色谱柱的使用和维护

一、概述

Hypersil Gold色谱柱是一种常用的色谱分析工具，具有高分辨率、高灵敏度和良好的稳定性等特点。本文将详细介绍Hypersil Gold色谱柱的使用方法，包括准备工作、样品处理、色谱条件设置和常见问题解决等内容，旨在帮助用户更加熟练地使用该色谱柱进行分析实验。

二、准备工作

1. 色谱柱选择：根据分析样品的特性及需要分离的目标物质选择合适规格的Hypersil Gold色谱柱。

2. 色谱柱连接：将色谱柱连接至色谱仪中，在连接时需注意密封件的安装是否严密。

3. 色谱柱保护：对于新的色谱柱，首次使用前需根据说明书进行保护操作，以保证色谱柱的分离性能。

三、样品处理

1. 样品准备：将待测样品按照规定的方法进行准备处理，确保其达到色谱分析的要求。

2. 样品溶解：将样品溶解在适当的溶剂中，注意避免溶剂残留和样品的沉淀情况。

四、色谱条件设置

1. 流动相选择：根据分离目标物质的特性选择合适的流动相，并根据实验要求准备好所需的溶液。 2. 流速设置：根据分析要求设置合适的流速，过快或过慢的流速都会影响分离效果。

3. 柱温控制：根据样品性质和分析要求设置合适的柱温，一般情况下，柱温的提升有助于提高分离效果。

五、色谱分析实验

1. 初始条件设置：根据分析目的和样品特性，设置合适的进样量和初始梯度条件。

2. 色谱运行：进行色谱分析实验，注意观察色谱图谱的变化，及时进行记录和分析。

3. 数据处理：针对实验结果进行数据处理和分析，确保结果的准确性和可靠性。

六、常见问题解决

1. 色谱峰形不对称：检查进样量、流速和柱温等条件是否合适，适当调整各项条件。

2. 色谱峰分离不彻底：检查样品处理和色谱条件设置是否符合要求，重新进行实验或调整分析条件。

3. 背景噪音过大：检查流动相和溶液是否干净，柱温是否稳定，及时清洗和维护色谱柱。

4. 其他异常情况：根据实验中出现的具体问题，进行分析和解决，也可通过与厂家技术支持进行通联。

第 1 页 共 3 页 离子色谱仪日常的维护保养

离子色谱仪日常应当做好哪些维护？以下是离子色谱仪组件的维护方法。

1、高压恒流泵的维护

（1）工作压力要适当

泵的工作压力不要超出规定的压力，否则会使高压密封环变形，产生漏液。“流量选择”开关使用时躲避从0向9拨动，使柱压上升而损害柱子和高压恒流泵。

（2）防止空泵运转造成的损坏

泵工作时要随时察看溶液，留心防止瓶内的流动相用完，严禁将溶液吸干。否则空泵运转磨损柱塞、密封环或缸体，后产生漏液。过滤头要始终浸在溶液底部，要躲避向上反 tan 而吸进气泡。更换液体时要关机操作。

（3）防止固体微粒对高压恒流泵的损坏

任何固体微粒进入泵体，包含灰尘或其它任何杂质都会磨损柱塞、密封环、缸体和单向阀，可接受滤膜（012m或0145m）等滤器除掉流动相中的任何固体微粒。滤器要常常更换，进液处的沙芯过滤头要常常清洗。

2、进样器的维护

（1）进样器的清洁在每次分析结束后，要反复冲洗进样口，防止样品的交叉污染

（2）进样速度要适当 第 2 页 共 3 页 对于手动进样器，使用时要注意进样时扳动阀的动作要快速以免造成超压，使流动管路泄漏或停泵；但不行过猛，以免损坏六通阀。

3、电抑制器的维护

（1）电抑制器的更换

在更换电化学抑制器时，两根电源线严禁短路，以防止将电路烧毁。即抑制电流正负极不能相碰，正极不能与机壳相碰。

（2）电抑制器的日常维护

在通入淋洗液时，要将“电流调整”开关打开，电流一般调到50～70mA（如淋洗液浓度高可调到70～95mA），分析完毕后通去离子水 15min 以上。仪器若长期不用，每周通水 15min。

4、输液系统的维护

（1）防止堵塞输液系统

水样做离子色谱分析前，必需先行稀释并过滤处理后方可进样

（2）防止气泡进入输液系统

由于气泡的进入会影响分别效果和检测信号的稳定性，所以离子色谱仪输液系统不能进入气泡。纯水必需经过真空泵脱气处理脱气效果的好坏直接关系到仪器是否正常运转，这是整个仪器操作的关键，要求现用水现脱气（如中午停机，下午开机时也要现脱气特别是夏天）。

液相色谱柱的日常维护保养

液相色谱柱是一种常见且重要的分析仪器，在实验室中被广泛应用。为了保证液相色谱柱的良好工作状态和分析结果的准确性，日常维护保养是必不可少的。

预测维护

在实验过程中，对液相色谱柱的使用会产生一定程度的损耗。因此，在使用液相色谱柱的过程中，需要对其进行预测维护。预测维护包括以下几个方面：

1. 液体进样器：每天使用前需要使用5%甲酸或醋酸水溶液进行清洗，冲洗10次；

2. 处理样品之前，需要使用纯水冲洗固相萃取（SPE）柱，以避免在反相色谱柱中残留的盐和其它非极性化合物损害色谱柱；

3. 沉淀时，孔径小的使用 0.45 微米滤膜；

4. 在一次实验操作中，同一规格的 Sample Loop 的使用次数不要超过

30 次。使用前，需要用洗针液清洗洗针头和 Sample Loop；

5. 使用过程中，如果发现色谱图出现异常，或者分离峰出现交叉、拖挂的情况，则需要对色谱柱进行常规维护。

常规维护

常规维护主要涉及以下方面：

色谱柱的清洗

准备工作：

1. 将色谱柱固定在色谱仪上；

2. 关闭色谱仪，并将系统空气排出。

清洗步骤：

1. 用离子交换水（或去离子水）进行快速洗脱。每 10 分钟换一次水，连续换 3 次；

2. 用5%甲酸（或乙酸）水溶液和纯水依次进行梯度洗脱，各洗 10 分钟，共需进行 20 分钟；

3. 用离子交换水（或去离子水）进行冲洗达 20 分钟，温度一般设置为室温；

4. 最后用重组缓冲液冲洗至少 30 分钟，直到色谱图正常为止。

清洗完毕后，需要用纯氮对色谱柱进行干燥，再关闭系统气路。 柱的保存

柱的保存需要在低温，干燥，阴凉和避光的环境下进行。存储柱的时间不宜过长，建议每次使用后立即保存，并在下次使用前先进行重新均衡。

色谱柱的更换

在使用一段时间后，液相色谱柱的效果会逐渐降低，这时需要进行更换。在更换时，需要注意以下几点：

1. 需要按照生产厂家提供的说明书进行更换；

--Glycan amide色谱柱使用注意事项--- 1、安装 1）清除溶剂输送系统中任何含有缓冲液或与水混溶的流动相，并将色谱柱的入口端连接至进样器出口。色谱柱识别标记上的箭头指示了正确的溶剂流向。 2）以0.1 mL/min，并且在3 min内增加至0.25 mL/min，用100%有机相(乙腈)冲洗色谱柱。在10 min内将水相增加至90%。请注意反压。 3）当流动相可从色谱柱出口自由流出时，停止液流并将色谱柱出口连接至检测器。这样可以防止空气进入检测系统，更快速地达到基线平衡。 2、平衡 1）初次使用时用50倍柱体积的60%乙腈/40%水溶液(或初始条件)冲洗色谱柱。 2） 进样之前，用20倍柱体积的初始流动相条件平衡色谱柱。两次进样之间用8-10倍柱体积的流动相平衡色谱柱。色谱柱平衡不当会导致保留时间发生漂移。 3、清洗 1）所有清洗步骤在高温下更有效。可以在70 °C下进行清洗。 2）用常用流速的一半进行清洗避免出现高压。 3）建议清洗步骤是在0–100%水范围内运行一系列梯度。确保降低水相比例高于75%的梯度的流速。在清洗过程中，柱长为150 mm的色谱柱应在0.25ml/min或更低的流速下操作。梯度可短至5倍柱体积，并且3–5次重复即可达到效果。 4、压力：在90%-100%的水性流动相中操作时，反压将显著上升，因此要降低流速。 5、样品制备：Hilic条件一般用乙腈浓度较高，而带标记的糖基通常不能溶于高浓度乙腈，建议水相比例50%。 6：储存：色谱柱在高温和或极端PH下使用后，应立即保存在纯乙腈中。切勿将色谱柱保存在高水相（<50%有机相）流动相中，因为这样会滋生细菌。 详细的使用维护请参照：720003042和720005408 应用2-AB使用到的标准品（校准仪器/色谱柱性能） 1）Glycan性能测试标准品 P/N 186006349 2）2-AB标记葡聚糖校正标准品 P/N 186006841