸道感染的新方法：Luminex xMAP(@)技术Mohamadou Sene;Joseph Mcampos;周晓芳【期刊名称】《临床检验杂志》【年(卷),期】2011(029)008【总页数】2页(P573-574)【关键词】急性呼吸道感染;xMAP技术;RVP【作者】Mohamadou Sene;Joseph Mcampos;周晓芳【作者单位】华盛顿国家儿童医疗中心分子诊断实验室,美国华盛顿20010-2970;华盛顿国家儿童医疗中心分子诊断实验室,美国华盛顿20010-2970;路明克斯上海公司,上海201203【正文语种】中文【中图分类】R446急性呼吸道感染(ARTI)是最常见的传染病。
在美国，仅季节性流感每年至少造成约36 000人死亡，成为致死的第四大原因。
目前常用的病毒培养、直接免疫荧光法(DFA)、免疫层析法及定量PCR等方法中，无一种方法能够及时检测出导致ARTI 发生的主要病毒种类。
由Luminex 公司研制的xTAG呼吸道病毒诊断试剂盒(RVP)填补此项空缺，已经通过美国FDA认证。
该试剂盒同时保证高敏感性及高特异性，xMAP技术是其核心技术。
1 ARTI诊断的常用方法2009年春季突然爆发的新型H1N1流感疫情，使得毫无防备的实验室无法给出及时准确的诊断方法。
当时大部分实验室，都使用下列一种或多种检测方法。
1.1 细胞培养法将病毒接种到活的真核细胞中，通过病毒感染和细胞内复制进行病毒繁殖。
根据病毒种类的不同，选择的最佳细胞株也有区别。
例如，流感病毒在狗肾细胞株(MDCK)中生长良好，但人的偏肺病毒更适合生长在传代的猴肾细胞株(LLC-MK2)或Vero E6细胞株中。
对生长在培养管管壁(传统的病毒培养)或圆形显微镜盖玻片(玻璃小瓶病毒培养)表面的细胞进行病毒感染并于适宜温度下培养，有些病毒需要24 h，有些则需要数日至数周，而有些病毒(如轮状病毒和诺如病毒)难以甚至不能培养。
TapMan荧光定量RT-PCR快速检测乙型流感病毒核酸方法的建立及意义高洁;严敏;付婷;邵中军【摘要】目的探究TapMan荧光定量逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)快速检测乙型流感病毒核酸的方法及意义.方法 24例确诊感染乙型流感病毒的咽拭子及相关机构提供的甲型流感病毒(H1和H3)、呼吸道合胞病毒、禽流感病毒以及乙型流感病毒,均采用TapMan荧光定量RT-PCR检测,此外乙型流感病毒采用常规RT-PCR 检测,观察检测结果.结果对于检测甲型流感病毒(H1和H3)、呼吸道合胞病毒、禽流感病毒以及乙型流感病毒,TapMan荧光定量RT-PCR仅对乙型流感病毒呈阳性,且反应与其他病毒无交叉.TapMan荧光定量RT-PCR相比于常规RT-PCR检测,对于不同浓度的乙型流感病毒敏感度更高.对24例送检样本,TapMan荧光定量RT-PCR的准确率为83.33％(20/24),明显高于常规RT-PCR检测的54.17％(13/24),差异具有统计学意义(P<0.05).结论对于乙型流感病毒的快速检测,根据病毒核酸的特点,使用TapMan荧光定量RT-PCR进行检测,具有高特异性、敏感度及准确率,推荐广泛应用.【期刊名称】《中国现代药物应用》【年(卷),期】2018(012)011【总页数】2页(P52-53)【关键词】乙型流感病毒核酸;荧光定量;逆转录-聚合酶链反应;TapMan探针;检测【作者】高洁;严敏;付婷;邵中军【作者单位】710032 空军军医大学流行病学教研室, 全军疾病预防控制实验室;710032 空军军医大学流行病学教研室, 全军疾病预防控制实验室;710032 空军军医大学流行病学教研室, 全军疾病预防控制实验室;710032 空军军医大学流行病学教研室, 全军疾病预防控制实验室【正文语种】中文流感作为常见病, 有季节性流行的特点, 病原菌种类较多, 不同病毒有不同检测手段［1］。
PCR 及其相关技术在感染性疾病诊断中的应用张洪涛【期刊名称】《包头医学院学报》【年(卷),期】2014(000)005【总页数】3页(P151-153)【作者】张洪涛【作者单位】鄂尔多斯市中心医院康巴什部检验科，内蒙古鄂尔多斯 017000【正文语种】中文聚合酶链反应(Polymerase Chain Reaction，PCR)是上世纪八十年代由Mullis等[1]首次公开发表的一种DNA体外扩增技术。
其发表后激发起了人们对这项技术的兴趣，并且由此翻开了分子生物学飞速发展的新篇章。
然而刚开始时，人们对PCR技术并不看好。
因为它不仅操作复杂，而且成本非常高，并不能得到普遍应用。
随着人们对DNA聚合酶和实验条件等因素的不断优化和改进，使得PCR逐渐发展成为成本较低、操作简便为人们所接受的常用实验技术。
PCR的基本原理类似于体内DNA复制的过程，通过模板DNA的变性，由双链变为单链使之与引物结合退火，然后在DNA聚合酶的作用下4种碱基相互连接即延伸，形成与模板相同的DNA，重复此步骤即可使目的基因进行数百万倍的放大。
从原理可看出，PCR能将几个拷贝目的基因进行放大，并在短时间内得到扩增，具有特异性高、灵敏度高、简便快捷易自动化等优点。
在这二十多年的时间里，PCR得到了不断的改进，从定性到定量，目的基因由小到大，操作由繁到简，已经有大概十几种的相关方法。
PCR及其相关技术的发展，优化了实验条件并且自动化程度也越来越高，开辟了临床诊断感染性疾病的新路径。
1 PCR在细菌感染性疾病诊断中的应用细菌能引起临床表现复杂的感染性疾病，因此对病原菌的准确诊断可以为疾病的诊断治疗和流行预测提供有效的依据。
然而人们对抗生素的大量使用，导致耐药菌以及新的病原微生物的出现，使得传统的微生物检测和鉴定方法难以满足疾病的快速诊断和治疗的要求。
因此，开发新的实验诊断方法显得非常必要。
PCR广泛应用于临床使得细菌的快速鉴定和细菌的耐药性检测成为可能。
SYBR GreenⅠ实时PCR检测甲型H1N1与季节性流感病毒方法的建立李文悌;孙菲;王晓春【期刊名称】《中国人兽共患病学报》【年(卷),期】2013(29)1【摘要】目的建立一种检测甲型H1N1、季节性H1N1、H3N2与乙型流感病毒的SYBR GreenⅠ实时荧光PCR方法.方法设计针对甲型H1N1、季节性H1N1、H3N2与乙型流感病毒HA基因的引物,分别进行SYBR GreenⅠ实时荧光定量PCR反应,同时进行熔解曲线和Tm值分析,并作灵敏度和重复性试验.结果该方法与H5、H7、H9亚型流感病毒及副流感病毒1、2、3型均无交叉反应.构建的荧光定量标准曲线循环阈值与模板浓度呈良好的线性关系,扩增效率为:95.588%,检测灵敏度为101 copies/反应体系,结果重现性好.成功地验证性检验了32份盲样标本.结论本研究建立的SYBR GreenⅠ实时荧光PCR方法敏感、不需荧光标记探针、成本低及高通量,能用于人类流感病毒的分型检测.%The purpose of this study is to develop a SYBR Green Ⅰ real-time fluorescence quantitative PCR assay for rapid detection of novel influenza A H1N1 virus, seasonal H1N1, H3N2 and influenza B viruses. Specific primers were designed according to the conserved sequence of hemagglutinin (HA) gene of the four influenza viruse s. The viruses were detected by SYBR Green Ⅰ real-time fluorescence quantitative PCR with the analysis of dissociation curve (DC) and melting temperature (Tm) , respectively. Sensitivity assay and reproducibility assay was determined. The results showed that the assay had no cross-reactionwith H5 , H7, H9 subtype influenza virus and parainfluenza virus type 1, 2, 3. The standard curves established by standard plasmid showed fine linear relationships between threshold cycle (Ct) and template concentration. The amplification efficiency was 95. 588% and detection sensitivity was 101 copies/reaction system. The results had fine repetition, and 32 blind samples were detected successfully. It's suggested that this SYBR Green Ⅰ real-time fluorescence quantitative PCR is sensitive, low-cost, high-throughput and suitable for subtyping of human influenza virus without fluorescence probe.【总页数】5页(P59-63)【作者】李文悌;孙菲;王晓春【作者单位】中南大学湘雅医学院医学检验系,长沙,410013;湖南国际旅行卫生保健中心,长沙,410016;中南大学湘雅医学院医学检验系,长沙,410013【正文语种】中文【中图分类】R373.1【相关文献】1.几种甲型H1N1流感病毒SYBR Green Ⅰ荧光RT-PCR检测方法的验证 [J], 蔡翁义;蔡颖;魏锐;黄琦容;朱俊贤;周广彪2.猪细胞因子SYBR Green实时PCR检测方法的建立 [J], 冯志新;姜平3.北美H7亚型禽流感病毒SYBR Green Ⅰ实时荧光定量PCR检测方法的建立 [J], 王晨曦;张谞霄;蒲娟;孙洪磊4.SYBR Green Ⅰ实时PCR检测三黄鸡TLR4基因方法的建立 [J], 陈非玥;钱隆;相雪莲;王怡菲;郭斯璇;曾依翎;田允波;许丹宁;曹楠5.SYBR GreenⅠ实时PCR检测乙脑病毒方法的建立与初步应用 [J], 朱兆奎;张曦;滕峥;赵百慧;邵俊杰;李燕婷;卢伟因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
实时荧光定量PCR技术快速检测甲型H1N1流感病毒作者：谷宇佳来源：《中国卫生产业》2018年第31期[摘要] 目的对疑似甲型H1N1流感病毒携带者的标本进行病毒核酸确诊，进而探讨实时荧光定量PCR技术在甲型H1N1流感病毒检测诊断中的意义。
方法选取2017年9—12月某院检验科工作人员采集的330份疑似甲型H1N1流感病毒携带者咽拭子标本，对其进行病毒核酸确诊检测，根据检测结果对甲型H1N1流感病毒、甲1型流感病毒、甲3型流感病毒以及乙型流感病毒进行临床分型。
结果该组标本中检出甲型H1N1流感病毒核酸阳性标本108份，检出率为108/330（32.73%），检出甲1型流感病毒10份（3.03%），检出甲3型流感病毒21份（6.36%），未检出乙型流感病毒。
结论临床上诊断甲型H1N1流感病毒时，采用实时荧光定量PCR技术，此种技术操作简单、快速、有着较强的特异性和较高的灵敏度。
有着较高的应用价值。
[关键词] 实时荧光定量PCR技术；检测；甲型H1N1流感病毒[中图分类号] R446.5 [文献标识码] A [文章编号] 1672-5654（2018）11（a）-0035-02甲型H1N1流感病毒是一种甲型流感病毒，临床上对其进行检测时，传统的方法是以细胞培养或者鸡胚培养分离定型流感病毒，但是这些方法都需要耗费较长的时间，尤其满足不了暴发疫情时，对病毒的诊断需求。
近些年，随着医疗技术的发展，实时荧光定量PCR技术被广泛的应用在了检测甲型H1N1流感病毒的临床上，此种技术操作起来极其简单快捷，并且其灵敏度和自动化的程度比较高，加上对核酸有着较高的扩增性，能够对甲型H1N1流感病毒做出快速的检测[1]。
为了对实时荧光定量PCR技术在甲型H1N1流感病毒检测诊断中的意义进行更加深入的探讨，2017年9—12月该文选取了330份疑似甲型H1N1流感病毒携带者咽拭子标本，对其进行病毒核酸确诊检测后，根据检测结果对标本进行了临床分型。
新型甲型H1N1流感的检测Detect on The virus Of Novel A/H1N1【摘要】目的研究新型甲型H1N1流感病毒RNA荧光定量RT-PCR检测的方法，探讨取材方法，时间等对检测结果的影响。
方法自2009年8月1日至12月30日采集来自医院发热门诊及学校集中发热人群的标本800份，其中鼻咽拭子混悬液308例，咽拭子280例，鼻拭子212例，采集时间以病人的就诊时间为准，荧光定量PCR法检测其甲型H1N1流感病毒RNA，同时做季节性流感病毒检测，B型流感病毒检测，高致病性禽流感病毒(H5N1)RNA 检测。
结果800份样本中有423例为甲型H1N1流感病毒RNA阳性，占53%；其它流感352例，占44%。
就取材方法而言，鼻咽拭子混悬液的阳性率为68%，咽拭子的阳性率为47%，鼻拭子的阳性率为39%。
就采集时间而言，发病1天内采集的样本阳性率为64%，发病3天内采集的样本阳性率为31%，发病7天内采集的标本阳性率为8%，发病7天后采集的标本阳性率为0。
结论在新型甲型H1N1流感的检测中，取材时应尽可能取鼻咽拭子混悬液，且采样时间越早阳性率越高。
【关键词】新型甲型H1N1流感，荧光定量PCR，鼻咽拭子，阳性率【Abstract】Objective To research on the fluorescence real-time quantitative RT-PCR methods which is used to detect novel A/H1N1 influenza virus RNA, Discuss the influence of collecting methods and time. Methods Collect 800 examples of fauces swab from the patients with a fever that are come from school or fever clinic. detect novel influenza A(H1N1) virus RNA by fluorescence real-time quantitative RT-PCR ,in the same time ,detect the seasonable influenza ,flu B, fowl flu(H5NA) RNA. Results There are 423 novel A/H1N1 influenza virus positive and 352 the seasonable influenza positive among 800 examples,account for 53% anad 44%; As for collecting methods,the positive rate of nasopharynx swab is 68%, the same of pharynx swab is 47%,and the nose swab is 39%. As for the collecting time, the positive rate of one day is 64%,three days is 31%,seven days is 8% and the others are 0. Conclusion During the detection of novel A/H1N1 influenza,the nasopharynx swab is the best sampling and the patients should collect sampling as soon as possible.【Key Word】influenza A(H1N1),fluorescence quantitative PCR，nasopharynx swab, positive rate 2009年4月25日,世界卫生组织(WHO)首次发布了墨西哥与美国发生甲型H1N1流感(曾称“人感染猪流感”)疫情的报告,并宣布人感染甲型H1N1流感疫情是“国际关注的突发公共卫生事件”,随后在3天内两次提高流感大流行的警告级别,从第3级提升到第5级。
一步法多重RT-PCR快速筛查A型、B型和新型甲型H1N1流感病毒莫秋华;杨泽;杨翠兰;林继灿;谭华;涂承宁;叶立青;刘志明;杜坚;孙虹【期刊名称】《南方医科大学学报》【年(卷),期】2009(029)008【摘要】目的建立能同时筛查A型、B型和新型甲型H1N1流感病毒的多重RT-PCR技术.方法针对A型流感病毒的M基因、B型流感病毒的NS基因设计通用扩增引物,针对新型甲型H1N1流感病毒的HA基因设计特异性扩增引物,采用一步法建立多重RT-PCR反应体系.通过盲法实验与实时荧光RT-PCR进行比对来评价方法的准确性,并应用于临床评价方法的实用性和有效性.结果琼脂糖凝胶电泳分析多重RT-PCR产物,结果显示目的扩增片段条带清晰明亮,没有非特异性产物出现,可见该方法扩增效率高,特异性强.50份样本的盲法实验结果显示两种方法检测结果完全一致,符合率为100%.结论建立的多重RT-PCR方法能通过一次实验快速、准确地同时筛检A型、B型和新型甲型H1N1流感病毒,是一项成本低廉、对流感的疫情监测和早期诊断具有实用价值的筛检技术.【总页数】3页(P1545-1547)【作者】莫秋华;杨泽;杨翠兰;林继灿;谭华;涂承宁;叶立青;刘志明;杜坚;孙虹【作者单位】珠海出入境检验检疫局,广东,珠海,519020;珠海出入境检验检疫局,广东,珠海,519020;南方医科大学基础医学院,广东,广州,510515;珠海出入境检验检疫局,广东,珠海,519020;珠海出入境检验检疫局,广东,珠海,519020;珠海出入境检验检疫局,广东,珠海,519020;珠海出入境检验检疫局,广东,珠海,519020;珠海出入境检验检疫局,广东,珠海,519020;珠海出入境检验检疫局,广东,珠海,519020;珠海出入境检验检疫局,广东,珠海,519020【正文语种】中文【中图分类】R373.1【相关文献】1.亚欧型及南非型口蹄疫一步法多重荧光RT-PCR检测方法建立 [J], 吴绍强;查成刚;邓俊花;林祥梅;刘建;梅琳2.多重实时RT-PCR快速检测新型甲型H1N1流感病毒 [J], 潘朝思;罗宝正;薄清如;莫秋华;徐海聂;沙才华;廖秀云3.多重RT-PCR方法检测新型甲型H1N1流感病毒的研究 [J], 罗吉新;李海妙;林志达;王振全;苏惠龙;罗宝正4.一步法多重RT-PCR检测猪圆环病毒2型和猪繁殖与呼吸道综合征病毒 [J], 王英;周宗清;张春玲;何锡忠;张婉华;李春华;蒋凤英;邹勇5.A型塞尼卡病毒与O型、亚洲I型、A型口蹄疫病毒多重RT-PCR检测方法的建立 [J], 谢守玉;粟艳琼;刘惠心;施开创;赵晶;屈素洁;尹彦文;王树培;陆文俊;冯淑萍因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
多重RT-PCR方法检测新型甲型H1N1流感病毒的研究作者：罗吉新,李海妙,林志达,王振全,苏惠龙,罗宝正来源：《湖北畜牧兽医》2010年第10期摘要:为了建立快速检测新型甲型H1N1流感病毒的多重PCR技术,根据GenBank中公布甲型H1N1流感病毒(2009年流行株)的HA和NA基因序列,设计并合成两套特异性引物。
使用TaKaRa公司的一步法RT-PCR试剂盒和自行设计合成的引物建立多重RT-PCR反应,按照预期的PCR产物序列合成的DNA作为阳性对照。
结果表明,该方法具有良好的特异性,可以将甲型H1N1流感病毒(2009年流行株)与传统甲型H1N1、H3N2、H5N1、H6N2和H9N2亚型流感病毒区分。
该方法同时具有较高的灵敏度,最低可以检测到100个拷贝的阳性克隆质粒。
在对183份发热病人临床咽拭子样品检测中发现了10份阳性样品,对350份猪鼻腔拭子样品检测全部呈阴性,结果与中国检验检疫科学研究院试剂盒检测结果一致,说明了该多重RT-PCR方法在临床检测新型甲型H1N1流感病毒方面具有广阔的应用前景。
关键词:多重RT-PCR;甲型流感病毒;H1N1亚型中图分类号:S852.65文献标识码:B文章编号:1007-273X(2010)10-0008-03流行性感冒病毒简称流感病毒(Influenza virus),属正黏病毒科(Orthomyxoviridae)。
按其核衣壳蛋白(nucleocapsid protein,NP)和基质蛋白(matrix protein,M)的不同,可将流感病毒分成甲(A)、乙(B)、丙(C)3型。
甲型和乙型流感病毒可以引起大的暴发流行和严重疾病;丙型流感病毒与普通感冒有关,主要在儿童中流行[1]。
其中甲型流感病毒根据其表层血凝素蛋白和神经氨酸苷酶蛋白分类成不同亚型,至今为止发现16×9种不同组合的甲型流感病毒亚型。
其中影响人类最重要的流感病毒是H3N2亚型和H1N1亚型,前者往往会与非常大规模的高死亡率有关[2]。
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