凝胶色谱柱的使用

使用注意事项：

色谱柱在使用过程中主要应该注意的是：

1、每根色谱柱都有一定的压力范围（说明书有说明），一般要在合适的压力下进行分析使用。

2、色谱柱在制作过程中是在一定的压力下按一定的方向添装 的，因此要求在使用时要按照规定的方向进行连接。如果不小心装反了也不用着急，一般没有超压使用应该影响不是很大。但如果一直使用了很长时间如半年或1-2年，建议你就一直这样使用下去。

3、分析样品和流动相一定要过滤干净，不要让对柱有害的物质通过色谱柱。

4、增加一根保护柱或柱前保护对分析柱是有好处的。

5、色谱柱能不能反冲，在第2中提到了一点，一般咨询厂家时都会告诉你不能反冲，主要是担心反冲会使柱中的填料松散，那样整根柱子就报废了。这一点应该很好理解，就是在一定压力一定方向将填料填充压紧，如果反向冲操作不当很容易就会使原来压紧的填料松散开，这是无法弥补的损坏。但在具体使用中，就我所知可以在压力低一些，也就是流量小一些的条件下进行反冲，只要没有影响到柱内的填料，将堵塞的物质冲出可以有效降低系统压力，改善柱效。

应用：

凝胶色谱柱主要进行大分子样品分子量与分子量分布的检测，如果样品分子量差异较大，应该也可以进行分离。这类样品可以作为宽标的标准样品进行标准曲线的建立。

另外，凝胶色谱柱检测的样品有油性的高分子物质，如树脂类等，还有水溶性的高分子物质如糖类等。

对于不同厂家的色谱柱要说好坏之分，我认为和以上很多内容都有关系，样品是否干净，流动相是否干净，人员有没有误操作，有没有保护柱，每天工作量大小等很多影响因素。总体来说应该差不多。凝胶色谱柱（水性）的保养与保存：

凝胶色谱柱需要注意防止微生物的生长，被微生物污染后的色谱柱将无法重现原来的分离效果与柱效，严重会使凝胶色谱柱报废。

为了抑制微生物的生长，可以使用低温保存。值得注意的是温度不能过低，以免冻结，为了不冻结可以提高保存时介质的离子强度。

常用的保存抑菌剂有：0.02%叠氮钠、0.002%洗必泰（hibitane，双氯苯双胍己烷）、0.01%-0.02%三氯丁醇、0.1mol/l氢氧化钠。

g-10葡聚糖凝胶色谱柱使用

G-10葡聚糖凝胶色谱柱是一种常用的分离和纯化生物大分子的柱子，特别适用于分离寡聚糖和多糖混合物。该柱子采用葡聚糖作为固定相，具有一定的孔隙大小和分子筛效果。

G-10葡聚糖凝胶色谱柱通常用于分离多糖、寡糖和其他大分子化合物。在使用之前，需要将柱子进行激活和平衡，具体步骤如下：

1. 将G-10葡聚糖凝胶色谱柱放入柱子支撑架上，并连接到色谱系统上。

2. 将适当的缓冲液（如适应于样品的缓冲液）通过柱子进行激活，以去除可能存在的杂质和污染物。

3. 进行柱子平衡：将适当的缓冲液通过柱子流经，直到柱子和系统达到平衡状态。

4. 加载样品：将待分离的样品按照柱子载样方法加载到柱子上。

5. 进行色谱分离：根据需要，控制缓冲液的流速和浓度梯度，使待分离的目标化合物在柱子上进行分离。

6. 收集分离物：根据其他方法（如按时间段收集、检测波长等）进行分离物收集和检测。

值得注意的是，G-10葡聚糖凝胶色谱柱通常用于相对较小的生物大分子分离，如寡聚糖和多糖，对于更大分子的分离可能需要使用其他类型的色谱柱。此外，在操作过程中需要根据具体样品的特性和需要进行柱子条件的调整。

凝胶柱使用手册

TSK-GELSW系列填充柱是用于水溶液的高性能凝胶柱。该色谱柱被研发用于分析和分离各种可溶于水的物质包括蛋白质，酶以及核酸等。

预先测量

在柱子安置好了之后，测量就开始了。应当避免以上提到的溶液的进样或者过快的压力增长，这些情况可能会导致柱效下降。

防止流速的波动

这种类型的柱子很容易受到流速波动的影响，所以最好能使用没有压力波动的泵，如果必须使用有压力波动的泵，那么必须在泵的出口处必须连接一个脉冲节气门以防波动，并且节气门应非常耐受腐蚀。

每日常规使用

如果柱子每天都要被使用的话，不需要将柱子从设备中移出，缓冲液可以在柱子中过夜。

短时间保存

如果柱子在几天只能会被使用，那么从设备中将柱子移出，用螺帽将两头密封。

长期保存

当柱子在一段时间内不会被使用时，那么以上的保存方法就不会很理想，一旦微生物或者腐蚀性缓冲液侵蚀将会导致柱子损耗。对于长时间的保存，用水溶液或者是含有0.05%的叠氮化钠的缓冲液按照0.5ml/min的流速作溶液置换。 柱子的保存环境

按以上的短期保存和长期保存方法来保存

将色谱柱保存在4℃到30℃的环境中，不要放在低于四度的环境或者让柱中溶剂结冰的环境。

柱子应避免阳光的照射。

柱子英放在远离腐蚀性气体的环境。

溶剂

溶剂的置换

SW类型的柱子内部充满着含有0.05%叠氮化钠和0.1mol/L的硫酸钠的0.1mol/LPH6.7的磷酸盐缓冲液。选择一种适当的溶液以一种适当的流速（0.5ml/min）置换出原有溶液。如果频繁的跟换置换溶液会加速柱效的下降，尽量使用同种溶液置换。

溶剂的选择

在溶剂的选择时应充分考虑到柱子的稳定性，样品的溶解性，样品与凝胶之间的反应，这些因素都很重要。

温度范围

当硅酸盐被用于基本材料时，SW类型的柱子在高PH的环境中会溶解。

由于凝胶的稳定性以及钢柱的原因，所以低PH的溶液应被限制使用。

因此溶液的PH范围应当维持在2.5到7.5之间。

1 Sephadex LH20是一种价钱较高的填料，使用请千万注意，很贵的哟！（当然，老板有钱就另当别论拉）

2 先讲Sephadex LH20 的原理。 Sephadex LH20的分离原理主要有两方面：以凝胶过滤作用为主，兼具反相分配的作用（在反相溶剂中）。因为凝胶过滤作用，所以大分子的化合物保留弱，先被洗脱下来，小分子的化合物保留强，最后出柱。如果使用反相溶剂洗脱， Sephadex

LH20对化合物还起反相分配的作用，所以极性大的化合物保留弱，先被洗脱下来，极性小的化合物保留强，后出柱。如果使用正相溶剂洗脱，这主要靠凝胶过滤作用来分离。

3 再讲Sephadex LH20 洗脱溶剂。听我讲完 第2点后，其实就应该清楚Sephadex LH20 洗脱溶剂因分为两类：反相和正相两种。用得最多的是反相溶剂洗脱，以甲醇－－水系统最为常见，先用水，逐渐增加甲醇比例，最后用100％甲醇冲柱。正相系统以氯仿－－甲醇最为常见，先用50％氯仿－－甲醇，逐渐增加甲醇比例，最后用100％甲醇冲柱。

4 接下来讲样品的处理和洗脱溶剂的选择。如果样品极性大，这选用反相溶剂洗脱（甲醇－－水），样品用最少体积的甲醇－－水（尽可能甲醇少一些）溶解，过滤后，湿法上样（一定要滤喔！要是把Sephadex

LH20 堵啦，就得将Sephadex LH20 的柱头部分弃去，很心痛呀）。如果样品极性小，这选用正相溶剂洗脱（氯仿－－甲醇），样品用最少体积的氯仿－－甲醇溶解，过滤后，湿法上样。

5 分离的技巧，最后说说我的使用心得： （1） 流速不可太快，切切不可新急，所谓欲速则不达。

（2）柱子尽可能长， Sephadex LH20 柱长的增加将极大地改善分离，所不要吝惜填料，宁可将填料全装在一根大柱子中，不要将填料装成几根小柱。所谓集中优势兵力，打击敌人。

（3） 馏分一定要接的细，可1／10，或1／20个保留体积接成一馏分。