工业微生物资源的保藏

一、石蜡油低温保藏法本方法的原理是在长好的斜面菌上覆盖灭菌的液体石蜡，达到菌体与空气隔绝，使菌处于生长和代谢停止状态，同时石蜡油还防止水分蒸发，在低温下达到较长期的保藏菌种的目的。

保藏温度要求在-4～4℃下。

液体石蜡法适用于不产孢子的菌种。

具体操作是：菌种为斜面培养菌种，斜面不宜过长；选择纯净优质石蜡油，置三角烧瓶中经过121℃高压蒸汽灭菌1～2h，将其放烘箱中(160℃左右)干热处理，去除灭菌时渗入的水分，待石蜡油变得清澈透明后冷却即可加入斜面，斜面上不能出现气泡，液蜡添加量以高出斜面顶部约1cm为宜。

二、甘油管冷冻保藏法1．试验方法介绍本法也是利用微生物在甘油中生长和代谢受到抑制的原理达到保藏目的。

其方法是，将80%的甘油高压蒸汽灭菌待用。

将培养好的斜面菌种用无菌水制成高浓度的菌悬液(108～1010/ml)。

取1ml灭菌甘油放入与甘油充分混匀，使甘油浓度约为10%-30%，于-70℃下冻存。

-20℃保存时间较短。

或采用体积比为8：2的甘油－生理盐水，加入新鲜培养的菌体肉汤，混合均匀后至-20℃冰箱保存。

2．效果该法适用于一般细菌的保存，同时也适用于链球菌、弧菌、真菌等需特殊方法保存的菌种，适用范围广，操作简便，效果好，无变异现象发生。

甘油－生理盐水保存液保存菌种优于甘油原液，其原因可能是加入生理盐水适当降低了甘油的高渗作用，且有肉汤培养物适量增加保存液的营养成分，从而更好地保护了待保存的菌株。

三、真空冷冻干燥法1．试验原理真空冷冻干燥保藏法是兼具低温、干燥、除氧三方面菌种保藏的主要因素，除不宜于丝状真菌的菌丝体外，对病毒、细菌、放线菌、酵母及丝状菌孢子等各类微生物都适用，不宜用冻干法保存的微生物不到2%。

冷冻干燥法是在低温下快速将细胞冻结，然后在真空条件下干燥，使微生物的生长和酶活动停止。

为了防止在冷冻和水分升华过程中对细胞的损害，要采用保护剂来制备细胞悬液，使菌在冻结和脱水过程中起到保护作用的溶质，通过氢键和离子键对水和细胞所产生的亲和力来稳定细胞成分的构型。

微生物菌种保藏方法菌种是一种重要的生物资源，菌种保藏是重要的微生物基础工作。

菌种保藏就是利用一切条件使菌种不死、不衰、不变，以便于研究与应用。

(一)常规保藏方法1 目的1.1 了解菌种保藏的基本原理1.2 掌握几种常用的菌种保藏方法。

2 原理菌种保藏的方法很多。

其原理却大同小异，不外乎为优良菌株创造一个适合长期休眠的环境,即干燥、低温、缺乏氧气和养料等。

使微生物的代谢活动处于最低的状态，但又不至于死亡，从而达到保藏的目的。

依据不同的菌种或不同的需求，应该选用不同的保藏方法。

一般情况下，斜面保藏、半固体穿刺,石蜡油封存和砂土管保藏法较为常用，也比较容易制作。

3 材料3.1菌株待保藏的适龄菌株斜面3.2培养基肉汤蛋白胨斜面，半固体及液体培养基。

3.3 试剂10%HCl无水氯化钙、石蜡油、五氧化二磷。

3.4 器具用于菌种保藏的小试管(10*100毫米)数支、5毫升无菌吸管、l 毫升无菌吸管等、灭菌锅、真空泵、干燥器、冰箱无菌水、筛子(40目、120目)、标签、接种针、接种环、棉花、牛角匙等等。

4 流程斜面保藏→半固体穿刺保藏→石蜡油封存→砂土管保藏5 步骤5.1斜面保藏5.1.1流程标记试管→接种→培养→保藏5.1.2步骤5.1.2.1贴标签取无菌的肉汤蛋白胨斜面数支。

在斜面的正上方距离试管口2-3厘米处贴上标签。

在标签纸上写明接种的细菌菌名、培养基名称和接种日期。

5.1.2.2斜面接种将待保藏的细菌用接种环以无菌操作在斜面上作划线接种。

5.1.2.3培养置37恒温箱中培养48小时。

5.1.2.4保藏斜面长好后，直接放入4℃的冰箱中保藏。

这种方法一船可保藏三个月至半年。

5.2半固体穿刺保藏5.2.1流程标记试管→穿刺接种→培养→保藏5.2.2 步骤5.2.2.1贴标签取无菌的半固体肉汤蛋白等直立柱数支，贴上标签，注明细菌菌名、培养基名称和接种日期。

5.2.2.2穿刺接种用接种针以无菌方式从待保藏的细菌斜面上挑取菌种，朝直立柱中央直刺至试管底部，然后又沿原线拉出。

微生物菌种保存方法及技术要点摘要：微生物保存是依据菌种变异快的特点，通过一定方法降低微生物的代谢活性，从而延长其保存期限。

本文对微生物菌种保存方法进行概述，并分别阐述药品微生物菌种的主要保存方法和工业微生物菌种主要保存方法。

只要选择恰当的保存方法，才达到良好的保存效果，真正实现保存的目的。

关键词：微生物菌种;保存方法;技术要点现阶段，微生物产业已具相当大的规模，其中在发达国家占有生产总值比重较高。

在微生物产值的不断增长的前提下，其中在工业、医药、农业等多个领域发挥着重要作用。

本文主要对工业微生物菌株和药品微生物菌株的保存方法进行分析研究，可以得出其保存方法是否合理对保持菌株的优良特性十分重要。

1、微生物菌种保存方法概述微生物菌种是一个基本的分类单元，其表型特征极其相似，并且与同属其他菌种有差异很大[1]。

环境条件对微生物菌种的繁殖过程有一定的影响，其保存的主要目的是保持菌种的原有活力和形状，更好的完成微生物检验等工作。

基于此，要做好优良的菌种的选择工作，将其代谢水平降低到最低，保证菌种不发生变异并保持相应的活性。

菌种保存方法还要考虑到保存方法的经济性与便捷性，主要是操作成本以及生产推广使用的可行性。

2、药品微生物菌保存方法阐述2.1 斜面低温保藏法此方法是一种经常使用的保藏法，主要是将微生物菌种转移培养到斜面培养基中，待到微生物菌种全部覆盖于整个斜面之后，将其低温保藏，温度一般为4℃。

通过一段时间之后，对微生物菌种按照相同的方法进行转培，通过保藏方法以及不断转培进行菌种的保藏。

该方法具有的优势主要体现在操作简单、对操作设备要求低，并且菌种的存活率比较高。

此方法适用于多种微生物菌种的短期保藏，其保存菌种的时间为几个月，并不适合需要长期保藏的菌种。

在温度为4℃的情况下，菌种一般还具有一定的代谢水平，会使菌种的活性降低。

同时，反复多次的培养菌种，容易使菌种发生变异，引发感染现象等。

2.2 石蜡油封藏法此方法主要适用于培养成熟微生物菌种斜面，采用做过无菌处理并去除水分的石蜡，将培养斜面进行封存[2]。

微生物的保藏原理微生物的保藏原理：微生物保藏是指将微生物保存在适当的环境下，以保持其活力和遗传特性的一种方法。

微生物保藏的目的是为了长期保存有用的微生物资源，以供科学研究、工业应用和教学实验等方面的需要。

一、低温冷冻保藏：低温冷冻保藏是常用的微生物保藏方法之一。

它的原理是通过将微生物培养物暂停在低温环境中，减缓其新陈代谢并有效抑制微生物的繁殖。

常见的低温保藏方法有甘油冻存和液氮冻存。

甘油冻存是将微生物培养物加入含有甘油溶液的冻存管中，然后经过特定的冷冻程序，将培养物保存在低温下。

液氮冻存是将微生物培养物直接置于液氮中进行保藏。

这些低温冷冻方法可以长期保存微生物，并保持其原有的功能和特性。

二、真菌与酵母菌的干燥保藏：真菌和酵母菌常常通过干燥来进行保藏。

干燥保藏的原理是利用干燥条件下的低水分环境，抑制微生物的生长和代谢活动。

首先，将微生物培养物涂布在导电性载体上，然后置于无菌环境中进行干燥。

常见的干燥方法有热浸法和真空浸法。

热浸法是将微生物培养物置于高温环境中，利用蒸发的方式将水分去除。

真空浸法是将微生物培养物放置在真空环境中，通过降低压力使水分蒸发。

这些干燥方法可以在长时间内保存微生物，并保持其遗传特性和功能。

三、冷冻干燥保藏：冷冻干燥保藏是将微生物在冷冻状态下进行干燥，以提高微生物的保藏效果。

冷冻干燥的原理是先将微生物培养物冷冻，然后将其放置在真空环境中，通过升华的方式将水分去除。

这种方法可以在同时保持微生物活性的同时，减少微生物在干燥过程中受到的损伤。

冷冻干燥保藏方法适用于对微生物活性和遗传特性要求较高的保藏。

总结起来，微生物的保藏原理主要包括低温冷冻保藏、真菌与酵母菌的干燥保藏以及冷冻干燥保藏。

这些方法都能够有效地延长微生物的保存时间，并保持其活力和遗传特性，在科学研究和实际应用中起到重要的作用。